马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

技术领域

本发明涉及对具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物中的保护基进行脱保护的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法。

背景技术

药剂有在血中不稳定的药剂、迅速排出到体外的药剂、显示抗原性的药剂等。这样的药剂通过用聚乙二醇(PEG)这样的水溶性聚合物进行修饰，从而有助于药剂的血中滞留性的提高，因此在给药系统、医药领域中正在积极地进行关于PEG的研究。通过进行PEG修饰，能够实现药剂等的稳定化、抗原性降低、给药量降低等，进而通过结合抗体等而能够提高靶向性。

为了用PEG修饰药物等生理活性物质，需要将PEG的末端基团变为反应性官能团。此时，在向反应性官能团的转化不充分的情况下，未修饰的药剂、官能团未转化的PEG会作为杂质残留，因此需要制造高纯度的PEG衍生物。

作为反应性官能团之一，可以举出马来酰亚胺基。马来酰亚胺基与硫醇基反应而形成稳定的硫醚，因此作为PEG化试剂的反应性官能团而广为人知，有用性高。

然而，马来酰亚胺基的双键部位富于反应性，容易劣化。在合成马来酰亚胺聚乙二醇衍生物时，在马来酰亚胺基导入后经过多个步骤，这有可能导致马来酰亚胺基的导入率(马来酰亚胺化率)降低。因此，在合成的最终工序中直接导入马来酰亚胺基的方法在抑制其劣化方面是优选的。

作为其制法，可列举记述了PEG衍生物与马来酰亚胺的反应的非专利文献1，在所记载的制造方法中，在三苯基膦与二异丙基重氮二羧酸酯存在下，在-78℃使马来酰亚胺与PEG衍生物中的PEG末端的羟基反应时，马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的收率为31％，没有提及该低收率的原因。

另外，还报道了由呋喃衍生物和马来酰亚胺合成的马来酰亚胺衍生物与PEG衍生物的反应(专利文献1)。在记载的制造方法中，用马来酰亚胺衍生物取代PEG末端的离去基团后，通过基于加热的脱保护而得到马来酰亚胺PEG衍生物。在该方法中，虽然没有马来酰亚胺化率的记载，但在导入马来酰亚胺基时，使用了具有保护马来酰亚胺的高活性双键的保护基的马来酰亚胺衍生物，因此，作为优点，可列举出抑制马来酰亚胺化率的降低，但在脱保护过程中，难以避免马来酰亚胺化率的降低。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第7790835号说明书

非专利文献

非专利文献1：Bioconjugate Chem.，vol.14，No.2，377-387(2003)

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于，在使具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物脱保护时，抑制马来酰亚胺基的劣化，制造马来酰亚胺化率高的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物。

用于解决课题的方法

本发明人等反复进行了深入研究，结果发现，通过在脱保护时的反应体系中添加硅胶，与现有方法相比，能够抑制马来酰亚胺基的劣化，并且得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物，从而完成了本发明。

即，本发明涉及下述[1]～[6]。

[1]一种由下述通式(2)表示的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法，包括：在硅胶存在下，在溶剂中对由下述通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物进行加热，由此进行脱保护的反应工序；

[化1]

[化2]

(式中，R

Z为从具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基；

Y

W为选自醚基、亚甲基、二甲基亚乙烯基中的基团；

X为碳原子数1～7的烃基、羟基的保护基、羧基的保护基、硫醇的保护基、氰基或包含它们的亚烷基；

m1和m2各自独立地为1或0；

n1为表示聚乙二醇的重复单元数的0或10～2000的整数；

n2为表示聚乙二醇的重复单元数的10～2000的整数；

l为表示亚甲基的重复单元数的0或2～10的整数；

a为1～5的整数，b为0～4的整数，a和b的合计为2～5的整数。)

[2]根据上述[1]所述的制造方法，上述通式(1)中，R

[3]根据上述[1]或[2]所述的制造方法，上述通式(1)中，W为醚基。

[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的制造方法，上述通式(1)和(2)中，Z为从具有2个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基，m1和m2为1，n1和n2为10～2000的整数，l为2，a和b为1。

