一种测定复方丙谷胺西咪替丁片的溶出曲线的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及测定复方丙谷胺西咪替丁片的溶出曲线的方法。

背景技术

复方丙谷胺西咪替丁片主要成分为丙谷胺、尿囊素、西咪替丁和珍珠粉，主要用于治疗急性胃炎(暴饮暴食、酒后、食物中毒等)、慢性胃炎、慢性十二指肠炎、消化性溃疡。其中丙谷胺具有抗胃泌素作用，并对胃黏膜有保护和促进愈合作用；尿囊素具有保护胃黏膜、促进上皮细胞增长功能；西咪替丁能明显地抑制食物、组胺或五肽胃泌素等刺激引起的胃酸分泌，对因化学刺激引起的腐蚀性胃炎有预防和保护作用；珍珠粉具有解毒作用，可净化溃疡创面并在溃疡面形成持久的保护膜。

目前，在生产工艺进行变更时，根据CDE《已上市化学药品药学变更研究技术指导原则(试行)》的要求，需“进行变更前后样品进行对比研究，变更前后样品的溶出曲线、杂质谱、关键理化性质等应保持一致”。在溶出曲线试验中发现，采用复方丙谷胺西咪替丁片现行质量标准中含量测定方法，尿囊素受溶出介质盐酸干扰，无法准确计算尿囊素的溶出量。因此，建立一个具有区分力的溶出曲线方法和准确定量的测定方法是亟待解决的新课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定复方丙谷胺西咪替丁片的溶出曲线的方法。采用HPLC法(流动相浓度、梯度淋洗、变流速法)进行溶出量的检测；通过搅拌桨转速和取样时间点的选择等试验，确定溶出曲线的检测方法；比较溶出曲线相似性采用相似因子(f

本发明的目的是这样实现的：一种测定复方丙谷胺西咪替丁片的溶出曲线的方法，该方法包括如下步骤：

(1)溶出方法：

(1a)溶出介质：纯化水；0.1mol/L盐酸溶液；pH4.5磷酸盐缓冲液；pH6.8磷酸盐缓冲液；

(1b)浆法；所述溶出介质为纯化水，转速为55～65转/分钟；所述溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液，转速为45～55转/分钟；

(2)检测方法：

(2a)色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂

流动相：第二磷酸盐缓冲液和甲醇；

所述流动相采用流动相浓度、梯度淋洗，变流速法；

所述第二磷酸盐缓冲液的制备；

供试品溶液的制备；

对照品溶液的制备；

(2b)测定方法：精密量取所述供试品溶液和对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算出每片中尿囊素、西咪替丁和丙谷胺的溶出量；

在所述尿囊素、西咪替丁和丙谷胺出峰前，所述流动相中，所述第二磷酸盐缓冲液和甲醇的体积比为(99.9-95.0):(0.1-5.0)。

所述溶出介质为纯化水，转速为58～62转/分钟；所述溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液，转速为48～52转/分钟。

所述色谱柱的规格选自(100-250)×(3.0-4.6)mm，3.5-10μm；优选的，所述色谱柱的规格包括选自(100-150)×(4.0-4.6)mm，5-10μm；更优选的，所述色谱柱的规格选自150×4.6mm，5μm；所述色谱柱的品牌选自Kromasil、Waters、安捷伦、迪马、资生堂；所述安捷伦色谱柱选自TC-C18；所述供试品溶液的色谱图中，所述尿囊素峰的理论板数不得低于2000。

所述第二磷酸盐缓冲液的制备方法包括如下步骤：取磷酸盐，加水溶解，用碱溶液调pH至弱酸性；所述磷酸盐选自磷酸钾盐、磷酸钠盐中的一种或几种；所述磷酸钾盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或几种；所述磷酸钠盐选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种；所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或几种；所述弱酸性指pH为4.5-6.5，优选的，所述弱酸性指pH为5.0-6.0，更优选的，所述弱酸性指pH为5.5；所述碱溶液的浓度选自1-30％；优选的，所述碱溶液的浓度选自5-20％，更优选的，所述碱溶液的浓度选自10％；在所述第二磷酸盐缓冲液的制备方法中，所述磷酸盐的质量：所述水的体积＝(1-10):(500-1500)，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升；优选的，所述磷酸盐的质量：所述水的体积＝(2-5):(800-1250)，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升；更优选的，所述磷酸盐的质量：所述水的体积＝2.72:1000，所述质量的单位为克，所述体积的单位为毫升。

