人参稀有皂甙制品、抗衰老护肤乳、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及抗衰老护肤乳技术领域，尤其涉及人参稀有皂甙的制备方法、抗衰老护肤乳及其应用。

背景技术

全民“抗衰老、抗氧化”时代，越来越多的抗衰老成分被添加进化妆品中，这类具有抗衰老抗氧化功效的产品在各个国家都占有大量市场。多肤因其优越的生物相容性、易吸收、安全、水溶性好、低分子量等优点，同时具有保护，以及修复氧化损伤细胞、促进细胞生长、除去细胞内过剩自由基的功效，因此多肤作为抗衰老物质具有巨大的发展潜力。

发明内容

有鉴于此，本申请在于提供一种基于人参稀有皂苷的抗衰老制品以及其制备方法。

第一方面，本申请实施例公开了一种人参稀有皂甙的制备方法，包括以下步骤：

得到人参花的水提液；

对水提液进行有机萃取，得到萃取物；

将所述萃取物溶解于反应溶液中，同时向反应溶液中加入转化剂进行反应得到包含有稀有皂甙的溶液；及

对包含有所述稀有皂甙的溶液进行纯化，即可得到所述稀有皂甙；

其中，所述稀有皂甙包括如

在本申请实施例中，所述R1选自单葡萄糖基、双葡萄糖基、多葡萄糖基、单甘露糖基、双甘露糖基、多甘露糖基、单果糖基、双果糖基、多果糖基、单蔗糖基、双蔗糖基和多蔗糖基中的至少一种；所述R2选自单葡萄糖基、双葡萄糖基、多葡萄糖基、单甘露糖基、双甘露糖基、多甘露糖基、单果糖基、双果糖基、多果糖基、单蔗糖基、双蔗糖基和多蔗糖基中的至少一种。

在本申请实施例中，所述转化剂包括葡萄糖、甘露糖、果糖和蔗糖中的至少一种。

在本申请实施例中，所述转化剂还包括糖基转移酶和蔗糖合酶，所述糖基转移酶选自UGT91D2、UGT91D2e、UGT76G1、EUGT11、UGT73C6、UGT85C2、UGT74G1、UGT76G1和UGTSL2中的至少一种。

在本申请实施例中，所述反应溶液为0.1mol/L pH值为7.5～10.0的Tris-HCL。

在本申请实施例中，所述得到人参花的水提液的步骤具体包括：

将人参花干材料在室温下用蒸馏水浸泡过夜后，煎煮至100℃煎煮提取不低于6h后，过滤，滤渣重复多次，合并提取液，离心，即可得到水提液。

根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，得到所述萃取物的步骤具体包括将所述水提液浓缩后，加入有机试剂进行萃取，所述有机试剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯和乙醚中的至少一种。

第二方面，本申请实施例公开了一种人参皂甙制品，包含第一方面公开的制备方法制备的稀有皂甙。

第三方面，本申请实施例公开了一种抗衰老护肤乳，包含第一方面公开的制备方法制备的稀有皂甙。

第四方面，第一方面公开的制备方法制得的稀有皂甙在制备抗氧化制品中的应用。

与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：

本申请公开的制备方法制备的人参皂苷涉及以及其相关衍生物具有抗氧化性，并且发现此种人参稀有皂甙以及其相关衍生物具有制作成为抗衰老护肤乳的应用前景，比如面霜、护肤乳等等。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的如式(I)所示的化合物(R1为-Fru，R2为-Suc)的

图2为本发明实施例1提供的如式(I)所示的化合物(R1为-Fru，R2为-Suc)的

图3为本发明实施例1提供的如式(II)所示的化合物(R1为-Fru，R2为-Suc)的

图4为本发明实施例1提供的如式(II)所示的化合物(R1为-Fru，R2为-Suc)的

图5为本发明实施例1提供的如式(I)所示的化合物(R1为-(Fru)

图6为本发明实施例1提供的如式(I)所示的化合物(R1为-(Fru)

图7为本发明实施例1提供的如式(II)所示的化合物(R1为-(Fru)

图8为本发明实施例1提供的如式(II)所示的化合物(R1为-(Fru)

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明人在长期的实践过程中发现两种人参稀有皂甙以及其相关衍生物具有抗氧化性，并且发现此种人参稀有皂甙以及其相关衍生物具有制作成为抗衰老护肤乳的应用前景，比如面霜、护肤乳等等。其中，此两种人参稀有皂甙的化合物结构分别为

