阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法。

背景技术

阿伐那非(Avanafil)，化学名为4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2S)-2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲酰胺，CAS号为330784-47-9，分子式：C23H26ClN7O3，分子量：483.95。

N,N’-二异丙基碳二亚胺(别名为二异丙基碳二亚胺，CAS号为693-13-0，分子式：C

专利文献1报道了一种检测多肽中N,N’-二异丙基碳二亚胺的方法，其采用液相色谱与质谱联用的方法在其对照溶液浓度的10％处可以有效检测，检出限浓度为0.8μg/mL。但是液质联用的检测方式需要价格高昂的液质仪器才能进行测定，成本较高，并且采用液质联用的方式检测阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺时，阿伐那非和N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测峰重叠，不能区分，难以满足准确检测N,N’-二异丙基碳二亚胺含量的要求。

专利文献2报道了一种多肽中测定N,N’-二异丙基碳二亚胺含量的分析方法，该方法采用气相色谱(GC)通过直接进样的方式进行检测。但是，该方法的检测灵敏度为2μg/mL，不能满足更低浓度的N,N’-二异丙基碳二亚胺含量测定的检验要求。而阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的残留量极低，在ppm级，为了满足检测要求，需要增加溶液的进样浓度，这样容易污染仪器衬管，影响检测结果。

因此，需要一种操作简单、定量准确、灵敏度高且经济实用的分析方法，以测定阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺残留量的检测方法，这具有重大的质量控制意义，有助于提高用药的安全性。

现有技术文献

专利文献1：CN106153748B

专利文献2：CN113092646A

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，该方法定量准确、灵敏度高且经济实用。

为了实现上述目的，本发明的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，包括以下步骤：

1)对照品溶液的制备：取N,N’-二异丙基碳二亚胺加入有机溶剂中，作为对照品溶液；

2)供试品溶液的制备：取阿伐那非样品加入与步骤1)相同的有机溶剂中，作为供试品溶液；

3)检测：将所述对照品溶液和所述供试品溶液分别至于顶空瓶中，采用顶空气相色谱法在下述条件下进行检测，

顶空平衡温度为60～120℃，顶空平衡时间为30～60分钟；

色谱柱采用胺类化合物分析柱，进样口温度为150～300℃；

采用程序升温，条件为：起始温度为100～150℃，维持0～25分钟，以20～50℃/min升温至220～260℃，维持10～25分钟；

采用氢火焰离子化检测器，检测器温度为230～300℃；以及

4)含量计算：采用外标法以峰面积计算阿伐那非样品中的N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量。

在一个实施方式中，所述胺类化合物分析柱的长度为30m～60m，内径为0.25mm～0.53mm。

在一个实施方式中，所述胺类化合物分析柱为长度为30m、内径为0.53mm的CP-Volamine分析柱。

在一个实施方式中，在步骤3)中，所述顶空平衡温度为90℃，所述顶空平衡时间为30分钟；所述进样口温度为200℃；所述程序升温的条件为：起始温度110℃，维持20分钟，以50℃/min升温至240℃，维持10分钟；所述检测器温度为250℃。

在一个实施方式中，所述对照品溶液与所述顶空瓶的体积比为1:10～1:5，所述供试品溶液中加入的溶剂与所述顶空瓶的体积比为1:10～1:5。

在一个实施方式中，所述有机溶剂为乙醇、N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

在一个实施方式中，所述对照品溶液的浓度在3.00μg/mL～4.00μg/mL范围内。

在一个实施方式中，所述供试品溶液中阿伐那非的浓度为0.2g/mL～0.8g/mL。

在一个实施方式中，在步骤3)中，气相色谱中使用的载气为高纯度氮气或氦气。

本发明的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法采用常规的气相色谱仪，检测和维护成本低，操作简便，采用顶空进样的方式，进样精密度高，检出限溶液浓度为0.4μg/mL，满足更低浓度的N,N'-二异丙基碳二亚胺含量测定的检验要求，采用胺类化合物分析柱能够使色谱峰更好地分离，有利于N,N’-二异丙基碳二亚胺的检出，同时可以有效改善峰型，提高检测结果的准确性和精密度。本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的残留量的检测方法精密度、准确度高，重现性好，可用于阿伐那非的质量控制及综合评价，为提高和控制阿伐那非的质量提供了可靠保障。

附图说明

图1为本发明实施例1中的供试品溶液的气相色谱图。

图2为本发明实施例1中的对照品溶液的气相色谱图。

图3为本发明实施例2中的空白溶液的气相色谱图。

图4为本发明实施例2中的线性图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施方式及附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明的一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。