所述色谱条件还包括：柱温：25℃～45℃，优选的，柱温：30℃～40℃，更优选的，柱温：35℃；紫外检测器波长：205-230nm，优选的，紫外检测器波长：210-220nm，更优选的，紫外检测器波长：215nm；进样量：5μl～50μl，优选的，进样量：10μl～20μl，优选的，进样量：15μl。

所述供试品溶液的制备包括如下步骤：

取溶出液，并即时补充相同温度相同体积的相应溶出介质，立即用微孔滤膜过滤，得到相应溶出液续滤液；

0.1mol/L盐酸溶液介质供试品溶液：精密量取相应溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钾溶液5ml，用水稀释至刻度，摇匀；

pH4.5磷酸盐缓冲液介质供试品溶液：精密量取相应溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用pH4.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀；

pH6.8磷酸盐缓冲液介质供试品溶液：精密量取相应溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用pH6.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀；

水介质供试品溶液：精密量取相应溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；

所述取溶出液的时间点为5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟。

所述对照品溶液的制备包括如下步骤：

精密称取丙谷胺对照品、西咪替丁对照品和尿囊素对照品中的一种或几种，置于容量瓶中，加第二磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液溶解，当所述溶出介质为纯化水、pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液时，用相应的溶出介质稀释至刻度，当所述溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液时，用水稀释至刻度，摇匀；

所述对照品溶液中丙谷胺的含量为0.01-0.03mg/ml；优选的，所述对照品溶液中丙谷胺的含量为0.015-0.025mg/ml；更优选的，所述对照品溶液中丙谷胺的含量为0.020mg/ml；所述对照品溶液中西咪替丁的含量为0.005-0.02mg/ml；优选的，所述对照品溶液中西咪替丁的含量为0.008-0.015mg/ml；更优选的，所述对照品溶液中西咪替丁的含量为0.010mg/ml；所述对照品溶液中尿囊素的含量为0.005-0.02mg/ml；优选的，所述对照品溶液中尿囊素的含量为0.008-0.015mg/ml；更优选的，所述对照品溶液中尿囊素的含量为0.011mg/ml。

所述流动相浓度、梯度淋洗、变流速法为如下步骤：

所述第二磷酸盐缓冲液与甲醇为体积比；

优选的，所述流动相浓度、梯度淋洗，变流速法包括如下步骤：

所述第二磷酸盐缓冲液与甲醇为体积比。

所述流动相浓度、梯度淋洗、变流速法为如下步骤：

所述第二磷酸盐缓冲液与甲醇为体积比；

优选的，所述流动相浓度、梯度淋洗，变流速法包括如下步骤：

所述第二磷酸盐缓冲液与甲醇为体积比。

所述计算公式为：

式中：A

A

W

P：对照品含量，％

S：供试品标示量：尿囊素为55mg；西咪替丁为50mg；丙谷胺为100mg；

式中：A

本发明的优点在于：建立了一个具有区分力的测定溶出曲线的方法，可以很好的区分复方丙谷胺西咪替丁片处方或工艺的变量对体外释放的影响，进而保证药品质量，达到质量与疗效的一致性。其检测方法还具有试剂易得、操作简便、精密度高、检测成本低等优点。

