地骨皮药材或配方颗粒的薄层检测方法及其在伪品鉴别中的应用

技术领域

本申请涉及中药检测技术领域，特别是涉及一种地骨皮药材或配方颗粒的薄层检测方法及其在伪品鉴别中的应用。

背景技术

地骨皮为茄科植物枸杞Lycium chinense Mill.或宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥根皮。其性甘、寒。归肺、肝、肾经，具有凉血除蒸，清肺降火的功效，主要用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，肺热咳嗽，咯血，衄血，内热消渴等，是临床常用中药材。地骨皮中含有多种化学成分，主要为生物碱类、有机酸及其酚类、肽类、蒽醌类、木脂素类、甾醇类、黄酮类及其它。其中生物碱类成分是其主要的成分，包括有生物碱类成分主要为酚酰胺、环戊烷并吡咯烷型、莨菪烷型、其他类等，酚酰胺包括有地骨皮乙素，地骨皮甲素、二氢咖啡酰基酰胺、咖啡酰基酰胺等化合物，莨菪烷型包括有阿托品和东莨菪碱等。地骨皮中还含多种生物碱，有甜菜碱、胆碱等等，其中含量最高的为地骨皮乙素，为地骨皮中的特征性成分。

2020版《中国药典》药材项下并未规定地骨皮的含量测定指标，仅在薄层鉴别项以对照药材为参照进行鉴别，暂无明确的成分对其进行专属性的鉴别。而且药典方法呈现的薄层色谱图有一个蓝色的主斑点，经确认为东莨菪内酯。由于东莨菪内酯存在于很多的药材当中，且在地骨皮中含量不高，因此选择其作为鉴别参照物的合理性还值得商榷。但现有的研究和文献资料，几乎都参考药典的方法，使用东莨菪内酯或者使用地骨皮对照药材，365nm荧光下观察，对地骨皮及相关制剂进行专属性鉴别。由于已有大量的研究证明，地骨皮乙素是地骨皮中的主要成分，具有专属性，地骨皮配方颗粒标准中也以其作为定量指标建立起含量测定方法。且地骨皮乙素具有降压、降血糖、解热和抗应激性瘾疡活性的药理作用，与地骨皮功效“凉血除蒸”一致。但目前未有使用地骨皮乙素对地骨皮及其相关制剂进行鉴别的相关研究报道以及标准。

与含量测定、特征图谱鉴别相比，薄层色谱法是平面色谱法中应用最广泛的方法之一，易掌握、设备便宜、操作简便灵活，具有以下特点：随时改换展开剂、展开方向，随时衍生、显色、观察、检测，方法开发快，灵敏度及分辨率高，可同时分离多个样品、样品预处理简单等。近年来，尽管其他色谱技术发展迅速，但薄层色谱的应用并没有明显减少，反而随着新的固定相和高速发展的仪器技术的引入，呈现出应用更加广泛的势头，并成为一种现代的、灵敏的、高效的分离分析方法。

由于目前已有的地骨皮药材及其制剂的快速鉴别手段中，缺乏一定的专属性，因此，亟待提供一种能够快速有效的地骨皮及其配方颗粒的专属鉴别方法。

发明内容

基于此，本发明提供一种操作简单高效且专属性强的地骨皮药材的薄层检测方法及其在在地骨皮配方颗粒鉴别中的应用。

本发明的第一方面，提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，包括如下步骤：

采用甲醇对地骨皮药材或配方颗粒进行提取，所得提取液蒸干，将蒸干所得固体加水溶解，以正丁醇萃取，所得正丁醇相蒸干，将蒸干所得固体加甲醇溶解，制备供试品溶液；

采用甲醇对地骨皮对照药材进行提取，所得提取液蒸干，将蒸干所得固体加水溶解，以正丁醇萃取，所得正丁醇相蒸干，将蒸干所得固体加甲醇溶解，制备对照药材溶液；

取地骨皮乙素对照品，加溶剂溶解，制备对照品溶液；

将所述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液点样于同一薄层板上，以正丁醇、甲酸和水的混合液为展开剂进行展开，晾干，显色剂显色，检视。

