一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法

技术领域

本发明涉及农业领域，特别涉及一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法。

背景技术

白菜霜霉病(peronaspora parasitica)是白菜上最重要的病害之一，在十字花科蔬菜上的危害程度仅次于病毒病，遇病害重发年份，其危害程度大大超过病毒病，是秋季及初冬白菜生产上的一个重大威胁。白菜霜霉病为十字花科霜霉病菌侵染所致，主要为害叶片，病叶最初出现黄色斑点，后转为浅褐色多角形斑点，在潮湿的环境条件中，病叶背面常可见到白色的霉状物。不结球白菜(Brassic campestris ssp.chinensis Makino)又名小白菜、青菜，属十字花科芸薹属，因其品质柔嫩、风味独特、营养丰富等特点，在人民生活中占有重要的地位，特别在上海、长江中下游及以南地区，不结球白菜是人们不可缺少的大众化蔬菜之一。

霜霉病由真菌中的霜霉菌引起的植物病害，对不结球白菜的危害极大，已经影响其从幼苗期到成熟期的整个生长阶段，造成品质以及产量上不可估量的损失。病原体为寄生型霜霉，属鞭毛菌亚门，为卵菌纲，霜霉属。

传统的杀菌剂不仅开发成本大，而且对环境的承载能力也是一个巨大的挑战，期间病菌产生的抗药性又会减少药效，但是，现有的鉴定方法无法保存或繁殖菌源及比较品种材料的抗性差异，获得抗源，为此，我们提出一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法来解决上述问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种通过点滴法对培育的白菜幼苗进行霜霉病菌接种，对接种后白菜是否感染霜霉病进行鉴别，从而判断不结球白菜是否具备抗霜霉病的特质的不结球白菜抗霜霉病。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法，包括如下步骤：

步骤1，配制霜霉病菌悬浮液，收集霜霉病发病叶片，洗净后置于20℃黑暗条件下保湿，24h后剥落于蒸馏水中制成霜霉病菌悬浮液并置于-20℃条件下保存；

步骤2，培育供试品种的白菜，在不结球白菜的幼苗长到两叶一心时期，将前述配制的霜霉病菌悬浮液滴点在不结球白菜的叶面；

步骤3，将前述滴点后的幼苗置于18～20℃，相对湿度为95％～100％的培养箱内进行培养，在7d后统计，鉴定筛选感病和不感病的不结球白菜植株。

进一步地，所述步骤2中不结球白菜的培育方式为：将供试品种播于穴盘中，穴盘中的基质为蛙石和泥炭以1:3比例混合而成的，高温灭菌后使用，待植株两片子叶平展时，即播种7d后，将配好的新鲜菌液进行滴液接种，接种量为每株150～200μl，接种后黑暗保湿24h，每个处理3次重复，每重复苗数20～30株。

进一步地，所述步骤2中不结球白菜接种霜霉病的方式为：当穴盘中的不结球白菜幼苗长到两叶一心时，进行接种，并置于18～20℃，相对湿度为95％～100％的培养箱内进行培养，在7d后统计，鉴定筛选感病和不感病的不结球白菜植株。

进一步地，所述步骤1中配制的浓度为每视野10mm×10mm具有4～5个孢子囊的悬浮菌液。

进一步地，所述步骤2中利用点滴法对幼苗接种霜霉病菌，接种量为每株150～200μl，接种后黑暗保湿24h，自然条件下发病。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1)本发明通过点滴接种法，将配制的霜霉病悬浮液对不结球白菜幼苗进行接种后，发现在19℃，相对湿度为98％下易于感染，接侵染斑点多，菌丝发展速度快，可见利于病害流行的温度是19℃，这一温度范围内既有利于孢子囊萌发侵入，也有利于侵入后菌丝体的发展；

2)本发明发现不结球白菜幼苗子叶期对霜霉病极易感染，因此子叶期试验的最终目的是保存或繁殖菌源及比较品种材料的抗性差异，获得抗源，试验中发现鉴定品种材料的抗性较适宜的苗龄是3～4片真叶期；

3)本发明区分了不结球白菜种质资源对十字花科霜霉病的抗感能力，通过点滴法来鉴定抗病或感病的不结球白菜，能快速、有效地鉴定不结球白菜对霜霉病的抗性。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明较优实施例中一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法，以不结球白菜常规品种“新矮青”为试材，在不同生长期(子叶期和三叶一心期)，进行接种处理。

