一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及凝血技术领域，具体而言，涉及一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用。

背景技术

临床上，人体凝血功能的评价越来越受到重视，术前和术后凝血的评估可以预测术中出现出血、术后发生血栓的机率，以便临床医生能提前做足准备，避免发生不幸事件。目前临床上常规的凝血筛查有凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)等，这些常规项目主观的把体内复杂的凝血级联反应人为的分开。但常规凝血项目测试通常采用血浆，失去了血液中有形成分的参与，所测结果不能真实体现患者体内的凝血状态。

血栓弹力图(Thrombelastography，TEG)于1948年由德国人Harter发明。1980年代开始广泛用于临床指导术中输血取得了良好效果，现已成为当今围术期监测凝血功能的最重要指标。TEG监测血凝块的物理特性基于以下原理：一特制静止盛有血液的圆柱形杯，以4°45’的角度旋转，每一次转动持续10秒。通过一根由螺旋丝悬挂且浸泡在血样中的针来监测血样的运动。纤维蛋白血小板复合物将杯和针粘在一起后，杯旋转所产生的旋转力能传递至血样中的针。纤维蛋白-血小板复合物的强度能影响针运动的幅度，以致强硬的血凝块能使针的运动与杯的运动同步进行。因此，针的运动幅度与已形成的血凝块的强度有直接关系。当血凝块回缩或溶解时，针与血凝块的联结解除，杯的运动不再传递给针。针的旋转被机电传感器转换成电子信号，这一电子信号能用电脑来监测。TEG血栓弹力图仪能够输出血凝时间、血凝速率及血块强度等凝血参数以及纤溶整个过程(参照图1)。

现有TEG全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂存在一些问题，如成本高昂，检测稳定性不好等缺陷。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，实施例提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，其包括以下组分：缓冲液、内源性凝血激活剂和磷脂；

在所述试剂中，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.1～10g/L，所述磷脂的浓度为0.1～5g/L。

第二方面，实施例提供了一种前述实施例所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂的制备方法，其包括将所述试剂的组分混合。

第三方面，实施例提供了前述实施例所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂在制备全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂盒中的应用。

第四方面，实施例提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂盒，其包括前述实施例所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂。

第五方面，实施例提供了一种检测样本凝血功能的方法，其包括采用如前述实施例所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂对样本进行检测；

所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的。

本发明具有以下有益效果：

本发明实施例提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用，该检测试剂包括以下组分：缓冲液、内源性凝血激活剂和磷脂；在试剂中，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.1～10g/L，所述磷脂的浓度为0.1～5g/L。试剂的成分简单，制备成本低廉，在上述特定的配比下，用于全自动血栓弹力图检测血液凝集功能，能够更真实地体现患者体内凝血、纤溶的状态，具有检测有效率高、稳定性好的优点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为背景技术中血栓弹力图示意图；

图2为验证例1中实施例1的试剂与对照例的进口试剂的R值对比结果；

图3为验证例1中实施例1的试剂与对照例的进口试剂的K值对比结果；

图4为验证例1中实施例1的试剂与对照例的进口试剂的Angle值对比结果；

图5为验证例1中实施例1的试剂与对照例的进口试剂的MA值对比结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，应用于全自动血栓弹力图仪检测，其包括以下组分：缓冲液、内源性凝血激活剂和磷脂；

在所述检测试剂中，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.1～10g/L，所述磷脂的浓度为0.1～5g/L。

经发明人研究发现，在上述特定的配比下，用于全自动血栓弹力图检测血液凝集试剂能够更真实地体现患者体内凝血及纤溶的状态，能稳定而有效地实施检测。需要说明的是，上述内源性凝血激活剂和磷脂的浓度，分别为其混合在缓冲液中时的浓度。

具体地，内源性凝血激活剂是指加入后能启动内源性凝血激活途径的试剂。所述内源性凝血激活剂的浓度可以为0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L、2.2g/L、2.4g/L、2.6g/L、2.8g/L、3.0g/L、3.2g/L、3.4g/L、3.6g/L、3.8g/L、4.0g/L、4.2g/L、4.4g/L、4.6g/L、4.8g/L、5.0g/L、5.2g/L、5.4g/L、5.6g/L、5.8g/L、6.0g/L、6.2g/L、6.4g/L、6.6g/L、6.8g/L、7.0g/L、7.2g/L、7.4g/L、7.6g/L、7.8g/L、8.0g/L、8.2g/L、8.4g/L、8.6g/L、8.8g/L、9.0g/L、9.2g/L、9.4g/L、9.6g/L、9.8g/L或10.0g/L。

所述磷脂的浓度可以为0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L、2.2g/L、2.4g/L、2.6g/L、2.8g/L、3.0g/L、3.2g/L、3.4g/L、3.6g/L、3.8g/L、4.0g/L、4.2g/L、4.4g/L、4.6g/L、4.8g/L或5.0g/L。

优选地，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.1～5g/L，所述磷脂的浓度为0.1～3g/L；优选地，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.5～3g/L，所述混合磷脂的浓度为0.5～1.5g/L。

优选地，所述磷脂选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油的至少一种；优选地，所述磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油的至少两种；优选地，所述内源性凝血激活剂选自：高岭土、鞣花酸、硅藻土和白陶土中的至少一种。

在可选实施方式中，所述试剂还包括防腐剂。

优选地，在试剂中，所述防腐剂的体积百分比为0.1～2％。具体地，防腐剂的体积百分比可以为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2.0％。

