靶向CD147的抗体

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背景技术

胞外基质金属蛋白酶诱导物CD147(也称为Basigin、EMMPRIN、Neurothelin)是一种跨膜糖蛋白，其属于免疫球蛋白超家族。CD147参与肿瘤发展、疟原虫侵入和病毒感染。此外，CD147已被研究为癌症和免疫病症(如类风湿关节炎)的潜在治疗靶点。

发明内容

本公开提供了新型抗体、抗体片段或其修饰，其结合细胞上表达的CD147，以预防病毒感染、抑制疟疾感染、抑制血管生成和降低细胞活力。

本文提供了一种抗CD147抗体，其包含结合结构域，所述结合结构域包含与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％同一性的至少一个CDR。在一些实施方式中，其中所述抗CD147抗体包含两个CDR，其中所述两个CDR的每一个独立地与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％的同一性。在一些实施方式中，其中所述抗CD147抗体包含三个CDR，其中所述三个CDR的每一个独立地与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％的同一性。在一些实施方式中，其中所述抗CD147抗体包含与选自SEQ ID NO:4-15的序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，其中所述抗CD147抗体包含选自SEQ ID NO:4-15的氨基酸序列。在一些实施方式中，其中所述抗体是全长抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体、抗原结合区、重链、轻链、VhH、Vh、CDR、可变结构域、scFv、Fc、Fv、Fab、F(ab)2、IgG、还原的IgG(rIgG)、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、双体抗体、双特异性双体抗体、三特异性三体抗体、微型抗体、纳米抗体、IgNAR、V-NAR、HcIgG或其组合。在一些实施方式中，其中所述抗体是VhH。在一些实施方式中，其中嵌合抗原受体(CAR)的结合区包含与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％同一性的至少一个CDR。在一些实施方式中，所述CAR是在免疫细胞上表达的。在一些实施方式中，所述免疫细胞是PBMC、淋巴细胞、T细胞或NK细胞。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体结合在细胞表面上表达的CD147或其片段。在一些实施方式中，所述细胞是上皮细胞、内皮细胞或神经元细胞。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除病毒与CD147之间的相互作用。在一些实施方式中，所述相互作用包括所述病毒对所述CD147的结合。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除病毒刺突蛋白与CD147的结合。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除细胞的病毒侵入。在一些实施方式中，如通过病毒感染性测定所确定的，所述抗CD147抗体将细胞的病毒侵入降低或消除至少约1倍。在一些实施方式中，所述病毒选自以下：麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。在一些实施方式中，所述病毒是冠状病毒。在一些实施方式中，所述冠状病毒是SARS-CoV-2。在一些实施方式中，所述细胞是癌细胞。在一些实施方式中，所述细胞是肿瘤细胞。在一些实施方式中，所述癌细胞来自血液系统癌症。在一些实施方式中，所述肿瘤细胞来自选自以下的癌症：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除肿瘤细胞增殖、转移、基质金属蛋白酶分泌、肿瘤基质降解、肿瘤细胞侵入和/或血管生成。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除炎症。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体有效降低或消除炎性或自身免疫性病症。在一些实施方式中，所述炎性或自身免疫性疾病选自以下：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体是人源化的。在一些实施方式中，所述CD147抗体结合细胞，从而预防、抑制或减少疟原虫寄生虫侵入所述细胞中。在一些实施方式中，所述疟原虫寄生虫侵入所述细胞中至少约1倍。在一些实施方式中，所述细胞是红细胞。在一些实施方式中，所述疟原虫寄生虫选自以下：恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫和诺氏疟原虫。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体有效减少血液细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体在约48小时内减少血液细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体在约96小时内减少血液细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，施用所述抗CD147抗体在受试者中预防、改善或治疗疟疾。

本文还提供了一种在有此需要的受试者中预防、治疗或改善与CD147表达相关的病症的方法，其包括施用抗CD147抗体。

本文还提供了一种药物组合物，其包含有效量的抗CD147抗体。

本文还提供了一种细胞，其包含编码抗CD147抗体的序列。

本文提供了一种抗CD147抗体，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:23，其中所述CDR2区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:24-SEQ ID NO:31,其中所述CDR3区是选自以下的氨基酸序列：SEQID NO:32-SEQ ID NO:39，和其中所述抗CD147抗体在所述CDR1区、CDR区或CDR3区的至少一个中包含0至5个氨基酸修饰。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体包含0-3个氨基酸修饰。在一些实施方式中，所述CDR1区对应于SEQ ID NO:18或22，其中所述CDR2区对应于SEQ IDNO:26或30，和其中所述CDR3区对应于SEQ ID NO:34或38。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体是人源化的。

本文提供了一种治疗方法，其包括施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:23，其中所述CDR2区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:24-SEQ ID NO:31，其中所述CDR3区是选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO:32-SEQ ID NO:39，和其中所述抗CD147抗体在所述CDR1区、CDR区或CDR3区的至少一个中包含0至2个氨基酸修饰。在一些实施方式中，所述施用有效降低或消除炎性或自身免疫性疾病。在一些实施方式中，所述炎性或自身免疫性疾病选自以下：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。在一些实施方式中，所述施用有效降低或消除病毒对细胞的病毒侵入。在一些实施方式中，所述病毒选自以下：麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。在一些实施方式中，所述病毒是所述冠状病毒。在一些实施方式中，所述冠状病毒包括SARS-CoV-2。在一些实施方式中，所述施用有效降低或消除癌症的转移。在一些实施方式中，所述癌症选自以下：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方式中，所述施用有效降低或消除疟原虫侵入细胞。

本文提供了一种抗体-药物缀合物，其包含抗CD147抗体。在一些实施方式中，所述药物选自以下：抗癌药、抗疟疾药、抗病毒药和抗炎药。在一些实施方式中，所述药物包含所述抗病毒药，其中所述抗病毒药是抗SARS-CoV-2药物。在一些实施方式中，所述药物包含抗癌药，其中所述抗癌药包括免疫疗法。在一些实施方式中，所述免疫疗法选自以下：抗体、检查点抑制剂、细胞疗法、细胞因子、溶瘤病毒和疫苗。在一些实施方式中，所述ADC包含抗体。在一些实施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14。

在一些实施方式中，本公开提供了一种抗CD147抗体、抗体片段或其修饰，其结合CD147多肽。在一些实施方式中，本公开提供了一种抗CD147抗体或其片段，其包含具有至少一个CDR的氨基酸序列，所述CDR包含在SEQ ID NO:16-39中的任一个中。在一些实施方式中，所述抗体包含二至六个CDR，所述CDR包含在SEQ ID NO:16-39中的任一个中。在一些实施方式中，所述抗体包含所有CDR，所述CDR包含在SEQ ID NO:16-39中的任一个中。在一些实施方式中，所述抗体包含与SEQ ID NO:16-39的任一个具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO:16-39的任一个的氨基酸序列。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体是全长抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体、抗原结合区、重链、轻链、VhH、Vh、CDR、可变结构域、scFv、Fc、Fv、Fab、F(ab)2、IgG、还原的IgG(rIgG)、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、双体抗体、双特异性双体抗体、三特异性三体抗体、微型抗体、纳米抗体、IgNAR、V-NAR、HcIgG或其组合。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体是VhH。在一些实施方式中，所述CD147抗体包含在嵌合抗原受体(CAR)中。在一些实施方式中，所述CAR是由免疫细胞表达的。在一些实施方式中，所述免疫细胞是PBMC、淋巴细胞、T细胞或NK细胞。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体、抗体片段或修饰结合在细胞表面上表达的CD147多肽或其片段。在一些实施方式中，所述细胞是上皮细胞、内皮细胞或神经元细胞。在一些实施方式中，所述细胞是肿瘤细胞。在一些实施方式中，所述肿瘤细胞来自实体瘤。在一些实施方式中，所述肿瘤细胞来自血液系统癌症。在一些实施方式中，所述肿瘤细胞来自选自以下的癌症：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体、抗体片段或修饰抑制病毒与CD147的相互作用。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体预防或降低病毒与CD147结合。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体预防或降低病毒刺突蛋白与CD147的结合。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体降低或消除细胞的病毒侵入。在一些实施方式中，所述抗CD147抗体预防或降低病毒感染。在一些实施方式中，所述病毒选自以下：麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。在一些实施方式中，所述病毒是冠状病毒。在一些实施方式中，所述冠状病毒是SARS-CoV-2。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体、抗体片段或其修饰预防或降低肿瘤细胞增殖、转移、基质金属蛋白酶分泌、肿瘤基质降解、肿瘤细胞侵入和/或血管生成。

在一些实施方式中，所述抗CD147抗体、抗体片段或其修饰预防或降低炎症。在一些实施方式中，所述抗体治疗或改善炎性或自身免疫性病症。在一些实施方式中，所述炎症或自身免疫性疾病选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。

在一些实施方式中，本公开提供了一种在有此需要的受试者中预防、治疗或改善与CD147表达相关的病症的方法，其包括施用根据本文所述的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰。

在一些实施方式中，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文所述的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰。

在一些实施方式中，本公开提供了一种细胞，其包含编码根据本文所述的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的序列。

附图说明

图1显示了证明本公开的抗CD147抗体与CD147包被的板结合的ELISA。

图2显示了所检测的抗体均未结合鼠源(小鼠)mCD147。

图3显示了所检测的抗体与人CD147和鼠源CD147结合的比较。

图4显示了Ibx-77结合CD147的稳态模型。

图5显示了Ibx-77结合CD147的动力学模型。

图6显示了Ibx-77结合CD147的Kd/Ka动力学模型。

图7显示了Ibx-77结合CD147的稳态1:1拟合模型。

图8显示了HEK-293细胞的Ibx-77染色。

图9显示了HCC-1954细胞的Ibx-77染色。

图10显示了HeLa细胞的Ibx-77染色。

图11A-B显示了HCC-1954细胞的Ibx-11、Ibx-13和Ibx-77染色。

图12A-B显示了Jurkat细胞的HeLa细胞的Ibx-11、Ibx-13和Ibx-77染色。

图13显示了Jurkat细胞的Ibx-11染色。

图14A-B显示了Vero E6细胞的Ibx-11和Ibx-13染色。

图15A-B显示了Ibx-75(A)和Ibx-74(B)的感应图。

图16显示了Ibx-11和Ibx-13抗体-药物缀合物(ADC)有效杀死MiaPaCa-2癌细胞。

图17显示了Ibx系列处理的细胞和对照细胞之间聚集模式的差异。

图18显示了测量像素尺寸的成像分析：50μg/mL–25μg/mL Ibx系列抗体在24小时针对颗粒(聚集体)显示出更大的像素尺寸。

图19显示了在18小时和24小时计数的该Jurkat聚集测定的图形。

图20显示了在24小时，Ibx-77处理细胞的单细胞计数显著降低。

图21表明用Ibx-76或Ibx-77处理的细胞在试管形成测定中显示出对血管生成的抑制作用。

图22显示了体外施用Ibx-13(AB1)、MIF-2-5(AB2)或VhH-Fc(AB3)后在48小时和96小时的寄生虫血症百分比。

图23A-B显示了以1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL体外施用Ibx-13、MF22.3(AB2)和h378GL(AB3)后的寄生虫血症百分比。图23A显示了施用后48小时的寄生虫血症百分比；图23B显示了96小时后的寄生虫血症百分比。