试验方法：取保存典型性状的不结球白菜病样，先用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗，置于20℃黑暗条件下保湿24h，其中RH＝95％，将病叶放在培养皿中，叶片上下铺上湿润的吸水纸或滤纸，用湿棉球将新产生的孢子囊轻轻剥落于蒸馏水中制成悬浮液，稀释至所需浓度并标定，最后加入标定体积的0.1％的吐温即成接种液；

供试品种播于穴盘中基质为蛙石和泥炭以1:3比例混合，高温灭菌后使用，待植株两片子叶平展时，即播种7d后，将配好的新鲜菌液进行滴液接种，每个处理3次重复，每重复苗数30株，利用点滴法对幼苗接种霜霉病菌，接种量为每株200μl，接种后黑暗保湿24h；

然后将前述滴点后的幼苗置于20℃，相对湿度为100％的培养箱内进行培养，在7d后统计，鉴定筛选感病和不感病的不结球白菜植株。

实施例2

本发明较优实施例中一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法，以不结球白菜常规品种“新矮青”为试材，在不同生长期(子叶期和三叶一心期)，进行接种处理。

试验方法：取保存典型性状的不结球白菜病样，先用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗，置于20℃黑暗条件下保湿24h，其中RH＝95％，将病叶放在培养皿中，叶片上下铺上湿润的吸水纸或滤纸，用湿棉球将新产生的孢子囊轻轻剥落于蒸馏水中制成悬浮液，稀释至所需浓度并标定，最后加入标定体积的0.1％的吐温即成接种液；

供试品种播于穴盘中基质为蛙石和泥炭以1:3比例混合，高温灭菌后使用，待植株两片子叶平展时，即播种7d后，将配好的新鲜菌液进行滴液接种，每个处理3次重复，每重复苗数20株，利用点滴法对幼苗接种霜霉病菌，接种量为每株150μl，接种后黑暗保湿24h；

然后将前述滴点后的幼苗置于18℃，相对湿度为95％的培养箱内进行培养，在7d后统计，鉴定筛选感病和不感病的不结球白菜植株。

实施例3

本发明较优实施例中一种不结球白菜抗霜霉病种质材料的鉴定方法，以不结球白菜常规品种“新矮青”为试材，在不同生长期(子叶期和三叶一心期)，进行接种处理。

试验方法：取保存典型性状的不结球白菜病样，先用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗，置于20℃黑暗条件下保湿24h，其中RH＝95％，将病叶放在培养皿中，叶片上下铺上湿润的吸水纸或滤纸，用湿棉球将新产生的孢子囊轻轻剥落于蒸馏水中制成悬浮液，稀释至所需浓度并标定，最后加入标定体积的0.1％的吐温即成接种液；

供试品种播于穴盘中基质为蛙石和泥炭以1:3比例混合，高温灭菌后使用，待植株两片子叶平展时，即播种7d后，将配好的新鲜菌液进行滴液接种，每个处理3次重复，每重复苗数25株，利用点滴法对幼苗接种霜霉病菌，接种量为每株180μl，接种后黑暗保湿24h；

然后将前述滴点后的幼苗置于189℃，相对湿度为98％的培养箱内进行培养，在7d后统计，鉴定筛选感病和不感病的不结球白菜植株。

接种鉴定结果：19℃下易感染，斑点多，菌丝发展速度快，保湿账内或在加罩条件下，均产生大量孢子囊，病症扩展快，不加保湿条件下，速度明显减慢，产生少量孢子囊，三次重复的平均结果得出，在这一温度下，5天即会产生斑点较多，可见，利于病害流行的温度是19℃，因为在这一温度范围内既有利于孢子囊萌发侵入，也有利于侵入后菌丝体的发展。

子叶期受侵染后，病菌发展速度最快，易造成幼苗死亡，不利于观察，不利于试验的进一步进行，不易采用子叶期这一苗龄以供试验。因此，试验表明鉴定品种材料的抗性较适宜的苗龄是3～4片真叶期。说明不结球白菜不同时期对霜霉病的抗感能力不同，通过点滴法快速、有效地鉴定不结球白菜对霜霉病的抗性。

在试验过程中发现，同一品种在不同的温、湿度下可呈现不同的症状，只有在适宜的较低温度，较高的相对湿度下，病菌充分发展，品种的抗性差异才能正确体现，从而才能获得真正的抗性材料。同样，掌握好适当的苗龄，使得幼苗在病菌侵染并蔓延的情况下不死亡且能恰当地反映出个体之间的抗性差异，从而提高苗期人工抗性鉴定的准确性，筛选出抗性可靠的材料。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。