附图说明

附图1复方丙谷胺西咪替丁片在水介质中各组分的HPLC图谱

附图2复方丙谷胺西咪替丁片在0.1mol/L盐酸溶液介质中各组分的HPLC图谱

附图3复方丙谷胺西咪替丁片在pH4.5磷酸盐缓冲液介质中各组分的HPLC图谱

附图4复方丙谷胺西咪替丁片在pH6.8磷酸盐缓冲液介质中各组分的HPLC图谱

附图5本发明实施例1水介质中尿囊素的溶出曲线对比图

附图6本发明实施例1水介质中西咪替丁的溶出曲线对比图

附图7本发明实施例1水介质中丙谷胺的溶出曲线对比图

附图8本发明实施例1中0.1mol/L盐酸溶液介质尿囊素的溶出曲线对比图

附图9本发明实施例1中0.1mol/L盐酸溶液介质西咪替丁的溶出曲线对比图

附图10本发明实施例1中0.1mol/L盐酸溶液介质丙谷胺的溶出曲线对比图

附图11本发明实施例1中pH4.5磷酸盐缓冲液介质尿囊素的溶出曲线对比图

附图12本发明实施例1中pH4.5磷酸盐缓冲液介质西咪替丁的溶出曲线对比图

附图13本发明实施例1中pH4.5磷酸盐缓冲液介质丙谷胺的溶出曲线对比图

附图14本发明实施例1中pH6.8磷酸盐缓冲液介质尿囊素的溶出曲线对比图

附图15本发明实施例1中pH6.8磷酸盐缓冲液介质西咪替丁的溶出曲线对比图

附图16本发明实施例1中pH6.8磷酸盐缓冲液介质丙谷胺的溶出曲线对比图

具体实施方式

以下实例将有助于对本发明的了解，但这些实例仅为了对本发明加以说明，但应注意的是，以下的实施例并不限制本发明的保护范围和应用范围。

说明：附图5-16中，附图标记1为复方丙谷胺西咪替丁片参比样品，附图标记2、3、4分别为不同处方或工艺制成的复方丙谷胺西咪替丁片自制样品。

参比样品：复方丙谷胺西咪替丁片，来源：东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：5211101；

实施例1：

a)溶出条件

溶出仪：SOTAX AT-xtend

溶出介质：纯化水；0.1mol/L盐酸溶液；pH4.5磷酸盐缓冲液；pH6.8磷酸盐缓冲液，各900ml。

介质配制，0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸9ml，加水稀释至1000ml，混匀；

pH4.5磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g，加水适量使溶解，用水稀释至1000ml；

pH6.8磷酸盐缓冲液：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液112ml混合后，再加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

转速：桨法，水介质为60转/分钟；其他介质为50转/分钟。

取样时间点：5分钟，10分钟，15分钟，20分钟、30分钟、45分钟、60分钟、90分钟、120分钟。

供试品溶液：取溶出液8ml，并即时补充相同温度相同体积的相应溶出介质，立即用0.45μm微孔滤膜，滤过，弃去初滤液，得到溶出液续滤液。

0.1mol/L盐酸溶液介质：精密量取相应的溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钾溶液5ml，用水稀释至刻度，摇匀。

pH4.5磷酸盐缓冲液介质：精密量取相应的溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用pH4.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。(2～8℃低温进样)

pH6.8磷酸盐缓冲液介质：精密量取相应的溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用pH6.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。(2～8℃低温进样)

水介质：精密量取溶出液续滤液5ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

b)高效液相色谱检测条件

色谱柱：安捷伦公司TC-C18 4.6mm×150mm，5μm

检测波长：215nm

进样体积：10μl

柱温：35℃

流动相：磷酸盐缓冲液为流动相A，甲醇为流动相B

c)磷酸盐缓冲液的制备：

称取磷酸二氢钾2.72g，加水1000ml溶解，用10％氢氧化钾溶液调节pH值至5.5。

d)对照品溶液

取丙谷胺对照品、西咪替丁对照品、尿囊素对照品适量，精密称定，加磷酸盐缓冲液：甲醇体积比＝6:4的溶液适量溶解，并用相应的溶出介质定量稀释成每1ml中含丙谷胺20μg、西咪替丁10μg、尿囊素11μg的溶液(0.1mol/L盐酸溶液介质用水稀释)。

e)测定方法

采用流动相磷酸盐缓冲液和甲醇浓度、梯度淋洗、变流速法；

上表中，流动相A与流动相B为体积比。

精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算出每片中尿囊素、西咪替丁和丙谷胺的溶出量。

f)计算公式

式中：A

A

W

P：对照品含量，％

S：供试品标示量。尿囊素为55mg；西咪替丁为50mg；丙谷胺为100mg。

式中：A

溶出曲线测定方法：溶出介质为水、0.1mol/L盐酸溶液(pH1.0)、pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液各900ml；转速，桨法50转/分钟(水介质为60转/分钟)；取样时间点，5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、45分钟、60分钟、90分钟、120分钟检测1，2，3，4四个样品。其中，样品1为参比样品，样品2，3，4为受试样品。