图24显示了使用不同浓度Ibx-11、Ibx-13或对照抗体处理后的A375恶性黑色素瘤细胞活力。

图25显示了使用30nM Ibx-11、Ibx-13或对照抗体处理后的A375恶性黑色素瘤细胞活力比较。

图26显示了使用不同浓度Ibx-11、Ibx-13或对照抗体处理后的PC3前列腺癌细胞活力。

图27显示了使用30nM Ibx-11、Ibx-13或对照抗体处理后的PC3前列腺癌细胞活力比较。

具体实施方式

癌症中的CD147

CD147是免疫球蛋白超家族的一种高度糖基化的跨膜蛋白，其作为基质金属蛋白酶(MMP)的主要上游刺激因子。CD147和MMP的表达水平通常在炎症过程和肿瘤中增加，并与癌症进展相关。癌症干细胞以高细胞表面CD147表达为特征，产生更多的透明质酸，导致脂筏稳定，并增强MMP和ABC药物转运蛋白的表达、耐药性和存活。

在一些实施方式中，本文所述的抗CD147抗体或片段或其修饰可以用于治疗或预防癌症生长。在一些实施方式中，抗CD147抗体或片段或其修饰和修饰的形式(例如，抗体-药物缀合物ADC)治疗或预防血液系统癌症生长。在一些实施方式中，抗CD147抗体或片段或其修饰治疗或预防实体癌症生长。在一些实施方式中，抗CD147抗体或片段或其修饰治疗或预防血液系统癌症生长。在一些实施方式中，抗CD147抗体或片段或其修饰治疗或预防转移性癌症生长。在一些实施方式中，所述癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。

自身免疫性和炎性病症

抗CD147抗体、片段或其修饰可以用于治疗或减轻受试者中的炎症。在一些实施方式中，炎症与自身免疫性或炎性病症相关。在一些实施方式中，自身免疫性或炎性病症包括但不限于类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。

病毒感染

抗CD147抗体、片段或其修饰可以用于治疗或减轻受试者中的病毒感染和/或病毒载量。在一些实施方式中，抗CD147抗体、片段或其修饰可以用于预防、抑制或降低病毒侵入细胞。已知CD147对病毒侵入细胞具有重要作用。例如，CD147已知是麻疹并入侵入上皮细胞的功能性进入受体，Watanabe 2010。此外，在HIV感染期间，CD147分子可以通过与病毒相关的CyPA相互作用促进HIV-1病毒对宿主细胞的感染(Chenglong 2020)。在一些实施方式中，病毒感染是由以下病毒引起的，包括但不限于麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。

疟疾感染

抗CD147抗体、片段或其修饰可以用于治疗或减轻受试者中的疟疾症状。在一些实施方式中，抗CD147抗体、片段或其修饰可以用于预防、抑制或降低一个或多个疟原虫株侵入细胞。在一些实施方式中，细胞是红细胞。在一些实施方式中，疟原虫株选自恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫和诺氏疟原虫。在一些实施方式中，抗CD147抗体、片段或其修饰预防恶性疟原虫侵入细胞。在一些实施方式中，抗CD147抗体、片段或其修饰预防多种疟原虫株侵入细胞。在一些实施方式中，疟原虫是恶性疟原虫。在一些实施方式中，疟原虫是三日疟原虫。

在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰减少寄生虫血症。在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰减少血细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰在10分钟至120小时内减少血细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰在约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约15小时、约20小时、约24小时、约25小时、约30小时、约35小时、约36小时、约40小时、约45小时、约48小时、约50小时、约55小时、约60小时、约65小时、约70小时、约75小时、约80小时、约85小时、约90小时、约95小时、约96小时、约100小时、约105小时、约110小时、约115小时或约120小时内减少血细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰在约48小时内减少血细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段或修饰在约96小时内减少血细胞中的寄生虫血症。在一些实施方式中，血细胞是红细胞。

SARS-CoV-2

截至2022年1月，SARS-CoV-2已感染超过2.93亿人(在美国超过5500万人)，在全球夺走了540多万人的生命(在美国超过821,408人)，并继续以惊人的速度传播，没有任何减缓的迹象。导致SARS-CoV-2具有高毒力和致病性的因素之一是其能够感染多个组织，导致严重病例中的器官衰竭和死亡。与其他包膜病毒类似，SARS-CoV-2利用宿主细胞受体入侵宿主细胞，最终导致组织坏死、器官损伤，并最终死亡。CD147是一种促进病毒进入的宿主细胞受体。

血管紧张素转换酶2(ACE2)通常被认为是SARS-CoV-2感染的主要受体，但据报道，其他分子对该病毒的细胞嗜性有显著贡献。CD147最近因其通过与病毒的刺突蛋白识别结合域(RBD)直接相互作用在SARS-CoV-2细胞侵入中的作用而受到关注，在一项开放标签临床试验中观察到了潜在的获益，该试验表明，在接受抗CD147抗体治疗的患者中COVID-19症状的早期缓解。

抗CD147抗体

在一些实施方式中，本公开提供了结合CD147的新型抗体及其在预防或改善病况或疾病中的用途。在一些实施方式中，CD147在细胞表面上表达。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体能够直接或间接发挥其作用。在一些实施方式中，抗CD147抗体结合CD147从而直接减少或消除任何其他物质(例如，病毒或癌细胞)对CD147的结合。在一些实施方式中，抗CD147抗体可以在空间上阻碍CD147受体的结合，从而间接发挥其作用。在一些实施方式中，当作为抗体-药物缀合物的一部分复合时，抗CD147能够递送阻断剂，从而间接减少或消除与CD147受体的结合。任何抗CD147抗体可以是全人的、人源化的、小鼠的、大鼠的、家兔的及其任何组合。在一些实施方式中，抗CD147抗体是人源化的。在一些实施方式中，抗CD147抗体是全人的。

在一些实施方式中，抗CD147抗体结合人CD147多肽或其亚型或片段。在一些实施方式中，人CD147是一种亚型。在一些实施方式中，CD147亚型是具有两个免疫球蛋白结构域的basigin或basigin-2。在一些实施方式中，CD147亚型是具有三个免疫球蛋白结构域的basigin-1。在一些实施方式中，人CD147多肽或其片段是包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽。在一些实施方式中，人CD147多肽或其片段是与SEQ ID NO:1具有至少约70％序列同一性的多肽。在一些实施方式中，人CD147多肽或其片段是与SEQ ID NO:1具有至少约70％、约71％、约72％、约73％、约74％、约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％、约99.2％、约99.3％、约99.4％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或约99.9％序列同一性的多肽。在一些实施方式中，CD147多肽或其亚型或片段在细胞表面上表达。在一些实施方式中，CD147多肽或其亚型或片段的参与结合部分的序列没有改变。在一些实施方式中，CD147多肽或其亚型或片段的参与结合部分的序列改变。

在一些实施方式中，人CD147多肽或片段是截短的多肽，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方式中，多肽是在N末端处截短的。在一些实施方式中，多肽是在C末端处截短的。在一些实施方式中，多肽是在N末端和C末端处截短的。在一些实施方式中，与SEQ ID NO:1的多肽相比，多肽被截短至多约20个氨基酸。在一些实施方式中，与SEQ IDNO:1的多肽相比，多肽截短约20个、约19个、约18个、约17个、约16个、约15个、约14个、约13个、约12个、约11个、约10个、约9个、约8个、约7个、约6个、约5个、约4个、约3个、约2个或约1个氨基酸。

在一些实施方式中，抗CD147抗体结合啮齿动物CD147多肽或其片段。在一些实施方式中，啮齿动物CD147多肽或其片段是大鼠CD147。在一些实施方式中，啮齿动物CD147多肽或其片段是小鼠CD147。在一些实施方式中，小鼠CD147多肽是包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽。在一些实施方式中，人CD147多肽或其片段是与SEQ ID NO:2具有至少约70％序列同一性的多肽。在一些实施方式中，人CD147多肽或其片段是与SEQ ID NO:2具有至少约70％、约71％、约72％、约73％、约74％、约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％、约99.2％、约99.3％、约99.4％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或约99.9％序列同一性的多肽。在一些实施方式中，参与结合CD147的多肽部分的序列没有改变。在一些实施方式中，参与结合CD147的多肽部分的序列改变。

在一些实施方式中，小鼠CD147多肽或片段是截短的多肽，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方式中，多肽是在N末端处截短的。在一些实施方式中，多肽是在C末端处截短的。在一些实施方式中，多肽是在N末端和C末端处截短的。在一些实施方式中，与SEQ ID NO:2的多肽相比，多肽被截短至多约20个氨基酸。在一些实施方式中，与SEQ IDNO:2的多肽相比，多肽截短约20个、约19个、约18个、约17个、约16个、约15个、约14个、约13个、约12个、约11个、约10个、约9个、约8个、约7个、约6个、约5个、约4个、约3个、约2个或约1个氨基酸。

在一些实施方式中，CD147在内皮细胞、上皮细胞、神经元细胞、免疫细胞、血细胞、成纤维细胞、T细胞、外周血单核细胞(PBMC)、单核细胞(monocyte cell/mononuclearcell)上表达。在一些实施方式中，CD147在细胞表面上异常表达。在一些实施方式中，CD147在细胞表面上过表达。在一些实施方式中，CD147由肿瘤间质的细胞表达。

在一些实施方式中，结合CD147多肽或其片段的抗体是全长抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体、抗原结合区、重链、轻链、VhH、Vh、Vl、CDR、可变结构域、scFv、Fc、Fv、Fab、F(ab)2、IgG、还原的IgG(rIgG)、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、双体抗体、双特异性双体抗体、三特异性三体抗体、微型抗体、纳米抗体、IgNAR、V-NAR、HcIgG或其组合。

在一些实施方式中，任何所述抗CD147抗体可以包含一个或多个接头、标签或者接头和标签两者。例如，任何抗CD147抗体融合构建体可以通过一个或多个接头连接，参见例如表1中的融合构建体。在一些实施方式中，接头是可切割接头。在一些实施方式中，接头是不可切割的。本公开的接头可以是蛋白酶敏感的、pH敏感的和/或谷胱甘肽敏感的。可切割接头可以用于在靶位点处(例如，在肿瘤处)更有效地释放药物。示例性的可切割接头包括但不限于：腙、SPDB、SPP、vc、va及其组合。示例性的不可切割接头包括：mcc和mc。在一些实施方式中，可以将柔性接头用于融合构建体，例如(GGGGS)

