一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器的制备方法及其产品和应用

技术领域

本发明涉及一种电化学免疫传感器，具体是一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器的制备方法及其产品和应用。

背景技术

钙调素是普遍存在于真核细胞内的钙受体蛋白,是细胞信号传导系统的重要成分，作为一种多功能的酶调节物,钙调素与生物体的许多生命现象有关。研究表明如癌症、肿瘤等疾病与钙调素的水平有密切关系。因此，灵敏、高效的钙调素检测方法对疾病的病因分析、疾病诊断及药物研发具有重要意义。

目前钙调素的主要分析方法有凝胶电泳分析法、放射免疫分析法、单克隆抗体法和酶学分析法等。但是这些检测方法都存在需要特殊设备、费时较多、不能识别无活性的钙调素等缺点。

石墨烯一般能够固定住各种生物分子，因而也能超出普通的碳电极的运用范围，比如经过用葡萄糖氧化酶能够对石墨烯进行功能化，可以做成葡萄糖酶基传感器；再经过用DNA对石墨烯进行功能化以后，可以做成基因传感器；经过用抗体修饰石墨烯等等。因为实验证明将石墨烯直接运用在传感器中，由于纳米级石墨烯容易聚沉，因此并没有达到预期的效果。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器的制备方法。

本发明的再一目的在于：提供一种上述方法制备的用于钙调素检测的电化学免疫传感器产品。

本发明的又一目的在于：提供一种上述产品的应用。

本发明目的通过下述方案实现：一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

第一步：Pt-Ag-石墨烯纳米材料的制备

将氧化石墨烯溶解于蒸馏水中超声，然后加入聚乙烯吡咯烷酮，室温下连续搅拌。之后，加入联氨溶液和氨水，混合均匀高温搅拌离心并溶于蒸馏水中。然后加入硝酸银溶液，室温小搅拌，同时缓慢加入NaBH

第二步：GNRs的合成

采用种子生长法合成GNRs：第一步为种子溶液的制备：向HAuCl

第三步：HRP-Ab2-GNRs的制备

将HRP-Ab

第三步：免疫传感器的制备及电化学检测过程

首先将玻碳电极（直径3毫米）用氧化铝进行抛光，然后在H

本发明还提供了一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器，根据上述方法制备得到。

本发明也提供了一种所述电化学免疫传感器在钙调素检测中的应用。

本发明基于将纳米技术、免疫科学和电化学分析技术相结合，开发了一种钙调素电化学免疫传感器，从而实现快速、灵敏、简便的钙调素检测。

具体实施例

实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器，按以下步骤制备：

第一步：Pt-Ag-石墨烯纳米材料的制备

将1mg的氧化石墨烯溶解于5ml蒸馏水中超声后，加入10mg聚乙烯吡咯烷酮，室温下连续搅拌5小时，之后，加入5ml浓度20wt%的联氨溶液和10ml浓度10wt%的氨水，混合均匀高温搅拌0.5小时离心并溶于3ml蒸馏水中，然后加入50ml深度10mM的硝酸银溶液，室温下搅拌1小时，同时缓慢加入100μL浓度3mM的NaBH

第二步：GNRs的合成

采用种子生长法合成石墨烯纳米材料GNRs：先进行种子溶液的制备：向3.0 mL浓度30.0 M的HAuCl

第三步，HRP-Ab

将20 µL浓度2.0 mg mL-1的HRP-Ab

第四步：免疫传感器的制备

先将直径3毫米的玻碳电极用氧化铝进行抛光后，在浓度0.5 M的H

实施例2

一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器，与实施例1步骤近似，按以下步骤制备：

第一步：Pt-Ag-石墨烯纳米材料的制备

将5mg的氧化石墨烯溶解于30ml蒸馏水中超声5小时后，加入60mg聚乙烯吡咯烷酮，室温下连续搅拌5小时，之后，加入5ml质量浓度30wt%的联氨溶液和30ml质量浓度20wt%的氨水，混合均匀高温搅拌1小时离心并溶于5ml蒸馏水中，然后加入100ml浓度20mM的硝酸银溶液，室温小搅拌2小时，同时缓慢加入200μL 5mM的NaBH

第二步：GNRs的合成

采用种子生长法合成GNRs：先进行种子溶液的制备：向5.0 mL 50.0 M的HAuCl

第三步：HRP-Ab

将20 µL，3.0 mg mL-1的HRP-Ab

第四步：免疫传感器的制备

先将直径3毫米的玻碳电极用氧化铝进行抛光后，在0.5 M的H

实施例3

一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器，与实施例1步骤近似，按以下步骤制备：

第一步：Pt-Ag-石墨烯纳米材料的制备

将1mg的氧化石墨烯溶解于3ml蒸馏水中超声2小时后，加入10mg聚乙烯吡咯烷酮，室温下连续搅拌2小时，之后，加入5ml质量浓度10wt%联氨溶液和10ml质量浓度的20wt%氨水，混合均匀高温搅拌1小时离心并溶于3ml蒸馏水中，然后加入50ml 10mM硝酸银溶液，室温小搅拌1小时，同时缓慢加入100μL 3mM的NaBH

第二步：GNRs的合成

采用种子生长法合成GNRs：先进行种子溶液的制备：向5.0 mL 50.0 M的HAuCl

第三步：HRP-Ab

将20 µL，2.0 mg mL-1的HRP-Ab

第四步：免疫传感器的制备

先将直径3毫米的玻碳电极用氧化铝进行抛光后，在0.5 M的H

实施例4

一种用于钙调素检测的电化学免疫传感器，与实施例1步骤近似，按以下步骤制备：

第一步：Pt-Ag-石墨烯纳米材料的制备

将4mg的氧化石墨烯溶解于40ml蒸馏水中超声4小时后，加入40mg聚乙烯吡咯烷酮，室温下连续搅拌5小时，之后，加入10ml 40wt%的联氨溶液和30ml 20wt%的氨水，混合均匀高温搅拌1小时离心并溶于5ml蒸馏水中，然后加入100ml浓度20mM的硝酸银溶液，室温小搅拌2小时，同时缓慢加入200μL 5mM的NaBH

第二步：GNRs的合成

采用种子生长法合成GNRs：先进行种子溶液的制备：向3.0 mL 30.0 M的HAuCl

第三步：HRP-Ab

将20 µL，2.0 mg mL-1的HRP-Ab

第四步：免疫传感器的制备

先将直径3毫米的玻碳电极用氧化铝进行抛光后，在0.5 M的 H