本发明的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的残留量的检测方法，包括以下步骤：

对照品溶液和供试品溶液的制备

取N,N’-二异丙基碳二亚胺，加入有机溶剂溶解/稀释后定容，作为对照溶液。取阿伐那非样品，加入相同的有机溶剂，作为供试品溶液；

在一个实施方式中，上述有机溶剂可以为乙醇、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，优选为N,N-二甲基甲酰胺。

根据《基因毒性杂质限度指南》(EMEA)中的TTC方法(毒性阈值1.5μg/日)并结合阿伐那非最大日剂量200mg/日计算，浓度限度＝TTC(μg/日)/剂量(g/日)，得到N,N’-二异丙基碳二亚胺的限度为0.00075％(即7.5ppm)，因此，本发明提供的检测方法中对于阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的基因毒性杂质限度设定为7.5ppm。根据N,N’-二异丙基碳二亚胺的基因毒性杂质限度来确定本发明提供的方法中的对照品溶液浓度和供试品溶液浓度，以2mL溶液为例，N,N’-二异丙基碳二亚胺的基因毒性杂质限度浓度为3.75μg/mL。在一个实施方式中，上述对照品溶液浓度在3.00μg/mL～4.00μg/mL范围内，优选地为3.75μg/mL。

由于阿伐那非样品中待测的N,N’-二异丙基碳二亚胺含量非常低，为了提高检测的准确度，通常需要增加阿伐那非样品的浓度，在本发明的实施方式中，上述供试品溶液中阿伐那非的浓度在0.2g/mL～0.8g/mL范围内，优选地上述供试品溶液中阿伐那非的浓度为0.5g/mL。

检测

将上述对照品溶液和上述供试品溶液分别至于顶空瓶中，采用顶空气相色谱法在下述条件下进行检测：

顶空平衡温度为60～120℃，顶空平衡时间为30～60分钟；色谱柱采用胺类化合物分析柱，进样口温度为150～300℃；采用程序升温，条件为：起始温度为100～150℃，维持0～25分钟，以20～50℃/min升温至220～260℃，维持10～25分钟；采用氢火焰离子化检测器，检测器温度为230～300℃。

其中，上述顶空瓶的容积可以为10mL、20mL等，但不限于此，本领域技术人员可以根据检测的实际需求进行选择。在一个实施方式中，顶空瓶中上述对照品溶液体积与上述顶空瓶容积的比在1:10～1:5范围内，优选地为1:5；上述供试品溶液中加入的溶剂体积与上述顶空瓶容积的比在1:10～1:5范围内。对于对照品溶液，当顶空瓶中溶液体积与上述顶空瓶容积的体积比较小时，也就是说，溶液体积相对于顶空瓶容积偏小时，顶空瓶中产生的待测物气体浓度较小，进样精密度的RSD结果偏大，导致测试结果的准确性降低。当顶空瓶中溶液体积与上述顶空瓶容积的比较大，也就是说，溶液体积相对于顶空瓶容积偏大时，顶空瓶中产生的待测物气体浓度较大，容易对仪器和色谱柱产生污染，影响结果的准确性以及增加仪器的维护成本。对于供试品溶液，加入的溶剂体积小于2mL则不能将样品完全淹没，导致测量结果不准确，而加入过多溶剂则会降低样品浓度，从而降低检测灵敏度；并且加入过多溶剂会增加检测成本，不利于大批量检测，此外，当溶剂和样品体积超过顶空体积的2/3时，顶空瓶中没有足够的空间使样品挥发出来，导致检测结果不准确。在本发明的一个优选实施方式中，选用10mL的顶空瓶，其中加入的上述供试品溶液中的溶剂的体积或上述对照品溶液的体积为2mL，其进样精密度的RSD相对较低，以确保测试结果的准确性。

本发明的检测方法中色谱柱采用胺类化合物分析柱，本发明人经研究发现，当采用普通色谱柱进行本发明的气相色谱检测时，待测物色谱峰拖尾严重，而采用胺类化合物分析柱进行本发明的气相色谱检测时，色谱图中N,N’-二异丙基碳二亚胺的峰能与其他物质的峰完全分离，并且峰型良好，有利于提高后续数据分析的准确性。在一个实施方式中，上述色谱柱的长度在30m～60m范围内，上述色谱柱的内径在0.25mm～0.53mm范围内，优选地，上述色谱柱的长度在30m～40m范围内，上述色谱柱的内径在0.4mm～0.53mm范围内。在一个优选实施方式中，上述色谱柱选用30m×0.53mm的CP-Volamine柱。本发明的优选实施方式中所选用的CP-Volamine柱具有很高的稳定性和化学惰性，可以用于分析高沸点、高极性有机胺，采用CP-Volamine柱进行气相色谱检测得到的色谱峰峰型更好，在后续的数据分析中更有利于提高检测结果的准确性。