在一些实施方式中，结合CD147多肽或其片段的抗体包括VhH抗体。在一些实施方式中，结合CD147多肽或其片段的抗体是VhH抗体。在一些实施方式中，VhH抗体选自SEQ IDNO:4-15的任一个。在一些实施方式中，VhH抗体与SEQ ID NO:4-15的任一序列具有至少约70％序列同一性。在一些实施方式中，VhH抗体与SEQ ID NO:4-15的任一序列具有至少约70％、约71％、约72％、约73％、约74％、约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％、约99.2％、约99.3％、约99.4％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或约99.9％序列同一性。

在一些实施方式中，抗CD147抗体包含存在SEQ ID NO:4-15中任一个的一个或多个中存在的一个或多个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含存在SEQ ID NO:4-15中任一个的一个或多个中存在的一个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含在SEQ IDNO:4-15中任一个的一个或多个中存在的两个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含存在SEQ ID NO:4-15中任一个的不同序列中存在的两个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含在SEQ ID NO:4-15中任一个的一个或多个中存在的三个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含存在SEQ ID NO:4-15中任一个的一个或多个不同序列中存在的三个CDR。

表1：示例性抗体构建体以及包含其的融合蛋白

在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个中存在的一个或多个CDR至少70％相同的CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个的一个或多个中存在的一个或多个CDR至少约70％相同的一个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个的一个或多个中存在的一个或多个CDR至少约70％相同的两个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个的不同序列中存在的一个或多个CDR至少约70％相同的两个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个的一个或多个中存在的一个或多个CDR至少约70％相同的三个CDR。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含与SEQ ID NO:16-39中任一个的一个或多个不同序列中存在的一个或多个CDR至少约70％相同的三个CDR。在一些实施方式中，一个或多个CDR与SEQ ID NO:16-39中任一个的一个或多个中存在的一个或多个CDR至少约60％、约65％、约70％、约75％,80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％、约99.2％、约99.3％、约99.4％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或约99.9％相同。

在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1，其包含与选自以下的序列具有至少约60％同一性的序列：SEQ ID NO:16-23。在一些实施方式中，，抗CD147抗体包含CDR2，其包含与选自以下的序列具有至少约60％同一性的序列：SEQ ID NO:24-31。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR3，其包含与选自以下的序列具有至少约60％同一性的序列：SEQ IDNO:32-39。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ ID NO:16、24和32。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:17、25和33。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:18、26和34。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:19、27和35。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:20、28和36。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:21、29和37。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:22、30和38。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，其分别包含SEQ IDNO:23、31和39。在一些实施方式中，抗CD147抗体包含串联的三个CDR1、CDR2和/或CDR3序列。在实施方式中，抗CD147抗体包含CDR1、CDR2或CDR3，其重复两次或三次，例如在本文所述的任何融合构建体中。在一些实施方式中，融合构建体可以包含与一个或多个接头串联的本文所述的CDR序列中的任何一个。

表2：示例性抗CD147构建体的CDR序列

在一些实施方式中，本文所述的抗CD147抗体可以包含修饰。在一些实施方式中，修饰包含氨基酸取代、缺失和/或插入。关于修饰，其可以包括任何修饰，例如在序列的任何位置的氨基酸取代、缺失和/或插入。因此，修饰可以包括顺序和/或长度上的修饰。在一些实施方式中，序列包含CDR区。因此，可以对CDR进行修饰，以使得长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34个以及至多约35个氨基酸残基范围内改变。类似地，CDR的任何区域都可以被修饰以包含在如此前所述的长度范围内的残基取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，修饰可以包含约0-2个残基修饰。在一些实施方式中，修饰可以在CDR1、CDR2和/或CDR3的任一个处包含约1-3、2-4、0-4或1-5个残基修饰。在一些实施方式中，SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:39的任一个可以具有一个或多个本文所述的修饰。

在一些实施方式中，抗CD147抗体或其片段(例如，VhH、CDR)是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。CAR是重组受体，其由胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号转导结构域组成。在一些实施方式中，胞内信号转导结构域可以包含来自免疫细胞的信号转导结构域。在一些实施方式中，免疫细胞是单核细胞。在一些实施方式中，单核细胞是PBMC、PBL、淋巴细胞、B细胞、T细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞或抗原呈递细胞(APC)。

在一些实施方式中，CAR的结合区可以包含本文公开的CDR序列。结合区通常与跨膜区融合，例如来自CD8的跨膜区也与胞内信号转导结构域融合。适宜的胞内信号转导结构域可以包含CD3ζ(CD3ζ)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、通用FcRγ(FCER1G)、FcRβ(FcεR1b)、CD79a、CD79b、FcγRIIa、DAP10和DAP12分子或其组合的胞内信号区序列。在一些实施方式中，胞内信号结构域包含CD3ζ分子的信号转导结构域。在一些实施方式中，胞内信号结构域还包含共刺激信号结构域，其可以选自以下共刺激信号分子：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、CD2、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、PD-1、ICOS、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、CD7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(触觉型)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMFI、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、结合CD83的特异性配体或其任何组合。在一些实施方式中，共刺激信号分子是4-1BB和/或CD28。在一些实施方式中，在CAR中包含0-2个共刺激信号转导分子。

如本文所用，“结合亲和力”通常指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间非共价相互作用的总和强度。如本文所用，除非另有说明，否则“结合亲和力”是指内在的结合亲和力，其反映了结合对成员(例如，抗体和抗原)之间1:1的相互作用。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用离解常数(KD)来表示。亲和力可以以本领域公知的多种方式测量和/或表达，包括但不限于平衡离解常数(KD)和平衡结合常数(KA)。KD由k

在一些实施方式中，本公开的抗体或片段结合细胞表面上的CD147。在一些实施方式中，抗体结合癌细胞表面上的CD147。在一些实施方式中，抗体结合尚未转移的癌症细胞表面上的CD147。在一些实施方式中，抗体结合转移性癌症细胞表面上的CD147。

在一些实施方式中，本公开的抗体或其片段结合病毒感染细胞表面上的CD147。在一些实施方式中，抗体结合尚未被病毒感染的细胞表面上的CD147。在一些实施方式中，抗体与细胞表面上CD147的结合预防病毒感染。在一些实施方式中，抗体干扰病毒与细胞表面上的CD147的相互作用。在一些实施方式中，抗体干扰刺突蛋白与CD147的相互作用。在一些实施方式中，刺突蛋白是冠状病毒刺突蛋白。在一些实施方式中，刺突蛋白是SARS-CoV2刺突蛋白。在一些实施方式中，抗体干扰病毒/CD147相互作用，并且抑制病毒在其他细胞中的侵入和/或传播。

在一些实施方式中，抗体、抗体片段或其修饰完全阻断病毒蛋白与CD147的相互作用。在一些实施方式中，与未处理的细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰减少病毒蛋白与CD147的相互作用。在一些实施方式中，与未处理的细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒蛋白与CD147的相互作用减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与未处理的细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒蛋白与CD147的相互作用减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与未处理的细胞相比，在施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时抗体、抗体片段或其修饰减少病毒蛋白与CD147的相互作用。在一些实施方式中，与未处理的细胞相比，在施用后约10分钟至约1天抗体、抗体片段或其修饰减少病毒蛋白与CD147的相互作用。

在一些实施方式中，抗体、抗体片段或其修饰完全阻止病毒侵入细胞。在一些实施方式中，与未处理细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰减少病毒侵入细胞。在一些实施方式中，与未处理细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒侵入细胞减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与未处理细胞相比，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒侵入细胞减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与未处理细胞相比，施用后约10分钟至约1天抗体减少并入侵入细胞。在一些实施方式中，与未处理细胞相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时抗体减少并入侵入细胞。在一些实施方式中，细胞是上皮细胞。在一些实施方式中，通过本文所述的病毒感染性测定确定的，抗CD147抗体降低或消除病毒侵入细胞至少约1倍、50倍、100倍、150倍、200倍、250倍、300倍、350倍、400倍、450倍、500倍、550倍、600倍、650倍、700倍、750倍、800倍、850倍、900倍、950倍、1000倍、1050倍、1100倍、1150倍、1200倍、1250倍、1300倍、1350倍、1400倍、1450倍、1500倍、1550倍、1600倍、1650倍、1700倍、1750倍、1800倍、1850倍、1900倍、1950倍或至多约2000倍。

可以使用体外测定确定病毒侵入或感染。在一些实施方式中，可以通过qRT-PCR计数病毒RNA基因组并测量组织培养物中感染单位的数量来量化病毒载量。第二种方法包括用受试者样品的稀释液孵育易感哺乳动物细胞，以确定杀死50％细胞所需的样品量。该值用于以“50％组织培养物感染剂量”或TCID50为单位反向计算样品中的感染滴度，例如，通过Reed和Muench方法。

在一些实施方式中，抗体、抗体片段或其修饰完全防止细胞间的病毒传播。在一些实施方式中，与未处理的受试者或细胞培养物相比，抗体、、抗体片段或其修饰减少了病毒在细胞之间的传播。在一些实施方式中，与未处理的受试者或细胞培养物相比，抗体、抗体片段或其修饰使得细胞间的病毒传播减少了约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与未处理的受试者或细胞培养物相比，抗体、抗体片段或其修饰使得细胞间的病毒传播减少了约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与未处理的受试者或细胞培养物相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒在细胞间的传播减少。在一些实施方式中，与未处理的受试者或细胞培养物相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰使得病毒在细胞间的传播减少。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少了受试者中的炎症。在一些实施方式中，抗体、抗体片段或其修饰的施用与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的炎症水平相比减少了炎症。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的炎症水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得炎症减少了约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的炎症水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得炎症减少了约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的炎症水平相比，施用后约10分组至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少了炎症。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的炎症水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时抗体、抗体片段或其修饰的施用减少了炎症。