优选地，所述防腐剂的体积百分比为0.1～0.5％。在该范围内，试剂的稳定性更好。

优选地，所述防腐剂选自：proclin 300、叠氮钠、硫酸庆大霉素和硫柳汞中的至少一种。

优选地，所述缓冲液的浓度为5～50mM，pH值为7.0～7.5。具体地，所述缓冲液的浓度可以为5mM、6mM、8mM、10mM、12mM、14mM、16mM、18mM、20mM、22mM、24mM、26mM、28mM、30mM、32mM、34mM、36mM、38mM、40mM、42mM、44mM、46mM、48mM或50mM。pH值可以为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5。

优选地，所述缓冲液的浓度为10～50mM，pH值为7.2～7.5。在缓冲液的该浓度范围和pH值的范围内，试剂的稳定性更好。

在可选的实施方式中，所述缓冲液中的缓冲剂成分选自：HEPES、咪唑、PBS、三羟甲基氨基甲烷和巴比妥中的任意一种。

本发明实施例提供了一种前述任一实施方式所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂的制备方法，其包括将如所述试剂的组分混合。

具体地，该制备方法包括将组分(如内源性凝血激活剂、磷脂和/或防腐剂)加入缓冲液中，使所述内源性凝血激活剂和磷脂达到上述任意实施方式所述的浓度。

本发明实施例提供了如前述实施方式所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂在制备全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂盒中的应用。

本发明实施例提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂盒，应用于全自动血栓弹力图仪检测，其包括前述任一实施方式所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂。

在一些实施方式中，所述试剂盒还包括检测器皿。

此外，本发明实施还提供了一种检测样本凝血功能的方法，应用于全自动血栓弹力图仪检测，其包括采用如前述任一实施方式所述的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂对样本进行检测；

所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的。

对全自动血栓弹力图仪的检测方式不作具体的限定，可以采用现有公开的任意的全自动血栓弹力图仪的检测方式(或参照全自动血栓弹力图仪的使用说明)，只要采用了上述任一实施方式所述的试剂，即属于本申请的保护范围内。

需要说明的是，该方法不以疾病的诊断或治疗为目的，只实施检测过程，不对样本的结果进行解读，比如第三方检测采用实施例提供的试剂对样本实施检测的过程。

在一些实施方式中，样本为血液样本。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，其包括以下组分：缓冲液、内源性凝血激活剂、磷脂以及防腐剂。

其中，内源性凝血激活剂为高岭土，所述高岭土的浓度为1g/L；所述磷脂为浓度为1g/L；所述防腐剂为叠氮钠，体积百分比为0.1％；缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，浓度为40mM，pH值为7.4。

实施例2

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于高岭土的浓度的不同：所述高岭土的浓度为0.5g/L。

实施例3

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于高岭土的浓度的不同：所述高岭土的浓度为1.5g/L。

实施例4

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于混合磷脂的浓度的不同：所述混合磷脂的浓度为0.5g/L。

实施例5

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于混合磷脂的浓度的不同：所述混合磷脂的浓度为1.5g/L。

实施例6

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于缓冲液pH的不同：pH为7.2。

实施例7

本发明提供了一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂，与实施例1提供的试剂大致相同，区别仅在于防腐剂的不同：防腐剂为硫酸庆大霉素。

验证例1

验证实施例1提供的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂的检测效果。

采用实施例1提供的试剂，应用于全自动全自动血栓弹力图仪，对样本进行血液凝集功能的检测，同时，设置一组对照例，对照例采用进口试剂(TEG试剂)进行R值、K值、Angle值以及Ma值的检测。

具体地，R值指测试开始到第一块纤维蛋白形成(振幅达到2mm)所需要的时间，反应凝血因子的综合情况。

K值是指从R时间终点至振幅达到20mm所需要的时间，反映纤维蛋白和血小板在凝血开始形成的共同作用结果，即血凝块形成的速率。

Angle角反映纤维蛋白和血小板在凝血开始形成时共同作用的结果。从血凝块形成点至弹力图最大曲线弧度作切线与水平线的夹角，Angle角与K值密切相关，都反映血凝块形成的速率。

MA值为弹力图上最大振幅，反映纤维蛋白原和血小板的功能。其中血小板的作用约占80％，血小板的功能包括质量和数量，两者都会影响MA值。

并采用卡方检验和对称度量对比对照例和实施例1提供的试剂的检测结果。

实验结果

实施例1和对照例的R值、K值、Angle值以及Ma值的结果对比请参照图2～5。

卡方检验的结果请参照表1，对称度量的结果请参照表2。

表1卡方检验

备注：表1中，a.1单元格(25％)的期望计数少于5，最小期望计数为3.93；b.仅对22表计算；c.使用的二项式分布。

表2对称度量

备注：a.不假定零假设；b.使用渐进标准误差假定零假设。

经方法学(卡方检验和对称度量)对比可知，对照例的进口试剂与实施例1提供的试剂的检测结果一致好，kapaa值等于0.924＞0.8。

验证例2

验证实施例1提供的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂的稳定性。

将多组实施例1提供的试剂和进口试剂(同验证例1)于37℃下长达18天，在18天内，将试剂应用于全自动全自动血栓弹力图仪，对临床样本进行血液凝集功能的检测。检测结果如表3所示。

表3检测结果

由结果可知，实施例1提供的试剂的稳定性显著优于现有技术的检测稳定性。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。