一种古代经典名方复方制剂散偏颗粒四种活性成分含量同时测定的方法

技术领域

本发明涉及一种中药新药古代经典名方复方制剂散偏颗粒中活性成分的检测方法，具体的说是一种同时测定古代经典名方复方制剂散偏颗粒中四种活性成分的方法，属于医药技术领域。

背景技术

散偏汤是清代名医陈士解《辨证录》卷二中的一首名方是由川芎、白芍、郁李仁、柴胡、白芥子，香附、甘草、白芷。”具活血祛瘀、行气化痰,散结止痛之功效,用于治疗郁气不宣，风邪袭于少阳经之半边头风。散偏汤中川芎为君药，具有活血行气，祛风止痛的功效，为治头痛之要药；白芷辛散，祛风止痛，善治头风；是治疗阳明经头痛的要药，柴胡行气疏肝，引诸药入少阳经，疏通经络，配香附理气解郁；白芍平肝气，养肝血，生胆汁，祛干燥；芥子利气消痰，佐以止痛，亦兼顾气、血、痰；郁李仁柔润通利；甘草配白芍缓急止痛，调和诸药。诸药共奏行气活血、和络止痛之功，临床以该方为基础方，加减药味用于治疗各种肝郁痰凝型、血淤型、风热上饶型头痛，偏头痛，抑郁症等。现代医家常用散偏汤治疗偏头痛，其临床疗效显著。

近年来，虽然有研究对散偏汤的中君药川芎中阿魏酸的含量测定及制备和临床应用的进行报道，由于中药制剂的主要成分比较复杂，其君药川芎的主要成分为阿魏酸和川芎所含洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、藁本内酯；白芍中主要成分为没食子酸、儿茶素、芍药苷等多种成分。有研究发现川芎挥发油、阿魏酸。药理研究表明，阿魏酸具有显著的抗氧化、抗炎镇痛、抗癌和抗辐射等药理作用，挥发油具有抗炎、镇痛等作用；研究表明洋川芎内酯I有减少炎症反应、抑制凋亡发生等作用；没食子酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抑菌等一系列药理活性，芍药苷具有抗自由基损伤、抑制细胞内钙超载和抗神经毒性等活性,体内实验证明其有降低血液黏度、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环、抗炎、抗氧化、抗惊厥等作用。为了控制质量，本专利采用HPL法同时测定散偏颗粒四种成分没食子酸、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯I的含有量，为该制剂的质量标准研究提供依据。

发明内容

本发明目的在于提供一种同时测定古代经典名方复方制剂散偏颗粒中四种活性成分的方法的方法，该方法简单、稳定、重现性好，可用于该药品的质量控制。

本发明的目的是这样实现的：利用高效液相色谱检测的方法，同时测定制剂中处方药材主要成分没食子酸、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ的含量，具体步骤如下：

(1)对照品溶液的制备：精密称取芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸对照品各适量，分别置于 20ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸质量浓度分别为 0.788、0.392、0.447、0.498mg/mL的单一对照品贮备液。分别精密吸取上述单一对照品贮备液7、2.8、 2.1、1.4ml置于同一25mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：取散偏颗粒约1.0g(相当于2.20g药材)，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称定质量，超声(功率：300w，频率：59KHz)处理30min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(3)色谱条件及样品检测：将混合对照品溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，采用如下色谱条件检测，色谱柱：Shim-pack GIST C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以0.15％磷酸水溶液- 乙腈为流动相，梯度洗脱；体积流量1.0ml/min，柱温30℃，检测波长200～400nm，数据处理选择最大的吸收波长分别为232nm(芍药苷)，322nm(阿魏酸)，270nm(没食子酸，洋川芎内酯I)。

本发明具有以下优点和积极效果：

1、本发明所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制散偏颗粒质量提供理论基础和科学依据。

2、本发明方法采用高效液相色谱法及梯度洗脱检测的方法，实现了同时测定散偏颗粒中4种有效成分的含量，本发明建立的色谱法能够较好的分离、测定散偏颗粒中没食子酸、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ有效成分的含量，色谱峰峰形好，分离度较高，在此色谱条件下没食子酸、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ的浓度与峰面积呈现良好的线性关系，各种成分回收率均在95％以上。