在一些实施方式中，炎症导致炎性肺损伤。在炎性肺损伤的减少可以通过本领域公知的任何手段来测量。例如，炎性肺损伤和/或其症状可以通过评估患者的氧气水平、呼出的一氧化氮、呼吸频率或肺活量测量的变化来测量。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的蛋白酶活性。在一些实施方式中，蛋白酶是基质金属蛋白酶。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少蛋白酶活性。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得蛋白酶活性减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得蛋白酶活性减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少蛋白酶活性。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少蛋白酶活性。在一些实施方式中，蛋白酶是由表达CD147的细胞产生和/或分泌的。在一些实施方式中，蛋白酶是由癌细胞产生和/或分泌的。在一些实施方式中，蛋白酶是由表达CD147的癌细胞产生和/或分泌的。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的基质降解。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少基质降解。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得基质降解减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得基质降解减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少基质降解。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少基质降解。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的细胞侵入。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体或抗体片段或修饰的施用减少细胞侵入。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰使细胞侵入减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰使细胞侵入减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少细胞侵入。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少细胞侵入。在一些实施方式中，细胞是肿瘤细胞。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的肿瘤细胞转移。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞转移。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得肿瘤细胞转移减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得肿瘤细胞转移减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞转移。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞转移。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的肿瘤细胞活力。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞活力。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得肿瘤细胞活力减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得肿瘤细胞活力减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞活力。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少肿瘤细胞活力。

在一些实施方式中，本公开的抗体、抗体片段或其修饰的施用减少受试者中的血管生成。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少血管生成。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得血管生成减少约99.9％至约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，抗体、抗体片段或其修饰的施用使得血管生成减少约99.9％、约99.8％、约99.7％、约99.6％、约99.5％、约99.4％、约99.3％、约99.2％、约99.1％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％、约82％、约81％、约80％、约79％、约78％、约77％、约76％、约75％、约74％、约73％、约72％、约71％、约70％、约69％、约68％、约67％、约66％、约65％、约64％、约63％、约62％、约61％、约60％、约59％、约58％、约57％、约56％、约55％、约54％、约53％、约52％、约51％、约50％、约49％、约48％、约47％、约46％、约45％、约44％、约43％、约42％、约41％、约40％、约39％、约38％、约37％、约36％、约35％、约34％、约33％、约32％、约31％、约30％、约29％、约28％、约27％、约26％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约10分钟至约1天，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少血管生成。在一些实施方式中，与施用抗体之前相似的未治疗受试者或相同受试者的水平相比，施用后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，抗体、抗体片段或其修饰的施用减少血管生成。在一些实施方式中，受试者患有癌症。在一些实施方式中，血管生成是肿瘤特异性血管生成。

抗体-药物缀合物(ADC)

在一些实施方式中，所提供的任何抗CD147抗体都可以作为ADC的一部分与药物融合。在一些实施方式中，抗体包含表1或表2中所述的任何前述构建体。抗体-药物偶联物(ADC)可以通过将小分子药物或另一种治疗剂连接到抗体上，其使用永久或不稳定的接头来构建。抗体靶向通常存在于靶细胞上的特异性抗原。一旦其与细胞结合，就会触发抗体与药物的内化。这为患病细胞或靶细胞提供了具有非常高特异性的药物，最大限度地提高了其疗效，并最大限度地减少了系统暴露，同时也降低了相关的副作用风险。在一些实施方式中，使用接头将抗体与药物连接。接头通常是稳定的，以避免药物在脱靶组织周围释放，并且接头在与抗体结合时可以将缀合物保持在无活性、无毒的状态。在一些实施方式中，接头应具有在ADC内化到靶细胞中时释放药物的性质。在一些实施方式中，此前描述的任何接头都可以用于ADC构建体中。在一些实施方式中，作为ADC一部分的药物选自以下：抗癌药、抗疟疾药、抗病毒药、抗炎药和毒素。

在一些实施方式中，药物是抗病毒药。在一些实施方式中，抗病毒药是抗SARS-CoV-2药物。在一些实施方式中，抗SARS-CoV-2药物包括单克隆抗体，其包括但不限于：巴尼韦单抗、埃特司韦单抗、卡斯瑞韦单抗、依米得韦单抗和索托韦单抗。在一些实施方式中，抗SARS-CoV-2药物不是抗体。在一些实施方式中，药物是抗癌药。在一些实施方式中，抗癌药包括免疫疗法。在一些实施方式中，免疫疗法选自以下：抗体、检查点抑制剂、细胞疗法、细胞因子、溶瘤病毒和疫苗。在一些实施方式中，抗癌药包括细胞毒剂。在一些实施方式中，免疫疗法包括抗体。所涉及的抗体包括吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、抗B4-bR、地尼白介素及其组合。在一些实施方式中，药物包括毒素。适宜的毒素包括假单胞菌外毒素和/或白喉毒素。在一些实施方式中，ADC包含SEQ ID NO:14的抗CD147抗体。在一些实施方式中，ADC包含SEQID NO:12的抗CD147抗体。在一些实施方式中，药物包括生长因子。示例性生长因子包括但不限于：IL-2、IL-13、TGFα、GM-CSF及其组合。

治疗方法

在一些实施方式中，本公开提供了治疗、改善或预防与CD147表达相关的病症和/或其症状的方法。

在一些实施方式中，本公开提供了治疗、改善或预防癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用本公开的抗CD147抗体、抗体片段或修饰的药物组合物。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的施用预防或延迟受试者中的肿瘤生长或癌细胞增殖。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的施用预防或延迟受试者中的癌细胞进展。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的施用预防或延迟受试者中的癌细胞转移。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的施用预防或延迟受试者中的血管生成。在一些实施方式中，本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰的施用预防或延迟受试者中的细胞侵入。在一些实施方式中，癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。

在一些实施方式中，本公开提供了治疗、改善或预防炎性或自身免疫性病症的方法，其包括向有此需要的受试者施用本公开的抗CD147抗体、抗体片段或修饰的药物组合物。在一些实施方式中，自身免疫性或炎性病症包括但不限于类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。

在一些实施方式中，本公开提供了一种治疗或预防病毒感染症状和/或相关病况的方法，其包括向有此需要的受试者施用包含本公开的抗CD147抗体、抗体片段或修饰的药物组合物。在一些实施方式中，病毒感染是由病毒引起的，所述病毒包括但不限于麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、SARS-CoV-2、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。在一些实施方式中，病毒感染是冠状病毒感染。在一些实施方式中，冠状病毒感染是SARS-CoV-2感染。任何SARS-CoV-2株都可以用本公开的抗体治疗，包括但不限于：α、β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν、ξ、o、π、ρ、σ、τ、υ、

在一些实施方式中，症状和/或相关病况是呼吸窘迫和/或衰竭。在一些实施方式中，呼吸衰竭是根据需要以下至少一项的资源利用来定义的：气管插管和机械通气，高流量鼻插管输送氧气；加热、湿润，通过增强鼻插管以>20L/分钟的流速输送氧气，输送氧气的分数>0.5，无创正压通气，体外膜肺氧合(ECMO)，和/或呼吸衰竭的临床诊断(例如，对前述疗法之一的临床需求，但前述疗法在资源限制的情况下无法实施)。

药物组合物和施用

本公开提供了药物组合物，其包含本公开的抗CD147抗体、抗体片段或其修饰，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。例如，此类赋形剂包括盐，和可起到稳定氢键作用的其他赋形剂。可以使用本领域公知的任何适当赋形剂。示例性赋形剂包括但不限于氨基酸，如组氨酸、甘氨酸或精氨酸；甘油；糖，如蔗糖；表面活性剂，如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80；柠檬酸；柠檬酸钠；抗氧化剂；盐，包括碱土金属盐，如钠、钾和钙；反离子，如氯化物和磷酸盐；防腐剂；糖醇(例如，甘露醇、山梨醇)；以及缓冲剂。示例性盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾。在某些实施方式中，本文公开的药物组合物具有增强的疗效、生物利用度、治疗半衰期、持久性、降解抗性等。

药物制剂可以冷冻、冷藏或在室温下储存。储存条件可以低于冰点，如低于约-10℃，或低于约-20℃，或者低于约-40℃，甚至低于约-70℃。在一些实施方式中，药物制成储存在2°-8℃。例如，药物制剂可以与血液等渗，或者具有模拟生理条件的离子强度。例如，制剂可以具有至少25mM氯化钠、或至少30mM氯化钠，或至少40mM氯化钠、或至少50mM氯化钠、或至少75mM氯化钠、或至少100mM氯化钠或至少150mM氯化钠的离子强度。在某些实施方式中，制剂具有相当于0.9％盐水(154mM氯化钠)的离子强度。

在一些实施方式中，药物制剂是在生理pH下配制的。在一些实施方式中，药物制剂是在约5.5至约8.5的pH范围内配制的。在一些实施方式中，药物制剂是在约6.0至约8.0的pH范围内配制的。在一些实施方式中，药物制剂是在约6.5至约7.5的pH范围内配制的。在一些实施方式中，药物制剂是在pH 7.5下配制的。在一些实施方式中，与在较高pH下的制剂相比，具有较低pH的药物制剂显示出改进的制剂稳定性。在一些实施方式中，与在较低pH下的制剂相比，具有较高pH的药物制剂显示出改进的制剂稳定性。

在一些实施方式中，药物制剂在储存条件下是稳定的。可以使用本领域中的任何适当的手段来测量稳定性。通常，稳定的制剂是降解产物或杂质增加不到5％的制剂。在一些实施方式中，制剂在储存条件下稳定至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约1年、或至少约2年或更长时间。在一些实施方式中，制剂在25℃下稳定至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月或至少约1年或更长时间。

在另一个实施方式中，本公开提供了一种用于递送本文公开的药物制剂的方法。所述方法包括向有此需要的受试者施用本文所述的药物制剂，其中药物制剂每月施用约1次至约31次。在一些实施方式中，药物制剂每月施用约1次、约2次、约3次和/或约4次。在一些实施方式中，药物组合物每日施用。在一些实施方式中，药物每周施用。在一些实施方式中，药物组合物每周施用。在一些实施方式中，药物组合物每周施用一至三次。在一些实施方式中，药物组合物每两周施用一次。在一些实施方式中，药物组合物每月施用一至两次。在一些实施方式中，药物组合物约每月施用1次。在一些实施方式中，药物组合物约每2个月施用一次，约每3个月施用一次、约每4个月施用一次、约每5个月施用一次和/或约每6个月施用一次。

在一些实施方式中，施用本文公开的药物组合物，直到正在治疗的病症的至少一种或多种症状减轻和/或改善。在一些实施方式中，施用本文公开的药物组合物，直到至少一种或多种症状得到改善。在一些实施方式中，施用本文公开的药物组合物，直到至少一种或多种症状延迟。在一些实施方式中，施用本文公开的药物组合物，直到病症治愈。

在一些实施方式中，本文公开的药物组合物在患者开始表现出一种或多种症状之前施用。在一些实施方式中，本文公开的药物组合物在症状出现时施用。

可以通过任何公知的途径施用药物组合物，比如例如，口服、静脉内、肌内、鼻内、皮下、胃肠外、通过吸入或皮内。在一些实施方式中，制剂通常用于皮下施用。在一些实施方式中，制剂通常用于静脉内施用。