[5]根据上述[1]～[3]中任一项所述的制造方法，上述通式(1)和(2)中，Z为从具有3个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基，m1为0，m2为1，n1为0，n2为10～2000的整数，l为0，a为1，b为2。

[6]根据上述[1]～[3]中任一项所述的制造方法，上述通式(1)和(2)中，Z为从具有4个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基，m1为1，n1为10～2000，l为2，a为4，b为0。

发明效果

根据本发明，能够提供马来酰亚胺化率高的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行详细说明。

本发明的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法为下述通式(2)所示的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法，包括：在硅胶存在下，在溶剂中加热由下述通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物，由此进行脱保护的反应工序。

需要说明的是，有时将上述具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物记载为“具有保护基的马来酰亚胺PEG衍生物”或“化合物1”。另外，有时将上述马来酰亚胺聚乙二醇衍生物记载为“马来酰亚胺PEG衍生物”。

[化3]

[化4]

(式中，R

Z为从具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基；

Y

W为选自醚基、亚甲基、二甲基亚乙烯基中的基团；

X为碳原子数1～7的烃基、羟基的保护基、羧基的保护基、硫醇的保护基、氰基或包含它们的亚烷基；

m1和m2各自独立地为1或0；

n1为表示聚乙二醇的重复单元数的0或10～2000的整数；

n2为表示聚乙二醇的重复单元数的10～2000的整数；

l为表示亚甲基的重复单元数的0或2～10的整数；

a为1～5的整数，b为0～4的整数，a和b的合计为2～5的整数。)

[由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物]

在本发明的制造方法中，使用由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物作为原料。

[化5]

式(1)中的R

其中，R

其中，特别优选R

式(1)中的m1和m2各自独立地为1或0。

式(1)中的n1表示聚乙二醇的重复单元数，为0或10～2000的整数。n1优选为50～1500的整数，更优选为100～500的整数。

式(1)中的n2表示聚乙二醇的重复单元数，为10～2000的整数。n2优选为50～1500的整数，更优选为100～500的整数。

式(1)中的l表示亚甲基的重复单元数，为0或2～10的整数。

式(1)中的a为1～5的整数，b为0～4的整数，a和b的合计为2～5的整数。

式(1)中的Z为从具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基。

此处，作为活性氢基，例如可列举羟基、羧基、氨基、硫醇基等，其中优选羟基。

作为具有2～5个活性氢基的化合物，例如可列举出碳原子数1～20、优选为碳原子数2～10的化合物，作为该化合物，可列举出多元醇化合物、多元羧酸化合物、多胺化合物、多硫醇化合物等。其中，优选多元醇化合物。

作为上述多元醇化合物，可列举出乙二醇、丙二醇、二乙二醇、三乙二醇、二丙二醇、甘油、三羟甲基丙烷、1,3,6-己三醇、季戊四醇、山梨糖醇等，其中，优选乙二醇、甘油、季戊四醇。

所谓从具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基，例如如果活性氢基为羟基，则是指除去羟基而得到的残基。举例进行说明，如果具有2～5个活性氢基的化合物为乙二醇，则以下的式(a1)所示的基团相当于从本发明中的具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得的残基。如果具有2～5个活性氢基的化合物为甘油，则以下的式(a2)所示的基团相当于从本发明中的具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基。如果具有2～5个活性氢基的化合物为季戊四醇，则以下的式(a3)所示的基团相当于从本发明中的具有2～5个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得到的残基。需要说明的是，式(a1)、式(a2)、式(a3)中的*表示连接键。

[化6]

式(1)中的W表示选自醚基、亚甲基、二甲基亚乙烯基中的任一基团。其中，从马来酰亚胺的保护和脱保护的容易性出发，W优选为醚基(即氧原子)。

式(1)中的Y

从制造容易性的观点出发，Y

式(1)中的X为碳原子数1～7的烃基、羟基的保护基、羧基的保护基、硫醇的保护基、氰基或包含它们的亚烷基。

作为上述羟基的保护基、羧基的保护基、硫醇的保护基，例如可列举出叔丁基、苄基、三苯甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等。

