一种检测化妆品中环磷酸腺苷的方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种检测化妆品中环磷酸腺苷的方法。

背景技术

目前种类繁多的功能性化妆品引起广大消费者的关注，为维护消费者权益，许多国家已对各功效成分提出功能评价要求，并对这些成分进行检测。GB 5296.3-2008 《消费品使用说明 化妆品通用标签》标准要求，在化妆品销售包装的可视面上应真实地标注化妆品全部成分的名称。因此，对化妆品中的功效成分的存在与否以及含量迫切需要相应的检测方法和标准。

环磷酸腺苷为《国际化妆品原料标准中文名称目录（2015年版）》及《国家食品药品监督管理总局关于发布已使用化妆品原料名称目录的通告（2014年第11号）》中允许使用的原料。是一种核苷酸衍生物，因具有抗过敏、消炎祛痘作用，能有效调节毛细血管血液循环，及时消退皮肤浮肿，预防和修整斑痕痘印，可作为皮肤调理剂用于祛斑、祛痘类化妆品中。市面上销售的多款化妆品产品明确标注添加了环磷酸腺苷作为其功效成分。

目前环磷酸腺苷检测方法主要包括纸色谱法、薄层色谱法、蛋白结合分析法、放射免疫分析法、高效液相色谱-串联质谱法和ELISA检测试剂盒等。其中，纸色谱法、薄层色谱法、蛋白结合分析法、放射免疫分析法等方法操作繁琐且时间长、灵敏度低；高效液相色谱-串联质谱法则易受基质干扰且设备昂贵。因此，开发一种快速、灵敏度高的液相色谱分析方法，对于化妆品中环磷酸腺苷的检测分析具有十分重要的意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种检测化妆品中环磷酸腺苷的高效液相色谱法。主要通过对化妆品的提取，净化，色谱条件的等优化处理，提供了一种方便快捷高效的测定方法。

本发明的技术方案如下：

一种检测化妆品中环磷酸腺苷的方法，包括以下步骤：

（1）向待测化妆品中加入乙腈-水溶液，超声提取；

（2）加入水饱和的正己烷，涡旋混匀；

（3）静止，离心，除去正己烷层至澄清；

（4）高效液相检测：色谱柱：Atlantis T3 柱；流动相：乙腈（色谱纯）+0.1%甲酸水溶液（5+95）；检测波长：257nm；柱温：35℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

（5）高效液相标准工作曲线制作；待测液检测。

所述步骤（1）的乙腈-水溶液中乙腈与水的体积比为1:9。

所述步骤（4）的流动相的乙腈与甲酸水溶液的体积比为1:19。

本发明采用乙腈-水溶液超声提取，将化妆品中待测物溶出；同时通过水饱和的正己烷进行样品净化，去除化妆品中的脂肪等杂质，采用本发明的方法适用面广，适用于各种类型的化妆品，如液体类、乳、膏、霜类化妆品等。

本发明的有益效果：

1. 分离简单，准确度高，适应性良好

本发明提供的方法，能够简单、快速、准确、高灵敏的测定化妆品中环磷酸腺苷。方法分离度好，检测灵敏度高，适应性良好。

2. 适用面广

采用本发明的方法适用面广，适用于各种类型的化妆品，如液体类、乳、膏、霜类等化妆品。

3. 检测限低，范围宽

环磷酸腺苷的方法检出限为5 mg/kg，定量限为10mg/kg。（见图1、2）。

附图说明

图1 本发明的检出限色谱图；

图2 本发明的定量限色谱图；

图3 本发明的环磷酸腺苷标准曲线图；

图4 本发明的环磷酸腺苷标准溶液全波长扫描色谱图；

图5 本发明的环磷酸腺苷标准溶液色谱图；

图6 本发明的样品色谱图；

图7 本发明的样品添加环磷酸腺苷标样后色谱图。

具体实施方式

实施例1

一种检测化妆品中环磷酸腺苷的方法，包括以下步骤：

1、称取混合均匀化妆品试样1.0 g（精确至0.001 g）于50 mL具塞离心管中，准确加入25.00 mL乙腈水溶液，涡旋混匀，35℃超声提取25 min，再加入10 mL水饱和的正己烷，涡旋混匀，静止10 min后，6 000 r/min 4℃离心，去除正己烷层。取水溶液经微孔滤膜过滤后待上机测定。

1.1流动相的选择

试验分别选取了相同比例的乙腈-0.1%甲酸水溶液（5:95）、甲醇-0.1%甲酸水（5:95）溶液作为流动相。结果发现：同一目标物浓度下，乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相时比甲醇-0.1%甲酸水溶液作流动相时，目标物出峰时间早且响应强度强。

1.2检测波长的选择

对标准溶液(10 μg/mL)进行全波长扫描，结果发现257 nm处有最大吸收。见附图说明5。

1.3柱温的选择

通过对比不同的柱温箱温度对检测效果的影响，试验发现当柱温升高时，响应信号几乎没有影响，出峰时间变化不大，但与其它杂质峰的分离要好，故选择柱温35℃。

1.4液相色谱条件

色谱柱：T

流动相：乙腈（色谱纯）+甲酸水溶液（0.1%）=5+95（体积比）。

流速：1.0 mL /min。

柱温：35 °C。

进样量：10 μL。

检测波长：257 nm。

1.5标准工作曲线制作

取适量的环磷酸腺苷标准储备液用水稀释制备一系列浓度的标准工作溶液，标准系列浓度为0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、10.00 μg/mL、20.00 μg/mL、50.00 μg/mL、100.00 μg/mL，供HLPC测定，上述的标准储备液浓度为1mg/mL。按色谱条件进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线（标准曲线见图3、图4）。得到线性方程和相关系数（见表1）。结果表明，环磷酸腺苷在0.10~100.00 μg/mL浓度范围内线性关系良好。

表1 环磷酸腺苷的线性方程及相关系数

6.结果计算和表述

试样中环磷酸腺苷的含量用如下的公式计算：

式中：

X——试样中环磷酸腺苷的含量，单位为（mg/kg）；

c——试样溶液中环磷酸腺苷浓度，单位为 (μg/mL)；

V——试样最终定容体积，单位为（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）；

实施例2 精密度和准确度

选取低、中、高三组浓度加入空白基质中，对其精密度和准确度进行考查，相对标准偏差(RSD)为0.92%～7.35%（结果见表2）。

表2 方法的准确度和精密度（

实施例3回收率试验

分别针对不同类型的样品，液体类、乳类、膏霜类化妆品中分别添加5 mg/kg、50mg/kg、100 mg/kg的环磷酸腺苷标准溶液，进行加标回收率试验（样品色谱图见图6；加标后样品色谱图见图7，添加量50 mg/kg）。由表3可知，在液体类、乳类、膏霜类化妆品中环磷酸腺苷的回收率均较好，回收率均在86.3%～110.3%之间。

表3 化妆品中环磷酸腺苷的回收率结果（n=6）

实施例4 检出限和定量限

当称样量1.0 g时，在空白基质中添加标准品，按照本标准建立的方法检测分析，根据信噪比确定本标准环磷酸腺苷的方法检出限为5 mg/kg，定量限为10 mg/kg。（见图1、2）。