虽然本领域技术人员可以在每种情况下确定所需的剂量，但用于实现治疗获益的药物组合物的适宜剂量可以例如在受体每公斤体重约1微克(μg)至约100毫克(mg)的范围内，优选在每公斤体重约10μg至约50mg的范围内，最优选在每公斤体重约100μg至约10mg的范围。在一些实施方式中，药物组合物以低剂量施用。在一些实施方式中，药物组合物以每公斤体重0.1mg至每公斤体重约9mg之间的剂量施用。在一些实施方式中，药物组合物以约0.05mg每公斤体重、约0.1mg每公斤体重、约0.2mg每公斤体重、约0.4mg每公斤体重、约0.5mg每公斤体重、约0.8mg每公斤体重、约1mg每公斤体重、约1.2mg每公斤体重、约3mg每公斤体重和/或约9mg每公斤体重施用。所需剂量可以每周施用。

用于实现治疗获益的药物组合物的适宜剂量可以例如在受体每公斤体重约1微克(μg)至约10毫克(mg)的范围内，优选在每公斤体重约10μg至约5mg的范围内、最优选在每公斤体重约100μg至约2mg的范围。在一些实施方式中，药物组合物以低剂量施用。在一些实施方式中，药物组合物以每公斤体重0.1mg至每公斤体重约9mg之间的剂量施用。在一些实施方式中，药物组合物以约0.05mg每公斤体重、约0.1mg每公斤体重、约0.2mg每公斤体重、约0.4mg每公斤体重、约0.5mg每公斤体重、约0.8mg每公斤体重、约1mg每公斤体重、约1.2mg每公斤体重、约2mg每公斤体重、约3mg每公斤体重和/或约9mg每公斤体重施用。所需剂量可以以一个剂量，或者以适当间隔施用的两个或更多个子剂量的形式呈现。这些子剂量可以以单位剂型施用，例如，每单位剂型含有约10μg至约1000mg，优选约50μg至500mg，最优选约50μg至250mg活性成分。或者，如果受体的情况需要，则可以以连续输注形式施用所述剂量。

在一些实施方式中，药物组合物以固定剂量施用，而与患者的体重无关，剂量为约1mg至约1g或更高。在一些实施方式中，药物组合物以约1.0mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约3.0mg、约4.0mg、约5.0mg、约6.0mg、约7.0mg、约8.0mg、约9.0mg、约10.0mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1g或更高的剂量施用。在一些实施方式中，药物组合物以约10mg、40mg或100mg的剂量施用。

药物组合物可以施用约一天至约一年之间或更长时间。在一些实施方式中，药物组合物施用一天、两天、三天、四天、五天、六天、七天、两周、三周、四周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月或更长时间。

在某些实施方式中，受试者是人，而在其他实施方式中，可以是非人哺乳动物，如家养宠物(例如，犬或猫)，或牲畜或农场动物(例如，马、奶牛、绵羊或猪)。

患者群体

任何合适的受试者都可以施用本公开的药物组合物。在一些实施方式中，受试者处于病毒感染、发展为癌症或者发展为自身免疫性或炎性病症的风险中。在一些实施方式中，患者处于发展为本文所述病症的有害或危及生命的影响的风险中。在一些实施方式中，受试者正在经历本文所述病症的有害或危及生命的影响。

在一些实施方式中，受试者感染或被认为感染了SARS-CoV-2。在一些实施方式中，受试者具有COVID-19、ARDS，和/或正在经历与COVID-19或ARDS相关的症状。在一些实施方式中，受试者住院治疗。在一些实施方式中，患者是COVID-19、ARDS轻度病例，和/或正在经历与COVID-19或ARDS相关的轻度症状。在一些实施方式中，受试者是COVID-19、ARDS中度病例，和/或正在经历与COVID-19或ARDS相关的中度症状。在一些实施方式中，受试者是COVID-19、ARDS重度病例，和/或正在经历与COVID-19相关的重度症状(例如，快速临床恶化、ARDS和/或死亡)。在一些实施方式中，患者需要辅助呼吸。在一些实施方式中，患者正在接受补氧。在一些实施方式中，患者通过面罩或带有尖头的鼻插管接受补氧。在一些实施方式中，患者需要呼吸机才能呼吸。在一些实施方式中，患者显示出低氧饱和度水平。在一些实施方式中，患者表现出增加的呼吸速率(例如，大于24次呼吸/分钟)。在一些实施方式中，患者伴有发烧(例如，温度高于100.4°F或38℃)。在一些实施方式中，患者有发展为更严重的COVID-19、ARDS或其症状的风险，并且在症状恶化之前施用本公开的药物组合物。

在一些实施方式中，通过以下确定患者患有轻度COVID-19：1)通过标准RT-PCRCD或等效物的阳性检测；2)COVID-19轻症症状，可能包括发热、咳嗽、喉咙痛、不适、头痛、肌肉痛、胃肠道症状、无呼吸急促或呼吸困难；和/或3)没有指示中度、重度或危重COVID-19的临床体征。

在一些实施方式中，通过以下确定患者患有中度COVID-19：1)通过标准RT-PCRCD或等效物的阳性检测；2)COVID-19中度疾病症状，可能包括轻度疾病或呼吸急促的任何症状；3)提示患有COVID-19的中度疾病的临床体征，如呼吸频率>每分钟20次呼吸，海平面室内空气中的血氧饱和度(SpO

在一些实施方式中，通过以下确定患者患有重度COVID-19：1)通过标准RT-PCRCD或等效物的阳性检测；2)提示COVID-19重度全身性疾病症状，可能包括中度疾病、休息时呼吸急促或呼吸窘迫的任何症状；3)表明COVID-19严重全身性疾病的临床体征，如呼吸频率>每分钟30，心率>每分钟125，海平面室内空气中SpO

在一些实施方式中，通过以下确定患者患有重度COVID-19：1)通过标准RT-PCRCD或等效物的阳性检测；2)由以下至少一种定义的危重疾病的证据：a)基于资源利用定义的呼吸衰竭，需要以下至少一项：气管插管和机械通气，高流量鼻插管输送氧气；加热、湿润，通过增强鼻插管以>20L/分钟的流速输送氧气，输送氧气的分数>0.5，无创正压通气，体外膜肺氧合(ECMO)，和/或呼吸衰竭的临床诊断(例如，对前述疗法之一的临床需求，但前述疗法在资源限制的情况下无法实施)；b)休克(例如，定义为收缩压<90mmHg，或舒张压<60mmHg，或者需要血管升压药)；和/或c)多器官功能障碍/衰竭。

在一些实施方式中，患者是婴儿(例如，包括0至2岁)。在一些实施方式中，患者是儿科患者(例如，包括2至18岁)。在一些实施方式中，患者的年龄在18至100岁之间。在一些实施方式中，患者的年龄在18至85岁之间。在一些实施方式中，患者的年龄在50至100岁之间。在一些实施方式中，患者的年龄大于65岁。在一些实施方式中，患者是60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100岁或以上。在一些实施方式中，超过50岁的患者被认为是发展成严重疾病(例如，COVID-19或ARDS)的高风险。一些实施方式中，超过65岁的患者被认为是发展成严重疾病(例如，COVID-19或ARDS)的高风险。

在一些实施方式中，具有一种或多种合并症的患者被认为是发展成严重疾病(例如，COVID-19或ARDS)的高风险。在一些实施方式中，合并症包括但不限于肥胖、高血压、糖尿病、自身免疫性病症(例如，类风湿关节炎)、心脏病、心力衰竭、动脉粥样硬化、癌症(例如，肺癌)、暴露于肺部损伤剂、肝病、酗酒、其他肺部感染和慢性肾脏疾病。在一些实施方式中，处于危险中的患者表现出心脏损伤或功能障碍的标志物升高(例如，hsTnI、NT-proBNP)。在一些实施方式中，种族是患者被认为患有严重疾病(例如，COVID-19或ARDS)的高风险因素。在一些实施方式中，社会经济地位是患者被认为患有严重疾病(例如，COVID-19或ARDS)的高风险因素。

在一些实施方式中，在与本公开的药物组合物一起施用的同时，患者继续接受任何合并症的标准护理。

联合疗法

本文公开的药物组合物可以与用于治疗、预防、延迟或改善癌症、病毒感染、炎症、自身免疫性病症、炎性肺损伤、COVID-19和/或ARDS的各种疗法一起施用。在一些实施方式中，药物组合物与标准护理药物同时施用。一种或多种治疗剂可以是对有此需要的受试者发挥治疗作用的任何化合物、分子或物质。

在一些实施方式中，本文公开的药物组合物与治疗剂一起施用，所述治疗剂包括但不限于抗病毒剂、抗疟疾剂、上皮细胞保护剂、去纤苷、恢复期血浆、氯喹、羟氯喹、瑞德西韦、得斯芬、法匹拉韦、皮质类固醇、克拉夫定、抗炎剂、抗氧化剂、达格列净、IFX-1、鲁索替尼、巴瑞替尼、干扰素β1a、阿奇霉素、托珠单抗、阿卡替尼、阿比朵尔、环索奈德、沙利鲁单抗、抗白介素剂和替米沙坦。

在一些实施方式中，受试者此前已接受过抗SARS-CoV-2疗法或COVID-19疗法的治疗或正在接受联合疗法。适宜疗法包括：单克隆抗体(例如，巴尼韦单抗、恩适得、索托韦单抗、Regen-Cov和埃特司韦单抗)、瑞德西韦、机械通风、氧疗法及其组合。在一些实施方式中，有此需要的受试者使用抗SARS-CoV-2疗法或COVID-19疗法例如本文提供的那些适宜疗法是难以控制的。在一些实施方式中，有此需要的受试者对于使用本文公开的抗体治疗的抗SARS-CoV-2疗法是难以控制的。

在一些实施方式中，本文公开的药物组合物与一种或多种化疗剂一起施用，所述化疗剂包括但不限于甲氨蝶呤、柔红霉素、丝裂霉素、顺铂、长春新碱、表阿霉素、氟尿嘧啶、维拉帕米、环磷酰胺、阿糖胞苷、氨基蝶呤、博来霉素、丝裂霉素C、秋水仙碱、依托泊苷、光神霉素、氯霉素、美法仑、道诺霉素、阿霉素、他莫昔芬、紫杉醇、长春花碱、喜树碱、放线菌素D、阿糖胞苷和康普瑞汀。

一种或多种治疗剂可以“共同施用”，即以协调的方式一起向受试者施用，其作为单独的药物组合物或混合在单一的药物组合物中。通过“共同施用”，一种或多种治疗剂也可以与本药物组合物同时施用，或者单独施用，包括在不同时间和不同频率施用。一种或多种治疗剂可以通过任何已知途径施用，如口服、静脉内、肌内、鼻内、通过气雾剂、皮下、阴道内、直肠内等；并且治疗剂也可以通过任何常规途径施用。

