一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法

技术领域

本发明涉及伊马酰氯液相纯度测定技术领域，尤其是一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法。

背景技术

甲磺酸伊马替尼是一种用于治疗费城染色体阳性的慢性骨髓性白血病成人患者的急变期、加速期和干扰素治疗失败后的慢性期的口服药物，2002年以商品名“格列卫”面市。

为了保证甲磺酸伊马替尼的生产质量控制，解决其过程控制的关键医药中间体伊马酰氯的检测对于医药生产企业来说尤为迫切。在现有的技术中，在液相测定时必须使用纯化水作水相、甲醇作有机相，并统一为流动相，伊马酰氯与部分水反应生成伊马酸，与部分甲醇反应生成伊马酸甲酯，在采用液相色谱仪中测定时，就会检测出伊马酸和伊马酸甲酯，造成伊马酰氯检测结果不准确，偏离较大，导致最终检测结果极度不准确。又或者大多数企业通常采用薄层点板定性的测定伊马酰氯的纯度，但是只能定性判断此反应过程是否完全，不能定量得出产品伊马酰氯的具体纯度值。

鉴于此，本发明提供了一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，能够快速准确测定出伊马酰氯的纯度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，以解决上述背景技术中提出的问题，能够快速准确地测定出伊马酰氯的纯度，大大提高了检测效率和检测准确度。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明的一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，包括以下操作步骤：

S1:选取一定量的伊马酰氯样品，将其置于反应容器内，并依次加入适量的二氯甲烷溶液和苯胺溶液进行溶解；

S2:溶解反应一段时间后，反应容器内的伊马酰氯与苯胺完全反应，生成伊马苯甲酰胺，且伊马酰氯与伊马苯甲酰胺的质量比值为1:1；

S3:对步骤2中生成的伊马苯甲酰胺混合液体进行蒸发浓缩处理，得到伊马苯甲酰胺混合溶液；

S4:将伊马苯甲酰胺混合溶液进行稀释溶解后，对伊马苯甲酰胺进行液相纯度的检测。

更进一步的，取适量的伊马苯甲酰胺混合溶液置于检测容器内，向检测容器内加入乙腈溶液进行溶解稀释，并将稀释后的溶液注入液相色谱仪中进行液相色谱测定，进而判断伊马苯甲酰胺的液相纯度。

更进一步的，步骤S1中伊马酰氯样品与二氯甲烷溶液的质量比值≤1:10

更进一步的，步骤S1中伊马酰氯样品与苯胺溶液的质量比值≤1:5。

更进一步的，步骤S1中溶解采用超声溶解。

更进一步的，步骤S2中溶解反应的时间不低于25min。

更进一步的，步骤S3中蒸发浓缩处理是在水浴环境下进行减压蒸发浓缩处理；

和/或，水浴温度为60℃～80℃。

更进一步的，减压蒸发浓缩处理的时间不低于20min。

更进一步的，液相色谱仪测定过程中所采用的流动相为乙腈溶液；

和/或，乙腈溶液的浓度为6％～10％。

更进一步的，采用液相色谱仪进行液相色谱测定时的进样量为3ul～8ul。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明中采用的是在测定前对样品先进行衍生，伊马酰氯与苯胺充分反应得到相对稳定的化合物伊马苯甲酰胺，生成的伊马苯甲酰胺与纯化水和甲醇不发生任何化学反应，故测定出伊马苯甲酰胺的纯度即得到了伊马酰氯的纯度，这样的检测简单快捷高效，与传统的检测方式相比，得到的结论更加准确可靠，是最好的检测方法。

附图说明

图1为传统的直接检测法在液相色谱仪中显示的伊马酸峰和伊马酸甲酯峰示意图；

图2为传统的薄层点板法测定的伊马酰氯示意图，其中①是伊马酸原料斑点、②是未反应彻底伊马酰氯反应液的斑点(同时存在伊马酸原料和产物伊马酰氯)，③是反应彻底的伊马酰氯反应液的斑点；

图3为伊马酰氯液相纯度测定用苯胺衍生测定分析方法中流动相的溶剂峰示意图；

图4为伊马酰氯液相纯度测定用苯胺衍生测定分析方法中伊马苯甲酰胺峰示意图。

具体实施方式

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例的一种利用苯胺衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，包括以下操作步骤：

S1:选取一定量的伊马酰氯样品，将其置于反应容器内，并依次加入适量的二氯甲烷溶液和苯胺溶液进行溶解，更进一步的，本实施例中伊马酰氯样品与二氯甲烷溶液的质量比值≤1:10；伊马酰氯样品与苯胺溶液的质量比值≤1:5。实践中为保障溶解完全，采用超声溶解，使得伊马酰氯样品能够充分溶解于二氯甲烷溶液内，并与苯胺能够充分接触发生化学反应。

本实施例中的二氯甲烷溶液一方面作为反应溶剂，具有不活泼性，不与反应物(伊马酰氯、苯胺)或生成物(伊马苯甲酰胺)发生反应，避免影响后续的测定结果；二氯甲烷溶液另一方面作为稀释剂，有利于传热和散热，并使得反应分子能够分布均匀、增加分子间碰撞和接触的机会，从而加速反应进程。

S2:溶解反应一段时间后，反应容器内的伊马酰氯与苯胺完全反应，生成伊马苯甲酰胺，且伊马酰氯与伊马苯甲酰胺的质量比值为1:1；其中溶解反应的时间不低于25min。其中伊马酰氯与苯胺的反应化学式如下所示：

从化学式(1)中能看出，伊马酰氯与伊马苯甲酰胺的质量比值为1:1，本实施例中的苯胺衍生法是通过伊马酰氯样品与苯胺溶液在二氯甲烷溶液的反应环境下，进行充分完全的反应，生成相对稳定化合物伊马苯甲酰胺，伊马苯甲酰胺与水或者甲醇均不会发生反应，能够在检测过程中稳定的存在，因此，能够准确的测定伊马苯甲酰胺的液相浓度，由于伊马酰氯与伊马苯甲酰胺之间为1:1的比例关系，测定的伊马苯甲酰胺的液相浓度即为伊马酰氯的液相纯度。

S3:对步骤2中生成的伊马苯甲酰胺混合液体进行蒸发浓缩处理，得到伊马苯甲酰胺混合溶液。更进一步的，本实施例中蒸发浓缩处理是在水浴环境下进行减压蒸发浓缩处理，水浴温度为60℃～80℃；减压蒸发浓缩处理的时间不低于20min。

S4:将伊马苯甲酰胺混合溶液进行稀释溶解后，对伊马苯甲酰胺进行液相纯度的检测。更进一步的，本实施例中取适量的伊马苯甲酰胺混合溶液置于检测容器内，向检测容器内加入乙腈溶液进行溶解稀释，保证现配现用，能够立马进样检测，检测结果更加精准。将稀释后的溶液注入液相色谱仪中进行液相色谱测定，进而判断伊马苯甲酰胺的液相纯度。

具体的，选取1g的伊马酰氯样品倒入反应容器中，并加入10ml的二氯甲烷溶液后再加入5ml的苯胺溶液，超声溶解后，将反应容器放置于旋转蒸发仪上，采用70℃水浴，减压浓缩20min后，伊马苯甲酰胺混合溶液呈淡黄色。选取25mL的伊马苯甲酰胺混合溶液，用10mL乙腈溶解稀释，将稀释后的伊马苯甲酰胺混合溶液注入液相色谱仪中进行测定。

更进一步的，本实施例中液相色谱仪采用Agilent1120液相色谱仪或其他适用液相色谱仪，色谱柱：Phenomenex Luna C18250mm×4.6mm×5μm或其他等效柱；检测波长:235nm；检测时的液相流速为1.0ml/min；柱温选择30℃；进样量为5ul。本实施例中液相色谱仪测定过程中所采用的流动相为乙腈溶液；乙腈溶液的浓度为8％。采用乙腈溶液作为伊马苯甲酰胺检测用流动相，能够保证检测效果较好，伊马苯甲酰胺的出锋情况较佳。

本实施例的苯胺衍生法，相对于传统的直接检测法而言，能够避免伊马酰氯在配样和测定过程中出现水解、醇解等反应，造成伊马酰氯检测结果不准确，偏离较大。相对于薄层点板法而言，薄层点板只能定性判断此反应过程是否完全，不能定量得出产品伊马酰氯的具体纯度值，难以满足检测需求。

而本实施例的苯胺衍生法，在测定前样品事先进行衍生，伊马酰氯与苯胺充分反应得到相对稳定的化合物伊马苯甲酰胺，生成的伊马苯甲酰胺与纯化水和甲醇不发生任何化学反应，故测定出伊马苯甲酰胺的纯度即为伊马酰氯的纯度。

本实施例中还将没有样品的溶剂注入到液相色谱仪中测定，结果如图3所示，属于流动相的溶剂峰，与图4对比可以排除其他的干扰峰。图4中将空白溶剂峰扣除，从相对峰面积看，保留时间17.8825即为伊马苯甲酰胺峰，其相对峰面积为93.72％，即伊马苯甲酰胺的纯度为93.72％，得出伊马酰氯的纯度也为93.72％。保留时间13.467即为伊马酸峰，同理得其样品中含有3.522％未反应的原料伊马酸。

对比例1

本对比例中采用传统的直接检测法直接测定1.0g伊马酰氯样品的液相纯度，使用浓度为8％的乙腈溶液作为流动相，结果如图1所示，伊马酰氯在配样和测定过程中出现了水解、醇解等反应，出现水解和醇解的原因是在液相测定时必须使用水相(即纯化水)和有机相(即乙腈)作为流动相，伊马酰氯与部分水反应生成伊马酸，与部分甲醇反应生成伊马酸甲酯，所以图1中有两个主峰，所生成的伊马酸又为起始原料，故不知是已反应完全还是未反应完全，造成伊马酰氯检测结果不准确，偏离较大。

对比例2

本对比例中采用传统的薄层点板法测定1.0g伊马酰氯样品的液相纯度，结果如图2所示，薄层点板只能定性判断此反应过程是否完全，当反应无原料斑点即代表反应完全，但不能定量得出产品伊马酰氯的具体纯度值，不利于可视数据化控制产品质量。

实施例2

本实施例的一种利用甲醇衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，基本操作同实施例1，其不同之处在于，选取2g的伊马酰氯样品倒入反应容器中，并加入20ml的二氯甲烷溶液后再加入12ml的苯胺溶液，超声溶解后，将反应容器放置于旋转蒸发仪上，采用60℃水浴，减压浓缩25min后，伊马苯甲酰胺混合溶液呈淡黄色。选取20mL的伊马苯甲酰胺混合溶液，用15mL乙腈溶解稀释，将稀释后的伊马苯甲酰胺混合溶液注入液相色谱仪中进行测定。

本实施例中液相色谱仪采用Agilent1120液相色谱仪或其他适用液相色谱仪，色谱柱：Phenomenex Luna C18250mm×4.6mm×5μm或其他等效柱；检测波长:235nm；检测时的液相流速为1.2ml/min；柱温选择35℃；进样量为3ul。本实施例中液相色谱仪测定过程中所采用的流动相为甲醇溶液和水。

实施例3

本实施例的一种利用甲醇衍生测定伊马酰氯液相纯度的方法，基本操作同实施例1，其不同之处在于，选取1g的伊马酰氯样品倒入反应容器中，并加入15ml的二氯甲烷溶液后再加入5ml的苯胺溶液，超声溶解后，将反应容器放置于旋转蒸发仪上，采用80℃水浴，减压浓缩30min后，伊马苯甲酰胺混合溶液呈淡黄色。选取25mL的伊马苯甲酰胺混合溶液，用10mL乙腈溶解稀释，将稀释后的伊马苯甲酰胺混合溶液注入液相色谱仪中进行测定。

本实施例中液相色谱仪采用Agilent1120液相色谱仪或其他适用液相色谱仪，色谱柱：Phenomenex Luna C18250mm×4.6mm×5μm或其他等效柱；检测波长:235nm；检测时的液相流速为1.2ml/min；柱温选择35℃；进样量为8ul。本实施例中液相色谱仪测定过程中所采用的流动相为甲醇溶液和水。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。