在其中一个实施例中，所述展开剂中，正丁醇、甲酸和水的体积比为(2～4):(0.5～2):1；进一步地，所述展开剂中，正丁醇、甲酸和水的体积比为(2～4):(1～2):1。

在其中一个实施例中，展开的温度为10℃以下。

在其中一个实施例中，展开缸预饱和的时间为12min～20min，展开的距离为7cm～10cm。

在其中一个实施例中，所述显色剂为碘蒸气。

在其中一个实施例中，检视的方法为在日光灯下观察。

在其中一个实施例中，所述提取的方法为超声提取。

在其中一个实施例中，超声提取的功率为250W～350W，频率为35kHz～45kHz，时间为20min～40min。

在其中一个实施例中，所述供试品溶液、对照药材溶液和所述对照品溶液的点样量分别独立为8μl～12μl。

本发明的第二方面，提供所述的地骨皮药材或配方颗粒的薄层检测方法在地骨皮药材及其伪品的鉴别中的应用。

在其中一个实施例中，鉴别的方法包括：比对所述供试品溶液的色谱中，在与所述对照药材溶液的色谱和/或所述对照品溶液的色谱相应的位置上，是否存在相同的斑点。

本发明提供的地骨皮药材或配方颗粒的薄层检测方法具有如下有益效果：

本发明在薄层色谱法的基础上，通过采用合适的供试品制备方法以及展开剂，可对地骨皮药材和已经失去性状特征的地骨皮配方颗粒粒进行检测，且能够实现地骨皮药材和地骨皮配方颗粒中地骨皮乙素的分离和检测，填补地骨皮药材和地骨皮配方颗粒中地骨皮乙素成分薄层鉴别的空白，且专属性强，为地骨皮药材和地骨皮配方颗粒质量标准的建立提供参考。同时相对于高效液相色谱等方法，操作更为简便，检测更为快速，成本低。

另外，上述地骨皮药材及配方颗粒的的薄层检测方法能够用于地骨皮药材及其伪品的鉴别，应用前景广阔。

附图说明

图1为地骨皮药材不同点样量的薄层色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)5μl；2.地骨皮药材(DGP079)10μl；3.地骨皮药材(DGP079)15μl；4.地骨皮对照药材5μl；5.地骨皮对照药材10μl；6地骨皮对照药材15μl；7.地骨皮乙素2μl；8.地骨皮乙素5μl；9.地骨皮乙素10μl；

图2为常温条件下地骨皮药材薄层鉴别色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图3为低温条件下地骨皮药材薄层鉴别色谱图(T：7℃，RH：68％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图4为高湿条件下地骨皮药材薄层鉴别色谱图(T：25℃，RH：85％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图5为低湿条件下地骨皮药材薄层鉴别色谱图(T：25℃，RH：20％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图6为不同厂家(默克)硅胶G板考察色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图7为不同厂家(青岛)硅胶G板考察色谱图(T：25℃，RH：52％；海洋硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图8为不同厂家(银龙)硅胶G板考察色谱图(T：25℃，RH：52％；银龙硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图9为5批地骨皮药材薄层色谱图(T：25℃，RH：55％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮药材(DGP082)10μl；5.地骨皮药材(DGP083)10μl；6.地骨皮对照药材10μl；7.地骨皮乙素10μl；

图10为3批地骨皮配方颗粒薄层色谱图(T：25℃，RH：52％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮配方颗粒(CG024)10μl；2.地骨皮配方颗粒(CG025)10μl；3.地骨皮配方颗粒(CG026)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图11为3批地骨皮药材薄层色谱图(药典方法)(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板

其中，1.地骨皮药材(DGP079)5μl；2.地骨皮药材(DGP080)5μl；3.

