一种用于抑制水产病原菌的中药组合物

文献发布时间：2023-06-19 09:49:27

技术领域

本发明涉及抑制水产病原菌技术领域，具体为一种用于抑制水产病原菌的中药组合物。

背景技术

水产养殖已成为重要的食物来源之一，然而，水产动物疾病的发生和流行已严重的威胁软体动物、鱼类、龙虾、虾等的规模化养殖；其中，致病菌如：嗜水气单胞菌、副溶血性弧菌和溶藻弧菌引起的细菌性病害是水产养殖业面临的严重威胁之一；针对水产动物疾病频发的情况，一些水产养殖企业大量使用或不规范使用抗生素，这又导致细菌耐药性频繁发生；同时，随着限制抗生素的使用，寻找绿色、高效的抗生素替代品已日益成为水产养殖业关注的重点；与此同时，中药及其提取物作为一种广谱、绿色的抗菌剂日益受到重视；

这不仅危害水产养殖业的健康发展，而且间接威胁人类的健康，因此寻求抗生素替代品是水产养殖业的重要方向；许多中药具有抗病毒、抗菌活性和增强免疫的特点，且来源广泛、价格低廉，毒性低，不易产生耐药性等优点；使用中药提取物替代传统抗生素是当前限制使用抗生素的形势下，水产养殖动物病害防控的发展趋势之一；针对这些缺陷，设计一种用于抑制水产病原菌的中药组合物是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于抑制水产病原菌的中药组合物，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种用于抑制水产病原菌的中药组合物，包括以下步骤，步骤一，原料选取；步骤二，药剂浸泡；步骤三，单独煎制；步骤四，离心过滤；步骤五，药物筛选及优化组合；

其中上述步骤一中，人工选取色泽鲜明的丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角

其中上述步骤二中，药剂浸泡包括以下步骤：

1)人工将丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角进行筛分，并将其倒入清水中洗净，随后烘干；

2)将烘干后的丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入打碎机中进行打碎加工，随后倒出使用过滤网进行过滤；

3)将丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入蒸馏水中浸泡，浸泡30-40min；

其中上述步骤三中，单独煎制包括以下步骤：

1)人工将步骤二3)中丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入锅中，煮沸1-2h，随后过滤收集滤液；

2)再将滤液倒入煎锅中进行文火煎熬，直至浓缩至原来的二分之一；

3)关火静置10-20min，直至混合物降温至室温，将冷却后的混合物进行过滤筛分，随后冷却静置备用；

其中上述步骤四中，离心过滤包括以下步骤：

1)将步骤三3)中丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入离心机中，调节离心机至1200rpm，离心加工10-20min，收集上层滤液；

2)将滤液使用0.22μm滤膜过滤，将滤液分装，即可得到用于抑制水产病原菌的中药组合物，将其保存在-80℃冷藏室中保存；

其中上述步骤五中，药物筛选及优化组合包括以下步骤：

1)采用圆盘扩散法测定所有中药提取物的抑菌活性；取少量保种菌株接种于LB液体培养基中，并在30℃，150rpm恒温摇床中培养18h；接着，吸取1mL菌液于1.5mL离心管中，6000rpm，离心2min，舍去菌液上清，用无菌生理盐水稀释菌体至1×10

2)用肉汤微量稀释法测定提取物对被供试菌株的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度；首先，准备12个无菌离心管，在第一个离心管中加入500μL的中药提取物并与1.5mL的LB液体培养基混合；随后，吸取1mL以1∶1依次稀释到第2至第11管，第12管作为空白对照；每管接种20μL菌悬液1×10

3)采用微量肉汤棋盘稀释法测定丁香、山茱萸、五味子、罗汉果、八角等5种中药两两组合后的体外抑菌的联用抑菌指数；根据体外抑菌试验结果，选择5种体外抑菌效果敏感药物两两组合按照1∶1的比例进行配比，并测定联用抑菌指数；FIC分数抑制浓度的计算方法如下：ΣFIC＝FICA+FICB，其中FICA为A药联合/MIC时A药的MIC，FICB为B药联合/MIC时B药的MIC；当FIC≤0.50时，为显著协同作用；当0.50＜FIC≤1.0时，为协同作用；FIC＝1.0时，为相加作用；1.0＜FIC＜2.0时，为无关作用；FIC≥