为此，本申请实施例还公开了此种人参稀有皂甙的制备方法，包括以下步骤：得到人参花的水提液；对水提液进行有机萃取，得到萃取物；将所述萃取物溶解于反应溶液中，同时向反应溶液中加入转化剂进行反应得到包含有稀有皂甙的溶液；及对包含有所述稀有皂甙的溶液进行纯化，即可得到所述稀有皂甙。其中，所述稀有皂甙包括如式(I)和/或式(II)所示的化合物。

本申请实施例通过从人参花进行水提和有机萃取，得到初步的含有人参皂甙的溶液，再经过转化剂进行转化反应，将其中含有的极少量的稀有皂甙通过转化剂进行转化反应，将其他一般人参皂甙转化为稀有皂甙，对稀有皂甙起到一个富集作用，同时还能得到一类与稀有皂甙结构类似的类似物，为稀有皂甙富集和纯化提供一个基础，以便于最终提高其收率、纯度以及效率。

在上述制备方法中，转化剂包括葡萄糖(简称为Glu)、甘露糖(简称为Man)、果糖(简称为Fru)和蔗糖(简称为Suc)中的至少一种。这些糖为一般皂甙的转化反应提供基础。

在上述制备方法中，转化剂还包括糖基转移酶，糖基转移酶选自UGT91D2、UGT91D2e、UGT76G1、EUGT11、UGT73C6、UGT85C2、UGT74G1和UGTSL2中的至少一种。这些酶作为皂甙的转化反应的催化剂。

在上述制备方法中，反应溶液选自50mmol/L pH值为7.5～10.0的Tris-HCl。

为此，下方将结合更加具体的实施过程进行说明，下方实施过程中所涉及的试剂和仪器，除非有特殊说明，均为一般商业途径可获得。

人参稀有皂甙的制备

1、试剂和仪器

人参花：取自于2年生吉林省抚松产人参(Panax ginseng C.A.Meyer)的干燥花。

葡萄糖(L115560L-(-)-葡萄糖，高纯级，98％)、甘露糖(M120942L-(-)-甘露糖，高纯级，99％)、果糖(F304579-5g，高纯级，≥99.0％)、蔗糖(D274314D(+)蔗糖，高纯级，≥99.0％)、蔗糖(高纯级，≥99.0％)和二磷酸尿苷二钠(UDP，99％，生物技术级)均购自阿拉丁试剂公司。

UGT91D2、UGT91D2e、UGT76G1、EUGT11、UGT73C6、UGT85C2、UGT74G1和UGTSL2固定化细胞制剂均购自北京百奥莱博科技有限公司。蔗糖合酶(SS)固定化细胞制剂购自美国amresco公司。这些糖基转移酶以及蔗糖合酶均为重组大肠杆菌表达产物，因此实际使用过程均为固定化细胞制剂。

2、制备方法

本申请实施例公开的人参稀有皂甙的制备方法可分为水提、萃取、转化和纯化的步骤。

2.1、水提

一个具体的实施例1中：

取人参花干材料1000g，用3L的蒸馏水浸泡过夜后，煎煮至100℃提取不低于6h，在浸泡和煎煮过程中可以采用密闭环境，比如将人参花干材料于一个密封蒸煮罐中进行浸泡和煎煮进行煎煮。煎煮后将煎煮物用四层纱布过滤，残渣重复以上过程3次，合并3次提取液，即为水提液，所得水提液体积为8.5L。

作为其他的实施例和对比例，其水提过程大致相同。

2.2、萃取

在上述实施例1中，将上述的水提液减压浓缩至552mL，向浓缩液中加入有机试剂，有机试剂包含甲醇、乙醇和异丙醇，甲醇、乙醇和异丙醇的体积比例为1:8:1，加入的有机试剂的体积为浓缩液的4倍，约为2208mL。充分混合后，静置30min，取上清，减压浓缩去除有机试剂，得到浓缩液为363mL。

作为其他的实施例2的萃取过程中，使用的有机试剂包含甲醇、乙醇和正丁醇，甲醇、乙醇和正丁醇的体积比例为1:8:1，加入的有机试剂的体积为浓缩液的5倍，其他步骤与实施例1的步骤相同。