在一些实施方式中，药物组合物皮下施用。

当两种或更多种治疗剂组合使用时，每种治疗剂的剂量通常与单独使用时的剂量相同。然而，当一种治疗剂干扰其他药物的代谢时，每种治疗剂的剂量都要适当调整。或者，在两种或更多种治疗剂显示协同作用的情况下，可以减少一种或多种的剂量。每种治疗剂可以在适当的时间间隔内同时或单独施用。

定义

如在本公开中所使用的，除非上下文另有明确规定，否则单数形式的“一个/一种(a/an)”和“所述(the)”包括复数指代。

如在本公开中所使用的，术语“或”应理解为包括和涵盖“或”和“和”两者。

如在本公开中所使用的，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所述范围内的任何整数的值，以及在适当时包括其分数(如整数的十分之一和百分之一)。此处使用的单位、前缀和符号是使用其国际单位制(SI)接受的形式提供的。数值范围包括定义范围的数字。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白”可互换使用，是指包含通过肽键共价连接的氨基酸残基的化合物。蛋白或肽包含至少两个氨基酸，并且对可以包含蛋白或肽序列的氨基酸的最大数量没有限制。多肽包括包含通过肽键彼此连接的两个或多个氨基酸的任何肽或蛋白。如本文所用，该术语指短链，其在本领域中也通常称为肽、寡肽和低聚物，例如，以及更长的链，其在本领域中通常称为蛋白，其有多种类型。例如，“多肽”包括生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异二聚体，多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。

为计算同一性百分比，所比较的序列通常以在序列之间提供最大匹配的方式排列。可用于确定同一性百分比的计算机程序的一个实例是GCG程序包，其包括GAP(Devereux等，1984,Nucl.Acid Res.12:387；Genetics Computer Group,University of Wisconsin,Madison,Wis.)。计算机算法GAP用于比对要确定其序列同一性百分比的两个多肽或多核苷酸。对序列进行比对，以实现各自氨基酸或核苷酸的最佳匹配(如通过算法确定的“匹配跨度”)。在某些实施方式中，算法还使用了标准比对矩阵(参见，Dayhoff等，1978,Atlas ofProtein Sequence and Structure 5:345-352，针对PAM 250比对矩阵；Henikoff等，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:10915-10919，针对BLOSUM 62比对矩阵)。

本公开的非限制性实施方式的实例

本文公开的本主题的实施方式单独地或与一个或多个其他实施方式组合可能是有益的。在不限制前述描述的情况下，以下提供了本公开的某些非限制性实施方式。如本领域技术人员在阅读本公开后将显而易见的是，单独编号的实施方式中的每一个可以与前面或后面单独编号的任何实施方式一起使用或组合。这旨在为所有这样的实施方式的组合提供支持，并且不限于以下明确提供的实施方式的组合。

实施方式：

实施方式1：一种抗CD147抗体，其包含结合结构域，所述结合结构域包含与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％同一性的至少一个CDR。

实施方式2：根据实施方式1所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含两个CDR，其中所述两个CDR的每一个独立地与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％的同一性。

实施方式3：根据实施方式1或实施方式2所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含三个CDR，其中所述三个CDR的每一个独立地与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％的同一性。

实施方式4：根据实施方式1-3中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含与选自SEQ ID NO:4-15的序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。

实施方式5：根据实施方式1-4中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含选自SEQ ID NO:4-15的氨基酸序列。

实施方式6：根据实施方式1-5中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗体是全长抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体、抗原结合区、重链、轻链、VhH、Vh、CDR、可变结构域、scFv、Fc、Fv、Fab、F(ab)2、IgG、还原的IgG(rIgG)、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、双体抗体、双特异性双体抗体、三特异性三体抗体、微型抗体、纳米抗体、IgNAR、V-NAR、HcIgG或其组合。

实施方式7：根据实施方式6所述的抗CD147抗体，其中所述抗体是VhH。

实施方式8：根据实施方式1-7中任一项所述的抗CD147抗体，其中嵌合抗原受体(CAR)的结合区包含与选自SEQ ID NO:16-39的氨基酸序列具有至少70％同一性的至少一个CDR。

实施方式9：根据实施方式8所述的抗CD147抗体，其中所述CAR是在免疫细胞上表达的。

实施方式10：根据实施方式9所述的抗CD147抗体，其中所述免疫细胞是外周血单核细胞(PBMC)、淋巴细胞、T细胞或NK细胞。

实施方式11：根据实施方式1-10中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体结合在细胞表面上表达的CD147或其片段。

实施方式12：根据实施方式11所述的抗CD147抗体，其中所述细胞是上皮细胞、内皮细胞或神经元细胞。

实施方式13：根据实施方式1-12中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体降低或消除病毒与CD147之间的相互作用。

实施方式14：根据实施方式13所述的抗CD147抗体，其中所述相互作用包括所述病毒对所述CD147的结合。

实施方式15：根据实施方式1-14中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体降低或消除病毒刺突蛋白与CD147的结合。

实施方式16：根据实施方式1-15中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体降低或消除细胞的病毒侵入。

实施方式17：根据实施方式1-16中任一项所述的抗CD147抗体，其中如通过病毒感染性测定所确定的，所述抗CD147抗体将细胞的病毒侵入降低或消除至少约1倍。

实施方式18：根据实施方式13-17中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述病毒选自以下：麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。

实施方式19：根据实施方式18所述的抗CD147抗体，其中所述病毒是冠状病毒。

实施方式20：根据实施方式19所述的抗CD147抗体，其中所述冠状病毒是SARS-CoV-2。

实施方式21：根据实施方式11-20中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述细胞是癌细胞。

实施方式22：根据实施方式11-20中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述细胞是肿瘤细胞。

实施方式23：根据实施方式21所述的抗CD147抗体，其中所述癌细胞来自血液系统癌症。

实施方式24：根据实施方式22所述的抗CD147抗体，其中所述肿瘤细胞来自选自以下的癌症：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。

实施方式25：根据实施方式1-24中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体降低或消除肿瘤细胞增殖、转移、基质金属蛋白酶分泌、肿瘤基质降解、肿瘤细胞侵入和/或血管生成。

实施方式26：根据实施方式1-24中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体降低或消除炎症。

实施方式27：根据实施方式1-24中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体有效降低或消除炎性或自身免疫性病症。

实施方式28：根据实施方式27所述的抗CD147抗体，其中所述炎性或自身免疫性疾病选自以下：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。

实施方式29：根据实施方式1-28中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体是人源化的。

实施方式30：一种在有此需要的受试者中预防、治疗或改善与CD147表达相关的病症的方法，其包括施用根据实施方式1-29中任一项所述的抗CD147抗体。

实施方式31：一种药物组合物，其包含有效量的根据实施方式1-29中任一项所述的抗CD147抗体。

实施方式32：一种细胞，其包含编码根据实施方式1-29中任一项所述的抗CD147抗体的序列。

实施方式33：根据实施方式1-29中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述CD147抗体结合细胞，从而预防、抑制或减少疟原虫寄生虫侵入所述细胞中。

实施方式34：根据实施方式33所述的抗CD147抗体，其中所述疟原虫寄生虫侵入所述细胞中至少约1倍。

实施方式35：根据实施方式34所述的抗CD147抗体，其中所述细胞是红细胞。

实施方式36：根据实施方式33-35中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述疟原虫寄生虫选自以下：恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫和诺氏疟原虫。

实施方式37：根据实施方式33-36中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体有效减少血液细胞中的寄生虫血症。

实施方式38：根据实施方式37所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体在约48小时内减少血液细胞中的寄生虫血症。

实施方式39：根据实施方式37所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体在约96小时内减少血液细胞中的寄生虫血症。

实施方式40：根据实施方式33所述的抗CD147抗体，其中施用所述抗CD147抗体在受试者中预防、改善或治疗疟疾。

实施方式41：一种抗CD147抗体，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:23，其中所述CDR2区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:24-SEQ ID NO:31,其中所述CDR3区是选自以下的氨基酸序列：SEQID NO:32-SEQ ID NO:39，和其中所述抗CD147抗体在所述CDR1区、CDR区或CDR3区的至少一个中包含0至5个氨基酸修饰。

实施方式42：根据实施方式41所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含0-3个氨基酸修饰。

实施方式43：根据实施方式41-42中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述CDR1区对应于SEQ ID NO:18或22，其中所述CDR2区对应于SEQ ID NO:26或30，和其中所述CDR3区对应于SEQ ID NO:34或38。

实施方式44：根据实施方式41-43中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14。

实施方式45：根据实施方式41-44中任一项所述的抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体是人源化的。

实施方式46：一种治疗方法，其包括施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗CD147抗体，其中所述抗CD147抗体包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:23，其中所述CDR2区是选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:24-SEQ ID NO:31，其中所述CDR3区是选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO:32-SEQ ID NO:39，和其中所述抗CD147抗体在所述CDR1区、CDR区或CDR3区的至少一个中包含0至2个氨基酸修饰。

实施方式47：根据实施方式46所述的治疗方法，其中所述施用有效降低或消除炎性或自身免疫性疾病。

实施方式48：根据实施方式46-47中任一项所述的治疗方法，其中所述炎性或自身免疫性疾病选自以下：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、乳糜泻、炎性肠病、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫氏病、I型糖尿病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、克隆氏病、多发性硬化症和重症肌无力。

实施方式49：根据实施方式46-48中任一项所述的治疗方法，其中所述施用有效降低或消除病毒对细胞的病毒侵入。

实施方式50：根据实施方式49所述的治疗方法，其中所述病毒选自以下：麻疹、冠状病毒、SARS、MERS、传染性造血组织坏死病毒(IHNV)、细小病毒、单纯疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、HIV、流感病毒、鼻病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、免疫缺陷病毒(例如，HIV)、包膜病毒、RNA病毒和肝炎。

实施方式51：根据实施方式50所述的治疗方法，其中所述病毒是所述冠状病毒。

实施方式52：根据实施方式51所述的治疗方法，其中所述冠状病毒包括SARS-CoV-2。

实施方式53：根据实施方式46-48中任一项所述的治疗方法，其中所述施用有效降低或消除癌症的转移。

实施方式54：根据实施方式53所述的治疗方法，其中所述癌症选自以下：乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。

实施方式55：根据实施方式46-48中任一项所述的治疗方法，其中所述施用有效降低或消除疟原虫侵入细胞。

实施方式56：一种抗体-药物缀合物，其包含根据实施方式1-29中任一项所述的抗CD147抗体。

实施方式57：根据实施方式56所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物选自以下：抗癌药、抗疟疾药、抗病毒药和抗炎药。

