一类ZL006-05的甲基（3-甲氨基丙基）氨基甲酸酯衍生物及其药学上可接受的盐及其药物用途

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其是指一类ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物及其药学上可接受的盐及其药物用途。

背景技术

脑卒中严重危害人类健康。nNOS-PSD-95解偶联剂4-N-(2-羟基-3，5-二氯苄基)氨基水杨酸(ZL006)，能够在不影响NMDAR、nNOS生理功能的前提下，减少NMDAR介导的NO的病理性释放，对谷氨酸刺激下的神经细胞损伤显示出明显的神经保护作用，改善中脑动脉闭塞(MCAO)再灌注动物神经缺陷症状、缩小梗死容积(NatureMedicine 2010,16,1439–1443)。发明专利PCT/CN2012/083455公开了ZL006的2-坎醇酯(ZL006-05)，ZL006-05具有良好的抗脑卒中(Stroke VascNeurol.2023Apr25:svn-2022-002156)、神经病理性疼痛作用(Theranostics 2021；11(12):5970-5985)。ZL006-05目前已经进入2期临床研究。由于神经病理性疼痛、脑卒中的恢复给药需要多次给药，口服制剂更适合临床需求。

但是，ZL006-05水溶性差，口服生物利用度差(4.2％)，不利于制成口服制剂。在ZL006-05灌胃给药后，90mg/kg血药浓度与30mg/kg相当，提示继续增加口服剂量，无法获得更好的药效。中国发明专利CN110218202A，公开了一类N-苄基取代的氨基水杨酸2-坎醇酯的哌嗪衍生物及其药物用途，该类药物能够提高口服后药物的血药浓度，但是进一步的研究显示，其没有显著的镇痛作用或者抗脑卒中的药效。其原因可能是其在体内产生的ZL006-05的非常有限，提示其主要代谢物不是ZL006-05(中国发明专利CN111233789A)。

中国发明专利CN111233789A，公开了一类2-哌嗪乙基氨基甲酸苯酯衍生物及其药物用途，该类药物注射给药能够代谢为ZL006-05，具有良好的抗脑卒中药效。但是口服后ZL006-05的血药浓度，没有提高。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中ZL006-05及其衍生物口服给药以后，无法获得ZL006-05高血药浓度的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了一类ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物的药学上可接受的盐及其药物用途。

本发明的第一个目的在于提供ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物的药学上可接受的盐，结构通式如式(1)所示：

在本发明的实施例中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐或4-甲基苯磺酸盐。

在本发明的实施例中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐。

本发明的第二个目的在于提供一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分为所述甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐。

本发明的第三个目的在于提供所述的ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、所述的药物组合物在制备治疗脑卒中或神经病理性疼痛药物中的应用。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

本发明得到的ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物，口服后可以获得ZL006-05血药浓度更高。可用于制备治疗脑卒中、神经病理性疼痛等疾病的药物。

中国发明专利CN110218202A，中国发明专利CN111233789A公开的实施例化合物，为ZL006-05的氨基甲酸酯衍生物，具有较好的稳定性，在体内难以迅速代谢出ZL006-05。本发明的实施例化合物，在酸性条件下具有比较好的稳定性，在中性条件下，分子内N原子上的孤对电子向羰基进攻，形成分子内反应，能够迅速释放出ZL006-05，机理如图4所示。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

图1是本发明目标化合物合成示意图。

图2是本发明目标化合物1灌胃给药后，ZL006-05的血药浓度(单位为μg/mL)。

图3是本发明口服本发明实施例1所得目标化合物对神经病理性疼痛的镇痛作用实验结果图。

图4是本发明实施例1中所得目标化合物在体内的反应机理图。

具体实施方式

为了解决背景技术中指出的技术问题，本发明提出了一类ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐及其应用。

本发明通过以下具体方案来实现：

本发明提供了一类ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐，结构通式如式(1)所示：

在具体实施例中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐或4-甲基苯磺酸盐。

在具体实施例中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐。

在具体实施例中，所述ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物的药学上可接受的盐的结构式如式2所示：

其中，HX为HCl、H

本发明所述一类ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐通过以下方法制备得到：

(1)、将对硝基水杨酸右崁醇酯、三乙胺混合于有机溶剂中，加入含有三光气的有机溶剂，混合反应，得到化合物1；将甲基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯、三乙胺混合于有机溶剂中，加入化合物1，混合反应得到中间体1-1；