作为其他的实施例3的萃取过程中，使用的有机试剂包含甲醇、乙醇和乙酸乙酯，甲醇、乙醇和乙酸乙酯的体积比例为2:15:1，加入的有机试剂为浓缩液体积的4倍，其他步骤与实施例1的步骤相同。

作为其他的实施例4的萃取过程中，使用的有机试剂包含甲醇、乙醇和乙醚，甲醇、乙醇和乙酸乙酯的体积比例为2:10:1，加入的有机试剂为浓缩液体积的4倍，在加入有机试剂过程中，控制环境温度不高于20℃，其他步骤与实施例1的步骤相同。

作为对比例1的萃取过程中，使用的有机试剂为乙醇，乙醇的加入体积为浓缩液体积的4倍，其他步骤于实施例1的步骤相同。

2.3、转化反应

由于转化反应需要用到固定化细胞制剂，因此，转化反应需要适应固定化的重组大肠杆菌生长以及对糖基化酶以及蔗糖合酶的可溶性表达。

实施例1的转化反应过程具体为：

1)取UGT91D2固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL，加入蔗糖至1.5mg/mL，加入果糖至1.2mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)反应结束后，用等体积甲醇终止反应，12 000r/min离心10min，取上清液进行HPLC和LC-MS分析，以考察转化情况。

实施例2-4以及对比例1的转化反应过程中使用的糖基化转移酶、蔗糖合酶的固定化细胞制剂与实施例1相同，其转化条件也相同。

实施例5的转化反应过程具体为：

1)取UGT91D2e固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至1.5mg/mL，加入果糖至1.2mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)反应结束后，用等体积甲醇终止反应，12 000r/min离心10min，取上清液进行HPLC分析，以考察转化情况。

实施例6的转化反应过程具体为：

1)取UGT76G1固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至0.75mg/mL，加入果糖至0.55mg/mL，加入葡萄糖0.50mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)同实施例5。

实施例7的转化反应过程具体为：

1)取EUGT11固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至0.55mg/mL，加入果糖至0.35mg/mL，加入葡萄糖0.75mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)同实施例5。

实施例8的转化反应过程具体为：

1)取UGT73C6固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至0.75mg/mL，加入果糖至0.55mg/mL，加入葡萄糖0.50mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)同实施例5。

实施例9的转化反应过程具体为：

1)取UGT85C2固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.2mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间12h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至0.75mg/mL，加入果糖至0.55mg/mL，加入葡萄糖0.50mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)同实施例5。

实施例10的转化反应过程具体为：

采用UGT74G1固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，采用实施例1制备的萃取后浓缩液，其他反应条件和步骤与实施5相同。

实施例11的转化反应过程具体为：采用UGTSL2固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，采用实施例1制备的萃取后浓缩液，其他反应条件和步骤与实施5相同。

实施例12的转化反应过程具体为：采用UGTSL2固定化细胞制剂4.0mg，EUGT11固定化细胞制剂4.0mg，SS固定化细胞制剂1.0mg，采用实施例1制备的萃取后浓缩液，其他反应条件和步骤与实施5相同。

对比例2的转化反应过程具体为：

1)取UGT91D2e固定化细胞制剂5.0mg，SS固定化细胞制剂5.0mg，加入0.35mmol/LIPTG、诱导温度16℃、诱导时间15h，诱导表达完成后，离心收集固定化细胞制剂；

2)用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)洗涤稀释固定化细胞制剂至10g/L，然后加入上方萃取后的浓缩液25mL(实施例1制备的萃取后浓缩液)，加入蔗糖至2.5mg/mL，加入果糖至1.8mg/mL，加入UDP至0.25mg/mL于37℃，220r/min反应14h。

3)反应结束后，用等体积甲醇终止反应，12 000r/min离心10min，取上清液进行HPLC分析，以考察转化情况。

利用制备液相色谱仪对萃取后的浓缩液以及实施例1-12和对比例1得到的溶液进行纯化，HPLC分析其中的如式(I)或式(II)所示的化合物的含量和纯度。将制备的产物进行

制备液相的色谱条件为：色谱柱为Waters反相柱(35mm×150mm，5μm)，流动相A为去离子水(加0.1％甲酸)；流动相B为乙腈(加0.1％甲酸)。洗脱梯度为有机相B59％～66％，梯度时间为15min。