地骨皮药材(DGP081)5μl；4.地骨皮对照药材5μl；5.东莨菪内酯2μl；

图12为不同样品制备方法(甲醇直接超声)考察色谱图(T：25℃，RH：48％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图13为不同样品制备方法(甲醇超声后乙酸乙酯萃取)考察色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图14为不同显色剂(365nm)考察色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图15为不同显色剂(碘化铋钾试液)考察色谱图(T：25℃，RH：53％；默克硅胶G板)

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图16为不同显色剂(改良碘化铋钾试液)考察色谱图(T：25℃，RH：47％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图17为不同显色剂(5％三氯化铁乙醇溶液)考察色谱图(T：25℃，RH：55％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图18为不同显色剂(10％硫酸乙醇溶液)考察色谱图(T：25℃，RH：52％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图19为不同显色剂(氨熏)考察色谱图(T：25℃，RH：55％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图20为不同展开剂(乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5：2：1：0.5)考察色谱图(T：25℃，RH：48％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图21为不同展开剂(二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水6：4：2：0.1)考察色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图22为不同展开剂(丙酮-甲醇-甲酸8：1：1)考察色谱图(T：25℃，RH：48％；默克硅胶G板)；。

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图23为不同展开剂(丙酮-甲酸-水6：1：1)考察色谱图(T：25℃，RH：50％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图24为不同展开剂(正丁醇-冰醋酸-水3：1：1)考察色谱图(T：25℃，RH：58％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl；

图25为不同展开剂(正丁醇-乙酸乙酯-甲酸-水3：2：2：0.5)考察色谱图(T：25℃，RH：52％；默克硅胶G板)；

其中，1.地骨皮药材(DGP079)10μl；2.地骨皮药材(DGP080)10μl；3.地骨皮药材(DGP081)10μl；4.地骨皮对照药材10μl；5.地骨皮乙素10μl。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本申请的地骨皮中药配方颗粒的薄层检测方法及其在伪品鉴别中的应用作进一步详细的说明。本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本申请公开内容理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。

本申请中，“第一方面”、“第二方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。

本申请中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本申请中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。

本申请中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。

本申请中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。

本申请中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。

本申请中的常温一般指10℃～30℃，较佳地指25±5℃。

目前中国药典2020年版第一部在鉴别项和含量测定项并无记载地骨皮药材专属性的成分，而文献中对地骨皮药材、大部分省份地骨皮配方颗粒标准的薄层鉴别的研究基本以地骨皮对照药材进行研究，少部分将主斑点归属为东莨菪内酯，但对照药材或东莨菪内酯所呈现的斑点并无证据能够证明其与地骨皮的“凉血除蒸，清肺降火”功效具有相关性，且东莨菪内酯缺乏专属性。由于目前的研究中暂无有关于地骨皮乙素的薄层鉴别方法，给鉴别方法的建立带来一定的难度，亟待需要提供一种能够快速有效的地骨皮及其中药配方颗粒的专属鉴别方法。

因此，本发明结合目前研究的情况，基于地骨皮中地骨皮乙素成分薄层鉴别的空白，本发明从地骨皮的酚酰胺类成分作为研究对象，以含量较高的地骨皮乙素为参照，通过提取、纯化、富集，利用更为简便、快速、成本低的薄层色谱建立地骨皮药材及其中药配方颗粒鉴别方法，为地骨皮质量标准提供参考，并可以用于区分其伪品。

技术方案如下：

一种地骨皮药材的薄层检测方法，包括如下步骤：

采用甲醇对地骨皮药材或配方颗粒进行提取，所得提取液蒸干，将蒸干所得固体加水溶解，以正丁醇萃取，所得正丁醇相蒸干，将蒸干所得固体加甲醇溶解，制备供试品溶液；

采用甲醇对地骨皮对照药材进行提取，所得提取液蒸干，将蒸干所得固体加水溶解，以正丁醇萃取，所得正丁醇相蒸干，将蒸干所得固体加甲醇溶解，制备对照药材溶液；

取地骨皮乙素对照品，加溶剂溶解，制备对照品溶液；

将所述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液点样于同一薄层板上，以正丁醇、甲酸和水的混合液为展开剂进行展开，晾干，显色剂显色，检视。

在其中一个实施例中，所述提取的方法为超声提取。

在其中一个实施例中，超声提取的功率为250W～350W，频率为35kHz～45kHz，时间为20min～40min。可以理解地，在本发明中，超声提取的功率包括但不限于为250W、260W、270W、280W、290W、300W、310W、320W、330W、340W和350W，频率包括但不限于为35kHz、40kHz和45kHz，时间为包括但不限于20min、25min、30min、35min和40min。进一步地，超声提取的功率为300W，频率为40kHz，时间为30min。