3、本发明方法操作简单、精密度、重现性和稳定性良好，为散偏颗粒有效成分质量控制和药效评价的进一步研究奠定了理论基础和科学依据。

附图说明

图1是本发明没食子酸对照品溶液(A)、没食子酸阴性溶液(B)HPLC图

附图标记说明：1-没食子酸

A-没食子酸对照品溶液HPLC图

B-没食子酸阴性溶液HPLC图

图2是本发明芍药苷对照品溶液(C)、芍药苷阴性溶液(D)HPLC图

附图标记说明：2-芍药苷

C-芍药苷对照品溶液HPLC图

D-芍药苷阴性溶液HPLC图

图3是本发明洋川芎内酯I对照品溶液(E)、洋川芎内酯I阴性溶液(F)HPLC图

附图标记说明：3-洋川芎内酯I

E-洋川芎内酯I对照品溶液HPLC图

F-洋川芎内酯I阴性溶液HPLC图

图4是本发明阿魏酸对照品溶液(G)、阿魏酸阴性溶液(H)HPLC图

附图标记说明：4-阿魏酸

G-阿魏酸对照品溶液HPLC图

H-阿魏酸阴性溶液HPLC图

具体实施方式

以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。

1仪器、试剂和材料

岛津高效液相色谱仪(型号：LC-2030C 3D)、电子天平ME104E/02(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)、SQP十万分之一电子天平(塞多利斯科学仪器(北京)有限公司)，DZKW-S-4型电热恒温水浴锅(北京市永光医疗仪器有限公司)、SG250HE超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)、MH-2000调温型电热套(北京科纬永兴仪器有限公司)。

芍药苷对照品(批号：1129A022、含量：95.1％，中国食品药品检定研究院)，阿魏酸对照品(批号： 110773-201614中国食品药品检定研究院)、没食子酸对照品(批号：110831-201605含量：90.8％，中国食品药品检定研究院)、洋川芎内酯I对照品(批号：94596-28-8源叶生物)。

乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯，磷酸为色谱纯(天津市大猫化学试剂厂)；水为怡宝纯净水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长：232nm(检测芍药苷)， 270nm(检测没食子酸，洋川芎内酯I)，322nm(检测阿魏酸)，流动相：以0.15％磷酸溶液为A，乙腈为C,按表1进行梯度洗脱；柱温：30℃；进样量：10μL。

表1流动相洗脱梯度

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液的制备精密称取芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸对照品各适量，分别置于20ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸质量浓度分别为0.788、0.392、0.447、0.498mg/mL的单一对照品贮备液。分别精密吸取上述单一对照品贮备液7、2.8、 2.1、1.4ml置于同一25mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取散偏颗粒约1.0g(相当于2.20g药材)，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称定质量，超声(功率：300w，频率：59KHz)处理30min，，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液按散偏颗粒处方标准分别称取缺川芎、白芍，按制备工艺制成相应的阴性样品，按“2.2.1”项下的方法进行制备，即得。

2.2.4专属性试验取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录图谱，结果见图1-4。在该色谱条件下芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I，阿魏酸分离良好，阿魏酸理论板数计不低于4000，阴性样品无干扰。如图1-4所示：

2.2.5线性关系分别精密吸取6个系列浓度的混合对照品溶液，各10μL，注入高效

液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测定各对照品的峰面积，取平均值。以各溶液质量浓度

(X)对峰面积积分值(Y)进行回归处理，得芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯和阿魏酸的线性方程和相关系数(R2)。结果表明，各对照品的进样量与峰面积均呈良好的线性关系(表2)

表2回归方程与线性范围

2.2.6精密度试验取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸峰面积的RSD分别为0.63％、0.26％、0.30％、 0.31％(n＝6)，表明仪器精密度良好。

2.2.7稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液(批号：20200401)适量，分别于室温下放置0、2、 4、8、12、24h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯 I、阿魏酸峰面积的RSD分别为2.36％、2.46％、3.24％、2.64％(n＝6)，表明供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。

2.2.8重复性试验取散偏颗粒样品(批号：20200401)1g(相当于2.20g药材)，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I，阿魏酸峰面积的RSD分别为0.89％、0.90％、1.57％、0.99％(n＝6)，表明本方法重复性良好。

2.2.9加样回收率试验精密称取已知含量的散偏颗粒样品(批号：20200401)0.5g，共6份，分别加入一定量的各单一对照品贮备液适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果，芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸的加样回收率分别为98.49％～10.55％(RSD＝1.63％,n＝6),96.09％～102.29％(RSD＝2.22％,n＝6),96.72％～ 103.71％(RSD＝2.50％,n＝6),95.12％～98.32％(RSD＝1.31％,n＝6)。

2.2.10样品含量测定取散偏颗粒样品15批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图峰面积，按标准曲线法计算供试品中

芍药苷、没食子酸、洋川芎内酯I、阿魏酸的含量，结果见表4。

表4散偏颗粒样品中4种成分的含量(mg.g-1)

综上所述，本方法的专属性、重现性、准确度均良好，可以作为散偏颗粒中没食子酸、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ含量测定的方法。