一种黑枸杞益生菌饮料及其制备方法

技术领域

本发明属于饮料制备技术领域，具体涉及一种黑枸杞益生菌饮料及其制备方法。

背景技术

免疫是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入机体的病毒、细菌等异物，识别和处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及突变和病毒感染细胞的能力，免疫低下状态；即当身体在受到外来细菌、病毒入侵时，身体抵抗能力下降的状态。机体免疫低下易导致细菌、病毒、真菌等入侵，因此免疫低下最直接的表现就是容易生病。

益生菌可以通过影响机体特异性和非特异性免疫应答增强免疫，一方面可以促进淋巴T细胞、淋巴B细胞增殖分化成浆细胞产生细胞因子IL-2、IL-10及抗体IgA、IgG等参与机体的体液免疫和细胞免疫特异性调节，一方面还可以提高单核巨噬细胞的吞噬活性，诱导活性氧、溶酶体酶及单核因子等的分泌，防止病原微生物等有害物质的入侵，参与非特异性免疫调节。益生菌除了提高免疫外，还具有调节和维持肠道菌群结构平衡、降胆固醇、抗氧化、降血糖等作用。

益生元是一类膳食补充剂，能够选择性地促进体内有益菌的代谢和增殖，而不刺激有潜在致病性或腐败活性的有害细菌，进而改善宿主健康的不可被人体消化的食品成分。益生元进入人体，主要发挥以下作用：促进肠道内乳杆菌和双歧杆菌的增殖和生长；具有较强的免疫刺激作用，可以增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，进而刺激淋巴细胞不断分裂繁殖。

聚葡萄糖是一种优质益生元，能有效促进双歧杆菌和乳杆菌在体内的增殖和定植。食用后经过口腔、食管、胃、到达小肠，通过胞饮进入淋巴和免疫系统，刺激增强NK细胞、巨噬细胞等免疫细胞的吞噬活性，提高巨噬细胞的吞噬能力达到平时的10倍以上，同时刺激释放白介素以增强人体抵抗有害毒素的能力，有效增强人体清除毒素的能力；还促进IgM抗体的产生，提高人体免疫。低聚果糖、银耳多糖、低聚半乳糖等同时即是优良的益生元，自己本身也具有很好的提高免疫的作用。

黑枸杞果粉及其提取物味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。还含有丰富的黑果色素(天然原花青素，简称OPC)，其OPC含量超过蓝莓，截止到2016年发现的OPC含量最高的天然野生植物。原花青素OPC是最有效的天然水溶性自由基清除剂，可以有效清除人体自由基，防止人体皮肤问题及抗衰老。

中国专利公布CN106659747A公开了鼠李糖乳杆菌促进生态失调后肠道菌群多样性恢复的应用：通过将鼠李糖乳杆菌制成可以口服施用的形式用于维持或增加受试者的肠道菌群多样性、用于缓解受试者由于抗生素引起的肠道生态失调、用于预防肠道细菌感染或由于受试者肠道中致病菌所引起的疾病的发展。但是，该专利制备的含有益生菌的口服制剂中益生菌的种类少，不能充分发挥多种益生菌之间的协同作用，而且在制备的过程中，没有充分考虑益生菌储存过程中的存活率和稳定性问题。

近年来，益生菌产品、黑枸杞产品和提高免疫产品都是热点，提高免疫的黑枸杞益生菌固体饮料既能满足人们对增强免疫的需求，又能满足人们对肠道健康、消化改善的需求。因此，开发一款安全温和，不生产依赖性且切实有效的的方便携带的提高免疫产品很有必要。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种黑枸杞益生菌饮料及其制备方法，可有效解决现有功能性饮料效果不佳的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种黑枸杞益生菌饮料，包括以下重量份的组分：

黑枸杞果粉30～50％、黑枸杞提取物15～25％、脱脂乳粉5～10％、益生菌粉3～15％，以及辅料10～30％。

进一步地，包括以下重量份的组分：

黑枸杞果粉30％、黑枸杞提取物15％、脱脂乳粉5％、益生菌粉5％，以及辅料13.5％。

进一步地，益生菌粉包括以下重量份的组分：乳双歧杆菌1～3％、长双歧杆菌0.5～2％、两双歧杆菌1～3％、植物乳杆菌1～3％，以及鼠李糖乳杆菌1～3％。

进一步地，益生菌粉为市产品，或可采用以下方式制备：

选取甘油管保藏单菌株，37℃解冻后划线接种于MRS琼脂培养基，挑取平板上的单菌落接种于MRS液体培养基培养至对数生长期作为种子发酵剂，采用高密度培养得到发酵液，使用离心机离心获得菌泥，菌泥与脱脂乳保护剂混合乳化后进行冻干、粉碎，获得乳双歧杆菌，长双歧杆菌，两歧双歧杆菌，植物乳杆菌，鼠李糖乳杆菌冻干粉。