在其中一个实施例中，每1ml供试品溶液中含有地骨皮药材0.8g～1.2g。

在其中一个实施例中，每1ml供试品溶液中含有地骨皮配方颗粒0.1g～0.3g。

在其中一个实施例中，每1ml对照药材溶液中含有地骨皮对照药材0.8g～1.2g。

在其中一个实施例中，每1ml对照品溶液中含有地骨皮乙素0.8mg～1.2mg。

在其中一个实施例中，所述供试品溶液的点样量为8μl～12μl，包括但不限于为8μl、9μl、10μl、11μl和12μl。进一步地，所述供试品溶液的点样量为10μl。

在其中一个实施例中，所述对照药材溶液的点样量为8μl～12μl，包括但不限于为8μl、9μl、10μl、11μl和12μl。进一步地，所述对照药材溶液的点样量为10μl。

在其中一个实施例中，所述对照品溶液的点样量8μl～12μl，包括但不限于为8μl、9μl、10μl、11μl和12μl。进一步地，所述对照品溶液的点样量为10μl。

在其中一个实施例中，所述展开剂中，正丁醇、甲酸和水的体积比为(2～4):(0.5～2):1，包括但不限于为2:0.5:1、2:0.6:1、2:0.7:1、2:0.8:1、2:0.9:1、2:1:1、2:1.1:1、2:1.2:1、2:1.3:1、2:1.4:1、2:1.5:1、2:1.6:1、2:1.7:1、2:1.8:1、2:1.9:1、2:2:1、2.5:0.5:1、2.5:0.6:1、2.5:0.7:1、2.5:0.8:1、2.5:0.9:1、2.5:1:1、2.5:1.1:1、2.5:1.2:1、2.5:1.3:1、2.5:1.4:1、2.5:1.5:1、2.5:1.6:1、2.5:1.7:1、2.5:1.8:1、2.5:1.9:1、2.5:2:1、3:0.5:1、3:0.6:1、3:0.7:1、3:0.8:1、3:0.9:1、3:1:1、3:1.1:1、3:1.2:1、3:1.3:1、3:1.4:1、3:1.5:1、3:1.6:1、3:1.7:1、3:1.8:1、3:1.9:1、3:2:1、3.5:0.5:1、3.5:0.6:1、3.5:0.7:1、3.5:0.8:1、3.5:0.9:1、3.5:1:1、3.5:1.1:1、3.5:1.2:1、3.5:1.3:1、3.5:1.4:1、3.5:1.5:1、3.5:1.6:1、3.5:1.7:1、3.5:1.8:1、3.5:1.9:1、3.5:2:1、4:0.5:1、4:0.6:1、4:0.7:1、4:0.8:1、4:0.9:1、4:1:1、4:1.1:1、4:1.2:1、4:1.3:1、4:1.4:1、4:1.5:1、4:1.6:1、4:1.7:1、4:1.8:1、4:1.9:1和4:2:1。进一步地，所述展开剂中，正丁醇、甲酸和水的体积比为(2～4):(1～2):1。更进一步地，所述展开剂中，正丁醇、甲酸和水的体积比为(2.5～3.5):(1～1.5):1。

在其中一个实施例中，展开的温度为10℃以下。可以理解地，在本发明中，展开的温度包括但不限于为-10℃、-5℃、0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃和10℃。进一步地，展开的温度为8℃以下。更进一步地，展开的温度为7℃。

在其中一个实施例中，展开缸预饱和的时间为12min～20min，包括但不限于为12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min和20min。进一步地，展开缸预饱和的时间为14min～20min。更进一步地，展开缸预饱和的时间为15min。

在其中一个实施例中，展开的距离为7cm～10cm，包括但不限于为7cm、8cm、9cm和10cm。进一步地，展开的距离为8cm。

在其中一个实施例中，所述显色剂为碘蒸气。

在其中一个实施例中，检视的方法为在日光灯下观察。

在其中一个实施例中，地骨皮药材的薄层检测方法包括如下步骤：

(1)取地骨皮药材(过四号筛)1g或地骨皮配方颗粒0.25g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

(2)取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。

(3)取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

(4)吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-甲酸-水(3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。