表1.样品1水介质中的溶出曲线

表2.样品2、3、4水介质中的溶出曲线

表3.样品1在0.1mol/L盐酸溶液介质中的溶出曲线

表4.样品2、3、4在0.1mol/L盐酸溶液介质中的溶出曲线

表5.样品1在pH4.5磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线

表6.样品2、3、4在pH4.5磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线

表7.样品1在pH6.8磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线

表8.样品2、3、4在pH6.8磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线

根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，采用非模型依赖法中的相似因子(f

计算公式：

f

R

T

表9.样品2，3，4与样品1(参比样品)在水介质中f

表10.样品2，3，4与样品1(参比样品)在0.1mol/L盐酸溶液介质中f

表11.样品2，3，4与样品1(参比样品)在pH4.5磷酸盐缓冲液介质中f

表12.样品2，3，4与样品1(参比样品)在pH6.8磷酸盐缓冲液介质中f

表3、表4中，受试样品和参比样品在尿囊素和西咪替丁在0.1mol/L盐酸溶液介质中15分钟的平均溶出量均不低于85％，可认为溶出曲线相似，不需计算f

据表9、表10、表11和表12的数据显示，样品2、3与样品1(参比样品)f

附图5至16中，“1、2、3、4”分别代表样品1、样品2、样品3、样品4。

实施例2：方法学考察

本研究对本方法的线性、重复性、准确度和稳定性进行了较为系统的考察。

1)线性

分别精密称取丙谷胺对照品25mg、西咪替丁对照品12.5mg、尿囊素对照品13.75mg，置同一100ml量瓶中，加流动相(磷酸盐缓冲液：甲醇体积比＝6:4的溶液)溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置50ml量瓶中，用相应的溶出介质稀释至刻度(0.1mol/L盐酸介质用水稀释)，摇匀，得到一系列不同浓度的对照品溶液，按照实施例1中色谱条件进样分析，分别以尿囊素、西咪替丁、丙谷胺浓度(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，结果表明，尿囊素在5.56μg/ml～16.69μg/ml的范围内线性关系良好，西咪替丁在5.19μg/ml～15.58μg/ml的范围内线性关系良好，丙谷胺在10.01μg/ml～30.04μg/ml的范围内线性关系良好。四种不同溶出介质的标准曲线方程如表13。

表13不同溶出介质中线性测定结果

2)重复性

取本品20片，精密称定，研细，精密量取适量(约含丙谷胺2mg、西咪替丁1mg、尿囊素1.1mg)六份，分别置100ml量瓶中，加少量甲醇使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按照实施例1中色谱条件进样分析，以测定的含量结果计算，水介质中尿囊素RSD值为0.5％、西咪替丁RSD值为0.5％、丙谷胺RSD值为0.7％；0.1mol/L盐酸溶液介质中尿囊素RSD值为0.9％、西咪替丁RSD值为0.4％、丙谷胺RSD值为0.4％；pH4.5磷酸盐缓冲液介质中尿囊素RSD值为0.7％、西咪替丁RSD值为0.3％、丙谷胺RSD值为0.3％；pH6.8磷酸盐缓冲液介质中尿囊素RSD值为0.5％、西咪替丁RSD值为0.3％、丙谷胺RSD值为0.4％；表明方法的重复性良好。