(2)、将中间体1-1溶于反应溶剂中，并加入催化剂，氢气气氛下回流反应，得到中间体1-2；

(3)、将中间体1-2溶于反应溶剂中，并加入3,5-二氯水杨醛溶液，反应过滤干燥得到化合物2；向干燥后化合物2中加入乙醇，分多次加入NaBH4进行反应；调节反应液至酸性析出固体物质，过滤取滤液，并向滤液中加入水，混合析出白色固体，过滤取固相，得到中间体1-3；

(4)、将中间体1-3溶于有机溶剂中，加入盐酸饱和溶液，搅拌反应，得到所述甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物的盐酸盐；

在具体实施例中，步骤(1)中，至少满足以下条件中的一种或多种：

a)：所述对硝基水杨酸右崁醇酯、三乙胺与三光气的摩尔比为1：1：0.6。

b)：所述甲基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯与三乙胺l的摩尔比为1：10。

c)：所述有机溶剂为本领域常规的有机溶剂，优选为二氯甲烷。

在具体实施例中，步骤(2)中，至少满足以下条件中的一种或多种：

I)、所述催化剂选自钯碳；

II)、反应溶剂为本领域常规的有机溶剂，优选为甲醇；

III)、所述回流反应温度为70℃、反应时间为3小时。

在具体实施例中，步骤(3)中，至少满足以下条件中的一种或多种：

反应液的酸性pH值范围为5；

所述中间体1-2与3,5-二氯水杨醛的摩尔比为1：1。

本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物的活性成分为所述甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐。

本发明又提供了ZL006-05的甲基(3-甲氨基丙基)氨基甲酸酯衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗脑卒中或神经病理性疼痛药物中的应用。

本发明又提供了上述所述药物组合物在制备治疗脑卒中或神经病理性疼痛药物中的应用。

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1：4-((3,5-二氯-2-羟基苄基)氨基)-2-(((3-(甲基氨基)丙基)氨基甲酰基)氧基)苯甲酸右崁醇酯盐酸盐(目标化合物1)的合成

合成步骤(合成示意图如图1所示)，具体如下：

(1)、向茄型瓶中依次加入对硝基水杨酸(1.83g，10mmol)、右崁醇(3.08g，20mmol)、碳二亚胺盐酸盐(EDCI，2.9g，15mmol)、4-二甲氨基吡(DMAP，0.6g，5mmol)，加入适量二氯甲烷，室温反应24小时，经薄层色谱(TLC)监测反应完成后，加水萃取，有机相旋干，柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：1)即得对硝基水杨酸右崁醇酯，白色固体1.7g，产率：53.3％。

(2)、取对硝基水杨酸右崁醇酯(1.2g,4mmol)，加入三乙胺(0.4g,4mmol)用二氯甲烷溶解制成混合溶液备用。将三光气(710mg,2.4mmol)溶于适量二氯甲烷中，将混合溶液缓慢加入，室温反应6小时。经TLC监测反应完成后，旋干溶剂备用。取甲基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(752mg,4mmol)与三乙胺(0.4g,4mol)用二氯甲烷溶解备用。将上一步所得固体用少量二氯甲烷溶解，将配制好的溶液缓慢加入其中，室温反应2小时，经TLC监测反应完成后，加水萃取，有机相旋干柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝20：1)即得中间体1-1，白色油状物1.5g，产率70.4％。

(3)、将中间体1-1(500mg,1mmol)溶于50mL甲醇中，加入钯碳，通入氢气，70℃下回流反应3小时，经TLC监测反应完成后，抽滤除去钯碳，滤液旋干得到中间体1-2,白色固体400mg，产率：80.4％。

(4)、在干燥的100mL茄型瓶中加入259mg(0.5mmol)对中间体1-2，用20mL无水乙醇完全溶解得溶液A，称取97mg(0.5mmol)3,5-二氯水杨醛，置于100mL烧杯中，用10mL无水乙醇溶解得溶液B，搅拌下将溶液B滴加入溶液A中，常温反应5h，溶液颜色迅速加深，随后产生鲜红色絮状物。将反应液用布氏漏斗抽滤，滤饼用乙醇快速冲洗2次，将滤饼自然烘干，得到红色亚胺中间体。