进一步地，辅料包括以下重量份的组分：聚葡萄糖1～2％、低聚果糖1～2％以及低聚半乳糖8～15％。

进一步地，黑枸杞提取物的制备方法为：

(1)将黑枸杞置于5～10wt％的氯化钠溶液中浸泡20～30min，再置于70～90％乙醇中继续浸泡10～30min后，干燥并粉碎至粒径为100～200目；

(2)将氯化胆碱、苯酚和水溶液以摩尔比为0.5～1:1.5～3:1～3的比例混合，于60～80℃搅拌30～60min；

(3)将步骤(1)制备得到的粉末加入至步骤(2)所得溶液中，于50～70℃，300～600W超声30～50min；压滤，收集滤液；所述粉末与氯化胆碱的重量比为1～3:0.01～0.5；

(4)向滤液中加入为其体积3～4倍的无水乙醇，静置3～5h后，于3000～5000r/min离心，收集上清液，挥干乙醇后用清水洗涤，再烘干即可。

进一步地，步骤(1)中氯化钠溶液的浓度为5wt％。

进一步地，氯化胆碱、苯酚和水溶液的摩尔比为1:3:1.5。

进一步地，粉末与氯化胆碱的重量比为2:0.5。

进一步地，超声条件为64℃，340W超声40min。

上述黑枸杞益生菌饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按配方将与有益菌粉等量的辅料与有益菌粉混合均匀，然后再在60～100r/min的条件下，加入剩余的辅料，混合搅拌20～30min；

(2)将步骤(1)所得产物过60～80目筛，并使其水分含量低于5％，水分活度低于0.25，然后加入黑枸杞果粉、黑枸杞提取物和脱脂乳粉，混合均匀后，无菌封装即可。

本发明的有益效果：

1、本发明的益生菌固体饮料所用乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两歧双歧杆菌乳杆菌等乳酸菌是人体肠道内的生理常驻菌，具有提高免疫的，改善肠道内环境，起到益生作用。使用益生菌、益生元及黑枸杞果粉结合，不仅能促进益生菌的增殖和定植，而且能发挥自身的功效。本发明的固体饮料除了提高免疫外，还具有改善肠道、降低胆固醇、助消化等功效。

2、本发明所用益生菌具有较好的耐酸耐胆盐及肠道定植能力，能够确保其有效发挥益生特性，制备得到的益生菌固体饮料无其它副作用，可作为食品长期食用。并且，本发明配方科学，口感良好，具有提高免疫的功效。

3、本发明在制备黑枸杞提取物时，首先采用5～10wt％的氯化钠溶液和乙醇容易对黑枸杞进行浸泡，能够起到破壁的功效，便于后续提取过程中有效成分的顺利溶出。同时，超声提取不仅能够进一步的破坏细胞壁，也能通过超声使提取溶剂强制性的进入细胞内部，提升提取效率。

4、本申请采用氯化胆碱、苯酚和水溶液以摩尔比为0.5～1:1.5～3:1～3的比例混合形成提取溶剂，其具有与有机溶剂相同的性质，且无毒害，安全绿色，对黑枸杞有效成分的提取效率也明显高于常规有机溶剂。

5、本申请提取得到的黑枸杞提取物中富含丰富的蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分，还含有丰富的黑果色素(天然原花青素，简称OPC)，具有优异的抗衰老等功效。除此之外，黑枸杞提取物还能够与益生菌粉配合，一同增强益生菌粉对肠道的改善功效，有效的提升产品的吸收率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。

实施例1

一种黑枸杞益生菌饮料，包括以下重量份的组分：

黑枸杞果粉30％、黑枸杞提取物15％、脱脂乳粉5％、乳双歧杆菌1％、长双歧杆菌2％、两双歧杆菌1％、植物乳杆菌1％、鼠李糖乳杆菌1％、聚葡萄糖1.5％、低聚果糖2％以及低聚半乳糖10％

其中，黑枸杞提取物的制备方法为：

(1)将黑枸杞置于5wt％的氯化钠溶液中浸泡30min，再置于70％乙醇中继续浸泡30min后，干燥并粉碎至粒径为200目；

(2)将氯化胆碱、苯酚和水溶液以摩尔比为1:3:1.5的比例混合，于80℃搅拌30min；

(3)将步骤(1)制备得到的粉末加入至步骤(2)所得溶液中，于64℃，340W超声40min；压滤，收集滤液；所述粉末与氯化胆碱的重量比为2:0.5；

(4)向滤液中加入为其体积3～4倍的无水乙醇，静置3～5h后，于3000r/min离心，收集上清液，挥干乙醇后用清水洗涤，再烘干即可。

上述黑枸杞益生菌饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按配方将与有益菌粉等量的辅料与有益菌粉混合均匀，然后再在60～100r/min的条件下，加入剩余的辅料，混合搅拌20～30min；

(2)将步骤(1)所得产物过60～80目筛，并使其水分含量低于5％，水分活度低于0.25，然后加入黑枸杞果粉、黑枸杞提取物和脱脂乳粉，混合均匀后，无菌封装即可。

实施例2

一种黑枸杞益生菌饮料，包括以下重量份的组分：

黑枸杞果粉50％、黑枸杞提取物25％、脱脂乳粉10％、乳双歧杆菌3％、长双歧杆菌2％、两双歧杆菌1％、植物乳杆菌1.5％、鼠李糖乳杆菌2％、聚葡萄糖2％、低聚果糖2％以及低聚半乳糖8％。

黑枸杞提取物的制备方法为：

(1)将黑枸杞置于10wt％的氯化钠溶液中浸泡30min，再置于90％乙醇中继续浸泡30min后，干燥并粉碎至粒径为200目；

(2)将氯化胆碱、苯酚和水溶液以摩尔比为0.5:3:2的比例混合，于60℃搅拌30min；

(3)将步骤(1)制备得到的粉末加入至步骤(2)所得溶液中，于70℃，300W超声50min；压滤，收集滤液；粉末与氯化胆碱的重量比为3:0.5；

(4)向滤液中加入为其体积3～4倍的无水乙醇，静置3～5h后，于3000～5000r/min离心，收集上清液，挥干乙醇后用清水洗涤，再烘干即可。

上述黑枸杞益生菌饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按配方将与有益菌粉等量的辅料与有益菌粉混合均匀，然后再在60～100r/min的条件下，加入剩余的辅料，混合搅拌20～30min；

(2)将步骤(1)所得产物过60～80目筛，并使其水分含量低于5％，水分活度低于0.25，然后加入黑枸杞果粉、黑枸杞提取物和脱脂乳粉，混合均匀后，无菌封装即可。

实施例3

一种黑枸杞益生菌饮料，包括以下重量份的组分：

黑枸杞果粉40％、黑枸杞提取物20％、脱脂乳粉8％、乳双歧杆菌3％、长双歧杆菌2％、两双歧杆菌1％、植物乳杆菌1.5％、鼠李糖乳杆菌2％、聚葡萄糖2％、低聚果糖2％以及低聚半乳糖8％。

黑枸杞提取物的制备方法为：

(1)将黑枸杞置于6wt％的氯化钠溶液中浸泡20～30min，再置于85％乙醇中继续浸泡20min后，干燥并粉碎至粒径为200目；

(2)将氯化胆碱、苯酚和水溶液以摩尔比为1:1.5:1的比例混合，于80℃搅拌60min；

(3)将步骤(1)制备得到的粉末加入至步骤(2)所得溶液中，于70℃，500W超声30min；压滤，收集滤液；粉末与氯化胆碱的重量比为1:0.1；

(4)向滤液中加入为其体积3～4倍的无水乙醇，静置3～5h后，于3000～5000r/min离心，收集上清液，挥干乙醇后用清水洗涤，再烘干即可。

上述黑枸杞益生菌饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按配方将与有益菌粉等量的辅料与有益菌粉混合均匀，然后再在60～100r/min的条件下，加入剩余的辅料，混合搅拌20～30min；

(2)将步骤(1)所得产物过60～80目筛，并使其水分含量低于5％，水分活度低于0.25，然后加入黑枸杞果粉、黑枸杞提取物和脱脂乳粉，混合均匀后，无菌封装即可。

实施例4

与实施例1相比，缺少黑枸杞提取物，其余过程均与实施例1相同。

实施例5

与实施例1相比，在制备黑球器提取物时，将氯化胆碱、苯酚和水溶液替换为70～95％乙醇，其余过程均与实施例1相同。

利用大鼠在体单向肠灌流模型，采用HPLC法测定灌流液中花青素含量，分别考察当实施例和对比例所得组合物对芍药苷肠道吸收的促进作用。

按照以下步骤进行大鼠在体单向肠灌流模型的试验：

S1：大鼠禁食12h，自由饮水，1.5％戊巴比妥钠溶液(10mL/kg)腹腔注射麻醉，背位固定，保持体温；

S2：沿腹中线打开腹腔约3cm，取十二指肠约10cm，距幽门1cm处于两端切口后，插管并结扎，用37℃恒温的生理盐水以3mL/min流速将肠内容物冲洗干净，再用空气将生理盐水排空，安装装置；

S3：用预热至37℃的灌流液(质量分数为1％)以0.5mL/min流速灌流30分钟，平衡管路及肠段；

S4：开始计时，分别收集0～15，15～30，30～45，45～60，60～75，75～90min的灌流液，称重，记录灌流液和收集液重量；

S5：实验结束时，测量肠段长度与内径。

以HPLC法测定灌流液中芍药苷的含量，并按下式计算计算药物的吸收速率常数Ka和表观吸收系数Papp：

其中，Q

表1花青素在十二指肠中的吸收

从表中可以看出，通过本申请中各有效成分的配合，尤其是益生菌粉与黑枸杞提取物的配合，使得肠道对产品的吸收速率在240×10

实施例4与实施例1相比，组分中由于缺少了黑枸杞提取物，可以看出，花青素在肠道中的吸收率和吸收速率均远低于实施例1～3，也低于实施例5，因此，通过黑枸杞提取物与益生菌粉相配合，才能够起到最佳的肠道改善效果，提升肠道对于产品的吸收率。

实施例5与实施例1相比，仅替换了黑枸杞提取物的提取溶剂，可以看出其明显由于提取溶剂的改变，导致黑枸杞提取物中有效成分含量有所降低，但这对于肠道的吸收率和吸收速率影响不大，其与实施例1差距也不大。