其中，X优选为碳原子数1～7的烃基，更优选为甲基。

通式(1)和后述的通式(2)中，优选以下的(i)～(iii)中的任一方式。

(i)Z为从具有2个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得的残基，m1和m2为1，n1和n2为10～2000的整数，l为2，a和b为1。

(ii)Z为从具有3个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得的残基，m1为0，m2为1，n1为0，n2为10～2000的整数，l为0，a为1，b为2。

(iii)Z为从具有4个活性氢基的化合物中除去上述活性氢基而得的残基，m1为1，n1为10～2000，l为2，a为4，b为0。

由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法并无特别限定，例如可通过准备以下的马来酰亚胺保护体(式(3))与PEG衍生物(式(4))，并使它们反应而获得。需要说明的是，马来酰亚胺保护体和PEG衍生物中的R

[化7]

[由通式(2)表示的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法]

本发明的由下述通式(2)表示的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法是包含如下反应工序的制造方法：在硅胶存在下，在溶剂中对上述由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物进行加热，由此进行脱保护。

[化8]

式(2)中的Z、Y

本发明的制造方法中使用的硅胶是指球状或破碎状的二氧化硅。

硅胶的平均粒径没有特别限定，优选为5～425μm，更优选为50～150μm。

硅胶的平均细孔径没有特别限定，优选为2～15nm，更优选为6～13nm。

硅胶的细孔容量没有特别限定，优选为0.5～1.5mL/g，更优选为0.6～1.2mL/g。

硅胶的比表面积没有特别限定，优选为200～800m

平均粒径、平均细孔径、细孔容量和比表面积为上述数值范围的下限值以上时，反应效率提高，为上述数值范围的上限值以下时，过滤硅胶后，目标物从过滤物中的提取量变高，生产率提高。

需要说明的是，硅胶的平均粒径是通过激光衍射式粒度分布测定法测定的值。硅胶的平均细孔径、细孔容量和比表面积是通过氮气吸附法测定的值。另外，关于比表面积，是使用BET式算出的值。

硅胶的使用量相对于由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺PEG衍生物(化合物1)，优选为0.1～5重量倍，特别优选为1～3重量倍。硅胶的使用量为这些下限值以上时，容易抑制马来酰亚胺基的劣化，为这些上限值以下时，反应液的搅拌变得容易。

本发明中，脱保护的反应在溶剂中加热进行。本发明中的加热时的溶剂的温度(即，反应温度)优选为70～150℃，其中特别优选为100～120℃。溶剂的温度为这些下限值以上时，反应容易进行，为这些上限值以下时，容易抑制马来酰亚胺基的劣化。

本发明中使用的溶剂只要为非质子性，且具有与反应温度同等以上的沸点，则并无特别限制，优选为甲苯、对二甲苯。相对于由通式(1)表示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(化合物1)，溶剂的使用量优选为3～50重量倍，更优选为5～20重量倍。溶剂的使用量为这些下限值以上时，反应液的搅拌变得容易，为这些上限值以下时，经济性提高。

本发明中的反应时间根据所使用的原料、溶剂的种类、量而不同，通常为2～8小时。

实施例

以下，基于实施例对本发明进行更具体的说明。需要说明的是，在实施例中，马来酰亚胺化率的分析使用NMR。

<

在

通过以下的制造例(1-1)～(1-3)，制造具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(A)(分子量：5,000)。

[化9]

n＝115

[制造例1-1]

马来酰亚胺保护体的合成

在9ml螺旋管中加入马来酰亚胺157.1mg(1.61mmol)、甲基叔丁基醚1.5g、呋喃876.7mg(12.88mmol)，在氮气气氛下、30℃下进行8小时反应。放冷至室温，滤取析出的结晶，进行干燥，得到下述所示的马来酰亚胺保护体(B)(122.9mg，0.74mmol)。

[化10]

[制造例1-2]

甲氧基PEG(分子量：5000)的合成

向带有温度计、氮气吹入管、搅拌机的200ml圆底烧瓶中加入脱水甲醇24g(0.8mol)、金属钠0.563g(24mmol：16mol％)，一边吹入氮气一边在室温下搅拌至金属钠溶解。将该溶液投入5L高压釜中，将体系内进行氮气置换后，升温至80℃，在100～150℃、0.5MPa以下的压力下加入环氧乙烷2300g(52.3mol)后，进一步继续反应1小时。在减压下除去未反应的环氧乙烷气体后，冷却至60℃，用85％磷酸水溶液将pH调整为7.5，得到下述化合物(C)。