(5)、将干燥的亚胺中间体置于100mL茄型瓶中，加入20mL无水乙醇，溶液呈浑浊状，搅拌下少量多次加入NaBH

(6)、将中间体1-3(138mg，0.21mmol)溶于10mL乙酸乙酯中，并加入等体积的2M的盐酸乙酸乙酯饱和溶液，搅拌反应1h，经TLC监测反应完成后，倒掉反应瓶中液体，并加入乙酸乙酯多次洗涤，洗涤完成后，旋干多余溶剂，即得目标化合物的盐酸盐112.1mg，产率：90.0％。

1

实施例2：目标化合物的其他药学上可以接受的盐的合成

2.1：4-((3,5-二氯-2-羟基苄基)氨基)-2-(((3-(甲基氨基)丙基)氨基甲酰基)氧基)苯甲酸右崁醇酯硫酸盐的合成

参考目标化合物1的合成方法，以中间体1-3和硫酸乙酸乙酯饱和溶液合成。

2.2：4-((3,5-二氯-2-羟基苄基)氨基)-2-(((3-(甲基氨基)丙基)氨基甲酰基)氧基)苯甲酸右崁醇酯三氟乙酸盐的合成

参考目标化合物1的合成方法，以中间体1-3和三氟乙酸乙酸乙酯饱和溶液合成。

2.3：4-((3,5-二氯-2-羟基苄基)氨基)-2-(((3-(甲基氨基)丙基)氨基甲酰基)氧基)苯甲酸右崁醇酯对甲苯磺酸酸盐的合成

参考目标化合物1的合成方法，以中间体1-3和对甲苯磺酸酸乙酸乙酯饱和溶液合成。

目标化合物的其他药学上可以接受的盐，可以采用中间体1-3和相应的酸，反应获得。

实施例3目标化合物口服后ZL006-05血药浓度测试

C57小鼠口服给予目标化合物(盐酸盐，实施例1所得目标化合物)，在给药后不同时间取血，分离血浆，用高效液相色谱-质谱联用法测定血浆中目标化合物以及ZL006-05浓度。

色谱条件色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱(50mm×2.1mm，1.8μm)；流动相为超纯水-乙腈；流速为0.4mLmin

质谱条件电喷雾电离源(ESI)，采用正离子模式检测；多反应监测(MRM)；所使用的气体均为高纯氮气；气帘气为35psi；离子源电压为5500V，温度为500℃；雾化气(GS1)压力为55psi；辅助加热气(GS2)压力为55psi；碰撞气为Medium；驻留时间3.53min。

采用高效液相色谱-质谱联用法，测定目标化合物1、ZL006-05、对照化合物CN110218202A-2、CN111233789A-2灌胃给药1h和2h后的血药浓度。

实验结果显示：灌胃给药后，ZL006-05给药剂量90mg/kg，其ZL006-05的血药浓度与灌胃给药30mg/kg相当，提示继续增加剂量，无法获得更好的药效。而本发明的目标化合物(盐酸盐)灌胃给药后的ZL006-05血药浓度显著高于灌胃ZL006-05，并且90mg/kg血药浓度显著高于30mg/kg血药浓度。提示本发明目标化合物灌胃给药能够获得比ZL006-05更好的药效。而对照化合物CN110218202A-2、CN111233789A-2灌胃给药后ZL006-05的血药浓度均很低，提示其难以改善口服药效。

实施例4口服目标化合物对神经病理性疼痛的镇痛作用

采用脊神经结扎法(segmental spinal nerve ligation，SNL)制备神经病理性疼痛模型，测定机械性刺激50％缩足反应阈值(paw withdrawal threshold，PWT)，对目标化合物(盐酸盐)的镇痛作用进行了初步的测试。将已测定50％机械性刺激缩足反应阈值基线的小鼠进行SNL手术，于术后第7天，随机分为药物组和溶剂组(n＝8)，分别灌胃给予等体积的药物或1％羧甲基纤维素钠混悬液，药物的剂量为30mg/kg，药物用1％羧甲基纤维素钠混悬液配置，单次给药。给药后2小时测量其机械性刺激缩足反应阈值变化情况，实验结果见图3。目标化合物灌胃给药后的PWT显著高于ZL006-05，而对照化合物CN110218202A-2、CN111233789A-2灌胃给药的PWT显著低于ZL006-05。以上实验结果提示：本发明的目标化合物具有较好的口服给药的药效。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。