一种双连续相Pickering乳液及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种双连续相Pickering乳液及其制备方法。

背景技术

抗老是护肤美容界亘古不变的话题，抗老的方式多种多样，可以从生活的各个方面入手，比如日常防晒、皮肤保养、健康饮食、增加锻炼。而其中护肤则是想要抗老必不可少的一个环节。越来越多的功效成分进入大家的视野，但很多成分功效类似，把这些看似有效的成分直接加到护肤品中却并不一定能得到很好的效果，甚至这种堆料式的护肤可能导致肌肤越来越差，因此，精简护肤的概念越来越深入人心。

衰老分为内源性衰老和外源性衰老。内源性衰老是随着年龄的增长和代谢的减弱，肌底真皮层急速老化的现象。外源性衰老是指由外部环境、心理因素等导致的衰老现象。表观是都是出现皮肤松弛、没有弹性，皱纹增多、加深以及皮肤干燥、多色素沉淀。

随着绿色可持续发展理念的传播普及，真正安全、无毒无害、无副作用的产品成为消费者追求的对象。利用天然来源的颗粒乳化剂代替传统的表面活性剂受到越来越多的关注，其中，由固体颗粒稳定油水界面所形成的新型乳液体系被称作Pickering乳液。最早是在20世纪初由Ramsden发现蛋白质颗粒可以自发地组装到空气与水的界面。随后，Pickering证实不溶于水的胶体颗粒可以吸附到油水界面并对所得的乳液体系进行了系统的研究。Pickering乳液因其无毒、无刺激性、良好的生物相容性和优异的生物降解性而逐渐被化妆品、生物医药以及食品行业应用起来。此外，Pickering乳液可以实现活性物的保护，并实现控制活性物释放、延长作用时间和改善活性物稳定性等效果。

中国专利CN 113679628 A公开了一种综合改善皮肤问题的护肤组合物及其应用，通过将活性物直接添加在成品中所发生作用，但是活性物本身的特性会影响其使用感及功效的发挥。比如在光照或常温条件下麦角硫因会产生三甲胺的气味，这种味道会使使用者体验感很差，只能通过选择在配方中大量增加香精来掩盖气味。麦角硫因是一种抗氧化剂，很容易被氧化，所以当添加量达到一定水平时会导致明显的产品变色。依可多因添加量太少时不能发挥作用，而添加量太高时会给皮肤带来额外的负担，并且其具有一定的粘度，可能会影响成品的使用肤感。另外直接添加的活性物长期稳定性并不能有效保证，其生物利用度太低，即使加入量提升也很难真正作用于肌肤深层来发挥功效。

因此，本发明在此基础上通过制备稳定的Pickering乳液来实现活性物保护，可以增加活性物的生物利用度，目前，该技术方案未见报道。

发明内容

本发明提供的一种双连续相Pickering乳液及其制备方法，旨在解决上述背景技术中存在的问题。

为了实现上述技术目的，本发明主要采用如下技术方案：

第一方面，本发明公开了一种双连续相Pickering乳液，按100重量份计，包括如下重量份配比的原料：玻色因10-15份；依可多因3-5份；麦角硫因0.1-0.5份；多元醇20-40份；磷脂1-10份；固体蛋白颗粒2-10份，余量为纯化水。

玻色因能通过促进糖胺聚糖(GAGs)的合成，进而促进蛋白聚糖的产生。它还能通过GAGs促进一些细胞因子以及胶原蛋白的再生，达到抗老、修复的作用。此外，玻色因还能促进连接处胶原蛋白VII和胶原蛋白IV的生成，使表皮和真皮贴合更紧密，皮肤变得更紧致、有弹性。

依可多因是一种氨基酸衍生物，它独特的分子结构使它即使在具备很好的锁水能力。皮肤里的蛋白质周围会存在一定的水分子但很容易游离去而导致肌肤缺水。依克多因渗入肌肤密集分布在蛋白质周围使“水分子”变得密集团结起来。依可多因还可以激活皮肤的朗格汉斯细胞，激发皮肤的自我修复能力，提升皮肤细胞的免疫防护能力。

麦角硫因是一种天然抗氧化剂，具有很好的自由基清除能力和生物利用度。与同是抗氧化美白类的白藜芦醇相比，显现出独特的优势。麦角硫因能够抑制由紫外线诱导的基质金属蛋白酶-1(它主要降解Ⅰ型胶原蛋白)和肿瘤坏死因子(它可以促进T细胞产生各种炎症因子，进而促进炎症反应的发生)等的表达，实现抗光老化，抑制紫外线照射引起的DNA、蛋白质和脂质损伤及细胞凋亡。

在本发明的较佳实施方式中，所述多元醇包括醇溶性多元醇和水溶性多元醇，所述醇溶性多元醇选自甘油、1,3-丁二醇中的一种或两种；所述水溶性多元醇选自1,2-丙二醇、聚乙二醇、甘油中的一种或几种。