HPLC分析条件为：C18色谱柱(4.6mm×250mm)m，5μm)；柱温：25℃；流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)；进样量20μL。洗脱程序：0～15min，20～21％(A％)；15～33min，21％(A％)；33～38min，21～30％(A％)；38～43min，30％(A％)；43～73min，30～40％(A％)。

将各实施例和对比例得到的如式(I)和如式(II)所示的化合物分别列入表1中，实施例1-12得到的如式(I)和如式(II)所示的化合物中R1基团和R2基团均为n个的糖基，其中n大于等于2，小于等于5。而对比例1得到的如式(I)和如式(II)所示的化合物中R1基团和R2基团均为n个的糖基，糖基数目均超过5个。实施例1制备的如式(I)和如式(II)所示化合物均分布通过

表1

采用上述HPLC方法对转化前的萃取液以及转化后的溶液中关于如式(I)或式(II)所示的化合物进行分析，经过制备色谱制备的含量大于99.0％色谱纯的样品作为标准品绘制标准曲线，根据标准曲线测量这些溶液中关于如式(I)或式(II)所示的化合物的含量，并且计算转化率＝转化后溶液中如式(I)或式(II)所示的化合物含量/转化前萃取液中如式(I)或式(II)所示的化合物含量。将结果列入表2和表3中。表2和表3中，分别列出了式(I)或式(II)所示的化合物(不同R1和R2基团)对应的含量以及转化率。例如，实施例1转化前式(I)所示的化合物，有R1和R2基团分别选自-Fru-Suc以及R1和R2基团分别选自-(Fru)

表2式(I)

表3式(II)

由表2和表3可知，实施例1-12和对比例1-2在制备的转化过程中，均使得式(I)和式(II)的含量显著提升，具有极大的转化率。

2.4、纯化

具体的实施例1中：

称取25g大孔吸附树脂(

其他实施例和对比例的纯化步骤与实施例1大致相同。

抗晒老功能

本实施方式研究上述实施例制备的人参稀有皂甙样品以及其制备护肤乳的抗衰老功能。采用人皮肤成纤维细胞(HSF)和人永生化角质形成细胞(HaCat)作为模型细胞研究其抗衰老功效。

1、实验材料及方法

1.1、细胞复苏以及传代

将含有人皮肤成纤维细胞(HSF)和人永生化角质形成细胞(HaCat)的冻存管(来源于普诺赛公司)立即放入37℃的恒温水浴锅融化后，加入7-8mL MEM完全培养液中培养24h后，传代1次后备用。

采用MTT法考察上述实施例1-12和对比例1-2分别制备的人参稀有皂甙样品对HSF细胞及对HaCat细胞活力的影响。将10

细胞活力/％＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100％；

式中：As为样品组吸光值；Ab为空白组吸光值；Ac为对照组吸光值。

1.2、氧化损伤细胞模型构建

以DMEM为溶液分别配制不同摩尔浓度H

1.3、对氧化损伤细胞的修复作用

接种细胞置于培养箱中孵育24h后，移除孔中培养液，含有HSF、HaCat细胞的孔中分别加入100μL、1.4mM H

1.4、制备护肤乳

护肤乳液的制备工艺如下：

按照配方依次称取A相(EDTA-2Na 0.1g，1,3-丁二醇4g，黄原胶0.3g，透明质酸2g的去离子水溶液)，在沸水中杀菌15min，后补齐蒸发发掉的水分；按照配方依次称量B相成分(十八醇1g，鳄梨油4g，乳木果油2g，维生素E醋酸酯0.25g)，在沸水中充分溶解15min；

将AB两相分别降温至80℃，将B相缓慢倒入A相中，4000r/min均质5min，冷却至450C，加入香精0.5g，人参皂甙0.6g(实施例1-12和对比例1-2分别制备得到)；抽真空脱气泡，搅拌冷却，即可出料灌装。

1.5、动物实验

实验动物：健康的SPF级昆明(KM)小鼠36只，均为两周左右幼龄，体重(20±10)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物购入后，室温维持(20±2)℃，相对湿度35％，保持通风良好，定期常规的颗粒饲料喂养且自由饮水，昼夜节律。