实施方式58：根据实施方式57所述的抗体-药物缀合物，其包含所述抗病毒药，其中所述抗病毒药是抗SARS-CoV-2药物。

实施方式59：根据实施方式57所述的抗体-药物缀合物，其包含所述抗癌药，其中所述抗癌药包括免疫疗法。

实施方式60：根据实施方式59所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫疗法选自以下：抗体、检查点抑制剂、细胞疗法、细胞因子、溶瘤病毒和疫苗。

实施方式61：根据实施方式60所述的抗体-药物缀合物，其包含抗体。

实施方式62：根据实施方式56所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗CD147抗体包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14。

实施例

实施例1-产生结合人CD147的VhH抗体

为了产生结合人CD147的VhH抗体，用重组CD147(在21种抗原的混合物中)免疫美洲驼，并强化四次。从血液淋巴细胞中提取mRNA，并在酵母表面表达系统中构建VhH抗体展示文库。通过两轮淘选和FACS富集表达抗CD147VhH抗体的酵母克隆，并对24个进行VhH分泌分析。通过ELISA测量其抗CD147活性。

在这24个克隆中，选择了四个具有独特序列和在ELISA上高信噪比的克隆进行进一步研究。其中两个(Ibx-11和Ibx-13)在哺乳动物细胞中作为IgG Fc融合蛋白良好表达，并且还产生了三个串联的二价VhH构建体(没有IgG Fc融合蛋白)(Ibx-75、Ibx-76、Ibx-75VhH)。

对于ELISA，将100ng人CD147包被在Nunc polysorb板上在1x包被缓冲液中过夜。用TBST(0.01％吐温20)洗涤孔一次，然后用1x鱼胶在TBST中在室温下(RT)封闭1小时。将Ibx-11、Ibx-13、Ibx-75、Ibx-76、Ibx-77和抗-HIS抗体以0.01–100ng/孔/100μl在室温下孵育1小时，随后洗涤3次，每次洗涤5分钟。将这些孔与用针对Ibx-11&Ibx-13的抗人抗体处理的孔和针对Ibx-77、Ibx-75、Ibx-76处理抗体的抗标签以1:1000的稀释度在室温下孵育1小时，然后洗涤3次，每次洗涤5分钟。将孔用100μl/孔的TMBE孵育30分钟，并用100μl/孔的的2N硫酸终止反应。使用Biotek synergy 4仪器测量光密度(OD)用于定量。

该测定结果如图1所示。测试抗体的ELISA EC50在两个对数范围内(0.1-10ng VhH抗体/孔)。串联的二价Ibx-75(10ng/孔)显示出与人CD147的最低结合，其次是以相同水平结合的Ibx-76和Ibx-77(1ng/m孔)。用IgG Fc融合蛋白Ibx-11和Ibx-13(0.1ng/孔)观察到最佳结合。IgG Fc融合蛋白与串联二价体结合的改善可能是由于所使用的不同的二级试剂(分别为抗Fc和抗标签)，或功能价态的差异(即，串联二价结构可能由于短接头长度而作为单价结构有效结合)。

实施例2-VhH与小鼠CD147的结合

为检测实施例1中所述的VhH结合小鼠CD147的能力，进行了ELISA。

对于ELISA，将100ng小鼠CD147包被在Nunc polysorb板上在1x包被缓冲液中过夜。用TBST(0.01％吐温20)洗涤孔一次，然后用1x鱼胶在TBST中在室温下(RT)封闭1小时。将Ibx-11、Ibx-13、Ibx-75、Ibx-76、Ibx-77和抗-HIS抗体以0.01–100ng/孔/100μl在室温下孵育1小时，随后洗涤3次，每次洗涤5分钟。将这些孔与用针对Ibx-11&Ibx-13的抗人抗体处理的孔和针对Ibx-77、Ibx-75、Ibx-76处理抗体的抗标签以1:1000的稀释度在室温下孵育1小时，然后洗涤3次，每次洗涤5分钟。将孔用100μl/孔的TMBE孵育30分钟，并用100μl/孔的的2N硫酸终止反应。使用Biotek synergy 4仪器测量光密度(OD)用于定量。

实施例3–IBX-77结合CD147的SPR分析

对于该测定，CD147在pH 7.4的HBS-EP缓冲液中以0nM至900nM的浓度以10μL/min注射600秒。在0、9.22、0、23.04、57.6、144、360、900nM(2.5倍系列稀释)进行重复CD147注射。使用pH 2.0的10mM甘氨酸在10μL/min下使芯片表面再生180秒。

由于在分析物注射过程中突然出现空气尖峰和DIP，将0nm和23.04nM的一个技术重复排除在分析之外。数据在仪器生产厂商提供的Q-Dat软件中进行分析。将稳态1:1拟合模型(图4)用于初始稳态结合分析，将简单的Kd/Ka动力学模型(图5)用于估计Kd。

每个浓度的重复注射相似，但第二次的反应低于第一次。稳态1：1计算的KD＝138.0nM(±0.003nM)。计算的动力学模型为：

Ka＝1.328x10

Kd＝4.89x10

KD＝36.1nM(±0.001nM)。

实施例4-在CMD芯片上Ibx-77结合CD147的SPR分析

通过以10μl/min注入NHS/EDC的1:1混合物420秒来激活CMD芯片表面。用pH4.5的10mM乙酸钠溶液以10μl/min固化100μg/ml CD147持续510秒。将未反应的CD147和活化的芯片表面用pH8.5的乙醇胺以10μl/min洗涤并灭活420秒。共计固化约3800RU的CD147。将Ibx-77以10μl/min注射到HBS-EP缓冲液(pH 7.4)中，浓度范围为9.22nM至360nM，持续420秒。使用pH 2.0的10mM甘氨酸使芯片表面再生。

数据在仪器生产厂商提供的Q-Dat软件中进行分析。将稳态1:1拟合模型(图7)用于初始稳态结合分析。然后，将简单的Kd/Ka动力学模型(图6)用于估计KD。

实施例5：Ibx-77与HEK 293和HCC 1954细胞的结合

为检测本公开的VhH抗体结合细胞上表达的CD147的能力，进行了流式细胞术。在T-75培养瓶中在推荐的培养基中使所有细胞系生长至汇合。(HCC1954–RPMI；SKBR3–McCoy’s 5A；HEK 293–DMEM；MCF-7–EMEM)。将大约100万个细胞接种在6孔板上，并使其沉淀并生长过夜。用1ml移液管尖端的宽钝口端手动刮除细胞，并像以前一样制备细胞用于流式细胞术分析。使用1μg Ibx-77、抗CD147、家兔同种型对照、抗标签dylight在冰上染色1小时，然后洗涤和离心。然后将细胞与1μg抗家兔Dylight488作为二抗和抗标签dylight488孵育30分钟，随后离心并洗涤。将细胞重悬于1000μl流式检测液中，并在流式细胞仪上进行最终的运行。在300秒(5分钟)内尽可能收集30,000个总事件进行分析。基于单个细胞系的未染色细胞来门控阴性细胞。

针对每个细胞系的条件：CST仅用于阳性对照；仅Ibx-77；ISO型对照家兔；UST；仅抗标签488 2°-XF2。

在HEK 293细胞(图8)和HCC 1954(图9)细胞系中，Ibx-77-染色的细胞显示出与未染色对照不同的阳性染色细胞群。

实施例6：Ibx-77与HeLa细胞上表达的CD147的结合

在T-75培养瓶中在推荐的培养基中使HeLa细胞系生长至汇合。将大约100万个细胞接种在6孔板上，并使其沉淀并生长过夜。用1ml移液管尖端的宽钝口端手动刮除细胞，并像以前一样制备细胞用于流式细胞术分析。将细胞在流式检测液中洗涤一次，在1μl/ml活力染料660中在冰上孵育30分钟，然后洗涤2次。使用10μg和5μg的Ibx-77对细胞进行染色，在冰上染色1小时，然后洗涤2次。然后将细胞与1μg抗人Dylight488作为二抗和抗标签dylight488孵育30分钟，然后洗涤2次。将细胞重悬于1000μl流式检测液中，并在流式细胞仪上进行最终的运行。在300秒(5分钟)内尽可能收集50,000个总事件进行分析。基于单个细胞系的未染色细胞来门控阴性细胞。针对每个细胞系的条件：仅Ibx-77；UST，仅抗标签488二抗-仅标签2。

如图10中所示，5μg的Ibx-77显示出不同于仅二抗对照和未染色细胞的峰值。

实施例7-Ibx-77、Ibx-13和Ibx-11与细胞结合能力的分析

在T-75培养瓶中在推荐的培养基中使HeLa和HCC-1954细胞系生长至汇合。将大约100万个细胞接种在6孔板上，并使其沉淀并生长过夜。用1ml移液管尖端的宽钝口端手动刮除细胞，并像以前一样制备细胞用于流式细胞术分析。将细胞在流式检测液(PBS，1％ FBS和叠氮钠)中洗涤一次。在1μl/ml活力染料660中在冰上孵育30分钟，然后洗涤2次。在冰上使用1μg/100μl Fc封闭试剂用于封闭可能的Fc受体，持续10分钟。随后洗涤两次。使用表中所示定量的抗体对细胞进行染色，在冰上染色1hr，然后洗涤2次。然后将细胞与抗人Dylight488作为二抗、抗家兔Dylight488和抗标签Dyligth488孵育30分钟，然后洗涤两次。将细胞重悬于2000μl流式检测液中，在流式细胞仪上进行最终检测。在300秒(5分钟)内尽可能收集50,000个总事件进行分析。基于单个细胞系的VhH-Fc(h27-8GL)细胞来门控阴性细胞。

在该实验中检测了下述抗体和对照：Ibx-77(10μg)；Ibx-13(10μg)；Ibx-11(10μg)；人同种型对照(10μg)；仅抗人二抗(1μg；人2)；VhH-Fc-(h27-8GL)(10μg)；仅XF2(抗标签488)；未染色。

Ibx-11和Ibx-13以相似模式染色细胞，并且直方图是不可能的。Ibx-77显示较弱的染色，这可能是由于二抗结合一个可用的标签表位。用1μg Fc封闭剂封闭可稍微降低人同种型对照的背景噪音。VhH-Fc(h27-8GL)对照抗体清楚地显示出其自身与Ibx-11和Ibx-13之间的染色差异。因此，对于每个使用VhH-Fc的实验，都可以使用这样的对照。总体而言，HELA细胞似乎比HCC 1954表达更多的CD147。