由于甘油既易溶于水，又易溶于醇溶液，故甘油可同时用作醇溶性多元醇和水溶性多元醇。

进一步的，所述醇溶性多元醇和水溶性多元醇的重量份配比为1:1。

在本发明的较佳实施方式中，所述磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂，或氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双肉豆磷脂酰胆碱、双肉豆磷脂酰甘油中的一种或几种。

在本发明的较佳实施方式中，所述固体蛋白颗粒包括醇溶性固体蛋白颗粒和水溶性固体蛋白颗粒，所述醇溶性固体蛋白颗粒选自麦醇溶蛋白或玉米醇溶蛋白；所述水溶性固体蛋白颗粒选自白乳扇豆蛋白或蚕丝蛋白。

进一步的，所述醇溶性固体蛋白颗粒和水溶性固体蛋白颗粒的重量份配比为1-3:5-3。

第二方面，本发明公开了一种如第一方面所述的双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取活性物原料麦角硫因和玻色因，然后向其中加入纯化水，混合，制备成内水相溶液备用；

(2)将磷脂、醇溶性多元醇以及醇溶性固体蛋白颗粒混合，搅拌，溶解均匀，形成油状液体；

(3)将步骤(2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤(1)所制备的水相溶液中，形成初始乳液；

(4)称取活性物原料依可多因、水溶性多元醇以及水溶性固体蛋白颗粒加入纯化水中，水浴下搅拌混匀得到外层水相；

(5)将步骤(4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤(3)所制备的初始乳液中，并在室温下搅拌，得到水包油包水的双连续相Pickering预乳液；

(6)将步骤(5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，得到双连续相Pickering乳液。在本发明的较佳实施方式中，步骤(2)中，搅拌时的温度为30-50℃；步骤(4)中，水浴温度为18-25℃。

在本发明的较佳实施方式中，步骤(5)中，以200-600rpm的转速搅拌10-30min。

在本发明的较佳实施方式中，步骤(6)中，高压均质处理条件为2000-3000rpm,100-500bar下循环1-8次。

第三方面，本发明公开了一种如第一方面所述的双连续相Pickering乳液或由第二方面所述制备方法制备得到的双连续相Pickering乳液在制备化妆品或护肤品中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明选择的三种活性物玻色因、依可多因、麦角硫因，每个活性物的功能强大且能互补，只需往基础精华、面霜等配方中加入本发明所制备的双连续相Pickering乳液即可具备极佳的抗老性能。依可多因保持肌肤湿润度，强效补水，修复抗炎，为肌底提供活力；麦角硫因抗击身体内外部因素产生的自由基强效抗氧化，防止老化和色素沉积；玻色因促进胶原蛋白的生成，增加真皮和表皮层的连接使皮肤更有弹性，使肌肤焕发活力。三种活性成分协同增效。通过实验室的多重配比优化后确定三种原料配比，既能保证Pickering乳液的稳定性，还可以使活性成分协同抗老的功效作用最大化。

(2)本发明选择的固体蛋白颗粒具有快速的界面吸附动力学，当蛋白质被吸附在界面上时，往往会发生结构展开，与被吸附的蛋白质之间存在相互吸引作用，为Pickering乳液的制备提供了多重优势。其中，蚕丝蛋白本身保持了其原始结构和化学组成，仍然具有蚕丝蛋白特有的柔和光泽和吸收紫外线抵御日光辐射的作用，光滑、细腻、透气性好、附着力强，能随环境温湿度的变化而吸收和释放水分，对皮肤角质层水分有较好的保持作用；麦醇溶蛋白可与皮肤角蛋白连接形成保护胶体层，减少其他物质对皮肤的刺激，也能减少紫外线对皮肤的损伤。

(3)本发明制备得到的双连续相Pickering乳液可以与多种基质复配，低温下加入配方即可，比如面膜、爽肤水、精华、面霜等，应用范围广泛且便利。Pickering乳液技术可以使活性物的稳定性更好，符合化妆品产品长货架寿命的需求。

(4)本发明制备得到的双连续相Pickering乳液相较于未处理的活性物，具有更好的经皮渗透性功效，成分更容易透过皮肤表层，直达护肤靶部位长效滞留并缓慢释放，效果持久，可以有效改善由于角质形成细胞活力减弱带来的皮肤衰老情况；具有有效防止皮肤发生氧化损伤的作用，减少皮肤水分散失。