(5)置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与地骨皮对照药材、地骨皮乙素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明还提供所述的地骨皮药材或配方颗粒的薄层检测方法在地骨皮药材及其伪品的鉴别中的应用。

可以理解地，所述地骨皮药材及其伪品的形态可以为药材、饮片、中药配方颗粒或其它制剂形式。

在其中一些示例中，鉴别的方法包括：在其中一个实施例中，鉴别的方法包括：比对所述供试品溶液的色谱中，在与所述对照药材溶液的色谱和/或所述对照品溶液的色谱相应的位置上，是否存在相同的斑点。若存在相同的斑点则为地骨皮药材或其配方颗粒，若不存在则为伪品。另外可以理解地，对照药材作为薄层鉴别的参照物，鉴别依据从单一的指标成分上升到以完整的薄层色谱判断真伪，体现在薄层色谱就是一副具有指纹意义的色谱图像，不同的品种具有各自固定的图谱进而可以提高鉴别的专属性，采用其与对照品结合进行鉴别，准确性更高。

以下为具体的实施例。

实施例1

本实施例提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，具体如下：

1.仪器、试剂与试药

仪器：全自动薄层点样仪(AUTOMATIC TLC SAMPLER4，瑞士卡玛公司)、薄层自动成像仪(TLC VISUALIZER 2，瑞士卡玛公司)、万分之一天平(ME204E，瑞士梅特勒)、超声清洗仪(KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司)、双槽展开缸、硅胶G薄层板、硅胶G薄层板(20cm10cm，厚度0.20～0.25mm，烟台市化学工业研究所)、硅胶G薄层板(20cm 10cm，厚度0.20～0.25mm，青岛海洋化工有限公司)、硅胶G薄层板(20cm 10cm，厚度0.25mm，默克股份有限公司)

试剂：甲醇(天津市富宇精细化工有限公司)、正丁醇(西陇科学股份有限公司)、甲酸(西陇科学股份有限公司)、纯净水(实验室自制)。

试药：地骨皮对照药材(批号：121087-201707，中国食品药品检定研究院)、地骨皮乙素对照品(批号：D04102204013，含量：98％，成都瑞芬思生物科技有限公司)、地骨皮药材(见下表1)。

表1 5批地骨皮药材信息表

2.溶液的制备

2.1供试品溶液的制备

取地骨皮药材(过四号筛)1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.2对照药材溶液的制备

取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

2.3对照品溶液的制备

取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：正丁醇-甲酸-水(体积比3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液。

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视。

4.地骨皮药材不同点样量考察

分别吸取地骨皮药材(DGP079)供试品溶液、地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图1。

由图1可见，当供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液点样量为10μl时，供试品色谱在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，无拖尾和其他干扰，因此将供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液点样量均定为10μl。

5.不同温度考察

分别吸取地骨皮药材供试品溶液(DGP079、DGP080、DGP081)、地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在常温和低温条件下展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图2和图3。

由图2和图3可见，在常温和低温条件下，地骨皮药材分离效果都较好，且供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实验结果表明，温度对地骨皮药材薄层鉴别无明显影响，说明该薄层鉴别方法对不同温度耐用性好。

6不同湿度考察

分别吸取地骨皮药材供试品溶液(DGP079、DGP080、DGP081)、地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在高湿和低湿条件下展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图4和图5。

由图4和图5可见，在高湿和低湿条件下，地骨皮药材色谱分离效果都较好，且供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实验结果表明，湿度对地骨皮药材薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别方法对不同湿度耐用性较好。

7不同厂家薄层板考察

分别吸取地骨皮药材供试品溶液(DGP079、DGP080、DGP081)、地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品溶液点样于不同厂家硅胶G薄层板(银龙硅胶G板、海洋硅胶G板、默克硅胶G板)上，按上述薄层色谱条件，分别在同一温湿度条件下展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视。实验结果见图6、图7和图8。

由图6、图7和图8可见，采用不同厂家硅胶G薄层板(银龙硅胶G板、海洋硅胶G板、默克硅胶G板)，地骨皮药材供试品色谱和对照药材色谱、对照品色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，且供试品色谱与对照药材色谱和对照品色谱的斑点能够对应。说明该薄层鉴别方法对不同厂家的硅胶G薄层板的耐用性良好。