2.0时，为拮抗作用；所有的分析重复三次。

根据上述技术方案，所述步骤一中需要人工检查丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角是否存在腐烂。

根据上述技术方案，所述步骤二2)中过滤网采用180-200目。

根据上述技术方案，所述步骤三1)中煮沸温度为80-100℃。

根据上述技术方案，所述步骤四1)中离心机使用前需要进行清洗。

根据上述技术方案，所述步骤五3)中测定结果需要存储备份在档案室。

与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：该发明，安全可靠，采用丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角两两混合作为主要药物，且全部采用中药制作，无副作用，不含抗生素，不会导致耐药性细菌的出现，有利于水产养殖业发展，同时有利于人类的健康和环境安全，且成本低廉，有利于用户生产与使用。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种用于抑制水产病原菌的中药组合物：

实施例1：

一种用于抑制水产病原菌的中药组合物，包括以下步骤，步骤一，原料选取；步骤二，药剂浸泡；步骤三，单独煎制；步骤四，离心过滤；步骤五，药物筛选及优化组合；

其中上述步骤一中，人工选取色泽鲜明的丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角，需要人工检查丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角是否存在腐烂；

其中上述步骤二中，药剂浸泡包括以下步骤：

1)人工将丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角进行筛分，并将其倒入清水中洗净，随后烘干；

2)将烘干后的丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角分别倒入打碎机中进行打碎加工，随后倒出使用过滤网进行过滤，过滤网采用180-200目；

3)将丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角分别倒入蒸馏水中浸泡，浸泡30-40min；

其中上述步骤三中，单独煎制包括以下步骤：

1)人工将步骤二3)中丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角分别倒入锅中，煮沸1-2h，煮沸温度为80-100℃，随后过滤收集滤液；

2)再将滤液倒入煎锅中进行文火煎熬，直至浓缩至原来的二分之一；

3)关火静置10-20min，直至混合物降温至室温，将冷却后的混合物进行过滤筛分，随后冷却静置备用；

其中上述步骤四中，离心过滤包括以下步骤：

1)将步骤三3)中丁香、罗汉果、山茱萸、熟地黄、五味子和八角分别倒入离心机中，离心机使用前需要进行清洗，调节离心机至1200rpm，离心加工10-20min，收集上层滤液；

2)将滤液使用0.22μm滤膜过滤，将滤液分装，即可得到用于抑制水产病原菌的中药组合物，将其保存在-80℃冷藏室中保存；

其中上述步骤五中，药物筛选及优化组合包括以下步骤：

3)采用微量肉汤棋盘稀释法测定丁香、山茱萸、五味子、熟地黄、罗汉果、八角等中药两两组合后的体外抑菌的联用抑菌指数；根据体外抑菌试验结果，选择5种体外抑菌效果敏感药物两两组合按照1∶1的比例进行配比，并测定联用抑菌指数；FIC分数抑制浓度的计算方法如下：ΣFIC＝FICA+FICB，其中FICA为A药联合/MIC时A药的MIC，FICB为B药联合/MIC时B药的MIC；当FIC≤0.50时，为显著协同作用；当0.50＜FIC≤1.0时，为协同作用；FIC＝1.0时，为相加作用；1.0＜FIC＜2.0时，为无关作用；FIC≥2.0时，为拮抗作用；所有的分析重复三次，测定结果需要存储备份在档案室。

实施例2：

其中上述步骤一中，人工选取色泽鲜明的丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角，需要人工检查丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角是否存在腐烂；

其中上述步骤二中，药剂浸泡包括以下步骤：

1)人工将丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角进行筛分，并将其倒入清水中洗净，随后烘干；

