多功能免疫细胞疗法

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背景技术

2018年11月14日提交的国际申请号PCT/US2018/060902和PCT/US2018/060887的公开内容出于所有目的通过引用整体并入本文。

基因修饰的T细胞的过继转移是一种正在快速发展的癌症创新治疗。嵌合抗原受体(CAR)工程改造的T细胞是可再生药物，其能够提供持续的功能性免疫。CD19 CAR T在一系列血液系统癌症中的临床疗效已经得到证实，并且对于其他基因修饰的CAR T在实体瘤中的鼓舞人心的早期临床数据也已被报道。然而，在CAR技术能够更完全地实现其巨大潜力之前，必须应对重大挑战。

目前用CAR-T细胞进行的临床试验观察到，由于CAR T细胞无法解决抗原逃逸和癌症或肿瘤表型中固有的异质性，在一年或更短的时间内复发的发生率很高。此外，目前的CAR技术不能适应癌症或肿瘤表型的这种变化。例如，在实体瘤中，由于肿瘤靶标异质性以及无法重新编程CAR T细胞以识别扩大的一组随时间表达的抗原靶标，目前的CAR技术表现出有限的疗效。除了提高临床反应的持久性和可持续性外，对于当前基于CAR细胞的技术的使用的其他关键障碍包括产生CAR-T细胞所需的时间以及CAR细胞用于白血病以外的癌症的次优特异性、有效性和安全性。因此，需要一种基于CAR细胞的技术，该技术提供同时和/或顺序靶标多特异性以及能够在体内调节、改变或重定向CAR细胞介导的免疫应答。

骨髓移植(BMT)和造血干细胞移植(HSCT)有望修正任何血液或免疫疾病。Czechowicz等人,Blood 128(22):493(2016)。尽管BMT和HSCT具有巨大的潜力，但它们的临床使用仍然相当有限，部分原因是与目前为了使患者准备以进行移植和随后的供体HSC植入的高剂量化疗/放疗调理方案相关的严重安全性和毒性风险。患者所经历的最常见的毒性包括中性粒细胞减少症、感染、贫血、粘膜炎、不孕症、器官损伤，尤其是在骨髓区室和继发性恶性肿瘤中。完全排除这些有毒性的调理方案将显著提高BMT和HSCT的安全性，并扩大潜在应用以包括更多的非恶性血液系统疾病、各种自身免疫疾病，以及促进实体器官移植。因此，需要开发改进的调理方案，以限制或排除与目前高剂量化疗/放疗相关的毒性，同时还能有效治疗潜在的疾病状态。

发明简述

在一些实施方案中，本公开内容提供了：

[1.]一种组合物，其包含：

[1.]一种治疗淋巴瘤或白血病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

a.治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFPp26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

b.一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域；

[2.]根据[1]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病包含表达BCMA的细胞；

[3.]根据[1]或[2]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病是B细胞淋巴瘤或白血病；

[4.]根据[1]或[2]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病是多发性骨髓瘤；

[5.]一种向多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

a.治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFPp26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

b.一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域；

[6.]一种杀伤多发性骨髓瘤细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

a.治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFPp26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

b.一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域；

[7.]一种耗竭多发性骨髓瘤细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

a.治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFPp26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

b.一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域；

[8.]根据[1]至[7]中任一项所述的方法，其中所述细胞是免疫效应细胞；

[9.]根据[1]至[8]中任一项所述的方法，其中所述细胞是T细胞或NK细胞；

[10.]根据[1]至[9]中任一项所述的方法，其中所述与AFP p26结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列；

[11.]根据[1]至[10]中任一项所述的方法，其中所述CAR包含SEQ ID NO：1164的氨基酸序列；

[12.]根据[1]至[11]中任一项所述的方法，其中所述与BCMA结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列；

[13.]根据[1]至[12]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列；

[14.]根据[1]至[13]中任一项所述的方法，其中所述衔接子被配制成用于静脉内施用；

[15.]根据[1]至[13]中任一项所述的方法，其中所述衔接子被配制成用于皮下施用；

[16.]根据[1]至[15]中任一项所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子同时施用；

[17.]根据[1]至[15]中任一项所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子连续施用；

[18.]根据[1]至[15]中任一项所述的方法，其中所述细胞在所述衔接子之前施用；

[19.]根据[1]至[18]中任一项所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子在同一天施用；

[20.]根据[1]至[18]中任一项所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子在不同的日子施用；

[21.]根据[20]所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子连续几天施用；

[22.]根据[20]所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子相隔1、2、3、4、5、6或7天施用；

[23.]根据[1]至[22]中任一项所述的方法，其中所述细胞和所述衔接子在不同的日子施用；

[24.]根据[1]至[23]中任一项所述的方法，其包括施用约20x10

[25.]根据[1]至[23]中任一项所述的方法，其包括施用约100x10

[26.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg的衔接子；

[27.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约20μg/kg至约1mg/kg的衔接子；

[28.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg的衔接子；

[29.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg或约0.3mg/kg的衔接子；

[30.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约0.4mg、约0.8mg、约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg、约20mg、约24mg、约28mg、约40mg或约80mg的衔接子；

[31.]根据[1]至[24]中任一项所述的方法，其包括施用一个或多个剂量的约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg的衔接子；

[32.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天3次、每天两次、每天、每两天、每周两次或每周施用；

[33.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天施用；

[34.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每两天施用；

[35.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天施用持续约1至约4周，随后每隔一天、每周两次或每周施用；

[36.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天施用持续约1周，随后每隔一天施用；

[37.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天施用持续约1周，随后每周施用两次；

[38.]根据[1]至[31]中任一项所述的方法，其包括施用多于一个剂量的衔接子，其中所述多于一个剂量每天施用持续约1周，随后每周施用；

[39.]根据[1]至[38]中任一项所述的方法，其包括以不同的剂量施用所述衔接子；

[40.]根据任何[36]所述的方法，其包括施用一个或多个负荷剂量的约0.1mg/kg至约10mg/kg的衔接子，随后施用约0.01mg/kg至约0.1mg/kg的一个或多个维持剂量；

[41.]根据任何[39]所述的方法，其包括施用一个或多个负荷剂量的约4mg至约200mg的衔接子，随后施用约0.4mg至约10mg的一个或多个维持剂量；

[42.]根据任何[40]或[41]所述的方法，其中施用所述一个或多个负荷剂量持续约1天至约3周；

[43.]根据任何[40]或[41]所述的方法，其中施用所述一个或多个负荷剂量持续约1天至约1周；

[44.]根据任何[40]或[41]所述的方法，其中施用所述一个或多个负荷剂量持续1天、2天、3天、4天或约1周；

[45.]一种治疗淋巴瘤或白血病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域，其中已向受试者施用治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[46.]根据[45]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病包含表达BCMA的细胞；

[47.]根据[45]或[46]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病是B细胞淋巴瘤或白血病；

[48.]根据[45]或[46]所述的方法，其中所述淋巴瘤或白血病是多发性骨髓瘤；

[49.]一种向多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域，其中已向受试者施用治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[50.]一种杀伤多发性骨髓瘤细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域，其中已向受试者施用治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[51.]一种耗竭多发性骨髓瘤细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用一个或多个治疗有效剂量的衔接子，其包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域，其中已向受试者施用治疗有效剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

本文提供的是基于多功能嵌合抗原受体(CAR)的组合物以及它们在将免疫应答定向至靶细胞中的用途。所述组合物具有的用途包括治疗过度增殖性病症，例如癌症。提供的方法通常包括将CAR细胞与衔接子组合使用。所述衔接子赋予在体外和体内调节、改变和/或重定向CAR细胞介导的免疫应答的能力。

本公开内容涉及的组合物包括：(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含抗原决定簇结合结构域(ADBD)，和(b)可溶性蛋白(“衔接子”)，其包含(i)抗原决定簇(AD)和(ii)ADBD。本公开内容还提供了用本文提供的组合物杀伤靶细胞的方法，包括本文提供的组合物的治疗应用。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的替代支架结合结构域(ASBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)含有与靶细胞上的第二AD结合的ASBD的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的D结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的第一D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的第二D结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含第一靶细胞的组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述第一靶细胞上；(b)包含第一靶细胞的组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与CAR接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含第一靶细胞的组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述第一靶细胞上；(b)包含第一靶细胞的组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与CAR接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，包括将包含靶细胞的组合物与CAR接触，其中(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中重定向靶细胞杀伤的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD和第二AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中定向靶细胞杀伤的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中将免疫应答重定向至靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD和第二AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种重定向治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD和第二AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种定向治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种重定向治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)ADBD，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中(a)所述患者已用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD和第二AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的ADBD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种定向治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；以及(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达CAR的细胞，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与人CD45抗原决定簇(AD)特异性结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达CD45AD的细胞，并且其中工程改造的细胞不表达CD45 AD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤表达人CD45的靶细胞的方法，所述方法包括使靶细胞与工程改造的人免疫效应细胞接触，其中所述工程改造的人免疫效应细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与人CD45抗原决定簇(AD)特异性结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向表达人CD45的靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使靶细胞与工程改造的人免疫效应细胞接触，其中所述工程改造的人免疫效应细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与人CD45抗原决定簇(AD)特异性结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，其中所述工程改造的人免疫效应细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与人CD45抗原决定簇(AD)特异性结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除至少一个人CD45AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中所述第一AD不是所述至少一个人CD45 AD，其中与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达CD45的细胞，其中所述衔接子包含第一AD和与所述至少一个人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述至少一个人CD45 AD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使靶细胞与工程改造的人免疫效应细胞和衔接子接触，其中所述靶细胞表达CD45，其中所述工程改造的人免疫效应细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中所述衔接子包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使靶细胞与工程改造的人免疫效应细胞和衔接子接触，其中所述靶细胞表达CD45，其中所述工程改造的人免疫效应细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(b)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中所述衔接子包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至表达CD45的靶细胞的方法，所述方法包括(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰；以及(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至表达CD45的靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至表达CD45的靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰；以及(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中工程改造的细胞不表达所述第一AD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使靶细胞与工程改造的人免疫效应细胞接触，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的细胞、工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(1)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰；以及(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够结合所述靶细胞上的第二AD的第二ADBD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达所述第二AD的细胞，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述第二AD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰；以及(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的第一AD和能够结合所述第二AD的第二ADBD，其中所述第二AD在所述靶细胞上表达。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和(b)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，其中与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达所述第二AD的细胞，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述第二AD。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含(i)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(1)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一ADBD，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和(ii)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰；以及(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的所述第一AD和能够结合所述第二AD的第二ADBD，其中所述第二AD在所述靶细胞上表达。

在一些实施方案中，本公开内容提供了：

[1.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[2.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[3.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一抗原决定簇(AD)结合的替代支架结合结构域(ASBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[4.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其包含与靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[5.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的D结构域；

[6.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[7.]一种组合物，包含：

(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的第一D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的第二D结构域；

[8.]根据[1]-[7]中任一项所述的组合物，其中CAR包含单链可变片段(scFv)ADBD；

[9.]根据[1]-[7]中任一项所述的组合物，其中所述CAR包含替代支架结合结构域(ASBD)ADBD；

[10.]根据[9]所述的组合物，其中所述CAR包含D结构域，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：17-26和27或SEQ ID NO：44-1078和1079；

[11.]根据[1]-[10]中任一项所述的组合物，其中所述CAR包含2个ADBD；

[12.]根据[11]所述的组合物，其中所述CAR包含ASBD和scFv；

[13.]根据[11]所述的组合物，其中所述CAR包含D结构域和scFv；

[14.]根据[11]所述的组合物，其中所述CAR包含2个ASBD；

[15.]根据[11]所述的组合物，其中所述CAR包含2个D结构域；

[16.]根据[1]-[15]中任一项所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域是信号传导结构域；

[17.]根据[16]所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域包含主要信号传导结构域；

[18.]根据[16]所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域包含CD3ζ主要信号传导结构域；

[19.]根据[17]或[18]所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域还包含共刺激信号传导结构域；

[20.]根据[19]所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域包含选自以下的共刺激信号传导结构域：CD28、41BB、CD27和CD134；

[21.]根据[20]所述的组合物，其中所述CAR胞内结构域包含41BB共刺激信号传导结构域；

[22.]根据[1]-[21]中任一项所述的组合物，其中所述CAR与选自以下的抗原结合：CD19、CD22、CD123、BCMA、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1；

[23.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与BCMA结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：44-338和339；

[24.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与CD123结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：340-77和773；

[25.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与CD19结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1030-1058和1059；

[26.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与CD22结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1060-1068和1069；

[27.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与CS1结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：780-794和795；

[28.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与HER2结合，任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：800-839和840；

[29.]根据[22]所述的组合物，其中所述CAR与PDL1结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1010-1016、1074-1078和1079；

[30.]根据[1]-[21]中任一项所述的组合物，其中所述CAR与AFP p26结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：841-983和984；

[31.]根据[1]-[30]中任一项所述的组合物，其中所述CAR包含2个与不同靶标结合的ADBD；

[32.]根据[31]所述的组合物，其中所述CAR与CD19和CD123结合；

[33.]根据[31]所述的组合物，其中所述CAR与BCMA和CS1结合；

[34.]根据[31]所述的组合物，其中所述CAR与CD22和CD123结合；

[35.]根据[31]所述的组合物，其中所述CAR与PDL1和CD123结合；

[36.]根据[32]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD19结合的第一ASBD和与CD123结合的第二ASBD；

[37.]根据[36]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD19结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[38.]根据[32]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD19结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[39.]根据[33]所述的组合物，其中所述CAR包含与BCMA结合的第一ASBD和与CS1结合的第二ASBD；

[40.]根据[39]所述的组合物，其中所述CAR包含与BCMA结合的第一D结构域和与CS1结合的第二D结构域；

[41.]根据[33]所述的组合物，其中所述CAR包含与CS1结合的D结构域和与BCMA结合的scFv；

[42.]根据[39]所述的组合物，其中所述CAR包含与BCMA结合的D结构域和与CS1结合的scFv；

[43.]根据[34]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD22结合的第一ASBD和与CD123结合的第二ASBD；

[44.]根据[43]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD22结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[45.]根据[34]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD22结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[46.]根据[35]所述的组合物，其中所述CAR包含与PDL1结合的第一ASBD和与CD123结合的第二ASBD；

[47.]根据[46]所述的组合物，其中所述CAR包含与PDL1结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[48.]根据[35]所述的组合物，其中所述CAR包含与PDL1结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[49.]根据[32]所述的组合物，其中所述CAR包含与CD19结合的ASBD和与CD123结合的scFv；

[50.]根据[1]-[49]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含肿瘤抗原的AD，任选地其中所述肿瘤抗原选自：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1；

[51.]根据[1]-[50]所述的组合物，其中所述衔接子包含AD，其是AFP p26或AFP的表位，并且任选地包含SEQ ID NO：16或1117-1123的氨基酸残基；

[52.]根据[1]-[51]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含ADBD，其是scFv；

[53.]根据[1]-[51]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含ADBD，其是ASBD；

[54.]根据[53]所述的组合物，其中所述衔接子包含D结构域，并且任选地其中所述衔接子包含选自以下的序列：SEQ ID NO：17-26和27，或SEQ ID NO：44-1078和1079；