8地骨皮药材薄层鉴别色谱图

分别吸取地骨皮药材供试品溶液(DGP079、DGP080、DGP081、DGP082、DGP083)、地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品溶液分别点样于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图9。

由图9可见，5批地骨皮药材供试品色谱中，在与地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品色谱相应的位置上，均显示相同颜色的斑点，采用与地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品作为参照，能够有效对地骨皮药材进行薄层色谱鉴别，5批地骨皮药材样品均符合要求。

9.小结

综上可知，本发明建立的色谱图各斑点Rf值大小适中，整体分离效果较好，斑点比较清晰，供试品色谱在与对照药材色谱和对照品色谱在相应的位置处，相同颜色的斑点能对应。经方法学验证，该薄层色谱方法的专属性、重现性及耐用性较好，该方法能够对地骨皮药材进行有效的定性鉴别。

实施例2

本实施例提供一种地骨皮配方颗粒的薄层检测方法，具体如下：

1.溶液的制备

1.1供试品溶液的制备

取地骨皮配方颗粒(批号：CG024、CG025、CG026，广东一方制药有限公司提供)0.25g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

1.3对照品溶液的制备

取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：正丁醇-甲酸-水(体积比3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液。

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图10。

3结论：

由图10可知，实施例1中所建立的以地骨皮乙素薄层鉴别方法同样适用于检测已失去性状特征的地骨皮配方颗粒的鉴别，3批地骨皮配方颗粒供试品色谱中，在与地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品色谱相应的位置上，均显示相同颜色的斑点，采用地骨皮对照药材溶液和地骨皮乙素对照品作为参照，能够有效对地骨皮配方颗粒进行薄层色谱鉴别，3批地骨皮配方颗粒样品均符合要求。

对比例1

本对比例提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，其为2020版药典地骨皮药材项下方法，具体如下：

1.溶液的制备

1.1供试品溶液的制备

取地骨皮粉末1.5g，加甲醇15ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取地骨皮对照药材1.5g，加甲醇15ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

1.3对照品溶液的制备

取东莨菪内酯对照品(110768-202105，中国食品药品检定研究院)适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：甲苯-丙酮-甲酸(体积比10∶1∶0.1)。

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：置紫外光(365nm)下检视，实验结果见图11。

3.结论：

由图11可知，采用2020版《中国药典》地骨皮药材项下方法进行薄层鉴别，吸取供试品溶液与对照药材各5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，结果显示，地骨皮药材供试品溶液色谱图中显相同的两个蓝色斑点与地骨皮对照药材色谱相对应，斑点较少，无法较好地体现地骨皮药材的整体质量。经与对照品匹配，发现该斑点为东莨菪内酯，但该成分不是地骨皮的专属性成分。

对比例2

本对比例提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，考察样品制备方式对鉴别方法的影响，具体如下：

1.溶液的制备

1.1供试品溶液的制备

①取地骨皮药材(过四号筛)1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

②取地骨皮药材(过四号筛)1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

①取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

②取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

1.3对照品溶液的制备

取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：正丁醇-甲酸-水(3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图12和13。

3结论：

由图12可知，参考2020版《中国药典》地骨皮药材项下薄层鉴别样品制备方法，直接甲醇超声提取后浓缩，结果显示，地骨皮药材供试品、地骨皮对照药材色谱中，与地骨皮乙素相应的位置上斑点拖尾，有其它成分干扰，对结果的判定有一定的影响。

由图13可知，在甲醇提取的基础上进行纯化，增加乙酸乙酯萃取步骤，结果显示，使用乙酸乙酯萃取后斑点数目减少，只能看到地骨皮乙素斑点，整体信息较实施例1中的使用正丁醇进行萃取少，详细见实施例1。

经过比较甲醇直接提取，甲醇提取后乙酸乙酯萃取、甲醇提取后正丁醇萃取三种不同的样品制备方法发现，使用甲醇提取后正丁醇萃取呈现的色谱斑点信息量丰富，斑点清晰，无拖尾现象，最终选择其作为样品制备方法。