本发明的检测方法中采用氢火焰离子化检测器，氢火焰离子化检测器是典型的质量型检测器，具有结构简单、稳定性好、灵敏度高、相应迅速的特点。检测器温度大于或等于程序升温的最高温度，且并不得低于150℃，以阻止水汽凝结，防止氢火焰熄灭。检测器温度为230～300℃，例如可以为230℃、240℃、250℃、260℃、270℃、280℃、290℃、300℃或它们中任意两个之间的范围。在一个优选实施方式中，上述检测器温度为250℃。

本发明的检测方法中进样口温度为150～300℃。上述进样口温度根据所用上述有机溶剂的沸点设定，通常不得低于150℃，并且需高于有机溶剂的沸点20℃以上，但最好不高于色谱柱所能耐受的最高温度，以保证溶剂能在瞬间完全汽化以及延长色谱柱的使用寿命。举例来说，上述进样口温度可以为150℃、160℃、170℃、180℃、190℃、200℃、210℃、220℃、230℃、240℃、250℃、260℃、270℃、280℃、290℃、300℃或它们中任意两个之间的范围。在一个优选实施方式中，上述进样口温度为200℃。

本发明的检测方法中采用程序升温，其条件为：起始温度为100～150℃，维持0～25分钟，以20～50℃/min升温至220～260℃，维持10～25分钟。可以理解的是，由于不同溶剂的沸点不同，色谱柱需要通过升温程序洗脱不同的溶剂，升温速率过快会使色谱图的基线升高过大过尖，不够美观，升温速率过慢则会增加时间成本。因此，在本发明的实施方式中，保持适当的升温速率是非常必要的，其中梯度温度及维持时间合适，可保证N,N’-二异丙基碳二亚胺在短时间内洗脱；如果起始温度低于100℃，则N,N’-二异丙基碳二亚胺可能不会在短时间内洗脱，若想保证N,N’-二异丙基碳二亚胺洗脱，则需要增加维持时间，因而增加了检验成本。反之，若升高起始温度至100℃以上，可保证N,N’-二异丙基碳二亚胺在短时间内洗脱，则维持时间相应减少，因而可以减少检验成本。然而，如果起始温度高于150℃，N,N’-二异丙基碳二亚胺虽然能够在短时间内洗脱，却会与溶剂峰或其他杂峰难以分离。另外，待N,N’-二异丙基碳二亚胺洗脱后，快速提高升温速率，并保持较高温度的一段时间，既能减少检验成本，还可以老化色谱柱，将难以洗脱的其他物质洗脱出来，避免后续检测受到干扰。在一个实施方式中，上述程序升温为：起始温度100～120℃，维持20～25分钟，以40～50℃/min升温至240～260℃，维持10～20分钟。在一个优选实施方式中，上述程序升温为：起始温度110℃，维持20分钟，以50℃/min升温至240℃，维持10分钟；该程序升温程序既能保证N,N’-二异丙基碳二亚胺能够在短时间内洗脱，并且与相邻峰达到有效分离，减少检测成本，以及还能老化色谱柱，避免后续检测出现干扰。

在本发明的一个优选方案中采用N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂，其中N,N’-二异丙基碳二酰胺的沸点为145℃～148℃；N,N-二甲基甲酰胺溶剂的沸点为153℃；阿伐那非性状为白色结晶性粉末；当起始温度设置为110℃时，一般原料生产过程中常用的有机溶剂，例如甲醇、乙醇、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、三乙胺、丙酮、四氢呋喃等沸点都低于100℃，通常都在色谱图初期出峰；并且能将N,N-二甲基甲酰胺峰与N，N’-二异丙基碳二亚胺峰之间的分离情况达到符合要求。因此采用N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂不会干扰N,N’-二异丙基碳二酰胺的检测，从而提高本发明提供的检测方法的准确性。

本发明的检测方法中顶空平衡温度为60～120℃，顶空平衡时间为30～60分钟。顶空平衡温度的确定需要考虑生产过程中残留在待测样品中残留溶剂的沸点，对于沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的平衡温度，但同时应兼顾待测样品的热分解特性，尽量避免待测样品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。此外，顶空平衡温度通常还应低于上述供试品的溶剂的沸点至少10℃，以避免顶空平衡过程中因温度过高而导致检测系统压力过大。顶空平衡时间一般为30～60分钟，以保证有足够的时间使样品溶液的气-液两相达到平衡，此外，顶空平衡时间通常不宜过长，例如超过60分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。在一个实施方式中，上述色谱条件可以包括上述顶空平衡温度为80～100℃，上述顶空平衡时间为30～40分钟。在一个优选实施方式中，上述色谱条件可以包括上述顶空平衡温度为90℃，上述顶空平衡时间为30分钟，以缩短顶空平衡的时间，并且确保顶空气体中待测物的浓度能够满足检测灵敏度的要求，同时避免由于高温高压对设备产生的额外损耗。

在一个实施方式中，本发明的检测方法中进样体积为0.1～1mL。可以理解的是，本领域技术人员可以根据检测需求确定进样体积，对此本发明不做具体限制。在一个优选实施方式中，上述进样体积为1mL。

在一个实施方式中，本发明的检测方法中所使用的载气为高纯度氮气或氦气，在一个优选实施方式中，上述载气为氮气。可以理解的是，高纯度是指纯度范围≥99.99％。

本发明的检测方法采用外标法，以峰面积计算待测阿伐那非样品中残留的N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量。所检测到的阿伐那非样品中残留的N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量根据下面公式1计算：

其中，A样品为供试品溶液中N,N’二异丙基碳二亚胺峰的峰面积；

A对照为对照品溶液中N,N’二异丙基碳二亚胺峰的峰面积；

C对照为对照品溶液的浓度，mg/mL；

L为供试品溶液的稀释倍数；

W为样品的称样量，mg。

在一优选实施方式中，本发明的检测方法，包括以下步骤(1)～(4)：

(1)取N,N’-二异丙基碳二亚胺375mg，精密称定，置100mL量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置100mL量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL，置50mL量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

(2)取阿伐那非样品1.0g，精密称定，置于10mL顶空瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺2mL，密封，作为供试品溶液。

(3)精密量取2mL上述对照品溶液，置于10mL顶空瓶中，密封。采用气相色谱法对供试品溶液和对照品溶液进行检测，其中气相色谱条件为：以30m×0.53mm的CP-Volamine柱为色谱柱；起始温度为110℃，维持20分钟，以50℃/min升温至240℃，维持10分钟；进样口温度为200℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；顶空平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟；进样体积1mL。

(4)按外标法以峰面积计算阿伐那非中残留的N,N’-二异丙基碳二亚胺含量。

本发明的检测方法采用气相色谱仪，检测和维护成本低，操作简便，无需配备昂贵且维护成本高的质谱仪。另外，通过采用胺类化合物分析柱能够使色谱峰更好地分离，有利于N,N’-二异丙基碳二亚胺的检出，并且可以有效改善峰型，使检测结果的准确性和精密度更高。通过采用顶空进样的方式，进样精密度高，检出限为0.4μg/mL，满足更低浓度的N,N’-二异丙基碳二亚胺含量测定的检验要求。

本发明的检测方法能够使色谱峰更好地分离，利于N,N’-二异丙基碳二亚胺的检出，同时可有效改善峰形，使检测结果的准确度及精密度更高。经方法学验证，本发明的方法线性相关系数可达0.9965，远高于气相色谱法0.990的线性相关系数要求。

本发明的方法对于N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测灵敏度可达0.4μg/mL，远低于阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的基因毒性杂质限度浓度3.75μg/mL，说明该方法的灵敏度高，可以满足N,N’-二异丙基碳二亚胺作为基因毒性杂质的含量测定。此外，本发明经方法学验证，平行测定6次样品的加样回收率为107.5％，符合药典规定，因而准确度高。

由此表明，本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法的精密度和准确度高，重现性好，可用于阿伐那非的质量控制及综合评价，为提高和控制阿伐那非的质量提供了可靠保障。

实施例

实施例1：溶液配制

空白溶液：精密量取N,N-二甲基甲酰胺2mL，置于10mL顶空瓶中，密封。

供试品溶液：取待测阿伐那非样品1.0g，精密称定，置于10mL顶空瓶中，向其中加入N,N-二甲基甲酰胺2mL，密封。

对照品溶液：取N,N’-二异丙基碳二亚胺375mg，精密称定，置100mL量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀得到3.75mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺；然后精密量取1mL上述3.75mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺，置100mL量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀得到0.0375mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺；然后精密量取5mL上述0.0375mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺，置50mL量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀得到0.00375mg/mL，即3.75μg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺溶液；精密量取2mL的3.75μg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺溶液，置10mL的顶空瓶中，密封。

实施例2：气相色谱检测

取供试品溶液和对照品溶液分别顶空进样，记录色谱图。

色谱条件如下：

气相色谱仪：岛津GC 2010Plus；

色谱柱：CP-Volamine柱，30m×0.32mm；

柱温程序升温：起始温度为110℃，维持20分钟，以50℃/min升温至240℃，维持10分钟；

进样口温度：200℃；

检测器：氢火焰离子化检测器，检测器温度：250℃；

顶空平衡温度：90℃，平衡时间：30分钟；

进样体积：1mL。

供试品溶液的色谱图如图1所示，对照品溶液的色谱图如图2所示。采用外标法以峰面积计算阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量，计算结果示于表1。

表1

结果显示未检出N,N’-二异丙基碳二亚胺，表明在供试品溶液中不包含N,N’-二异丙基碳二亚胺。

方法学验证

实施例3：专属性

采用实施例2提供的检测方法进行气相色谱检测，考察通过实施例1制备的空白溶液是否对供试品溶液和对照品溶液的测定结果造成干扰。

检测得到空白溶液、供试品溶液的色谱图如图1和图3所示。供试品溶液实验结果显示，由于阿伐那非为固体，不会气化，所以在本发明实施例的色谱条件下不出峰，不会干扰N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测结果；此外，空白溶液实验结果显示，空白溶液中溶剂峰和其他杂峰也不会干扰N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测结果表明本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺残留量的GC检测方法的专属性良好。

实施例4：线性与范围

取N,N’-二异丙基碳二亚胺375mg，精密称定，置100mL量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀得到3.75mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺；然后精密量取1mL上述3.75mg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺，置100mL量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀得到37.5μg/mL的N,N’-二异丙基碳二亚胺，作为线性系列储备溶液。照下表2，分别精密量取线性系列储备溶液适量，置于相应体积的容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，得到线性系列溶液，浓度分别为定量限浓度(30％)、50％、80％、100％、120％、150％。

表2

取上述各线性系列溶液，通过实施例2提供的气相色谱方法，分别顶空进样，记录色谱图；考察在设计的范围内，N,N’-二异丙基碳二亚胺的测定响应值与其浓度是否呈良好的线性。检测得到的溶液响应值与其相应的浓度绘制线性曲线，如图4所示。线性图的数据分析结果结果示于表3。

表3

从数据分析结果可以看出，采用本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法测得的N ,N’-二异丙基碳二亚胺响应值与浓度应呈良好线性。

实施例5：准确度

空白溶液：精密量取N,N-二甲基甲酰胺2mL，置于10mL顶空瓶中，密封。

未加标供试品溶液：取待测阿伐那非样品1.0g，精密称定，置于10mL顶空瓶中，向其中加入N,N-二甲基甲酰胺2mL，密封。

对照品溶液：采用实施例1提供的方法配制对照品溶液，其中，实际称取的N,N’-二异丙基碳二亚胺的质量为383.2mg，配制得到3.82μg/mL的对照品溶液。

加标供试品溶液：取待测阿伐那非样品1.0g，精密称定，置于10mL顶空瓶中，向其中加入上述对照品溶液2mL，密封。平行配制6份，分别编号为1～6。

取空白溶液、对照品溶液、未加标供试品溶液和加标供试品溶液1～6，通过实施例2提供的气相色谱方法，分别顶空进样，记录色谱图。计算未加标供试品溶液和加标供试品溶液中的N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量，分别为原有量和测得量，然后计算其回收率，以考察方法的准确度，其中回收率＝(测得量-原有量)/加入量×100％。准确度的数据分析结果如表4所示。

表4

实验结果表明，本实施例测得的回收率在102.5％～113.7％范围内，平均值为107.5％，符合中国药典的规定，说明本发明的检测方法准确度高；本实施例测试结果的RSD为3.9％，符合中国药典规定，说明本发明的检测方法的精密度高。

实施例6：重复性

采用实施例5中的对照品溶液和加标供试品溶液，通过实施例2提供的气相色谱方法，分别顶空进样，记录色谱图，计算6份加标供试品溶液中的N,N’-二异丙基碳二亚胺的含量RSD。重复性的检测结果如表4所示。

表4

本实施例测试结果的RSD为3.9％，远低于中国药典规定的6份加标样品溶液中二异丙基碳二亚胺的检测结果的RSD不得过6％。由此可见，本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法具有良好重复性。

实施例7：检测限、定量限

按信噪比S/N≈10/1确定N,N’-二异丙基碳二亚胺的定量限；

按信噪比S/N≈3/1确定N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测限。

定量限的检测结果如表5所示，检测限的检测结果如表6所示。

表5

表6

实验结果表明，本发明提供的阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，灵敏度高，能满足检测需求。

以上上述仅为本发明的优选实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。