附图说明

图1为本发明实施例1-5所制备得到的双连续相Pickering乳液图；

图2为本发明实施例1所制备得到的双连续相Pickering乳液电镜图；

图3为本发明实施例1-5所制备得到的双连续相Pickering乳液粒径分布图；

图4为本发明实施例1所制备得到的双连续相Pickering乳液给药24h后对HaCaT细胞活力的作用影响图；

图5为本发明实施例1所制备得到的双连续相Pickering乳液给药48h后对HaCaT细胞SOD活力水平的影响图；

图6为本发明实施例1所制备得到的双连续相Pickering乳液对人表皮水分散失的影响图；

图7为本发明实施例1所制备得到的双连续相Pickering乳液与游离活性物的体外透皮实验评估图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取活性物原料0.1份麦角硫因和15份玻色因加入20.9份纯化水混合制备成内水相溶液备用。

2)5份的氢化大豆卵磷脂、10份的甘油以及1份的麦醇溶蛋白混合并在30℃下搅拌溶解均匀形成油状液体。

3)将步骤2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤1)所制备的水相中形成初始乳液。

4)称取活性物原料3份依可多因、10份1,2-丙二醇以及5份的蚕丝蛋白，加入30份的纯化水中，在20℃水浴下搅拌混匀得到外层水相。

5)将步骤4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤3)所制备的初始乳液中，并在室温下以300rpm的转速搅拌30min，可得到所制备的水包油包水的双连续相Pickering预乳液。

6)将步骤5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，处理条件为3000rpm,200bar下循环2次，得到双连续相Pickering乳液1。其显微图如图1所示。

实施例2

一种双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取活性物原料0.5份麦角硫因和10份玻色因加入25.5份纯化水混合制备成内水相溶液备用。

2)5份的氢化大豆卵磷脂、10份的甘油以及1份的麦醇溶蛋白混合并在30℃下搅拌溶解均匀形成油状液体。

3)将步骤2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤1)所制备的水相中形成初始乳液。

4)称取活性物原料5份依可多因、10份1,2-丙二醇以及5份的蚕丝蛋白，加入30份的纯化水中，在20℃水浴下搅拌混匀得到外层水相。

5)将步骤4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤3)所制备的初始乳液中，并在室温下以300rpm的转速搅拌30min，可得到所制备的水包油包水的双连续相Pickering预乳液。

6)将步骤5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，处理条件为3000rpm,200bar下循环2次，得到双连续相Pickering乳液2。

实施例3

一种双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取活性物原料0.1份麦角硫因、15份玻色因和加入20.9份纯化水混合制备成内水相溶液备用。

2)称取5份的双肉豆磷脂酰甘油、10份的1,3-丁二醇以及1份的麦醇溶蛋白混合并在30℃下搅拌溶解均匀形成油状液体。

3)将步骤2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤1)所制备的水相中形成初始乳液。

4)称取3份依可多因、10份甘油以及5份的蚕丝蛋白，加入30份的纯化水中，在20℃水浴下搅拌混匀得到外层水相。

5)将步骤4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤3)所制备的初始乳液中，并在室温下以300rpm的转速搅拌30min，可得到所制备的水包油包水的双连续相Pickering预乳液。

6)将步骤5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，处理条件为3000rpm,200bar下循环2次，得到双连续相Pickering乳液3。

实施例4

一种双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取活性物原料0.1份麦角硫因和15份玻色因加入20.9份纯化水混合制备成内水相溶液备用。

2)5份的氢化大豆卵磷脂、10份的甘油以及3份的玉米醇溶蛋白混合并在30℃下搅拌溶解均匀形成油状液体。

3)将步骤2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤1所制备的水相中形成初始乳液。

4)称取活性物原料3份依可多因、10份聚乙二醇以及3份的白乳扇豆蛋白，加入30份的纯化水中，在20℃水浴下搅拌混匀得到外层水相。

5)将步骤4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤3)所制备的初始乳液中，并在室温下以300rpm的转速搅拌30min，可得到所制备的水包油包水的双连续相Pickering预乳液。

6)将步骤5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，处理条件为3000rpm,200bar下循环2次，得到双连续相Pickering乳液4。

实施例5

一种双连续相Pickering乳液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取活性物原料0.1份麦角硫因和15份玻色因加入20.9份纯化水混合制备成内水相溶液备用。

2)5份的氢化大豆卵磷脂、10份的甘油以及1份的麦醇溶蛋白混合并在30℃下搅拌溶解均匀形成油状液体。

3)将步骤2)制备的油相液体缓慢滴加到步骤1)所制备的水相中形成初始乳液。

4)称取活性物原料3份依可多因、10份1,2-丙二醇以及5份的蚕丝蛋白，加入30份的纯化水中，在20℃水浴下搅拌混匀得到外层水相。

5)将步骤4)制备的外层水相缓慢滴加到步骤3)所制备的初始乳液中，并在室温下以500rpm的转速搅拌10min，可得到所制备的水包油包水的双连续相Pickering预乳液。