2)将烘干后的丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入打碎机中进行打碎加工，随后倒出使用过滤网进行过滤，过滤网采用180-200目；

3)将丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入蒸馏水中浸泡，浸泡30-40min；

其中上述步骤三中，单独煎制包括以下步骤：

1)人工将步骤二3)中丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入锅中，煮沸1-2h，煮沸温度为80-100℃，随后过滤收集滤液；

2)再将滤液倒入煎锅中进行文火煎熬，直至浓缩至原来的二分之一；

3)关火静置10-20min，直至混合物降温至室温，将冷却后的混合物进行过滤筛分，随后冷却静置备用；

其中上述步骤四中，离心过滤包括以下步骤：

1)将步骤三3)中丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角分别倒入离心机中，离心机使用前需要进行清洗，调节离心机至1200rpm，离心加工10-20min，收集上层滤液；

2)将滤液使用0.22μm滤膜过滤，将滤液分装，即可得到用于抑制水产病原菌的中药组合物，将其保存在-80℃冷藏室中保存；

其中上述步骤五中，药物筛选及优化组合包括以下步骤：

实施例3：

其中上述步骤一中，人工选取色泽鲜明的丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角，需要人工检查丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角是否存在腐烂；

其中上述步骤二中，药剂浸泡包括以下步骤：

1)人工将丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角进行筛分，并将其倒入清水中洗净，随后烘干；

2)将烘干后的丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角分别倒入打碎机中进行打碎加工，随后倒出使用过滤网进行过滤，过滤网采用180-200目；

3)将丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角分别倒入蒸馏水中浸泡，浸泡30-40min；

其中上述步骤三中，单独煎制包括以下步骤：

1)人工将步骤二3)中丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角分别倒入锅中，煮沸1-2h，煮沸温度为80-100℃，随后过滤收集滤液；

2)再将滤液倒入煎锅中进行文火煎熬，直至浓缩至原来的二分之一；

3)关火静置10-20min，直至混合物降温至室温，将冷却后的混合物进行过滤筛分，随后冷却静置备用；

其中上述步骤四中，离心过滤包括以下步骤：

1)将步骤三3)中丁香、罗汉果、大黄、山茱萸、五味子和八角分别倒入离心机中，离心机使用前需要进行清洗，调节离心机至1200rpm，离心加工10-20min，收集上层滤液；

2)将滤液使用0.22μm滤膜过滤，将滤液分装，即可得到用于抑制水产病原菌的中药组合物，将其保存在-80℃冷藏室中保存；

其中上述步骤五中，药物筛选及优化组合包括以下步骤：

3)采用微量肉汤棋盘稀释法测定丁香、山茱萸、五味子、罗汉果、大黄、八角等5种中药两两组合后的体外抑菌的联用抑菌指数；根据体外抑菌试验结果，选择5种体外抑菌效果敏感药物两两组合按照1∶1的比例进行配比，并测定联用抑菌指数；FIC分数抑制浓度的计算方法如下：ΣFIC＝FICA+FICB，其中FICA为A药联合/MIC时A药的MIC，FICB为B药联合/MIC时B药的MIC；当FIC≤0.50时，为显著协同作用；当0.50＜FIC≤1.0时，为协同作用；FIC＝1.0时，为相加作用；1.0＜FIC＜2.0时，为无关作用；FIC≥2.0时，为拮抗作用；所有的分析重复三次，测定结果需要存储备份在档案室。

将实施例性质分别给不同水产品使用，中药提取物的抑菌活性如下表：

中药提取物的MIC值和MBC值如下表：

中药提取物的联合抑菌效果如下表：

基于上述，本发明的优点在于，该发明，安全可靠，采用丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角两两混合作为主要药物，且全部采用中药制作，无副作用，不含抗生素，不会导致耐药性细菌的出现，有利于水产养殖业发展，同时有利于人类的健康和环境安全，且成本低廉，有利于用户生产与使用。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

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该技术已申请专利。仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
专利发明人：杨培奎;郑玉忠;张振霞;林敏;查广才;
专利申请人：韩山师范学院;