[化11]

H

n＝115

[制造例1-3]

向甲氧基PEG衍生物中导入马来酰亚胺保护体的工序

在20ml螺旋管中投入化合物(C)2.00g(0.40mmol)、脱水甲苯3.5g、氯仿10g、马来酰亚胺保护体(B)231.2mg(1.40mmol)、三苯基膦1.41g(5.40mmol)、二异丙基重氮二羧酸酯1.09g(5.40mmol)，在氮气气氛下、室温下反应1小时。反应后，加入甲醇10.0mg，在50℃下浓缩。将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯10g中，加入己烷8g进行析晶。滤取析出的结晶，添加己烷6g和乙酸乙酯12g的混合溶剂。进行4次该操作后，将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯12g中，加入己烷6g，再次进行析晶。最后，将生成的结晶用己烷8g洗涤、干燥，得到下述所示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(A)(1.35g，0.27mmol)。

[化12]

n＝115

除了改变(制造例1-2)的环氧乙烷的加入量来调整分子量以外，通过与上述制造例(1-1)～(1-3)同样的方法，制造具有保护基的马来酰亚胺PEG衍生物(D)(分子量20,000)。

[化13]

n＝460

通过以下的制造例(2-1)～(2-7)，制造具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(E)(分子量：10,000)。

[化14]

n＝115

[制造例2-1]

马来酰亚胺保护体的合成

在9ml螺旋管中加入马来酰亚胺157.1mg(1.61mmol)、甲基叔丁基醚1.5g、2-甲基呋喃877.7mg(10.68mmol)，在氮气气氛下、30℃下进行8小时反应。放冷至室温，滤取析出的结晶，进行干燥，得到下述所示的马来酰亚胺保护体(F)(86.4mg，0.48mmol)。

[化15]

[制造例2-2]

亚异丙基甘油的苄基化工序

向带有温度计、氮气吹入管、搅拌机的1000ml圆底烧瓶中加入2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇132.2g(1.0mol)、甲醇钠28％甲醇溶液231.4g(1.2mol)、甲苯500ml，一边吹入氮气一边使甲苯减压回流1小时，蒸馏除去甲醇。一边将该溶液保持在80℃，一边使用滴液漏斗用2小时滴加苄基氯126.6g(1.0mol)，进一步反应2小时。将反应液进行脱溶剂、蒸馏精制(b.p.93-95℃/266Pa)，得到4-(苯甲酰氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环(G)。

[化16]

[制造例2-3]

苄基保护亚异丙基甘油的脱亚异丙基化工序

在1L烧杯中量取4-(苯甲酰氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环(G)222g(1.0mol)、乙醇250ml、蒸馏水400ml，用磷酸将pH调整为2.0。一边吹入氮气，一边将溶液加热至70℃，反应1.5小时后，用氢氧化钠将pH调整为7.0，用Kyoward1000(协和化学工业株式会社制)对盐进行吸附处理，进行脱溶剂，得到3-苄氧基-1,2-丙二醇(H)。

[化17]

[制造例2-4]

甘油苄基保护体的PEG化工序(分子量：10,000)

向带有温度计、氮气吹入管、搅拌机的300ml圆底烧瓶中加入3-苄氧基-1,2-丙二醇(H)27.3g(0.15mol)、脱水甲苯127g(1.2mol)、金属钠0.9g(39mmol：26mol％)，一边吹入氮气一边在室温下搅拌至金属钠溶解。将该溶液投入5L高压釜中，将体系内进行氮气置换后，升温至100℃，在100～150℃、1MPa以下的压力下加入环氧乙烷1473g(33.5mol)后，进一步继续反应1小时。在减压下除去未反应的环氧乙烷气体后，冷却至60℃，用85％磷酸水溶液将pH调整为7.5，得到下述化合物(I)。

[化18]

n＝115

[制造例2-5]