对比例3

本对比例提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，考察显色方法对鉴别方法的影响，具体如下：

1.溶液的制备

1.1供试品溶液的制备

取地骨皮药材(过四号筛)1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

1.3对照品溶液的制备

取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

1.4显色剂的配制

(1)碘化铋钾试液：取次硝酸铋/碱式硝酸铋0.85g，加冰醋酸10ml与水40ml溶解后，加碘化钾溶液(4→10)20ml，摇匀，即得。

(2)改良碘化铋钾试液：取碘化铋钾试液lml，加0.6mol/L盐酸溶液2ml，加水至10ml，即得。

(3)取三氯化铁5g，加乙醇稀释至100ml，即得。

(4)取硫酸溶液10ml，加乙醇稀释至100ml，即得。

2薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：正丁醇-甲酸-水(3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：①直接在荧光灯(365nm)下检视，实验结果见图14。

②喷以碘化铋钾试液，日光下检视，实验结果见图15。

③喷以改良碘化铋钾试液，日光下检视，实验结果见图16。

④喷以5％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图17。

⑤喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图18。

⑥置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视，实验结果见图19。

3结论：

由图14可知，按照实施例1的样品制备方法和展开条件进行展开，直接在荧光灯(365nm)下检视，由于地骨皮乙素在365nm无紫外吸收，因此无法观察到地骨皮乙素斑点。

由图15和16可知，地骨皮乙素属于生物碱类成分，因此使用生物碱成分较为常用的碘化铋钾试液、改良碘化铋钾试液进行显色，结果显示，地骨皮药材供试品、地骨皮对照药材、地骨皮乙素斑点模糊不清，且背景干扰加大，无法看清斑点，该显色剂不符合要求。

由图17可知，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，加热后日光下检视发现，与实施例1中的碘熏比较，斑点数目均一致，但斑点颜色较淡，显色效果较碘熏稍差

由图18可知，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热后日光下检视发现，同样无法观察到地骨皮乙素斑点。

由图19可知，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，结果发现在地骨皮乙素斑点上面的其它斑点显色后较为模糊分散，斑点之间的分离度较差

综合比较以上的显色方法，以实施例1中使用碘熏进行显色，斑点数目最多，分离度更佳，色谱斑点更为清晰。

对比例4

本对比例提供一种地骨皮药材的薄层检测方法，考察展开剂对鉴别方法的影响，具体如下：

1.溶液的制备

1.1供试品溶液的制备

取地骨皮药材(过四号筛)1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

1.2对照药材溶液的制备

取地骨皮对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。

1.3对照品溶液的制备

取地骨皮乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板

展开剂：①乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5：2：1：0.5)，实验结果见图20；

②二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(6：4：2：0.1)，实验结果见图21；

③丙酮-甲醇-甲酸8：1：1，实验结果见图22；

④丙酮-甲酸-水6：1：1，实验结果见图23；

⑤正丁醇-冰醋酸-水3：1：1，实验结果见图24；

⑥正丁醇-乙酸乙酯-甲酸-水3：2：2：0.5，实验结果见图25；

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，展开缸预饱和时间为15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视。

3结论：

按照实施例1的样品制备方法，采用不同的展开剂进行展开，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，日光下检视。由图20可知，展开剂①极性较低，斑点无法向上展开。由图21可知，展开剂②只观察到一个地骨皮乙素斑点，信息量较少，且该斑点拖尾。由图22可知，展开剂③效果与展开剂②相似，斑点拖尾，Rf值过低。由图23可知，展开剂④无法观察到任何斑点，不符合规定。由图24可知，展开剂⑤展开总体效果与实施例中1的较为相似，但斑点的分离度和拖尾现象均较差。由图25可知，展开剂⑥与只看到两个斑点，地骨皮乙素斑点拖尾严重，展开效果不佳。

综合比较以上展开剂的展开效果，以实施例1中的使用正丁醇-甲酸-水(体积比3∶1∶1)10℃以下放置的上层溶液进行展开，斑点数目最多，分离度更佳，色谱斑点无拖尾、扩散，Rf值适中。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，便于具体和详细地理解本申请的技术方案，但并不能因此而理解为对申请专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本申请提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本申请所附权利要求的保护范围内。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。