一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法

技术领域

本发明涉及血浆中吉非替尼含量检测技术领域，尤其涉及一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法。

背景技术

吉非替尼，又名易瑞沙(商品名),由英国阿斯利康医药公司研发,于2005年2月25日经国家食品药品监督管理局批准正式在中国上市,用于治疗既往接受过化学治疗的局部晚期或转移性非小细胞肺癌。吉非替尼是一种选择性表皮生长因子受体(epider-malgrowth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，该酶通常表达于上皮来源的实体瘤。对于EGFR酷酪氨酸激酶活性的抑制可妨碍肿瘤的生长,转移和血管生成,并增加肿瘤细胞的凋亡。但目前较少见到关于吉非替尼含量测定的方法，因此提出一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与试药：岛津LC-10ATVF高效液相色谱仪,岛津SPV-10AVP可变波长检测器,N2000在线色谙工作站，K5200DE型数控超声波凊洗器，吉非替尼对照品，吉非替尼药片，易瑞沙，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为双蒸水。

S2，色谱条件：色谱柱：Phenomenex C18(250×4.6mm)；流动相为甲醇：水；柱温：室温；流速：1m1/min；检测波长：30nm；进样体积：20μ1按以上色谱条件测量得到吉非替尼对照品、吉非替尼供试品、易瑞沙供试品及阴性样品色谱图；

S3，对照品溶液的制备：精密称取吉非替尼标准品25mg,置50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,超声使其溶解,制得浓度为500g/ml的吉非替尼标准溶液,备用；

S4，吉非替尼供试品溶液的制备：取吉非替尼药片(实验室制)10片,精密称定,得其平均片重为0.5099g,研细,精密称定吉非替尼药片粉末(0.5099g),置100ml容量瓶中，精密加入足量甲醇至刻度,称定重量,超声处理15分钟,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过，再精密吸取滤液2ml,置于50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液；

S5，易瑞沙供试品溶液的制备：取易瑞沙1片,小心刮去薄膜衣,准确称量,准确称取约合吉非替尼0.0101g的样品粉末,置于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,超声15min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过即得；

S6，阴性对照液的制备：取片剂处方组成中除吉非替尼的其余辅料成分(乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁和聚维酮)制成不含吉非替尼的阴性对照品,按‘S4'项下的制备方法处理得阴性对照液；

S7，易瑞沙供试品的含量测定：取样品3份按“S5”项下易瑞沙供试品制备法制备,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,每一份样品测定5次,分别记录峰面积,以外标法去计算各组分的含量,并分别求出5次含量测定结果的RSD值。

优选的，所述S1吉非替尼对照品纯度99％，吉非替尼药片规格0.125g，易瑞沙规格0.25g。

优选的，所述S3分别精密吸取吉非替尼对照品溶液(浓度为500g/ml)0.2.0.6、1.0、1.6、2.0m1置于10m1容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,按色谱条件,分别取20u1注入高效液相色谱仪,以浓度C(g/ml)对应峰面积A进行回归。

优选的，所述S2流动相为甲醇：水含量比例为80：20，流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明中，通过本方法采用高效液相色谱法，以吉非替尼纯品为对照品，测定易瑞沙中吉非替尼的含量，操作简便、快速、规范，结果准确可靠，可用于吉非替尼药物的质量控制，吉非替尼是极性较大的物质，实验过程中曾采用甲醇：水(80：20)作为流动相，检测所得峰存在拖尾现象。随后在流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂，即可改善了峰形，流动相中加入竞争性的胺类——三乙胺(TEA)，TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应，从而达到调整峰形的目的。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：

一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与试药：岛津LC-10ATVF高效液相色谱仪,岛津SPV-10AVP可变波长检测器,N2000在线色谙工作站，K5200DE型数控超声波凊洗器，吉非替尼对照品，吉非替尼药片，易瑞沙，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为双蒸水。

S2，色谱条件：色谱柱：Phenomenex C18(250×4.6mm)；流动相为甲醇：水；柱温：室温；流速：1m1/min；检测波长：30nm；进样体积：20μ1按以上色谱条件测量得到吉非替尼对照品、吉非替尼供试品、易瑞沙供试品及阴性样品色谱图；

S3，对照品溶液的制备：精密称取吉非替尼标准品25mg,置50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,超声使其溶解,制得浓度为500g/ml的吉非替尼标准溶液,备用；

S4，吉非替尼供试品溶液的制备：取吉非替尼药片(实验室制)10片,精密称定,得其平均片重为0.5099g,研细,精密称定吉非替尼药片粉末(0.5099g),置100ml容量瓶中，精密加入足量甲醇至刻度,称定重量,超声处理15分钟,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过，再精密吸取滤液2ml,置于50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液；

S5，易瑞沙供试品溶液的制备：取易瑞沙1片,小心刮去薄膜衣,准确称量,准确称取约合吉非替尼0.0101g的样品粉末,置于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,超声15min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过即得；

S6，阴性对照液的制备：取片剂处方组成中除吉非替尼的其余辅料成分(乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁和聚维酮)制成不含吉非替尼的阴性对照品,按‘S4'项下的制备方法处理得阴性对照液；

S7，易瑞沙供试品的含量测定：取样品3份按“S5”项下易瑞沙供试品制备法制备,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,每一份样品测定5次,分别记录峰面积,以外标法去计算各组分的含量,并分别求出5次含量测定结果的RSD值。

所述S1吉非替尼对照品纯度99％，吉非替尼药片规格0.125g，易瑞沙规格0.25g。

所述S3分别精密吸取吉非替尼对照品溶液(浓度为500g/ml)0.2.0.6、1.0、1.6、2.0m1置于10m1容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,按色谱条件,分别取20u1注入高效液相色谱仪,以浓度C(g/ml)对应峰面积A进行回归。

所述S2流动相为甲醇：水含量比例为80：20，流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂。

通过本方法采用高效液相色谱法，以吉非替尼纯品为对照品，测定易瑞沙中吉非替尼的含量，操作简便、快速、规范，结果准确可靠，可用于吉非替尼药物的质量控制，吉非替尼是极性较大的物质，实验过程中曾采用甲醇：水(80：20)作为流动相，检测所得峰存在拖尾现象。随后在流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂，即可改善了峰形，流动相中加入竞争性的胺类——三乙胺(TEA)，TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应，从而达到调整峰形的目的。

实施例：仪器与试药：岛津LC-10ATVF高效液相色谱仪,岛津SPV-10AVP可变波长检测器,N2000在线色谙工作站，K5200DE型数控超声波凊洗器，吉非替尼对照品(纯度99％)，吉非替尼药片(规格0.125g)，易瑞沙(规格0.25g)，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为双蒸水；色谱条件：色谱柱：Phenomenex C18(250×4.6mm)；流动相为甲醇：水含量比例为80：20，流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂；柱温：室温；流速：1m1/min；检测波长：30nm；进样体积：20μ1按以上色谱条件测量得到吉非替尼对照品、吉非替尼供试品、易瑞沙供试品及阴性样品色谱图；对照品溶液的制备：精密称取吉非替尼标准品25mg,置50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,超声使其溶解,制得浓度为500g/ml的吉非替尼标准溶液,备用；吉非替尼供试品溶液的制备：取吉非替尼药片(实验室制)10片,精密称定,得其平均片重为0.5099g,研细,精密称定吉非替尼药片粉末(0.5099g),置100ml容量瓶中，精密加入足量甲醇至刻度,称定重量,超声处理15分钟,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过，再精密吸取滤液2ml,置于50ml容量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀,即得供试品溶液；易瑞沙供试品溶液的制备：取易瑞沙1片,小心刮去薄膜衣,准确称量,准确称取约合吉非替尼0.0101g的样品粉末,置于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,超声15min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过即得；阴性对照液的制备：取片剂处方组成中除吉非替尼的其余辅料成分(乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁和聚维酮)制成不含吉非替尼的阴性对照品,按‘吉非替尼供试品溶液的制备'项下的制备方法处理得阴性对照液；易瑞沙供试品的含量测定：取样品3份按“瑞沙供试品溶液的制备”项下易瑞沙供试品制备法制备,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,每一份样品测定5次,分别记录峰面积,以外标法去计算各组分的含量,并分别求出5次含量测定结果的RSD值，通过本方法采用高效液相色谱法，以吉非替尼纯品为对照品，测定易瑞沙中吉非替尼的含量，操作简便、快速、规范，结果准确可靠，可用于吉非替尼药物的质量控制，吉非替尼是极性较大的物质，实验过程中曾采用甲醇：水(80：20)作为流动相，检测所得峰存在拖尾现象。随后在流动相中加入0.1％三乙胺作为扫尾剂，即可改善了峰形，流动相中加入竞争性的胺类——三乙胺(TEA)，TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应，从而达到调整峰形的目的。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。