小鼠皮肤光老化模型制备：

实验动物分组：分为正常对照组(NC)、UV模型组(UV)、护肤乳组(HH)和维生素E阳性对照组(VE)。各组小鼠常规饮水喂食饲养以适应环境。其中，护肤乳组使用上述方法制备得到，其中包含由实施例1-12和对比例1-2分别制备的人参皂甙，因此护肤乳组具体包括实施例1-12和对比例1-2共14个组。

实验动物造模：

模型组：在各组小鼠背部剃毛形成3cm×3cm范围的暴露皮肤，保持背部光滑。除NC组不做任何处理，其余各组小鼠放在紫外线灯(下，调整灯管位置，使光源与小鼠之间距离约30cm左右，每次照射前先预热灯管5min并轮换鼠笼的位置，以此来平衡每组小鼠照射的紫外线量。照射频率为每周6次，共照射12周，前1-3周每天照射0.25小时；第6-9周，每天照射1.5小时；第10-12周，每天照射3小时；至第13周结束，终止照射共照12周。UV照射强度约为261.79J/cm

护肤乳组：在造模前，每天向小鼠背部暴露皮肤涂擦护肤乳组制备的护肤乳，3次，每次涂抹2min。

阳性对照组：在造模前，每天向小鼠背部暴露皮肤涂擦维生素E，3次，每次涂抹2min。

1.6、免疫组化法检测Fas以及FasL的表达

DAB染色试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)制备小鼠暴露皮肤的石蜡标本，采用免疫组化二抗试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)进行检测其中Fas以及FasL的表达量；Fas、Fast抗体武汉三鹰生物技术有限公司。

2、结果

2.1、细胞实验结果

表4对HSF和HaCat的影响

由表4可知，实施例1-12对于HSF和HaCat细胞的MTT实验表明其具有促进生长作用，而对比例1和2对二者无明显促进作用。实施例1-12对HSF和HaCat细胞在双氧水氧化损伤后具有修复作用，而对比例1-2的修复作用不明显。并且，在实施例1-12中，实施例5、9和12的促进HSF和HaCat细胞生长和氧化损伤修复的作用特别突出。

由此可见，实施例1-12制备得到的人参皂甙具有对促进HSF和HaCat细胞生长和氧化损伤修复特殊作用，而这种作用由其中如式(I)和式(II)所示化合物中的R1基团和R2基团决定的。

2.2、动物实验

表4

表5列出了对照组、模型组、VE组和HH组分别经过上述动物实验后的小鼠暴露皮肤组织的Fas和FasL表达值，这些表达值均测量6次，数值以平均值和标准偏差进行表示，同时对分别对每列数据在不同组别之间进行显著性差异比较和标记。由表5可知，实施例1-12对于小鼠皮肤组织中的Fas和FasL表达具有促进作用，而对比例1和2对二者无明显促进作用。

Fas为一种I型膜蛋白，FasL为一种II型膜蛋白，二者均属于肿瘤坏死因子(TNF)/神经生长因子受体家族。TNF受体家族的死亡受体，包括肿瘤坏死因子受体、TNF相关的凋亡诱导配体受体和Fas介导的相关凋亡通路。在死亡受体介导的外源性途径中，膜配体(FasL)细胞死亡受体(Fas)结合，通过死亡诱导信号复合物传递凋亡信号，诱导Caspase的激活，最终导致细胞凋亡。

UV对人皮肤的损伤是一种UV在皮肤中损伤持续积累的过程，在UV照射皮肤组织过程中，发挥相关作用的细胞凋亡基因包括促使细胞调亡基因、抑制细胞调亡基因以及调亡效应基因，当细胞基因不同于正常的表达发生时，可能会导致细胞功能紊乱而诱发光老化，这种异常包括促凋亡基因表达增加、抑凋亡基因表达下调等，比如Fas和FasL的表达下调，而本申请实施例提供的人参皂甙能够促进二者表达升高，这侧面说明其对于UV小鼠皮肤损伤具有修复作用，而这种作用与人参皂甙中包含的式(I)和式(II)所示化合物中的R1基团和R2基团决定的，结果与细胞实验相一致。

由此，本申请实施例通过细胞实验和动物实验发现了式(I)和式(II)所示化合物具有抗衰老功能，并利用该人参皂甙制备了护肤乳，这对于其作用护肤领域化妆品的应用前景具有积极意义。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。