NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物及其使用方法

相关申请

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发明领域

本公开总体上涉及用于给予NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物以用于治疗癌症的给药方案。

发明背景

NaPi2b (SLC34A2、NaPiIIb、Npt2)为一种多次跨膜、钠依赖性磷酸盐转运蛋白(Xu等人 Genomics 62:281-284 (1999))，通常在哺乳动物小肠的刷状缘膜上表达并参与跨细胞无机磷酸盐(Pi)的吸收，助于维持磷酸盐的体内稳态。已在肝脏中，在乳腺、唾液腺和支气管的上皮细胞的顶端表面处，以及在肺、睾丸、甲状腺、小肠和子宫中检测到蛋白水平下的NaPi2b表达。NaPi2b中的突变与肺泡和睾丸微结石症的临床综合征相关。NaPi2b在非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非粘液性卵巢癌和乳头状甲状腺癌中高度表达。NaPi2b阳性组织免疫反应性存在于61%的NSCLC和92%的卵巢癌样本中。

卵巢癌为最常见的妇科恶性肿瘤之一和女性中第五大最常见的癌症死亡原因。高死亡率部分地是由于经常在晚期时诊断出卵巢癌，并且死亡率为发病率的约65%。卵巢上皮性肿瘤占所有卵巢肿瘤的58%和超过卵巢恶性肿瘤的90%。减瘤手术和基于铂的联合化疗(包括紫杉烷类)为当前的治疗模式；然而，大多数患有复发性上皮性卵巢癌的患者最终均死于该疾病。在卵巢癌中需要新型的治疗模式，包括靶向疗法，比如用单克隆抗体的免疫疗法或基于癌症疫苗的方法。

NSCLC为除小细胞肺癌(SCLC)以外的任何类型的上皮性肺癌。NSCLC占所有肺癌的约85%。作为一个类别，与小细胞癌相比较，NSCLC对化学疗法相对不敏感。当可能的时候，它们主要通过意图治愈的手术切除进行治疗，尽管化学疗法越来越多地在手术前(新辅助化学疗法)和手术后(辅助化学疗法)两者使用。在转移性或非手术性环境下，使用化学疗法和/或免疫疗法，尽管处于该阶段的疾病在很大程度上是无法治愈的，并且存活时间仍然很短。在NSCLC中需要新型的治疗模式，包括靶向疗法，比如用单克隆抗体的免疫疗法或基于癌症疫苗的方法。

因此，需要靶向NaPi2b的生物活性的疗法。

发明概述

在各个方面，本发明提供通过给予受试者NaPi2b靶向的完全人类或人源化抗体聚合物-药物缀合物来治疗受试者中表达NaPi2b的肿瘤的方法。通过在治疗的第一天和之后每3周以约10 mg/m

在另一方面，本发明提供通过在治疗的第一天和之后每4周以约10 mg/m

优选地，剂量为约10 mg/m

NaPi2b抗体含有具有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的CDRH1、具有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)的CDRH2、具有氨基酸序列GETARATFAY (SEQID NO: 7)的CDRH3、具有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的CDRL1、具有氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的CDRL2和具有氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)的CDRL3；

聚合物-药物缀合物含有式A：

其中：

聚合物包含分子量在约5 kDa-约10 kDa范围内的聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-缩甲醛) (PHF)；

m为20-75的整数，

m

m

m

m

m、m

m

受试者为人类受试者。在某些方面，受试者被鉴定为具有NaPi2b表达，如通过对从受试者获得的测试细胞群体进行的IHC分析所检测的。在其他方面，受试者被鉴定为具有NaPi2b表达，如通过从受试者获得的样品中的RNA表达或基因标签所检测的。

在某些方面，表达NaPi2b的肿瘤为卵巢癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、乳头状甲状腺癌、子宫内膜癌、胆管癌、乳头状肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳腺癌、肾癌、宫颈癌或唾液腺导管癌。

在仍然另一方面，受试者患有上皮性卵巢癌、输卵管癌、原发性腹膜癌、铂类耐药性卵巢癌、非鳞状NSCLC癌症、进行性、放射性碘难治性、局部区域复发性或转移性疾病乳头状甲状腺癌或上皮性子宫内膜癌。

在仍然另一方面，患有上皮性卵巢癌的受试者被亚型化为高级别卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌或透明细胞卵巢癌。

在仍然另一方面，患有卵巢癌的受试者已经接受了先前的单一药物化学疗法，比如聚乙二醇化的脂质体多柔比星，每周用紫杉醇拓扑替康吉西他滨、PARP抑制剂等治疗。

在仍然另一方面，患有卵巢癌的受试者已经接受了不超过3线的先前疗法线，比如包括(但不限于)化学疗法组合，比如卡铂+紫杉醇、聚乙二醇化的脂质体多柔比星，每周用紫杉醇、多西他赛、托泊替康、吉西他滨、PARP抑制剂等治疗。在另一方面，患有NSCLC癌症的受试者被亚型化为腺癌。

在另一方面，受试者患有NSCLC并且已经接受了比如用基于铂的化学疗法(顺铂或卡铂)和PD-1或PD-L1单克隆抗体的先前治疗。在另一方面，受试者患有NSCLC并且已经接受了用卡铂/紫杉醇、abraxane白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)、多西他赛、培美曲塞、吉西他滨或多西他赛和雷莫芦单抗(ramucirumab)的组合的先前治疗。

在另一方面，受试者患有NSCLC并且尚未接受另外的用细胞毒剂的先前治疗或尚未接受免疫疗法。在另一方面，患有NSCLC的受试者具有记录的不耐受性或疾病进展和对其存在批准的疗法的已知致癌突变(例如ALK易位、EGFR突变)。

在另一方面，患有NSCLC癌症的受试者用式A的聚合物-药物缀合物和PD-1或PD-L1单克隆抗体，比如纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)或阿维鲁单抗(avelumab)治疗。

在另一方面，受试者患有对先前的激酶抑制剂疗法具有耐药性或不耐受性的乳头状甲状腺癌，或者已经接受了针对低级别、激素受体阳性的子宫内膜样腺癌的先前治疗。

在另一方面，子宫内膜癌不是间质瘤或癌肉瘤。

在另一方面，受试者患有子宫内膜癌并且已经接受了用卡铂/紫杉醇或类似方案的先前治疗。

在另一方面，受试者患有具有主要乳头状生长模式的乳头状肾细胞癌或肾透明细胞癌。一方面，受试者具有在标准全身疗法之后已经进展的唾液腺导管癌的组织学诊断。

在仍然另一方面，受试者对化学疗法(包括标准的一线化学治疗剂)为难治性的。

在另一方面，受试者用式A的聚合物-药物缀合物与以下的组合进行治疗：PARP抑制剂比如奥拉帕尼(olaparib)、尼拉帕尼(niraparib)、鲁卡帕尼(rucaparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)等；PD1/PDL-1抑制剂，比如纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)等；化学疗法，比如卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、doxil、环磷酰胺(cyclophosphamide)、吉西他滨(gemcitabine)、托泊替康(topotecan)、培美曲塞(premetrexed)等；VEGF抑制剂，比如贝伐珠单抗(bevacizumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)等；酪氨酸激酶抑制剂，比如吉非替尼(gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、达克替尼(dacomitinib)、奥希替尼(osimertinib)、帕唑帕尼(pazopanib)等；ALK抑制剂，比如阿来替尼(alectinib)、克唑替尼(crizotinib)、色瑞替尼(certinib)、布加替尼(brigatinib)等；或BRAF抑制剂，比如达拉非尼(dabrafenib)、曲美替尼(trametinib)等。

在另一方面，受试者用式A的聚合物-药物缀合物与派姆单抗、卡铂、doxil、贝伐珠单抗或PARP抑制剂的组合进行治疗。除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在说明书中，单数形式也包括复数，除非上下文另外明确规定。尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可用于本发明的实践或测试中，但是以下描述合适的方法和材料。在冲突的情况下，以本说明书包括定义为准。另外，材料、方法和实例仅为说明性的，并且不旨在为限制性的。

根据以下详述和权利要求，本发明的其他特征和优点将为显而易见的。

附图简述

图1为一个游泳者曲线图(swimmers plot)，概述通过DL6、21天周期的所有患者(n= 19)和28天周期中给药的4名患者(n = 4)的研究时间的详细信息。

图2为一个“瀑布图”，显示按RECIST标准的迄今进行了至少一次扫描的21天治疗周期中DL1-DL5患者的最佳反应。

图3显示在21天治疗周期中患者(n=11)的最佳总体反应。

图3显示在21天治疗周期中患者(n=11)的最佳总体反应。

图4为一个“瀑布图”，显示按RECIST标准的在21天周期和28天周期中给药且迄今进行了至少一次扫描的患者的最佳反应。

图5为一个“游泳者曲线图”，概述通过DL6、21天周期的患者(n=20)和在28天周期中给药的DL 4A和DL 5A患者(n=16)的研究时间的详细信息。

图6显示从来自34个患者肿瘤样品的通过IHC的NaPi2b蛋白表达获得的H评分。y轴显示NaPi2b H评分和x轴显示肿瘤类型。

图7为一个“游泳者曲线图”，概述通过DL6、21天周期的患者(n=20)和在28天周期中给药的DL 4A和DL 5A患者(n=17)的研究时间的详细信息。

图8为一个“游泳者曲线图”，概述7个剂量水平(2-40 mg/m

详述

本公开提供通过给予与SLC34A2的细胞外区域特异性地结合的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物来治疗表达NaPi2b的癌症的方法。具体地讲，本发明提供XMT-1536在治疗表达NaPi2b的癌症中的给药方案。XMT-1536包含约10-15个分子的经聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-缩甲醛) (PHF)支架与NaPi2b单克隆抗体(XMT-1535)的半胱氨酸部分缀合的澳瑞他汀F-羟丙基酰胺(AF HPA)。

在剂量递增研究中，患有表达NaPi2b的卵巢癌、NSCLC、乳头状甲状腺癌、子宫内膜癌、乳头状肾细胞癌或唾液腺导管癌的患者每3周静脉内给予XMT-1536。根据RECIST 1.1版，用至少12 mg/m

在剂量递增研究中，患有表达NaPi2b的卵巢癌、NSCLC、乳头状甲状腺癌、子宫内膜癌、乳头状肾细胞癌或唾液腺导管癌的患者每4周静脉内给予XMT-1536，输注剂量在约20-45 mg/m

在某些方面，受试者已被鉴定为具有NaPi2b表达。通过本领域已知的方法检测NaPi2b表达。例如，通过免疫组织化学(IHC)分析、荧光原位杂交(FISH)测定或RNA表达分析。

NaPi2b抗体

适合于本公开方法的NaPi2b抗体与SLC34A2的细胞外区域特异性地结合。本公开进一步提供NaPi2b靶向的单克隆抗体，其特异性地识别NaPi2b，也称为钠依赖性磷酸盐转运蛋白2B。本文公开的缀合物中使用的NaPi2b抗体能够并且可用于调节例如阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b的至少一种生物活性。本文公开的抗体还包括结合可溶性NaPi2b的抗体。NaPi2b抗体与人类NaPi2b的细胞外区域(ECD)上的表位特异性地结合。这些抗体在本文中统称为“NaPi2b”抗体。

本文提供的NaPi2b抗体-药物缀合物包含与NaPi2b表位结合的抗体，平衡解离常数(K

本文提供的NaPi2b抗体-药物缀合物可包含用于调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b的功能活性的抗体。NaPi2b的功能活性包括例如参与跨细胞无机磷酸盐(Pi)的吸收，从而助于维持磷酸盐的体内稳态。例如，NaPi2b抗体通过部分或完全地调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰跨细胞无机磷酸盐的吸收来完全或部分地抑制NaPi2b的功能活性。使用任何领域公认的用于检测跨细胞无机磷酸盐吸收活性的方法来评价跨细胞无机磷酸盐的吸收活性，包括(但不限于)在存在和不存在本文公开的抗NaPi2b抗体的情况下检测跨细胞无机磷酸盐吸收的水平。

当与不存在与本文所述的NaPi2b抗体结合的情况下的NaPi2b功能活性水平相比较，在存在NaPi2b抗体的情况下的NaPi2b功能活性水平降低至少95%，例如96%、97%、98%、99%或100%时，认为NaPi2b抗体完全调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b的功能活性。当与不存在与本文所述的NaPi2b抗体结合的情况下的NaPi2b活性水平相比较，在存在NaPi2b抗体的情况下的NaPi2b活性水平降低小于95%，例如10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或90%时，认为NaPi2b抗体部分地调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b的功能活性。

本文公开的示例性抗体包括XMT-1535抗体。这些抗体对人类NaPi2b显示出特异性，并且已显示出其抑制NaPi2b的活性。

NaPi2b人类或人源化单克隆抗体XMT-1535包含重链(HC)、重链可变区(VH)、轻链(LC)和轻链可变区(VL)，如以下所示的氨基酸和相应的核酸序列所示。每个抗体的可变重链区和可变轻链区在以下氨基酸序列中标有阴影。重链和轻链的互补决定区(CDR)在以下所示的氨基酸序列中标有下划线。包含XMT-1535抗体的互补决定区(CDR)的氨基酸如由E.A. Kabat等人 (参见Kabat, E.A.,等人, Sequences of Protein of immunologicalinterest, 第5版, US Department of Health and Human Services, US GovernmentPrinting Office (1991))定义，并在美国专利8,603,474中公开。

> XMT-1535重链氨基酸序列(重链可变区(SEQ ID NO: 3) (斜体) + IgG1重链恒定区(SEQ ID NO: 11))

CDRH1: GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)

CDRH2: AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)

CDRH3: GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)

> XMT-1535重链可变区核酸序列

CAAGTTCAGCTGGTTCAGTCTGGCGCCGAGGTTGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGGCTACAACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGACTCGAATGGATCGGAGCCATCTATCCCGGCAACGGCGACACCAGCTACAAGCAGAAGTTCCGGGGCAGAGCCACACTGACCGCCGATACAAGCACCAGCACCGTGTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTATTGCGCCAGAGGCGAAACAGCCAGAGCCACCTTTGCCTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTTAGCTCT (SEQ ID NO: 13)

> XMT-1535轻链氨基酸序列(轻链可变区(SEQ ID NO: 4) (斜体) +轻链恒定区(SEQ ID NO: 12))

CDRL1: SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)

CDRL2: YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)

CDRL3: QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)

> XMT-1535轻链可变区核酸序列

GATATTCAGATGACACAGAGCCCCAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGACAGAGTGACCATCACCTGTAGCGCCAGCCAGGATATCGGCAACTTCCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCCGGCAAGACCGTGAAGGTGCTGATCTACTACACCTCCAGCCTGTACAGCGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTACACCCTGACCATATCTAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCAAGCTGCCCCTGACATTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAACTGAAG (SEQ ID NO: 14)

本公开中还包括结合于与本文所述的抗体相同的表位或交叉竞争结合于相同表位的抗体。例如，本文公开的抗体与NaPi2b特异性地结合，其中抗体与包含人类NaPi2b (例如GenBank登录号O95436.3)上的一个或多个氨基酸残基的表位结合。

本文公开的抗体与包含以下氨基酸序列的全长人类NaPi2b上的表位特异性地结合：

本文公开的抗体与人类NaPi2b的细胞外结构域(ECD)上的表位特异性地结合。

本领域技术人员将认识到，可通过确定单克隆抗体是否阻止本文公开的单克隆抗体(例如XMT-1535、10H1.11.4B)与天然结合配偶体或已知与NaPi2b相关的其他分子结合来确定前者是否具有与后者相同的特异性而无需过度实验。如果所测试的单克隆抗体与本文公开的单克隆抗体竞争，如本文公开的单克隆抗体的结合减少所示，则两种单克隆抗体与相同或密切相关的表位结合。

用于确定单克隆抗体是否具有本文公开的单克隆抗体的特异性的一种备选方法为将本文公开的单克隆抗体与可溶性NaPi2b (通常与之反应)一起进行预温育，并然后添加所测试的单克隆抗体以确定所测试的单克隆抗体结合NaPi2b的能力是否受到抑制。如果所测试的单克隆抗体受到抑制，则其极有可能与本文公开的单克隆抗体具有相同或在功能上等同的表位特异性。

还可例如通过测量NaPi2b介导的活性并确定测试单克隆抗体是否能够调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b活性来进行本文公开的单克隆抗体的筛选。

本文公开的抗体含有具有与选自SEQ ID NO: 3的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的重链可变区和具有与选自SEQ ID NO: 4的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有与SEQ ID NO: 1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的重链氨基酸序列和与SEQ IDNO: 2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的轻链氨基酸序列。

本文公开的抗体含有具有与选自SEQ ID NO: 3的序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的重链可变区和具有与选自SEQ ID NO: 4的序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有与SEQ ID NO: 1的氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO: 2的氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有SEQ ID NO: 3的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO: 4的轻链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有SEQ ID NO: 1的重链氨基酸序列和SEQID NO: 2的轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有SEQ ID NO: 5的CDRH1氨基酸序列、SEQID NO: 6的CDRH2氨基酸序列、SEQ ID NO: 7的CDRH3氨基酸序列、SEQ ID NO: 8的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO: 9的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO: 10的CDRL3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有与氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO:5)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列；含有与氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRH2；含有与氨基酸序列GETARATFAY(SEQ ID NO: 7)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRH3；含有与氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL1；含有与氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL2；和含有与氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL3。

在一些实施方案中，本文公开的抗体含有与氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO:5)具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列；含有与氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRH2；含有与氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)具有至少具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRH3；含有与氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL1；含有与氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL2；和含有与氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的CDRL3。

在某些实施方案中，本文公开的抗体在可变结构域序列包含一个或多个保守性氨基酸取代，比如可变结构域序列中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多个保守性取代。在一些实施方案中，这些保守性氨基酸取代在CDR区域中，例如在所有CDR上累积进行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多个保守性取代，并且在一些特定实施方案中，在每个CDR序列(例如SEQ ID NO: 5-10)中可存在最多1、2、3或4个保守性氨基酸取代。

本领域技术人员将认识到，可通过确定单克隆抗体是否阻止单克隆抗体XMT-1535与天然结合配偶体或已知与NaPi2b相关的其他分子结合来确定前者是否具有与后者相同的特异性而无需过度实验。如果所测试的单克隆抗体与本文公开的单克隆抗体竞争，如本文公开的单克隆抗体的结合减少所示，则两种单克隆抗体与相同或密切相关的表位结合。

用于确定单克隆抗体是否具有本文公开的单克隆抗体的特异性的一种备选方法为将本文公开的单克隆抗体与可溶性NaPi2b (通常与之反应)一起进行预温育，并然后添加待测试的单克隆抗体以确定所测试的单克隆抗体结合NaPi2b的能力是否受到抑制。如果所测试的单克隆抗体受到抑制，则其极有可能与本文公开的单克隆抗体具有相同或在功能上等同的表位特异性。

还可例如通过测量NaPi2b介导的活性并确定测试单克隆抗体是否能够调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和或者以其他方式干扰NaPi2b的活性来进行本文公开的单克隆抗体的筛选。

可通过众所周知的技术，例如WO 2009/097128、WO 2017/160754和US 16/136,706(其每一个通过参考以其全部结合至本文中)产生和纯化适用于本文公开的方法的NaPi2b抗体。

NaPi2b靶向的聚合物抗体药物缀合物

本发明涉及包括免疫缀合物的疗法，免疫缀合物包含经聚合物支架与细胞毒剂比如毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段)缀合的抗体。

本文所述的缀合物包含连接于一个或多个携带AF-HPA的聚合物支架的NaPi2b抗体，聚合物支架独立地包含分子量在约5 kDa-约10 kDa范围内的聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-缩甲醛) (PHF)。携带AF-HPA的聚合物支架经NaPi2b半胱氨酸残基与NaPi2b靶向的抗体缀合。

具体地讲，NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物为XMT-1536，并具有式(A)：

式A

其中：

聚合物包含分子量在约5 kDa-约10 kDa范围内的聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-缩甲醛) (PHF)；

m为20-75的整数，

m

m

m

m

m、m

m

NaPi2b为本文所述的完全人类或人源化NaPi2b抗体XMT1535。

在一些实施方案中，m为约30-约75的整数。

在一些实施方案中，m为约30-约40的整数。

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，m

在一些实施方案中，NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物包含10-15个AF-HPA分子。

在一些实施方案中，PHF的分子量在约6 kDa-约8 kDa的范围内。

在一些实施方案中，PHF的分子量在约6 kDa-约7 kDa的范围内。

在某些实施方案中，NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物式(A)具有式(B)，其中聚合物为分子量在约5 kDa-约10 kDa范围内的PHF：

(B)

其中：

m为30-约35的整数，

m

m

m

m

m

PHF与抗体之间的比率为约3-约5。

可通过众所周知的技术，例如WO 2009/097128、WO 2017/160754、PCT/US18/38988和US 16/136,706 (其每一个通过参考以其全部结合至本文中)产生和纯化适用于本文公开的方法的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物(即XMT-1536)。

剂量和给予

以足以发挥治疗有用作用的量给予本文提供的含有NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物的癌症疗法。一般地，以不会导致所治疗患者的不良副作用或使观察到的副作用最小化或减少的量给予活性剂。表达NaPi2b的癌症包括例如卵巢癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、乳头状甲状腺癌、子宫内膜癌、胆管癌、乳头状肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳腺癌、肾癌、宫颈癌和唾液腺导管癌。

确定活性剂的精确量处于本领域技术人员水平的范围内，活性剂包括要给予受试者的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物。例如，这种试剂和用于治疗癌症和实体瘤的用途为本领域众所周知的。因此，可基于在给定的给予途径下该试剂的标准给药方案来选择这种试剂的剂量。

应当理解，治疗的精确剂量和持续时间为所治疗的组织或肿瘤的函数，并且可使用已知的测试方案凭经验确定，或者通过从体内或体外测试数据外推凭经验确定和/或可从特定试剂的已知给药方案确定。应当注意的是，浓度和剂量值还可随所治疗个体的年龄、个体的重量、给予途径和/或疾病的程度或严重性以及处于熟练医学从业者水平要考虑的范围内的其他因素而变化。通常，选择剂量方案以限制毒性。应该注意的是，主治医师会知道如何以及何时由于毒性或者骨髓、肝脏或肾脏或其他组织功能障碍引起的终止、中断或调整疗法至较低剂量。相反，如果临床反应不充分(排除毒性副作用)，主治医师也将知道如何以及何时将治疗调整到更高的水平。应当进一步理解，对于任何特定的受试者，应根据个体需要和给予或指导制剂给予的人员的专业判断，随着时间的推移调整具体的剂量方案，并且本文列出的浓度范围仅为示例性的，并且不意指限制其范围。

例如，以治疗有效量给予NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物以减小肿瘤体积。

给予用于治疗疾病或病症例如癌症或实体瘤的量的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物，可通过标准临床技术确定。另外，可采用体外测定和动物模型来帮助确定最佳剂量范围。可凭经验确定的精确剂量可取决于给予途径、待治疗的疾病类型和疾病的严重性。

本文提供的缀合物静脉内给予。对于静脉内给予，可通过推注或快速推注、通过输注或经其组合来给予缀合物。输注时间可为约1分钟-3小时，比如约1分钟-约2小时，或约1分钟-约60分钟，或至少10分钟、40分钟或60分钟。

剂量在约10 mg/m

或者，剂量在约10 mg/m

或者，剂量在约10 mg/m

或者，剂量在约10 mg/m

或者，剂量在约10 mg/m

给予的频率和时机以及剂量可在给予的周期中定期给予，以在期望的时间长度内保持活性剂的连续和/或长期作用。所提供的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物的组合物可每小时、每天、每周、每月、每年或一次性给予。给予周期的时间长度可凭经验确定，并且取决于待治疗的疾病、疾病的严重性、特定患者以及治疗医师技术水平范围内的其他考虑因素。本文提供的联合疗法的治疗时间长度可为一周、两周、一个月、几个月、一年、几年或更长时间。

例如，NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物的给予频率为每天一次、隔天一次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。在治疗过程期间，剂量可分为多个给予周期。例如，NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物可在约1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年或更长时间段内以一定频率给予。给予频率在整个周期时间段内可以相同，也可以不同。例如，示例性的剂量频率至少在给予周期的第一周为每周两次。在第一周之后，频率可继续每周两次，可增加至多于每周两次，或者可减少至不多于每周一次。基于所给予的特定剂量、所治疗的疾病或病症、疾病或病症的严重性、受试者的年龄和其他类似因素确定特定的剂量频率和给予周期处于技术人员水平的范围内。

如果疾病症状在不存在中断治疗的情况下持续存在，则可继续治疗额外的时间长度。在治疗过程中，可监测疾病和/或治疗相关的毒性或副作用的证据。

可定制NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物的给予周期来增加中断治疗的时间段，以提供免于暴露于试剂的休息时间。中断治疗的时间长度可为预定的时间，或者可根据患者如何反应或根据所观察到的副作用凭经验确定。例如，可将治疗中断一周、两周、三周、一个月或几个月。通常，中断治疗的时间段被建立到患者的给药方案周期中。

示例性的给药方案为21天或28天的治疗周期或者给予周期。优选地，给药方案为治疗周期或者给予周期为28天。本文公开的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物在第1天给予，然后20天不给药，或者在第1天给予，然后27天不给药。确定给予的精确周期和给药时间表处于本领域技术人员水平的范围内。

如上所述，给予周期可持续任何期望的时间长度。因此，可重复21天给予周期或28天给予周期持续任何时间长度。例如，可重复21天给予周期或28天给予周期持续2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1.5年、2年、2.5年、3年或更长时间。根据特定于待治疗的患者和疾病的个人考虑，采用满足患者需要的给予周期和给药方案处于治疗医师技术水平的范围内。

NaPi2b表达的测量

在各个方面，本发明提供一种用于通过测量从患者获得的肿瘤样品中NaPi2b表达的状态来鉴定适合于NaPi2b靶向疗法的癌症患者或监测治疗方案的方法。

在一些实施方案中，NaPi2b诊断测试可用于鉴定用于以NaPi2b靶向的聚合物药物缀合物治疗的受试者。

样品源自患有癌症的受试者。从自受试者取出或获得的组织中解剖癌细胞样品。在一些实施方案中，样品为新鲜、冷冻的或档案活检样品。

在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检样品的新鲜、未冷冻的组织。在其他实施方案中，测试细胞群体源自原发性或转移性部位。在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检或手术样品的新鲜或冷冻组织或者腹水或胸膜液。在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检或手术样品的固定组织(例如福尔马林固定或福尔马林固定石蜡包埋(FFPE))、或源自流体样本的细胞块。组织样品可为冷冻或新鲜的。

NaPi2b表达的必需水平可为通过本领域已知的任何方法，并且更具体地讲通过本文所述的方法鉴定的水平。例如，NaPi2b表达的水平可通过使用特异性地识别NaPi2b的抗体进行针对蛋白表达的已知的免疫学测定，比如酶免疫测定、放射免疫测定、竞争性免疫测定、双抗体夹心测定、荧光免疫测定、ELISA、Western印迹技术、凝集测定、细胞荧光光度术(例如流式细胞术)、荧光原位杂交(FISH)、比色法或免疫组织化学染色测定(IHC) 来测量。基于细胞的测定，比如流式细胞术(FC)、免疫组织化学(IHC)、RNA表达分析或免疫荧光(IF)在确定NaPi2b表达状态时特别合乎期望，因为这种测定形式为临床上合适的。

流式细胞术(FC)可用于确定在用药物治疗之前、期间和之后肿瘤样品中NaPi2b的细胞表面表达。例如，如果需要，可通过流式细胞术分析肿瘤细胞的NaPi2b表达以及鉴定癌细胞类型的标志物等。流式细胞术可根据标准方法进行。参见例如Chow等人, Cytometry(Communications in Clinical Cytometry) 46: 72-78 (2001)。简而言之并且举例来说，可采用以下用于细胞计数分析的方案：细胞在37℃下用2%多聚甲醛固定10分钟，然后在冰上于90%甲醇中透化30分钟。然后细胞可用NaPi2b特异性抗体染色，洗涤并用荧光标记的二级抗体标记。然后根据所使用仪器的具体方案在流式细胞仪(例如Beckman CoulterFC500)上分析细胞。这种分析将鉴定肿瘤中表达的NaPi2b的水平。

免疫组织化学(IHC)染色也可用于确定在用药物治疗之前、期间和之后肿瘤样品中NaPi2b的表达。IHC可根据众所周知的技术进行。参见例如ANTIBODIES; A LABORATORYMANUAL, 第10章, Harlow & Lane Eds., Cold Spring Harbor Laboratory (1988)。简而言之并且举例来说，通过以下制备用于免疫组织化学染色的石蜡包埋的组织(例如来自活检的肿瘤组织)：先后用二甲苯和乙醇使组织切片脱蜡；在水中然后在PBS中水合；通过在枸橼酸钠缓冲液中加热载玻片来暴露抗原；在过氧化氢中温育切片；在封闭溶液中封闭；在一级多肽抗体和二级抗体中温育载玻片；和最后根据制造商的说明书使用ABC亲和素/生物素方法进行检测。

免疫荧光(IF)测定也可用于测定在用药物治疗之前、期间和之后肿瘤样品中NaPi2b的表达。IF可根据众所周知的技术进行。参见例如J. M. Polak和S. Van Noorden(1997) INTRODUCTION TO IMMUNOCYTOCHEMISTRY, 2nd Ed.; ROYAL MICROSCOPY SOCIETYMICROSCOPY HANDBOOK 37, BioScientific/Springer-Verlag。简而言之并且举例来说，患者样品可先后在多聚甲醛和甲醇中固定，用封闭溶液(例如马血清)封闭，先后与针对多肽的一级抗体和用荧光染料(比如Alexa 488)标记的二级抗体一起温育，并用落射荧光显微镜(epifluorescent microscope)进行分析。

可将上述测定中采用的抗体有利地与荧光染料(例如Alexa488，PE)或其他标记(比如量子点)缀合，以与其他信号转导(磷酸化AKT、磷酸化Erk 1/2)和/或细胞标志物(细胞角蛋白)抗体一起用于多参数分析中。

在一个优选的实施方案中，通过免疫组织化学确定来自肿瘤的样品中NaPi2b的表达。在另一个实施方案中，使用US 16/136,706 (其通过参考以其全部结合至本文中)中描述的方法免疫组织化学(IHC)确定来自肿瘤的样品中NaPi2b的表达。

或者，该测定可包括从样品制备RNA，任选地用于PCR (聚合酶链反应)或其他分析方法中。PCR方法任选地为例如RT-PCR (逆转录PCR)或定量PCR，比如实时RT-PCR、RNA seq等。或者，可通过使用阵列，比如相关领域中已知的微阵列，比如纳米串技术来进行测定。

患者鉴定为对治疗有反应，其中通过检测和/或测量样品中NaPi2b的表达水平来监测治疗或检测癌症。

通过计算NaPi2b评分来确定NaPi2b表达水平的检测/测量。NaPi2b评分为定量的或半定量的。例如，对检测进行病理评分以得出病理评分。考虑本领域中已知的任何评分方法均可用于本发明的方法中。特别地，本领域已知的任何组织学评分方法。

用于评价通过免疫组织化学染色测定获得的测量结果的方法包括例如H评分法。H评分由以下计算公式确定(Am J Clin Pathol. 1988; 90 (3): 233-9)。H评分= ((在<1+时的%) X 0) + ((在1+时的%)X 1) + ((在2+时的%) X 2) + ((在3+时的%) X3)，其中染色强度0为未染色；染色强度1为弱染色；染色强度2为中等染色；和染色强度3为强染色。

在通过H评分法的评价中，仅使用癌细胞部分。 对于染色强度的阴性或阳性对照，可采用福尔马林固定石蜡包埋的细胞系或异种移植物(其蛋白表达水平预先已知的系)。当没有对照样本时，同时评价多个样本以确认样本染色强度的总体分布，并然后可设定染色强度。

除H评分法之外，也可使用本领域已知的其他评分方法，比如Allred方法(Harvey,等人 Journal of Clinical Oncology 17, No. 5 (1999年5月) 1474-1474)。截止点需要在每种方法中进行设定。Allred评分=阳性细胞百分比的评分+染色强度评分。

本公开还提供试剂盒和/或方法，用于通过在用本文公开的NaPi2b靶向的抗体-药物缀合物治疗之前鉴定受试者的NaPi2b评分来鉴定或者以其他方式提炼(例如分层)适合于治疗性给予本文公开的NaPi2b-靶向的抗体-药物缀合物的患者群体。在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检样品的新鲜、未冷冻的组织。在一些实施方案中，测试细胞群体源自原发性或转移性部位。在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检或手术样品的冷冻组织或者腹水或胸膜液。在一些实施方案中，测试细胞群体源自来自活检或手术样品的固定组织(例如福尔马林固定)。IHC测试可测量癌症组织样品中细胞表面上NaPi2b受体蛋白的量。

定义

除非另外定义，否则与本公开结合使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另外要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。通常，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学以及蛋白和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交结合使用的命名法和技术为本领域众所周知和常用的那些。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质转染)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书或如本领域通常完成的或如本文所述的进行。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法和如本说明书通篇引用和讨论的各种一般性和更具体的参考文献中所述来进行。参见例如Sambrook等人 Molecular Cloning: A LaboratoryManual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))。本文描述的与分析化学、合成有机化学以及医药和药物化学结合使用的命名法以及实验室程序和技术为本领域众所周知和通常使用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。

如根据本公开使用的，除非另外指明，否则以下术语应理解为具有以下含义：

如本文使用的术语“NaPi2b”(也称为钠依赖性磷酸盐转运蛋白2B、SLC34A2、NaPiIIb、Npt2、Na(+)依赖性磷酸盐共转运蛋白2B；钠/磷酸盐共转运蛋白2B；Na(+)/Pi共转运蛋白2B；NaPi3b；溶质载体家族34成员2)当在本文中使用时，是指人类NaPi2b (例如GenBank登录号O95436.3)，并且包括由细胞(包括肿瘤细胞)天然表达或在用NaPi2b基因转染的细胞上表达的NaPi2b的任何变体、同种型和物种同源物。这些术语为同义词，并且可互换使用。

如本文使用的术语“NaPi2b抗体”或“抗NaPi2b抗体”为与SLC34A2的细胞外区域特异性地结合的抗体。

当本文中在两种或更多种抗体的情况下使用时，术语“与……竞争”或“与……交叉竞争”表示两种或更多种抗体竞争结合于NaPi2b，例如在任何领域公认的测定中竞争NaPi2b结合。如果抗体与一种或多种其他抗体竞争25%或更多，则抗体“阻断”或“交叉阻断”一种或多种其他抗体与NaPi2b的结合，其中25%-74%代表“部分阻断”和75% -100%代表“完全阻断”，如使用任何领域公认的测定确定的。对于某些抗体对，只有在将一种抗体包被于平板上和将另一种抗体用于竞争时才观察到在任何领域公认的测定中的竞争或阻断，并且并非反之亦然。除非由上下文另外定义或否定，否则在本文中使用时，术语“与……竞争”、“与……交叉竞争”、“阻断”或“交叉阻断”也旨在涵盖这种抗体对。

如本文使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即含有特异性地结合抗原(与之免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性地结合”或“与……免疫反应”或“针对”意指抗体与期望的抗原的一个或多个抗原决定簇反应而不与其他多肽反应或以低得多的亲和力结合(K

已知基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25 kDa)和一条“重”链(约50-70 kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100-110或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分定义主要负责效应子功能的恒定区。通常，从人类获得的抗体分子涉及类别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任何一种，其通过分子中存在的重链性质而彼此不同。某些类别也具有子类别，比如IgG

如本文使用的术语“单克隆抗体”(mAb)或“单克隆抗体组合物”是指仅含有由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成的抗体分子的一个分子种类的抗体分子群体。特别地，单克隆抗体的互补决定区(CDR)在群体的所有分子中均为相同的。mAb含有能够与抗原的特定表位免疫反应的抗原结合位点，其特征为对其具有独特的结合亲和力。

通常，从人类获得的抗体分子涉及类别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任何一种，其通过分子中存在的重链性质而彼此不同。某些类别也具有子类别，比如IgG

术语“抗原结合位点”或“结合部分”是指免疫球蛋白分子中参与抗原结合的部分。抗原结合位点由重(“H”)链和轻(“L”)链的N-末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。称为“高变区”的在重链和轻链的V区内的3个高度相异的片段插入在称为“框架区”或“FR”的更为保守的侧翼片段之间。因此，术语“FR”是指天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间和与之邻近的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的3个高变区和重链的3个高变区在三维空间中相对于彼此布置，以形成抗原结合表面。抗原结合表面与结合抗原的三维表面互补，并且每条重链和轻链的3个高变区称为“互补决定区”或“CDR”。氨基酸对每个结构域的分配根据KabatSequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes ofHealth, Bethesda, Md. (1987 and 1991))或Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia等人 Nature 342:878-883 (1989)定义。

如本文使用的术语“表位”包括能够与免疫球蛋白或其片段或T细胞受体特异性结合的任何蛋白决定簇。术语“表位”包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的任何蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面分组比如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。当解离常数≤1 μM，例如≤100 nM，优选地≤10 nM和更优选地≤1 nM时，据说抗体特异性地结合抗原。

术语“多肽”在本文中用作通用术语，是指多肽序列的天然蛋白、片段或类似物。因此，天然蛋白片段和类似物为多肽属的种类。如本文使用的术语“天然存在的”当应用于物体时是指物体可存在于自然界的事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中的可从自然界中的来源分离并且未在实验室中人为地有意地进行修饰或者以其他方式天然存在的多肽或多核苷酸序列。

以下术语用于描述两个或更多个多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系：“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“显著同一性”。“参考序列”为用作序列比较的基础的所定义序列，参考序列可为较大序列的子集，例如作为序列表中给出的全长cDNA或基因序列的区段，或者可包含完整的cDNA或基因序列。通常，参考序列的长度为至少18个核苷酸或6个氨基酸，通常长度为至少24个核苷酸或8个氨基酸，并且经常长度为至少48个核苷酸或16个氨基酸。由于两个多核苷酸或氨基酸序列可各自(1) 包含在两个分子之间相似的序列(即完整的多核苷酸或氨基酸序列的一部分)，和(2) 可进一步包含在两个多核苷酸或氨基酸序列之间相异的序列，两个(或更多个)分子之间的序列比较一般地通过在“比较窗口”中比较两个分子的序列以鉴定和比较序列相似性的局部区域来进行。如本文使用的“比较窗口”是指至少18个邻接核苷酸位置或6个氨基酸的概念性区段，其中多核苷酸序列或氨基酸序列可与至少18个邻接核苷酸或6个氨基酸序列的参考序列进行比较，并且其中比较窗口中的多核苷酸序列部分可包含与参考序列(不包含添加或缺失)相比较20%或更少的添加、缺失、取代等(即缺口)以用于两个序列的最佳比对。用于比对比较窗口的序列的最佳比对可通过以下来进行：Smith和Waterman Adv. Appl. Math. 2:482(1981)的局部同源性算法、Needleman和Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)的同源比对算法、Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)的相似性搜索方法、这些算法的计算机化实施(Wisconsin Genetics Software Package Release7.0 (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.)、Geneworks或MacVector软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或检查，并且选择由各种方法生成的最佳比对(即在比较窗口中导致最高的同源性百分比)。

术语“序列同一性”意指两个多核苷酸或氨基酸序列在比较窗口中为相同的(即在逐个核苷酸或逐个残基的基础上)。术语“序列同一性的百分比”通过以下进行计算：在比较窗口中比较两个最佳比对的序列，确定两个序列中出现相同的核酸碱基(例如A、T、C、G、U或I)或残基的位置数以得到匹配的位置数，将匹配的位置数除以比较窗口中的位置总数(即窗口大小)，并将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。如本文使用的术语“显著同一性”表示多核苷酸或氨基酸序列的特征，其中多核苷酸或氨基酸包含在至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置的比较窗口中，通常在至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置的窗口中，与参考序列相比较具有至少85%的序列同一性，优选地至少90%-95%的序列同一性，更通常地至少99%的序列同一性的序列，其中通过将参考序列与可能在比较窗口中包含共计参考序列的20%或更少的缺失或添加的序列进行比较来计算序列同一性的百分比。参考序列可为较大序列的子集。

如本文使用的20种常规氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology - ASynthesis (第2版, E.S. Golub和D.R. Green编辑, Sinauer Associates, Sunderland7Mass. (1991))。20种常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)、非天然氨基酸(比如α-,α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其他非常规氨基酸)也可为本公开多肽的合适组分。非常规氨基酸的实例包括：4-羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N,N,N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸以及其他类似的氨基酸和亚氨酸(例如4-羟基脯氨酸)。在本文使用的多肽符号中，根据标准用法和惯例，左手方向为氨基末端方向和右手方向为羧基末端方向。

类似地，除非另外规定，否则单链多核苷酸序列的左手末端为5’末端，和双链多核苷酸序列的左手方向称为5’方向。新生RNA转录物的5’至3’添加方向称为转录方向，在DNA链上与RNA具有相同序列并且为RNA转录物5’末端的5’的序列区域称为“上游序列”，在DNA链上与RNA具有相同序列并且为RNA转录物3’末端的3’的序列区域称为“下游序列”。

当应用于多肽时，术语“显著同一性”意指两个肽序列当比如通过使用缺省缺口权重的程序GAP或BESTFIT进行最佳比对时共具至少80%序列同一性，优选地至少90%序列同一性，更优选地至少95%的序列同一性，和最优选地至少99%的序列同一性。

优选地，不同的残基位置的差异在于保守性氨基酸取代。

保守性氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的可互换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸为丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸为天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族侧链的一组氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸为赖氨酸、精氨酸和组氨酸；和具有含硫侧链的一组氨基酸为半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸取代组为缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。

如本文讨论的，考虑抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的微小变化被本公开所涵盖，条件是氨基酸序列中的变化保持至少75%，更优选地至少80%、90%、95%，和最优选地为99%。特别地，考虑保守性氨基酸替换。保守性替换为发生在其侧链中相关的氨基酸家族内的那些替换。遗传编码的氨基酸通常分为以下家族：(1) 酸性氨基酸为天冬氨酸、谷氨酸；(2) 碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3) 非极性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，和(4) 非荷电的极性氨基酸为甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。其他氨基酸家族包括：(i) 丝氨酸和苏氨酸，其为脂肪族-羟基家族；(ii) 天冬酰胺和谷氨酰胺，其为含有酰胺的家族；(iii) 丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，其为脂肪族家族；和(iv) 苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其为芳族家族。例如，可合理地预期，用异亮氨酸或缬氨酸单独替换亮氨酸，用谷氨酸单独替换天冬氨酸，用丝氨酸单独替换苏氨酸，或用结构上相关的氨基酸类似替换氨基酸将对所得分子的结合或特性没有重大影响，尤其是如果替换不涉及框架位点内的氨基酸时。氨基酸变化是否导致功能性肽可通过测定多肽衍生物的比活性而易于确定。测定在本文中详细描述。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可由本领域普通技术人员易于制备。片段或类似物的优选的氨基和羧基末端出现在功能性结构域的边界附近。可通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库进行比较来鉴定结构和功能性结构域。优选地，计算机化的比较方法用于鉴定在已知结构和/或功能的其他蛋白中出现的序列基序或预测蛋白构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法为已知的。Bowie等人 Science 253:164 (1991)。因此，前述实例证实，根据本公开，本领域技术人员可识别可用于定义结构和功能性结构域的序列基序和结构构象。

优选的氨基酸取代为以下那些：(1) 降低对蛋白水解的敏感性，(2) 降低对氧化的敏感性，(3) 改变对形成蛋白复合物的结合亲和力，(4) 改变结合亲和力，和(4) 赋予或修饰其他这种类似物的物理化学或功能特性。类似物可包括除天然存在的肽序列以外的序列的各种突变蛋白。例如，可在天然存在的序列中(优选地在形成分子间接触的结构域外部的多肽部分中)进行单个或多个氨基酸取代(优选地为保守性氨基酸取代)。保守性氨基酸取代不应基本上改变亲本序列的结构特征(例如替换氨基酸不应倾向于破坏亲本序列中出现的螺旋，或破坏表征亲本序列的其他类型的二级结构)。领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W.H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure(C. Branden和J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); 和Thornton et at. Nature 354:105 (1991)。

肽类似物在制药工业中通常用作非肽药物，其特性类似于模板肽的那些特性。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物”或“拟肽”。 Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29(1986), Veber和Freidinger TINS p.392 (1985); 和Evans等人 J. Med. Chem. 30:1229 (1987)。这种化合物通常借助于计算机化的分子模型来开发。在结构上类似于治疗上有用的肽的肽模拟物可用于产生等同的治疗或预防作用。通常，拟肽在结构上类似于范例多肽(即具有生化特性或药理活性的多肽)，比如人类抗体，但具有一个或多个肽键，这些键通过本领域众所周知的方法任选地被选自以下的键替代：--CH

术语“试剂”在本文中用于表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。

如本文使用的术语“标记”或“标记的”是指可检测标志物的掺入，例如通过掺入放射性标记的氨基酸，或附接于可通过标记的亲和素检测的生物素基部分的多肽(例如含有可通过光学或量热法检测的荧光标志物或酶促活性的链霉亲和素)。在某些情况下，标记或标志物也可为治疗性的。标记多肽和糖蛋白的各种方法为本领域已知的并且可以使用。用于多肽的标记的实例包括(但不限于)以下：放射性同位素或放射性核素(例如

本文中的其他化学术语根据本领域的常规用法使用，如由The McGraw-HillDictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco(1985))举例说明的。

如本文使用的“基本上纯的”意指目标种类为存在的主要种类(即在摩尔基础上，其比组合物中的任何其他单个种类更丰富)，并且优选地基本上纯化的级分为其中目标种类占存在的所有大分子种类的至少约50% (在摩尔基础上)的组成。

通常，基本上纯的组合物将包含组合物中存在的所有大分子种类的多于约80%，更优选地多于约85%、90%、95%和99%。最优选地，将目标种类纯化至基本同质(通过常规检测方法无法在组合物中检测到污染物种类)，其中组合物基本上由单一大分子种类组成。

在以下描述和权利要求两者中，冠词“一个(a)”、“一种(an)”和“该(the)”的使用应解释为涵盖单数和复数，除非本文中另外指明或与上下文明显矛盾。术语“包含”、“具有”、如“具有化学式”中的“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放术语(即意指“包括(但不限于)”)，除非另外说明。例如，具有某种化学式的聚合物支架包括化学式中所示的所有单体单元，并且还可包括化学式中未显示的另外的单体单元。另外，每当在一个实施方案中使用“包含”或另一个开放式术语时，应当理解可使用中间术语 “基本上由...组成”或封闭术语“由...组成”来更狭窄地要求保护同一实施方案。

当与数值结合使用时，术语“约”、“大约”或“近似”意指包括数值的集合或范围。例如，“约X”包括其为X的±20%、±10%、±5%、±2%、±1%、±0.5%、±0.2%或±0.1%的数值范围，其中 X为数值。在一个实施方案中，术语“约”是指比规定值大或小5%的数值范围。在另一个实施方案中，术语“约”是指比规定值大或小2%的数值范围。在另一个实施方案中，术语“约”是指比规定值大或小1%的数值范围。

除非本文中另外指明，否则数值范围的叙述仅旨在用作分别指代落入该范围内的每个单独数值的简写方法，并且每个单独数值如同其在本文中单独叙述一样结合至说明书中。除非另外规定，否则本文中使用的范围包括该范围的两个端点。例如，表述“x为1-6之间的整数”和“x为1-6的整数”两者均意指“x为1、2、3、4、5或6”，即术语“ X和Y之间”和“从X到Y的范围”包括X和Y及之间的整数。

除非本文中另外指明或者与上下文明显矛盾，否则本文中描述的所有方法可以任何合适的顺序进行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“比如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，并且不应解释为对权利要求范围的限制，除非另外明确要求。说明书中的任何语言均不应解释为表示任何未要求保护的要素对于要求保护的内容为必不可少的。

“聚合物载体或支架”：如本文使用的术语聚合物载体或支架是指适合于共价附接于或可共价附接于一种或多种具有指定接头的药物分子和/或一种或多种具有指定接头的PBRM的聚合物或修饰的聚合物。

“生理条件”：如本文使用的短语“生理条件”涉及在活组织的细胞外液中可能遇到的化学(例如pH、离子强度)和生化(例如酶浓度)条件的范围。对于大多数正常组织，生理pH范围为约7.0-7.4。循环血浆和正常隙间液体代表正常生理条件的典型实例。

“药物”：如本文使用的术语“药物”是指其为生物活性的，并且在给予需要它的受试者后提供期望的生理作用的化合物(例如活性药用成分)。

“细胞毒性”：如本文使用的术语“细胞毒性”意指对细胞或选定的细胞群体(例如癌细胞)具有毒性。毒性作用可导致细胞死亡和/或裂解。在某些情况下，毒性作用可为对细胞的亚致死性破坏作用，例如减慢或阻止细胞生长。为了达到细胞毒性作用，药物或前药可选自DNA损伤剂、微管破坏剂或者细胞毒性蛋白或多肽等。

“PHF”是指聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-缩甲醛)。

如本文使用的术语“聚合物单元”、“单体的单元”、“单体”、“单体单元”、“单元”均是指聚合物中的可重复结构单元。

如本文使用的聚合物或聚合物载体/支架或聚合物缀合物的“分子量”或“MW”是指未修饰的聚合物的重均分子量，除非另外规定。

如本文使用的“给药方案”或“剂量方案”是指给予的试剂例如含有NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物的组合物的量和给予频率。给药方案为待治疗的疾病或病症的函数，并因此可以变化。

如本文使用的给予的“频率”是指连续给予治疗之间的时间。例如，频率可为数天、数周或数月。例如，频率可为多于每周一次，例如每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天。频率也可为一、二、三或四周。特定频率为所治疗的特定疾病或病症的函数。通常，频率为多于每周一次，并且通常为每周两次。

如本文使用的“给予周期”是指在连续给予中重复的给予酶和/或第二种试剂的给药方案的重复时间表。例如，示例性的给予周期为28天周期，每周给予两次持续三周，然后中断给药一周。优选的给予周期为21天周期(每21天(即3周)给予一次)或每28天周期(每28天(即4周)给予一次)。

如本文使用的，当基于受试者的mg/kg指涉剂量时，一般的人类受试者被认为具有约70 kg-75 kg (比如70 kg)的体重和1.73 m

如本文使用的，通过治疗比如通过给予药用组合物或其他治疗剂来改善特定疾病或障碍的症状是指病症的症状或不利影响的永久或短暂、持续或暂时的任何减轻，比如与给予NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物相关或在其给予后出现的不利影响的减少。

如本文使用的，当基于“体表面积”(BSA; m

如本文使用的“治疗(treating)”或“治疗(treat)”描述了以对抗疾病、病症或障碍为目的的患者管理和护理，并且包括给予本公开的缀合物或其药用组合物与免疫调节疗法(例如免疫肿瘤药物，比如免疫检查点抑制剂)的组合，以减轻疾病、病症或障碍的症状或并发症，或者消除疾病、病症或障碍。

如本文使用的“防止”或“预防”是指减少发展疾病或病症的风险，或者减少或消除疾病、病症或障碍的症状或并发症的发作。

当术语“有效量”或“足够量”指涉活性剂时，其是指引发期望的生物反应所需的量。如本文使用的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指至少足以产生可检测的治疗作用的试剂、化合物、材料或含有化合物的组合物的量或数量。作用可通过本领域已知的任何测定方法来检测。用于受试者的精确有效量取决于受试者的体重、大小和健康状况；病症的性质和程度；以及选择用于给予的治疗剂。

“受试者”包括哺乳动物。哺乳动物可为例如任何哺乳动物，例如人类、灵长类、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物为人类。

如本文使用的“单位剂量形式”或“单位剂型”是指适合于人类和动物受试者并且如本领域中已知的那样单独包装的物理上离散的单位。

如本文使用的单剂量制剂是指作为单一剂量的制剂。

如本文使用的“时间接近性”是指一种治疗剂(例如本文公开的NaPi2b靶向的聚合物抗体-药物缀合物)的给予发生在另一种治疗剂(例如本文公开的免疫检查点抑制剂)的给予之前或之后的一段时间内，使得一种治疗剂的治疗作用与另一种治疗剂的治疗作用叠加。在一些实施方案中，一种治疗剂的治疗作用与另一种治疗剂的治疗作用完全重叠。在一些实施方案中，“时间接近性”意指一种治疗剂的给予发生在另一种治疗剂的给予之前或之后的一段时间内，使得一种治疗剂与另一种治疗剂之间存在协同作用。“时间接近性”可根据各种因素而变化，包括(但不限于)要给予治疗剂的受试者的年龄、性别、体重、遗传背景、医学状况、疾病史和治疗史；待治疗或改善的疾病或病症；要获得的治疗结果；治疗剂的剂量、给药频率和给药持续时间；治疗剂的药代动力学和药效学；以及给予治疗剂的途径。在一些实施方案中，“时间接近性”意指在15分钟内、30分钟内、1小时内、2小时内、4小时内、6小时内、8小时内、12小时内、18小时内、24小时内、36小时内、2天内、3天内、4天内、5天内、6天内、1周内、2周内、3周内、4周内、6周内或8周内。在一些实施方案中，一种治疗剂的多次给予可以时间接近于另一种治疗剂的单次给予发生。在一些实施方案中，时间接近性可在治疗周期期间或在给药方案内改变。

如本文使用的“试剂盒”是指组分的组合，比如本文的组合物与用于包括(但不限于)重构、激活的目的的另一物品和用于递送、给予、诊断和评价生物活性或特性的仪器/装置的组合。试剂盒任选地包括使用说明书。

本公开旨在包括在本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。通过一般实例而非限制性地，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和C-14。

本公开旨在包括化合物的所有异构体，其是指并且包括旋光异构体和互变异构体，其中旋光异构体包括对映异构体和非对映异构体、手性异构体和非手性异构体，并且旋光异构体包括分离的旋光异构体以及旋光异构体的混合物，包括外消旋和非外消旋混合物；其中异构体可以分离形式或与一种或多种其他异构体的混合物存在。

其他实施方案

本文引用的所有出版物和专利文件均通过参考结合至本文中，就好像每个这种出版物或文件均被具体和单独地指明通过参考结合至本文中。出版物和专利文件的引用不旨在承认任何为相关的现有技术，也不构成对其内容或日期的任何承认。现已通过书面描述的方式描述了本发明，本领域技术人员将认识到，本发明可在各种实施方案中实践，并且前述描述和以下实施例为出于说明的目的而不是对以下权利要求的限制。

实施例

以下实施例为说明性的而不旨在为限制性的，并且本领域的技术人员将易于理解，可使用其他试剂或方法。

缩写

在以下反应流程和合成实施例中使用以下缩写。该列表并不意指为本申请中使用的缩写的全包列表，因为有机合成领域的技术人员易于理解的另外的标准缩写也可用于合成流程和实施例中。

AF-HPA 澳瑞他汀F-羟丙基酰胺

BSA 体表面积

CR 完全应答

DCR 疾病控制率

DES 剂量递增

DLT 剂量限制性毒性

EXP 队列扩展

IHC 免疫组织化学

IV 静脉内

MTD 最大耐受剂量

NSCLC 非小细胞肺癌

ORR 客观应答率

PBS 磷酸盐缓冲盐水

PE 身体检查

PHF 聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基缩甲醛))

PR 部分应答

RP2D 2期推荐剂量

SD 稳定疾病

SRC 安全审查委员会

SRM 安全审查会议

TRAE 治疗相关的不良事件。

一般信息

如美国申请号2017/0266311中所述制备XMT-1536。

如美国专利号8808679 (B2)中所述制备AF-HPA。

CDR通过Kabat编号方案识别。

实施例1：XMT-1536的安全性和耐受性评价

研究设计

本文呈现的研究为作为每三或四周一次静脉内输注给予的XMT-1536的开放标签、多中心1b期研究。研究的剂量递增(DES)部分将为患有多种可能表达NaPi2b的肿瘤类型的患者确定XMT-1536的最大耐受剂量(MTD)或2期推荐剂量(RP2D)，主要针对铂类耐药性卵巢癌和非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)患者。MTD定义为不会引起方案特定的剂量限制性毒性标准所定义的不可接受的毒性的XMT-1536的最高剂量。RP2D可能不同于MTD，并且可能考虑到基于RECIST 1.1的XMT-1536的耐受性、药代动力学和药效学度量以及功效。在第一个周期之后，如果根据调查者的意见药物耐受良好并且患者继续获得临床益处，则患者可继续接受XMT-1536直至疾病进展为止。该研究的DES部分使用了加速滴定设计。治疗的第一个3周周期构成剂量限制性毒性(DLT)评估期。对于前两个剂量水平，每个剂量水平治疗最少1名患者。如果该患者经历2或更高级别的治疗期间出现的不良事件，则将以该剂量水平再增加2名患者，并且该研究随后将遵循3 + 3设计，如下所述。如果该患者在DLT评估期期间没有经历2或更高级别的治疗相关事件或DLT，并且安全审查委员会(SRC)同意这是合理耐受良好的剂量，则以下一个剂量水平开始入选。在剂量水平3开始，研究将遵循标准的3 + 3设计，每个剂量水平最初入选3名患者。如果3名患者在评估期期间均未经历DLT，并且SRC同意这是合理耐受良好的剂量，则3名患者将以下一个剂量水平入选。然而，如果有1个DLT，则将以相同的剂量水平再入选3名患者。具有2个或更多个DLT的任何剂量水平均将视为超过MTD，并且随后的患者将以较低剂量水平入选。在第一个周期之后，如果根据调查者的意见药物耐受良好并且患者继续获得临床益处，则患者可继续接受XMT-1536直至疾病进展为止。

DES完成之后，将在3个患者队列中开放研究的EXP部分。队列1将含有患有铂类耐药性卵巢癌的患者。队列2将含有患有非鳞状NSCLC的患者。队列3将含有患有乳头状甲状腺癌、子宫内膜癌、乳头状肾细胞癌或唾液腺导管癌的患者。

在2018年8月方案修订案之后，每个周期将为4周(28天)剂量周期。前两个为期4周的治疗周期(56天)构成剂量限制性毒性(DLT)的评估期。从该修订案开始，将在新的4周周期剂量方案下以20.0 mg/m

所有不良事件将根据国家癌症研究所(National Cancer Institute) (NCI)通用术语标准版本(Common Terminology Criteria version)(CTCAE v4.03)进行分级。DLT的观察期为56天，介于第1天至第2周期结束之间，其中包括接受第3周期剂量之前的给药前评价。通常，不良事件级别≥3为DLT，其中对以下标准进行了修改：中性粒细胞减少症血液学毒性、胃肠道毒性、肝毒性和电解质失衡。将第3周期的开始延迟多于2周的XMT-1536相关的毒性、住院以治疗输注相关的反应以及任何导致修改在第3周期中要给予的剂量的毒性也为DLT。将进行血液采样以确定XMT-1536、其释放产物澳瑞他汀F-HPA和选择代谢产物的血浆PK参数。将进行抗药物抗体(ADA)和中和抗体(nAb)的测试。在第2周期结束时，将使用实体瘤反应评估标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors) (RECIST)版本1.1由调查者评价肿瘤反应，并且之后每2个周期进行一次。

研究访问

将进行研究访问。在整个研究中，当前周期的最后一天可与下一周期的开始为同一天，前提是获得周期结束安全性评价的结果并在下一个周期开始给药之前进行审查。调查者可基于患者的医学需要在访问时间表中安排住宿。除非其是紧急需要，否则在进行任何调整之前与医学监查员讨论可能的时间表变更。调查者将在开始如评价时间表中所述的XMT-1536剂量之前对每位患者进行评估。全面身体检查(PE)由以下组成：检查头/耳/眼/鼻/喉(HEENT)、可触及的肿瘤、神经和肌肉系统、肺部和心血管系统、腹部和下肢。简单身体检查由检查以下组成：HEENT、肺部和心血管系统。将在每次访问时评估患者的发生情况或者新的和/或恶化的毒性。所有不良事件将根据国家癌症研究所(National CancerInstitute) (NCI)通用术语标准版本(CTCAE v4.03)进行分级。

受试者的人数

无法前瞻性地获知DES中要入选的患者的确切人数，并且这取决于达到MTD或RP2D的时间。基于临床前动物研究，可合理地预期将在DES中给药的范围为21-40名患者。该研究的EXP部分计划在3个疾病队列中分别治疗最多30名患者。给定退出率，可合理地预期将有90-105名范围的患者在EXP中给药。

资格性

调查者评估作为参加研究的候选者的患者的资格性，以确保纳入和排除标准得到满足，并且患者具有参与资格。

表1. DES和EXP的纳入标准

初次给药之前的预防性输血(或血液成分)不能用于满足入选标准。可允许输血(或血液成分)以处理治疗期间出现的贫血或其他血细胞减少症，并应记录为伴随药物。不能在任何周期中的XMT-1536给予之前使用生长因子预防。

表2：DES的疾病特定纳入标准

表3：扩展部分(EXP)的疾病特定纳入标准

表4：剂量递增和扩展的排除标准

与肝毒性相关的药物的使用

在研究参与期间，不应使用由FDA分类的最有可能引起药物诱导性肝损伤(DILI)的那些药物中的药物。排除标准6中描述了对乙酰氨基酚(醋氨酚)的使用例外。如果在研究期间必须使用FDA清单上的药物来提供适当的医学护理，并且对其没有备选可用，则医学监查员需要讨论这种情况。

受试者退出标准

患者可自由地随时退出研究。

出于安全性监测目的，如果可能的话，希望在早期终止研究参与的患者将被要求在给药后至少30天继续进行一般医学随访。进入临终关怀将优先于该要求。将遵循对治疗结束访问所述的程序。

在所有情况下，退出原因均必须记录于eCRF中。如果最初未知原因，则应跟踪患者以确定原因是否为不良事件。如果是的话，此事件将被记录为研究终止的原因。

剂量和给予

XMT-1536作为在5 mL圆形燧石玻璃管形瓶中的无色至黄色或棕色液体提供，管形瓶带有灰色氯丁基橡胶塞，橡胶塞带有由20 mm铝绿色钳口盖覆盖的阻隔膜。每个一次用小瓶含有2.5 mL XMT-1536抗体药物-缀合物，浓度为10 mg/mL和pH为4.0-6.0。

小瓶必须在-20℃ (±5℃)下储存于安全的温度控制的冰箱中。使用机构的标准药房程序对XMT-1536小瓶进行盘点和控制，以控制研究物质。指派的CRA将在定期的现场访问期间审查储存条件和这些条件的保持。

在准备患者剂量之前，每个XMT-1536单个小瓶均允许在室温下解冻最多60分钟。使用之前检查解冻的小瓶：液体应澄清为黄色至棕色，基本上没有可见的颗粒。不能摇动小瓶或将其置于阳光直射下。一旦准备好用于输注的剂量，就可在给予之前于室温下，在典型的室内照明条件下将其保留最多4个小时。

XMT-1536将根据体表面积(BSA)给予。经BSA调整的剂量按照每个机构的标准做法计算得出。如果可能，将使用Mosteller公式。基于首次剂量的14天内收集的身高和体重来计算起始剂量(可在首次剂量的当天收集)。基于后续重量测量的剂量调整根据每个机构的标准做法进行。如果不存在标准做法，则在第2周期及之后每两个周期给药之前获得另外的重量测量并经BSA确认或更改。

每个剂量以100 mL，0.9%NS PVC输液袋制备。剂量制备根据研究的现场程序进行。有关详细说明，请参阅药房手册。剂量制备将记录于每位患者的研究参与记录中，并遵循所有机构的做法，包括质量保证检查。

在研究的剂量递增部分中，计划的起始剂量为3 mg/m

表5. 剂量递增水平

经BSA调整的剂量按照每个机构的标准做法计算得出。如果可能，使用Mosteller公式。基于首次剂量的14天内收集的身高和体重(并且可在首次剂量的当天收集)来计算起始剂量。基于后续重量测量的剂量调整根据每个机构的标准做法进行。如果不存在标准做法，则在第2周期及之后每两个周期给药之前获得另外的重量测量并经BSA确认或更改。

常规的支持性护理药物可用于治疗与给药相关的并发的急性病症，例如过敏反应、呕吐、腹泻和发烧。不建议在任何患者的首次剂量之前进行输液反应或过敏性的预防性治疗，但如果这些反应在首次剂量之后发生，则可在第二和/或后续剂量之前给予该预防性治疗。输注之后可指示持续几天用止吐药和退热药进行治疗，并且如果患者的病史指示，可在首次剂量之前使用。在特定情况下，允许在第1周期之后进行剂量调整。

用于每位患者的初始剂量在90分钟内给予。如果没有发生输注相关的反应(IRR)，则由调查者自行决定在30-90分钟内给予所有后续剂量。IRR的治疗应根据机构标准或研究指南进行。

如果根据调查者的意见，患者经历毒性但会从用XMT-1536的进一步治疗中受益，则一旦患者完成第1周期(DLT评估期)即可进行剂量调整。

继续给药的标准

在第2周期及以后，调查者或指定人员应在进行研究药物给予之前审查周期结束/给药前的临床和实验室研究结果。在进行之前，所有肝酶均应恢复至1级或更低，或至患者的基线。应将实验室数据(特别是肝脏测试)与患者的基线进行比较，并应考虑延迟给药(例如1周)以使得肝功能能够更完全恢复或使得能够消退其他AE，例如恶心、呕吐、厌食或疲劳。

同一患者剂量降低

如果根据调查者的意见，患者经历毒性但会从用XMT-1536的进一步治疗中受益，则一旦患者完成第1周期即可进行剂量调整。只有在观察到的毒性在毒性开始之后21天或28天内消退至Gr≤1或基线时，并且在与医学监查员讨论之后由调查者自行决定，才可开始以降低的剂量治疗(表6)。

首次剂量降低将为比其中观察到毒性的剂量水平低一个剂量。

第二次降低将为比观察到毒性的初始剂量低两个剂量。

如果需要第三次剂量降低，则患者将被停药。

表6. 第一周期完成之后的剂量降低

在第2周期或后续周期中，发生之后21天内仍未消退至≤2级的周围运动或感觉神经病≥3级，需要剂量降低或终止治疗。通常，在进行任何剂量调整之前，致电医学监查员进行讨论。

在第2周期及以后，调查者或指定人员应在进行研究药物给予之前审查周期结束/给药前的临床和实验室研究结果。在进行之前，所有肝酶均应恢复至1级或更低，或至患者的基线。应将实验室数据(特别是肝脏测试)与患者的基线进行比较，并应考虑延迟给药(例如1周)以使得肝功能能够更完全恢复或使得能够消退其他AE，例如恶心、呕吐、厌食或疲劳。

DES和EXP中由于肝毒性的剂量降低

DES和EXP两者中经历肝转氨酶或ALP水平≥3级的患者将重新就诊，在初始≥3级值的48-72小时内进行重新测试，并至少每周进行监测直至水平恢复至≤1级或至该患者的基线。如果患者居住在距研究设施有明显距离，使得难以返回，则可安排当地抽血，并将结果和当地正常范围返回给研究调查员进行监测。

经历肝转氨酶或ALP一次升高至≥3级且需要超过72小时来恢复至≤2级(或基线)的患者，可在下一个周期，但以下一个更低的剂量继续给药。

如果患者在一个先前剂量降低之后经历肝转氨酶或ALP第二次升高至≥3级，并且需要超过72小时来恢复至≤2级(或基线)，则他或她可在下一个周期，但以下一个比发生第二次升高更低的剂量继续给药。

如果在两次先前剂量降低之后，患者经历肝转氨酶或ALP第三次升高≥3级，并且需要超过72小时来恢复至≤2级(或基线)，则他或她将中断研究并至少每周进行监测直至这些水平恢复至≤1级(或基线)。

如果恢复至≤2级(或基线)需要少于72小时，则不会对于肝转氨酶或ALP升高至≥3级修改XMT-1536剂量。

任何经历Gr 4肝转氨酶或ALP的患者均将中断研究并且不经受剂量降低。至少每周监测Gr 4毒性，直至恢复至Gr≤1或基线。

无论是否达到剂量降低的阈值，肝转氨酶或ALP高于1级的任何升高必须在研究药物的下一个剂量之前恢复至≤1级或基线。

治疗的持续时间

除非出现以下情况之一，否则治疗将无限期地继续：疾病进展、阻碍进一步给予治疗的并发疾病、不可接受的不良事件或怀孕、患者对方案的非顺应性、患者撤回参与研究的同意书和/或以调查者的判断，患者状况的总体或特定变化使患者无法接受进行进一步治疗。

然而，如果发生疾病进展但调查者仍认为患者有可能从继续暴露于XMT-1536中获益，则调查者可选择在与医学监查员讨论之后继续给药。

主要目的

剂量递增(DES)研究的主要目的为确定每三或四周一次静脉内给予的XMT-1536的最大耐受剂量(MTD)和2期推荐剂量(RP2D)，并评价XMT- 1536的安全性和耐受性。

扩展研究的主要目的为进一步评价以DES中确定的MTD/RP2D给予的XMT-1536的安全性和耐受性，评价XMT-1536的初步抗肿瘤活性。

次要目的

剂量递增(DES)研究的次要目的为评价XMT-1536的初步抗肿瘤活性。

DES和扩展研究的次要目的为评价XMT-1536、其释放产物和选定的代谢产物的药代动力学(PK)，评价针对XMT-1536的抗药物抗体的形成，以及评价NaPi2b的肿瘤表达与针对XMT-1536的客观肿瘤应答的相关性。

DES和扩展研究中的探索性目的为回顾性地评估客观应答与除NaPi2b以外的基因的肿瘤表达或其他肿瘤分子特征的相关性。

功效测量

在研究的两个部分中，均在第2周期结束时以及之后每个偶数周期结束时以计算机断层扫描(CT)扫描和RECIST 1.1版标准进行评价。持续评估患者在任何周期中的不良事件、伴随药物的使用以及发生的输液反应。评估了XMT-1536和选定的释放产物/代谢产物的药代动力学曲线以及抗药物抗体的形成。RECIST 1.1版用于测量肿瘤应答。将测量每个队列的客观应答率(ORR - 完全应答[CR]和部分应答[PR]率)和疾病控制率(DCR - CR、PR和稳定疾病[SD]的比率)。估计应答持续时间、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。

使用DES和EXP数据两者进行功效的主要分析。主要终点为由调查者放射学审查得出的ORR，并定义为根据RECIST 1.1获得确认的PR或CR的患者比例。次要终点为DCR，其定义为根据RECIST 1.1获得任何持续时间的完全应答、部分应答和/或稳定疾病的患者比例。概述了获得应答或临床益处的患者人数和百分比，并提供了确切的95%置信区间(CI)。

报告了其他功效终点的分析，包括应答的持续时间(DOR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)，只要有可能，均根据标准应答标准进行。这些统计数据报告了具有95% CI的中位数和四分位数的Kaplan-Meier估计。

使用每种癌症类型队列中的功效分析集和功效可评估分析集两者对功效终点进行分析。

药代动力学分析

使用标准PK软件(例如Phoenix WinNonlin)通过非隔室分析确定每位患者的XMT-1536活性成分、其释放产物和选定的代谢产物的PK曲线。每患者的PK参数包括最大观察浓度的时间(t

PK分析计划中提供了对缺失浓度和协变量数据、离群值和低于量化限的数值的处理，以及剂量-反应和PK参数-反应关系的建模的详细信息。

统计分析

编写了统计分析计划(SAP)，并且其含有3个部分：分析(1) 来自DES的数据，(2)来自EXP的数据和(3) 来自DES和EXP的组合数据。该SAP将解决对临床数据库中记录的数据以及实验室数据和其他数据的分析。每个部分将在入选该部分已经完成之前和锁定特定研究部分(即DES或EXP)的数据库之前完成。在DES和EXP结束之后将生成选定的表格、列表或图形(统称为TLF)用于审查目的，并将在SAP中指明，但不会为这些中间报告准备分析报告。将创建一份最终分析报告，并将其包含在最终临床研究中。在已经锁定两个阶段的数据之后，将准备最终的TLF和临床研究报告。在入选该部分已经完成之后，对SAP的该部分进行的任何更改将与调查者共享。与计划的分析的任何偏差将在最终研究报告中进行描述。

将临床数据传输给PK供应商以支持PK分析。针对XMT-1536、其释放产物和代谢产物的PK曲线将准备一份单独的分析计划。

在EXP给药开始之前，至少由SRC对来自DES的数据进行充分汇总和审查。基于对DES数据的审查，可在开始EXP部分之前创建并提交方案修订案以供批准。统计分析将由Novella Clinical使用SAS 9.3或更高版本进行。

连续变量，包括基线特征，将通过报告观察次数、平均值、标准偏差、中位数、最小值和最大值进行汇总。分类/离散变量将使用频率表进行汇总，该表格显示类别内患者的人数和百分比。事件发生时间数据将使用Kaplan-Meier方法进行汇总。

除非另外指明，否则概括统计将仅针对观察到的数据进行报告。缺失数据将不会估算。如果缺失基线值，则不会计算与基线相比较的变化。基线定义为在第1周期第1天首次给予研究药物之前的最后可用观察结果。将在SAP中规定缺失数据的处理以及用于报告终点的方法。

结果

截至2019年2月，已有20名患者在6个剂量水平(3 mg/m

截至2019年8月，已对51名患者进行了9个剂量水平的给药(21天方案中3 mg/m

表7给出在6个剂量水平(2-40 mg/m

表7

该方案于2018年8月进行修订。21天的周期延长至28天，而DLT评估的观察期延长至包括两个28天的周期。这是在其之后安全审查委员会评估患者对XMT-1536的反应并决定是否应进行剂量递增的期间。表8汇总了截至2019年2月给药的患者。

表8

图1为一个“游泳者曲线图”，概述通过DL6、21天周期的20名患者(n = 19)和28天周期中给药的4名患者(n = 4)的研究时间的详细信息。该曲线图相对于在x轴上研究药物的时间，映射在y轴上按剂量水平和肿瘤类型的患者。x轴按周时间间隔进行组织。在较低剂量下，大多数患者由于进行性疾病而退出研究，但在DL4开始，大多数患者疾病稳定。

图2为一个“瀑布图”，显示按RECIST标准在21天周期中给药并且迄今进行了至少一次扫描的患者的最佳反应。y轴显示肿瘤大小的百分比变化。x轴按剂量水平组织反应。尽管每种剂量的患者人数较少，但似乎有剂量反应。在DL 5开始，两名正在进行的患者几乎达到部分缓解(定义为与基线相比较，肿瘤大小大于或等于30%减小)。

图3显示11名患者的总体最佳反应以及在21天周期中给药的卵巢癌患者的H评分和CA-125水平。

图4为一个“瀑布图”，显示按RECIST标准在21天周期和28天周期中给药且迄今进行了至少一次扫描的患者的最佳反应。y轴显示肿瘤大小的百分比变化。x轴按剂量水平组织反应。尽管每种剂量的患者人数较少，但似乎有剂量反应。在DL 5开始，两名患者几乎达到部分缓解(定义为与基线相比较，肿瘤大小大于或等于30%减小)。在DL 4A，一名患者达到部分缓解。

图5为一个“游泳者曲线图”，概述通过DL6、21天周期的患者(n=20)和在28天周期中给药的DL 4A和DL 5A患者(n=16)的研究时间的详细信息。该曲线图相对于在x轴上研究药物的时间，映射在y轴上按剂量水平和肿瘤类型的患者。x轴按周时间间隔进行组织。在较低剂量下，大多数患者由于进行性疾病而退出研究，但在DL4开始，大多数患者疾病稳定。

截至2019年5月10日，已有37名患者在6个剂量水平(3 mg/m

表10概述了在≥10%的患者的TRAE。报告了13名患者(33%)的严重不良事件(SAE)。两个可能的治疗相关SAE为DL5 (30 mg/m

表9

表10

在来自30名患者(3 mg/m

如果可用，提交来自患者肿瘤的切好的载玻片或整个组织块进行IHC表达分析。免疫组织化学使用自动化TechMate 500或TechMate 1000 (BioTek Solutions/Ventanamedical Systems)平台建立，其中测试了各种抗原恢复条件和一级抗体滴定以开发更高通量的方案。方案基于对照材料的染色和对ADC治疗具有已知反应的临床前材料的染色来选择。简而言之，对于已建立的方案，将4 µ的切片切开，脱蜡，并通过二甲苯和一系列醇进行再水化。使用BioGenex AR-10修复溶液在标准蒸笼中对载玻片进行抗原修复。在TechMate平台上，用蛋白酶K (DAKO)进行了进一步修复。血清封闭后：在室温下应用一级抗体(抗NaPi2b/MERS67)30分钟，然后使用内源性过氧化物酶封闭和基于非生物素聚合物的检测(兔Polink-2 Plus检测系统，GBI)，并最后进行简单的苏木精复染。

通过使用“H评分”方法在光学显微镜上手动读取来评估肿瘤膜染色。作为评分过程的一部分，对苏木精和曙红染色的载玻片以及兔IgG同种型对照染色的载玻片进行评估。对所有评估的肿瘤类型使用相同的评分方法。H评分包含染色强度(通过强度从0增加到3+确定)以及在肿瘤细胞膜上检测到的阳性细胞百分比。H评分= (<1+时的百分比X 0) + (1+时的百分比X 1) + (2+时的百分比X 2) + (3+时的百分比X3)。未显示细胞减少的样本或其中在提交的样本中未显示原发性肿瘤的那些样本。

图6显示NaPi2b蛋白在34个患者的肿瘤类型(例如卵巢、NSCLC、子宫内膜、乳头状肾和唾液腺导管)中的表达，其中输卵管和原发性腹膜肿瘤类型与卵巢肿瘤类型组合。y轴为NaPi2b IHC测定中阳性肿瘤细胞数量和染色强度的H评分，范围为0-300。在所有卵巢和肺腺癌样品中均观察到可检测的NaPi2b蛋白表达。

图7为一个“游泳者曲线图”，概述通过DL6、21天周期的患者(n=20)和在28天周期中给药的DL 4A和DL 5A患者(n=17)的研究时间的详细信息。该曲线图相对于在x轴上研究药物的时间，映射在y轴上按剂量水平和肿瘤类型的患者。x轴按周时间间隔进行组织。在较低剂量下，大多数患者由于进行性疾病而退出研究，但在DL4开始，大多数患者疾病稳定。

表11概述了在整个剂量水平上中断参与研究的原因。表12给出可评估群体的结果反应。基于客观应答和治疗的持续时间，在20 mg/m

表11

表12

*如按RECIST 1.1版测量的

一名患有铂类耐药性高级别浆液性卵巢癌且已有11个先前疗法线的70岁女性以DL4A (20 mg/m

表13给出截至2019年8月在7个剂量水平(2-40 mg/m

表13

该方案于2019年7月进行修订。增加了用于入选卵巢癌患者和非小肺癌患者的资格标准。表14汇总了截至2019年8月给药的患者。

表14

图8为一个“游泳者曲线图”，概述7个剂量水平(2-40 mg/m

结论

已良好耐受XMT-1536最多30 mg/m

其他实施方案

尽管本发明已经结合其详细描述进行描述，但是前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改处于以下权利要求的范围内。