甘油苄基保护PEG的甲氧基化工序

向带有温度计、氮气吹入管、搅拌机、Dean-Stark管和冷凝管的500ml圆底烧瓶中加入100g(10mmol)上述化合物(I)、320g甲苯，加热回流，共沸除去水分。冷却至室温后，加入三乙胺10.12g(100mmol)、甲基磺酰氯6.87g(60mmol)，在40℃下反应6小时。将反应液过滤后，将滤液移至带有温度计、氮气吹入管、搅拌机及冷却管的500ml圆底烧瓶中，加入甲醇钠28％甲醇溶液19.3g(100mmol)，在70℃下反应6小时。接着，向反应液中加入Kyoward700(协和化学工业株式会社制)27g，进一步在70℃下搅拌1小时，对过量的甲醇钠进行吸附处理，过滤反应液后，将滤液装入1L烧杯中，加入300g乙酸乙酯、350g己烷进行析晶。将析出的结晶滤取到1L烧杯中，加入乙酸乙酯，在40℃下加热溶解后，加入己烷300g，再次进行析晶，滤取析出的结晶，干燥，得到下述化合物(J)。

[化19]

n＝115

[制造例2-6]

甘油苄基保护PEG的脱苄基化工序

在带有温度计、氮气吹入管、搅拌机及冷却管的500ml圆底烧瓶中，投入15g上述化合物(J)、15g的5％钯碳(50％含水品)，氮气置换后，加入300ml甲醇、150ml环己烯并升温，在52～55℃下缓慢回流，反应5小时。将反应液冷却至室温后，过滤分离钯碳，将滤液浓缩。在浓缩液中加入乙酸乙酯50ml、己烷50ml而进行析晶。滤取所得到的结晶，进行干燥，得到下述化合物(K)。

[化20]

n＝115

[制造例2-7]

向甲氧基PEG中导入马来酰亚胺保护体的工序

在20ml螺旋管中投入化合物(K)2.0g(0.20mmol)、脱水甲苯3.5g、氯仿10g、马来酰亚胺保护体(F)125.4mg(0.70mmol)、三苯基膦708.2mg(2.70mmol)、二异丙基重氮二羧酸酯546.0mg(2.70mmol)，在氮气气氛下、室温下反应1小时。反应后，加入甲醇10.0mg，在50℃下浓缩。将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯10g中，加入己烷8g进行析晶。滤取析出的结晶，添加己烷6g和乙酸乙酯12g的混合溶剂。进行4次该操作后，将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯12g中，加入己烷6g，再次进行析晶。最后，将生成的结晶用己烷8g洗涤、干燥，得到下述所示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(E)(1.30g，0.13mmol)。

[化21]

n＝115

通过以下的制造例(3-1)～(3-3)，制造具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(L)(分子量：40,000)。

[化22]

n＝230

[制造例3-1]

马来酰亚胺保护体的合成

在9ml螺旋管中加入马来酰亚胺386.9mg(3.99mmol)、甲基叔丁基醚3.7g、2,5-二甲基呋喃3.09mg(32.14mmol)，在氮气气氛下、50℃下进行8小时反应。放冷至室温，滤取析出的结晶，进行干燥，得到下述所示的马来酰亚胺保护体(M)(522.3mg，2.70mmol)。

[化23]

[制造例3-2]

季戊四醇的PEG化工序

向带有温度计、氮气吹入管、搅拌机的1000ml圆底烧瓶中加入季戊四醇24.5g(0.18mol)、脱水甲苯420g(4.6mol)、金属钠2.5g(109mmol：73mol％)，一边吹入氮气一边在室温下搅拌至金属钠溶解。将该溶液投入5L高压釜中，将体系内进行氮气置换后，升温至100℃，在100～150℃、1MPa以下的压力下加入环氧乙烷896g(20.3mol)后，进一步继续反应1小时。在减压下除去未反应的环氧乙烷气体后，冷却至60℃，用85％磷酸水溶液将pH调整为7.5，得到下述化合物(N)。

[化24]

n＝230

[制造例3-3]

向季戊四醇PEG中导入马来酰亚胺保护体的工序

在20ml螺旋管中投入化合物(N)2.0g(0.050mmol)、脱水甲苯3.5g、氯仿10g、马来酰亚胺保护体(M)31.4mg(0.175mol)、三苯基膦177.0mg(0.675mmol)、二异丙基重氮二羧酸酯136.5mg(0.675mmol)，在氮气气氛下、室温下反应1小时。反应后，加入甲醇10.0mg，在50℃下浓缩。将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯10g中，加入己烷8g进行析晶。滤取析出的结晶，添加己烷6g和乙酸乙酯12g的混合溶剂。进行4次该操作后，将析出的结晶在40℃下加热溶解于乙酸乙酯12g中，加入己烷8g，再次进行析晶。最后，用己烷8g将生成的结晶洗涤、干燥，得到下述所示的具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(L)(1.28g，0.032mmol)。

[化25]

n＝230

[实施例1]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL的具支试管中，加入具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(A)200mg(0.04mmol)、甲苯10g、硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)200mg，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。倾析反应液后，用甲醇4g从硅胶中提取目标物2次。将反应液和提取液转移到50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(O)(产量：189.5mg，0.037mmol，收率96％，马来酰亚胺化率97％)。需要说明的是，本实施例中使用的硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)的平均粒径为100μm，平均细孔径为7nm，细孔容量为0.8mL/g，比表面积为500m

[化26]

n＝115

根据实施例1中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(O)的

[实施例2]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL的具支试管中，加入具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(D)200mg(0.01mmol)、甲苯10g、硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)200mg，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。倾析反应液后，用甲醇4g从硅胶中提取目标物2次。将反应液和提取液转移到50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(P)(产量：191.4mg，0.0095mmol，收率96％，马来酰亚胺化率97％)。需要说明的是，本实施例中使用的硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)的平均粒径为100μm，平均细孔径为7nm，细孔容量为0.8mL/g，比表面积为500m

[化27]

n＝460

根据实施例2中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(P)的

[实施例3]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL的具支试管中，加入具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(E)200mg(0.02mmol)、甲苯10g、硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)200mg，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。倾析反应液后，用甲醇4g从硅胶中提取目标物2次。将反应液和提取液转移到50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(Q)(产量：188.3mg，0.019mmol，收率95％，马来酰亚胺化率96％)。需要说明的是，本实施例中使用的硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)的平均粒径为100μm，平均细孔径为7nm，细孔容量为0.8mL/g，比表面积为500m

[化28]

n＝115

根据实施例3中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(Q)的

[实施例4]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL的具支试管中，加入具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(L)200mg(0.005mmol)、甲苯10g、硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)200mg，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。倾析反应液后，用甲醇4g从硅胶中提取目标物2次。将反应液和提取液转移到50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(R)(产量：194.0mg，0.0048mmol，收率98％，马来酰亚胺化率96％)。需要说明的是，本实施例中使用的硅胶(富士Silysia制：PSQ100B)的平均粒径为100μm，平均细孔径为7nm，细孔容量为0.8mL/g，比表面积为500m

[化29]

n＝230

根据实施例4中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(R)的

[比较例1]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL三口圆底烧瓶中加入具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(A)200mg(0.04mmol)、甲苯10g，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。将反应液转移至50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(O)(产量：195.4g，0.038mmol，收率99％，马来酰亚胺化率85％)。

根据比较例1中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(O)的

[比较例2]

马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法

在100mL的具支试管中，加入具有保护基的马来酰亚胺PEG衍生物(L)150mg(0.0037mmol)、甲苯7.5g、Kyoward2000(氧化铝-氧化镁固溶体，协和化学工业制)150mg，在氮气气氛下、110℃下进行5小时反应。倾析反应液后，用甲醇3g提取目标物2次。将反应液和提取液转移到50mL茄形烧瓶中，使其浓缩干固。然后，真空干燥6小时，得到马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(R)(产量：87.5mg，0.0021mmol，收率59％，马来酰亚胺化率65％)。

根据比较例2中得到的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物(R)的

如上所述，通过将具有保护基的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物在硅胶存在下在溶剂中加热，能够提供马来酰亚胺化率高的马来酰亚胺聚乙二醇衍生物的制造方法。