表14.重复性测定结果

/>

3)准确度试验

分别精密称取丙谷胺对照品20mg、25mg、30mg各三份，西咪替丁对照品10mg、12.5mg、15mg各三份，尿囊素对照品11mg、13.75mg、16.5mg各三份，分别置9个100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液与甲醇体积比为6:4的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液2ml，置9个25ml量瓶中，加空白辅料适量，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为加标供试品溶液。按照实施例1中色谱条件进样分析，根据公式“回收率＝回收量/加入量×100％”计算回收率，结果表明，水介质中，尿囊素的平均回收率为98.98％、RSD值为0.6％，西咪替丁的平均回收率为99.26％、RSD值为0.8％，丙谷胺的平均回收率为99.74％、RSD值为0.5％；0.1mol/L盐酸溶液介质中，尿囊素的平均回收率为100.45％、RSD值为0.7％，西咪替丁的平均回收率为100.01％、RSD值为0.6％，丙谷胺的平均回收率为100.91％、RSD值为0.8％；pH4.5磷酸盐缓冲液介质中，尿囊素的平均回收率为99.37％、RSD值为0.9％，西咪替丁的平均回收率为100.50％、RSD值为1.1％，丙谷胺的平均回收率为100.89％、RSD值为0.7％；pH6.8磷酸盐缓冲液介质中，尿囊素的平均回收率为99.37％、RSD值为0.7％；西咪替丁的平均回收率为99.60％、RSD值为0.9％；丙谷胺的平均回收率为100.18％、RSD值为0.8％，RSD均小于1％，表明样品的回收率良好。

表15.水介质中准确度测定结果

/>

表16.0.1mol/L盐酸溶液介质中准确度测定结果

/>

表17.pH4.5磷酸盐缓冲液介质中准确度测定结果

/>

表18.pH6.8磷酸盐缓冲液介质中准确度测定结果

/>

4)溶液稳定性

分别用水、0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液与pH6.8磷酸盐缓冲液依上述重复性的方法配制供试品溶液，按照实施例1中色谱条件，分别在0h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h进样，对含量进行计算，水介质中，尿囊素的RSD为0.3％，西咪替丁的RSD为0.2％，丙谷胺的RSD为0.4％；0.1mol/L盐酸溶液介质中，尿囊素的RSD为0.4％，西咪替丁的RSD为0.2％，丙谷胺的RSD为0.3％；pH4.5磷酸盐缓冲液介质中，尿囊素的RSD为0.3％，西咪替丁的RSD为0.4％，丙谷胺的RSD为0.5％；pH6.8磷酸盐缓冲液介质中，尿囊素的RSD为0.5％，西咪替丁的RSD为0.4％，丙谷胺的RSD为0.5％；表明样品在36小时内稳定性良好。

表19.溶液稳定性测定结果

/>

/>

实施例3：

1)搅拌桨转速的选择

表20.参比样品(样品1)在水介质中不同转速溶出曲线

采用75转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺在15分钟释放量均达到85％以上，为非常快速溶出，不具备区分力；采用50转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺释放变缓，具备区分力，但10min、15min、20min溶出量结果相对标准偏差(RSD)偏高；采用60转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺释放仍具备区分力，相对标准偏差(RSD)符合《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》的要求，因此，水介质中溶出曲线转速选择60转/min。

表21.样品1在0.1mol/L盐酸溶液介质中不同转速溶出曲线

/>

采用75转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺在15分钟释放量均达到85％以上，为非常快速溶出，不具备区分力；采用50转/min，尿囊素和西咪替丁仍为非常快速溶出，丙谷胺释放变缓，具备一定的区分力，相对标准偏差(RSD)符合要求，因此，0.1mol/L盐酸溶液介质中溶出曲线转速选择50转/min。

表22.样品1在pH4.5磷酸盐缓冲液介质中不同转速溶出曲线

/>

表23.样品1在pH6.8磷酸盐缓冲液介质中不同转速溶出曲线

表22、表23数据表明，采用75转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺在15分钟释放量均达到85％以上，为非常快速溶出，不具备区分力；采用50转/min，尿囊素、西咪替丁和丙谷胺释放变缓，具备区分力，相对标准偏差(RSD)符合要求，于是选择50转/min作为pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液研究溶出曲线的转速。

2)取样时间点的选择

根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，“取样时间点可为5和/或10、15和/或20、30、45、60、90、120分钟，此后每隔1小时进行测定”，确定取样时间点为5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟。