一种酯类化合物的应用

技术领域

本发明涉及一种酯类化合物的应用，尤其涉及一种酯类化合物在预防或/和治疗急慢性心血管疾病的药物中的应用。

背景技术

心血管疾病，是全球死亡和致残的主要原因。急性心肌梗死(Acute myocardialinfarction，AMI)多继发于多种因素引起的冠状动脉粥样硬化的斑块破裂，发生出血或诱发急性闭塞性血栓，堵塞冠脉，使局部心肌细胞供血急剧减少或完全中断，发生急性、持续性缺血缺氧，导致局部心肌坏死，最终发展为心衰。

急性心梗是心血管疾病致死的主要原因，其发病迅速、死亡率高且预后不良。心肌缺血为临床常见的心血管疾病之一，是多种心肌疾病及心衰的起始过程，与各种原因引起的冠状动脉持续性缺血缺氧导致的心律失常、心肌梗死等发生相关，其发病率近来呈上升趋势。近年来由心肌缺血所致的急慢性心血管疾病的患病率、再住院率和死亡率居高不下，已成为严重威胁人类健康的全球性公共卫生问题。因此，寻找防治心肌缺血改善急慢性心血管疾病的药物具有重要意义。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种具有显著的急慢性心血管疾病疗效的酯类化合物的应用。

技术方案：本发明所述的酯类化合物具有如下结构，其应用于预防或/和治疗急慢性心血管疾病的药物的制备，

所述药物优选为预防或/和治疗急性心梗、慢性心肌缺血的药物；进一步优选为预防或/和治疗由心肌缺血引发的急性心梗、慢性心肌缺血的药物；更优选为预防或/和治疗选自以下任一疾病的药物：因冠状动脉血流急性受阻引发的心肌严重缺血坏死，临床多表现为恶性心律失常、心源性休克；或者，更优选为预防或/和治疗选自以下任一疾病的药物：因心肌梗死、心肌病、血流动力学负荷过重或炎症引发的心肌损伤、心肌结构或功能的病变、心室泵血或充盈功能低下，临床主要表现为呼吸困难、乏力和体液潴留。

本发明基于计算机虚拟分析技术和实验筛选结果，首次证实上述酯类化合物可用于预防、缓解和/或治疗急性心梗和慢性心肌缺血等心血管疾病。

具体地，所述药物减少急性心梗患者的心脏梗死的面积，降低血清中肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白、内皮素的含量；提高慢性心肌缺血患者的心脏的射血分数、缩短分数、每搏输出量，降低左心室舒张末期间隔厚度；改善慢性心肌缺血患者的心脏组织病理损伤，降低心重指数、心肌细胞的横截面积；降低慢性心肌缺血患者的血清中氨基末端脑利钠肽前体、内皮素的含量。

更具体地，所述药物用于临床的单次使用剂量为0.01～0.1mg/kg(依据小鼠实验的单次使用剂量0.1～1mg/kg，参照本领域通用的剂量折算法则计算得到)。

应用的给药方式可以为口服或注射给药，具体为腹腔内、皮下、静脉内或肌肉内注射；还可以添加稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等药学上可接受的载体，制成一定形式的药物组合物，如散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、徽囊剂、软胶囊剂、膜剂、栓剂、注射剂、膏剂、散剂、冲剂、气雾剂等制剂。药物组合物中活性成分的剂量优选为0.01～1重量份，具体可按照0.01～1mg/kg、0.01～0.1mg/kg、0.03～0.1mg/kg折算。

应用的活性成分还可以为药学上可接受的盐型，具体为所述酯类化合物与选自以下任一的酸所形成的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、碳酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸、杏仁酸、枸橼酸、阿魏酸。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：

本发明的酯类化合物能够显著改善心肌缺血引发的急性心梗和慢性心肌缺血的相关症状，具有保护心脏和血管内皮的作用，可用于防治急慢性心血管疾病，用药剂量低，具有临床应用价值，应用前景广阔。

附图说明

图1为不同剂量的酯类化合物对急性心梗小鼠心脏梗死面积的影响，其中A为心脏组织TTC染色图，B为TTC染色统计图(n＝6，以mean±SEM表示，

图2为不同剂量的酯类化合物对急性心梗小鼠血清生化指标的影响，其中A为肌酸激酶同工酶统计图，B为肌钙蛋白T统计图，C为内皮素-1统计图(n＝9-12，以mean±SEM表示，

图3为高剂量的酯类化合物对慢性心肌缺血小鼠心功能障碍和心脏重构的影响，其A为M型超声心动图，B为左心室射血分数统计图，C为左心室缩短分数统计图，D为每搏输出量统计图，E为左心室舒张末期间隔厚度统计图(n＝6，以mean±SEM表示，

图4为高剂量的酯类化合物对慢性心肌缺血小鼠心脏组织病理结构损伤的影响，其A为HE和Masson染色图，B为HE染色病理评分统计图，C为Masson染色胶原面积统计图(n＝3，以mean±SEM表示，

图5为高剂量的酯类化合物对慢性心肌缺血小鼠心肌肥大的影响，其A为WGA染色图，B为心肌细胞横截面积统计图，C为心重指数(心脏重量/体重)统计图(n＝3，以mean±SEM表示，

图6为高剂量的酯类化合物对慢性心肌缺血小鼠血清生化指标的影响，其中A为氨基末端脑利钠肽前体统计图，B为内皮素-1统计图(n＝6-9，以mean±SEM表示，

各图中显示的6号化合物即为本发明所述的酯类化合物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例1：酯类化合物减少冠脉结扎诱导的急性心梗小鼠心脏梗死面积

1、实验材料

(1)仪器和试剂

小动物人工呼吸机(DW-3000)(北京众实迪创科技发展公司)，6-0带线医用缝合针(宁波医用缝针有限公司)，Infinite200Pro酶标仪(瑞士Tecan公司)，电子分析天平(上海Mettler-Toledo公司)，Milli-Q超纯水机(美国Millipore公司)，组织剪、手术镊(上海手术器械厂)

酯类化合物由苏州满元生物科技有限公司提供，卡托普利购自美国Sigma公司，TTC粉末购自上海麦克林生化科技股份有限公司，肌酸激酶同工酶CK-MB、肌钙蛋白cTnT以及内皮素ET-1购自湖南艾方生物科技有限公司。

(2)实验动物

C57BL/6J雄性小鼠105只，购于江苏华创信诺医药科技有限公司(实验动物生产许可证号SYXK(苏)2022-0013)。

2、实验方法

(1)动物分组、模型制备和给药

将105只雄性C57BL/6J小鼠随机分为7组(15只/组)：

假手术组：于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；

假手术+酯类化合物组：于术前2h灌胃酯类化合物1mg/kg，1次；

模型组：于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；

酯类化合物低剂量组：于术前2h灌胃酯类化合物0.1mg/kg，1次；

酯类化合物中剂量组：于术前2h灌胃酯类化合物0.3mg/kg，1次；

酯类化合物高剂量组：于术前2h灌胃酯类化合物1mg/kg，1次；

阳性药卡托普利组：于术前2h腹腔注射卡托普利160mg/kg，1次。

急性心梗小鼠模型制备方法如下：采用腹腔注射的方式给予C57BL/6J小鼠3％戊巴比妥钠，小鼠麻醉后，采用仰卧位固定，连接人工呼吸机后，剪去小鼠胸部的毛，使用碘伏消毒。在胸骨左侧作一纵行切口，钝性分离小鼠的胸大肌，并暴露出第四根肋骨，用止血钳将胸腔打开并撕开心包，使心脏暴露，轻压胸廓将心脏挤出胸腔外，用6-0号丝线，在冠状动脉左前降支下方3mm处和线穿过的心肌组织一起结扎，将心脏迅速放回胸腔，将胸腔空气完全挤出后进行缝合。各组小鼠分别在结扎后24h后取血和心脏组织用于后续实验。

(2)心脏梗死面积测定

摘取心脏，置于-20℃冰箱冷冻6h后，从心尖开始，迅速切1mm左右的薄片，共取5片。再将切片置于含1％TTC(pH 7.4)染液的6孔细胞培养板中，37℃孵育箱中避光孵育20min后取出，吸去多余的染液，拍照记录。采用图像分析系统Image J测量心肌梗死面积，计算其占心脏面积百分比，再进行统计分析。

(3)数据处理

所有数据采用Graphpad Prism 8软件进行统计，以mean±SEM表示，对于两组间的比较用Students’t检验，当三组或三组以上比较时用单因素方差分析，检验采用Dunnett’s检验，P<0.05认为有统计学意义。

3、实验结果

如图1所示，与假手术组相比，假手术给药组小鼠心肌组织呈红色，未见明显梗死区域。而模型组小鼠心脏左室壁可见白色梗死区域，梗死面积达33％(

实施例2：酯类化合物对冠脉结扎诱导的急性心梗小鼠血清中肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白以及内皮素的改善作用

1、实验材料

同实施例1。

2、实验方法

(1)动物分组、模型制备和给药方法同实施例1。

(2)血清肌酸激酶同工酶CK-MB、肌钙蛋白cTnT以及内皮素ET-1的检测

各组小鼠造模24h后，进行眼眶取血。室温静置30min后，离心(3500rpm，10min)，取上清并分装保存。根据肌酸激酶同工酶CK-MB、肌钙蛋白cTnT以及内皮素ET-1试剂盒说明书进行检测。

(3)数据处理

同实施例1。

3、实验结果

结果如图2所示，与假手术组比较，经冠脉结扎后，模型组小鼠血清CK-MB、cTnT和ET-1水平显著增加(

实施例3：酯类化合物对冠脉结扎诱导的慢性心肌缺血小鼠心功能障碍和心脏重构的改善作用

1、实验材料

仪器、实验动物同实施例1。小动物高频彩色超声3100LT成像系统购自加拿大Visonsonic公司。

WGA粉末购自美国Sigma公司，Aficamten购自美国MedChemExpress公司，氨基末端脑利钠肽前体NT-proBNP以及内皮素ET-1试剂盒购自湖南艾方生物科技有限公司。

2、实验方法

(1)动物分组、模型制备和给药

将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组(12只/组)：

假手术组：术后灌胃等量生理盐水(1次/日)，连续2周；

模型组：术后灌胃等量生理盐水(1次/日)，连续2周；

酯类化合物组：术后灌胃酯类化合物1mg/kg(1次/日)，连续2周；

Aficamten组：术后灌胃Aficamten 1mg/kg(1次/日)，连续2周。

造模方法同实施例1。各组小鼠分别在造模2周后取血和心脏组织用于后续实验。

(2)超声心动图检测

冠脉结扎2周后，采用小动物高频彩色超声仪检测各组小鼠心功能和心脏维度。采用异氟烷麻醉小鼠后将其仰卧位固定于操作台上，连接好相应仪器，测定小鼠左室射血分数EF、左室缩短分数FS、每搏输出量SV以及左室舒张末期间隔厚度IVS；d。

(3)数据处理

同实施例1。

3、实验结果

结果如图3所示，与假手术组相比，冠脉结扎2周后，模型组小鼠左室射血分数、缩短分数以及每搏输出量均显著降低(

实施例4：酯类化合物对冠脉结扎诱导的慢性心肌缺血小鼠心脏组织病理损伤的改善作用

1、实验材料

仪器、试剂和实验动物同实施例3。

2、实验方法

(1)动物分组、造模和给药同实施例3。

(2)HE和Masson染色

各组小鼠取血后摘取心脏，在预冷PBS溶液中挤出残留血液，滤纸吸干残液。使用4％多聚甲醛溶液固定心脏组织24h，采用石蜡包埋，送至武汉塞维尔生物科技有限公司进行HE和Masson染色。采用数字扫描仪对切片进行扫描，利用Image J软件计算胶原面积，并由专业人员对HE切片进行双盲评分。

(3)数据处理

同实施例1。

3、实验结果

如图4所示，与假手术组相比，冠脉结扎2周后，模型组小鼠心肌细胞排列无规则，结构断裂，部分心肌细胞呈空泡化，细胞核固缩，出现炎性细胞浸润；同时出现大量的蓝染胶原纤维，心脏肌束排列杂乱(

实施例5：酯类化合物对冠脉结扎诱导的慢性心肌缺血小鼠心肌肥大的改善作用

1、实验材料

仪器、试剂和实验动物同实施例3。

2、实验方法

(1)动物分组、造模和给药同实施例3。

(2)心重指数测定

各组小鼠禁食12h后称其体重，摘取心脏后采用预冷PBS将心脏内残留的瘀血冲洗干净，小心修剪心脏周围的组织和血管，用滤纸吸干心脏表面残留的液体，采用精密天平称取全心重量。

(3)WGA染色

取心脏组织冰冻切片于湿盒中室温平衡30min(保持盒内湿润环境)，PBS漂洗3次(5min/次)，将切片稍擦干后，组画笔小心圈出心脏组织。圈内小心滴加WGA染液(5g/mL)，室温下避光孵育1h。将切片置于含有PBS的玻璃槽中清洗3次(5min/次)，滤纸擦干后，小心滴加含DAPI的抗荧光淬灭剂，小心封片，于激光共聚焦显微镜下观察并拍照。

(4)数据处理

同实施例1。

3、实验结果

如图5所示，与假手术组相比，冠脉结扎2周后，模型组小鼠心重指数显著增加，心肌细胞横截面积明显增大(

实施例6：酯类化合物对冠脉结扎诱导的慢性心肌缺血小鼠血清生化指标的改善作用

1、实验材料

仪器、试剂和实验动物同实施例3。

2、实验方法

(1)动物分组、造模和给药同实施例3。

(2)氨基末端脑利钠肽前体NT-proBNP、内皮素ET-1的检测

各组小鼠造模24h后，进行眼眶取血。室温静置30min后，离心(3500rpm，10min)，取上清并分装保存。根据氨基末端脑利钠肽前体NT-proBNP以及内皮素ET-1试剂盒说明书进行检测。

(3)数据处理

同实施例1。

3、实验结果

如图6所示，与假手术组比较，经冠脉结扎后，模型组小鼠血清NT-proBNP和ET-1水平显著增加(