实施例8-Ibx-11和Ibex-13抗体与Jurkat T细胞结合能力的分析

在推荐的培养基中使Jurkat细胞系生长至汇合，并且收集约400万个细胞，并像以前一样制备用于流式细胞术分析。这些细胞未用叠氮钠处理。将细胞在流式检测液(PBS，1％FBS和叠氮钠)中洗涤一次，然后在1μl/ml活力染料660中在冰上孵育30分钟病洗涤2次。在室温下使用1μg/100μl Fc封闭试剂用于封闭Fc受体，持续10分钟，随后洗涤两次。如图13中的表所示，用指示量的抗体将细胞在冰上染色一小时，然后洗涤两次。将指定的试管与刺突RBD(1μg/管)孵育1小时，然后洗涤两次。然后将细胞与抗刺突蛋白抗体、VhH-Fc对照、人同种型抗体或Ibx-11在4℃下孵育1小时，然后洗涤两次。然后将细胞与抗人Dylight488孵育30分钟，然后与抗家兔Dylight488孵育，然后洗涤两次。将细胞重悬于1000μl流式检测液中，在流式细胞仪上进行最终检测。在300秒(5分钟)内尽可能收集50,000个总事件进行分析。基于单个细胞系的VhH-Fc(h27-8GL)细胞来门控阴性细胞。

总体而言，Ibx-11和Ibex-13抗体对Jurkat细胞染色。

实施例9-Ibx-11和Ibex-13抗体与Vero E-6细胞结合能力的分析

在推荐的培养基中使Jurkat和Vero E-6细胞生长至汇合。将每个孔大约100万个细胞接种在6孔培养皿上，并像以前一样制备用于流式细胞术分析。细胞未用叠氮钠处理。将细胞在流式检测液(PBS，1％FBS和叠氮钠)中洗涤一次。在室温下使用1μg/100μl Fc封闭试剂用于封闭Fc受体，持续10分钟，随后洗涤两次。如图14A-B中的表所示，用指示量的抗体将细胞在冰上染色一小时，然后洗涤两次。然后将细胞用刺突蛋白RBD(1μg/管)孵育一小时，然后洗涤两次。然后将细胞与抗刺突蛋白抗体、VhH-Fc对照、人同种型抗体或Ibx-11、Ibx-13或Ibx-77在4℃下孵育1小时，然后洗涤两次。然后将细胞与抗人Dylight488孵育30分钟，然后与抗家兔Dylight488孵育，然后洗涤两次。将细胞重悬于1000μl流式检测液中，在流式细胞仪上进行最终检测。在300秒(5分钟)内尽可能收集50,000个总事件进行分析。基于单个细胞系的VhH-Fc(h27-8GL)细胞来门控阴性细胞。

使用流式细胞仪上针对Jurkat细胞设置的相同电压设置来分析Vero E6细胞。Jurkat细胞用Ibx-11、Ibx-13和Ibx-77显示出良好的染色，其与阴性对照(VhH-Fc(h27-8GL))和未染色对照之间有明显的分离。参见图14A。令人吃惊的是，Vero E6细胞显示出Ibx-13比Ibx-11更强的染色。参见图14B。这些差异可能是由于人和猴CD147序列的差异。这种氨基酸差异可能是Ibx抗体系列的关键表位的一部分，并可用于潜在的表位作图。对于非人灵长类模型，Ibx-13及其二聚体形式Ibx-76可能是好的候选物。Ibx-77显示了两个峰群，这可能表明Vero E6细胞上的染色较弱。

实施例10-Ibx-74和Ibx-75的KD

提供了约45μl处于不同纯化阶段的Ibx-74和Ibx-75；将35μl的每个样品注射到传感器芯片上，并收集传感图。流速为10μ/分钟，用pH为1.5的10mM甘氨酸再生芯片。结果如图15A-B中所示。

虽然这里获得的KD值可能受到杂质或浓度的影响，但这些值主要取决于抗体，因此可以用作鉴定强结合物的筛选工具。这里，Ibx-75以1x 10

该比较表明，Ibx-75可能是比Ibx-74具有更低解离率的更强的结合剂。

实施例11-抗体-药物缀合物(ADC)的细胞毒性测定

将MiaPaCa-2癌细胞接种在96孔培养皿中2500个细胞/孔，使其粘附，并生长过夜。用50μl新鲜培养基替代旧培养基。Ibx-11和Ibx-13是通过将抗体与抗人IgG-Fc-MMAF预混合来制备的。将50微升不同浓度(最终浓度为30nM至1.1nM)的Ibx-11和Ibx-13混合物加入孔中。培养板上包括同种型和仅二抗ADC对照。然后将板孵育72小时。该72小时孵育后，使用Rockland试剂盒测量细胞活力。在最高浓度下，Ibx-11和Ibx-13分别显示出约73％和74％的活细胞。参见图16。这些抗体有效杀死癌细胞。

实施例12-Jurkat T细胞聚集测定

将Jurkat T细胞以20,000个细胞/孔接种在96孔圆底培养板(100μl)中。将100μg/ml的Ibx-77、Ibx-11或Ibx-13以100μl的形式添加到细胞中，最终体积为200μl/孔，最终浓度为50μg/ml抗体。在0小时、2小时、4小时、9小时、18小时和24小时收集图像。ImageJ用于测量像素2小时，并在24小时达到最大值。

ImageJ用于测量像素2小时，并在24小时达到最大值。在48小时时没有发现进一步的差异。目测鉴定(图17)显示，聚集模式的差异在18小时很明显，用50μg/ml的Ibx系列抗体处理的细胞显示出不同的聚集模式，聚集团更紧密，单个细胞更少，与未处理的对照相比，在20μg/ml的较低剂量下，用抗CD147对照抗体和抗CD98抗体观察到类似的模式。这些数据还通过对8位图像的像素尺寸进行计数的成像分析进行定量分析。50μg/ml–25μg/ml Ibx系列抗体在24小时内显示颗粒(聚集体)的像素尺寸更大。这些差异在Ibx系列抗体之间是不易察觉的。参见图18。

在另一项细胞聚集测定中，将Jurkat T细胞以20,000个细胞/孔接种在96孔圆底培养板(100μl)中。将100μg/ml的Ibx-77、Ibx-11或Ibx-13以100μl添加到细胞中，最终体积为200μl/孔，最终浓度为50μg/ml抗体。在0小时、2小时、4小时、9小时、18小时和24小时收集图像。在18小时和24小时手动计数不属于较大聚集体的具有清晰不同边界的单个细胞和细胞组(每组少于3个细胞)。图19。在24小时时，Ibx-77处理细胞的单细胞计数显著降低(p＝0.071)。图20A-B。

实施例13-Ibx-76和Ibx-77在管形成测定中抑制血管生成

使用管形成测定探索了抗CD147 VhH抗体抑制血管生成的能力。将HuVEC细胞接种到用Matrigel包被的孔的表面上。接种次日添加抗体和CD147蛋白(添加用于竞争)。在另外培养一天后，用Calcein AM对细胞染色。然后通过显微镜评估管形成。将结合人CD147的小鼠抗体(HIM6)在此处作为阳性对照。

如图21中所示，用Ibx-76或Ibx-77处理的细胞显示出血管生成的抑制。CD147与Ibx-76和Ibx-77的共孵育显示CD147单独诱导的血管生成减少。

实施例14-Ibx-13防止恶性疟原虫在血细胞中生长

不同抗体阻断恶性疟原虫NF54株在红细胞中生长的能力。最初的寄生虫血症为1.3％，虫株在96孔板中以2％的红细胞压积培养。以1、10和100μg/mL向孔中施用Ibx-13或MIF-2-5抗体或VhH-Fc。培养未暴露于任何抗体的寄生虫作为阴性对照，使用用抗疟疾剂氯喹(CQ)培养的寄生虫作为阳性对照。在治疗后48和96小时制备血液涂片，染色，并通过显微镜以盲法准备。以盲法从约1000个红细胞中对感染的红细胞(RBC)的数量进行评分，并以寄生虫血症的百分比表示。

结果显示在图22和23以及表2中。

在阳性对照治疗中，寄生虫在48小时后正常生长，从1.3％增加到5.9％。在阴性对照中，用氯喹治疗在48小时杀死约93％的寄生虫，在96小时杀死约98％的寄生虫。用Ibx-13治疗导致约100％的寄生虫抑制，甚至在测试的最低浓度下，但是用MIF-2-5或VhH-Fc治疗也没有可测量的效果。到96小时时，对照组、MIF-2-5组和VhH-Fc组中的寄生虫由于非常高的寄生虫血症而死亡，因为培养基没有每天更换。

表2-平均寄生虫血症

实施例15-在恶性黑色素瘤细胞上进行的抗体药物缀合物测定

将2,500个A375(恶性黑色素瘤)细胞在96孔板中每孔的完全生长培养基(DMEM，10％FBS)中接种，并使其贴壁过夜。次日，用50μl新鲜完全培养基和25μl Ibx-11、Ibx-13或对照抗体(在完全培养基中稀释)补充旧培养基。抗体的添加量为30nM至1.1nM，浓度降低3倍，而二抗ADC保持恒定在30nM。使这些混合物孵育5分钟。将25μl抗Fc(人)二抗药物缀合物试剂(在完全培养基中稀释)添加到孔中，并在37℃下、在5.0％ CO

A375细胞显示出对高达3.3nM的一抗Ibx-11和Ibx-13的增加剂量的敏感性。见图24-25。观察到的最大影响是在3.3nM时活力损失约55％，然后在更高的抗体浓度下活力逐渐减弱。与未处理的细胞相比，30nM的二抗ADC本身可能具有较小的效果。还观察到了人同种型对照的一些效果。

实施例16-在前列腺癌细胞上进行的抗体药物缀合物测定

将2,500个PC-3(前列腺癌)细胞在96孔板中每孔的完全生长培养基(F-12K，10％FBS BS)中接种，并使其贴壁过夜。次日，用50μl新鲜完全培养基和25μl Ibx-11、Ibx-13或对照抗体(在完全培养基中稀释)补充旧培养基。抗体的添加量为30nM至1.1nM，浓度降低3倍，而二抗ADC保持恒定在30nM。使这些混合物孵育5分钟。将25μl抗Fc(人)二抗药物缀合物试剂(在完全培养基中稀释)添加到孔中，并在37℃下、在5.0％ CO

与实施例15中教导的A375(恶性黑色素瘤)细胞相比，PC3细胞可能对ADC测定不那么敏感。见图26和图27。在这里观察到的最大影响是约25％的活力损失。这种活力的差异可能是由于细胞上存在的表面CD147的量以及内吞速率和癌症对测定中使用的毒性有效载荷的易感性的相应差异。

参考文献

Watanabe等，(2010).CD147/EMMPRIN Acts as a Functional Entry Receptorfor Measles Virus on Epithelial Cells，Journal of Virology，2010年4月，84(9)4183-4193。

Chenglong等，(2020)Cyclophilin A and CD147:novel therapeutic targetsfor the treatment of COVID-19，Medicine in Drug Discovery，第7卷：100056。