6)将步骤5)所制备的Pickering预乳液通过高压均质处理，处理条件为2000rpm,300bar下循环1次，得到双连续相Pickering乳液5。

对比例1

称取活性物原料0.1份麦角硫因、15份玻色因和3份依可多因，直接加入到81.9份纯化水中，搅拌混合均匀。

试验例1：稳定性考察

将上述实施例1～5、对比例1制备的样品分别置于密闭容器中，在室温、4℃、-18℃以及45℃放置90天，于初始状态和90天后，在常温下检查样品性状有无析出或分层现象发生，并测试样品保有率。实验结果表1所示。

表1实施例1-5及对比例1的稳定性测试结果

由表1可知，本发明所制备的实施例1-5中实施例1-5均表现出较好的稳定性。所制备的双连续相Pickering乳液在在室温、4℃、-18℃以及45℃温度条件下各放置90天后也未出现团聚分层现象，无活性成分泄漏。但是裸露的活性物水溶液在长期保存条件下可以看到明显的活性成分析出。因此，本发明提供的水包油包水双连续相Pickering乳液具有良好的稳定性，并且能稳定复配于产品中。

试验例2：对HaCaT细胞活力的作用影响

将实施例1分别按照1％，2％，5％的比例稀释后，用来测试其对于细胞增殖的影响。将融合度达到80～90％的HaCaT细胞消化下来，离心。以5×10

由图4结果可知，与空白组相比，给药24h后，1％实施例1、2％实施例1、5％实施例1的样品均能显著促进HaCaT细胞增殖，对HaCaT细胞增值的效果具有剂量依赖性。这说明本发明提供的水包油包水双连续相Pickering乳液可以有效改善由于角质形成细胞活力减弱带来的皮肤衰老情况。

试验例3：对HaCaT细胞SOD活力水平的影响

将实施例1分别按照1％，2％，5％的比例稀释后，用来处理HaCaT细胞，48h后吸净细胞培养液，用4℃或冰浴预冷的PBS洗涤一遍，按照每100万细胞加入100-200微升的比例加入SOD检测试剂盒提供的SOD样品制备液，适当吹打以充分裂解细胞；然后按照试剂盒的检测步骤对不同样品的SOD活力进行检测。结果如图5所示。

由图5结果可知，1％的双连续相Pickering乳液稀释液即可以显著增加SOD的活力，SOD可以催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H

试验例4：TEWL测试

环境条件：测试环境温度为22℃±1℃，湿度为50％±5％。

志愿者条件：30人；年龄在22岁～60岁之间；身体及皮肤状态健康；受试部位前2天～3天未使用任何产品(化妆品或外用药品)。

测试样品：将实施例1-5所制备的Pickering乳液及对比例1所制备的水溶液均添加2％至实验室空白精华中，空白精华的配方：还原胶0.3％；甘油10％；小核菌胶0.2％；对羟基苯乙酮0.5％；1，2-乙二醇0.5％；尿囊素0.2％；透明质酸钠1％；其余全为水；

测试步骤：受试者需先清洁双手前臂内测，用面巾纸擦拭干净。然后在受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前静坐至少20min，不能喝水，左右手臂内侧标记3cm×3cm试验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域不可重叠。使用TM300 Courage+Khakaza Cologne Germany测定仪进行受试区域和对照区域的测量，每个区域依照平行测定5次。先测量各测试区域的空白值，然后按2.0mg±0.1mg样品/cm2的用量，将试验样品均匀涂布于试验区内。涂抹后，分别测量1h、2h和4h时，受试区域和空白对照区域的皮肤含水量。结果如图6所示。

由图6可以看出，随着时间的增加，空白和涂抹不加实施例1的受试区域水分散失量无明显变化，二者的水分散失量比涂抹乳液前稍小，是由于皮肤调节自身水分平衡导致的。而涂抹涂抹含1％、2％和5％的实施例1所制备的精华后受试区域水分散失量逐渐减少，且随着实施例1的添加量增加，其水分散失量也随之减少。故实施例1制备的双连续相Pickering乳液可以有效减少水分散失。

试验例5透皮测试

采用垂直式Franz扩散池法研究三因Pickering乳液的体外释放行为。以乳猪皮为载体，将其固定在Franz扩散池的供给室和接收室之间，将扩散池固定于透皮吸收扩散仪中，在开启磁搅拌子和恒温水浴的情况下，向室中皮肤表面加入实施例1所制备的三因pickering乳液(稀释至2％)，另一组加入游离的活性物三因样品，活性物浓度与测试样保持一致，分别进行透皮实验。然后计算24h后的累积渗透量、滞留量等数值。然后对体外透皮试验结束后进行结果分析。结果如图7所示。

由图7实验结果可知，24h后，实施例1所制备的三因Pickering乳液较游离态三因样品的皮肤累积渗透量和滞留量均显著增加，说明所制备的三因Pickering乳液具有良好的皮肤透过性及皮肤滞留能力，更有利于其发挥功效。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。