[55.]根据[1]-[54]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含两个ADBD；

[56.]根据[55]所述的组合物，其中所述两个ADBD(a)是相同的，(b)与相同的抗原决定簇结合，(c)与相同抗原的不同AD结合，或(d)与相同细胞上的不同抗原结合，或(e)与不同细胞上的不同抗原结合；

[57.]根据[55]或[56]所述的组合物，其中所述衔接子包含两个ASBD；

[58.]根据[55]-[57]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含两个D结构域，并且任选地其中所述衔接子包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：44-1079；

[59.]根据[55]或[56]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含是scFv的ADBD和是ASBD的ADBD；

[60.]根据[59]所述的组合物，其中所述衔接子包含是scFv的ADBD和是D结构域的ADBD；

[61.]根据[1]-[60]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子包含与选自以下的成员结合的ADBD：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1；

[62.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与BCMA结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：44-338和339；

[63.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CS1结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：780-794和795；

[64.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CD123结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：340-772和773；

[65.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CD19结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1030-1058和1059；

[66.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CD22结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1060-1068和1069；

[67.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与HER2结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：800-839和840；

[68.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与TACI或BAFFR结合的ADBD；

[69.]根据[61]所述的组合物，其中所述衔接子包含与PDL1结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1010-1016、1074-1078和1079；

[70.]根据[1]-[69]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子是双特异性的；

[71.]根据[70]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CD19结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[72.]根据[70]所述的组合物，其中所述衔接子包含与BCMA结合的ADBD和与CS1结合的ADBD；

[73.]根据[70]所述的组合物，其中所述衔接子包含与CD22结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[74.]根据[70]所述的组合物，其中所述衔接子包含与PDL1结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[75.]根据[1]-[74]中任一项所述的组合物，其中所述靶细胞是肿瘤细胞；

[76.]根据[75]所述的组合物，其中所述肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病、脊髓发育不良、乳腺癌和卵巢癌；

[77.]根据[75]所述的组合物，其中所述肿瘤细胞是多发性骨髓瘤；

[78.]根据[75]所述的组合物，其中至少一种靶细胞是肿瘤细胞；

[79.]根据[75]所述的组合物，其中所述第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞；

[80.]根据[79]所述的组合物，其中所述第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于同一类型；

[81.]根据[79]所述的组合物，其中所述第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同类型；

[82.]根据[80]或[81]所述的组合物，其中所述肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病、脊髓发育不良、乳腺癌和卵巢癌；

[83.]根据[82]所述的组合物，其中所述肿瘤细胞是多发性骨髓瘤；

[84.]根据[1]-[83]中任一项所述的组合物，其中所述表达CAR的细胞是免疫效应细胞；

[85.]根据[84]所述的组合物，其中所述免疫效应细胞是T细胞；

[86.]根据[84]所述的组合物，其中所述免疫效应细胞是NK细胞；

[87.]根据[1]-[86]中任一项所述的组合物，其中所述表达CAR的细胞杀伤靶细胞；

[88.]根据[1]-[87]中任一项所述的组合物，其中所述衔接子与抗原决定簇的结合阻断了包含所述AD的抗原的活性；

[89.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使靶细胞与[1]-[88]中任一项所述的组合物接触；

[90.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[91.]一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[92.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[93.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[94.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含第一靶细胞的组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[95.]一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一AD存在于所述第一靶细胞上；

(b)包含第一靶细胞的组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[96.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[97.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[98.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[99.]一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[100.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[101.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中

(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[102.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于靶细胞上；

(b)包含第一靶细胞的组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

[103.]一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一AD存在于所述第一靶细胞上；

(b)包含第一靶细胞的组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[104.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[105.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[106.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[107.]一种在患者中重定向靶细胞杀伤的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[108.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一抗原决定簇(AD)结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[109.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[110.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)和第二AD存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[111.]一种在患者中定向靶细胞杀伤的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一抗原决定簇(AD)和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[112.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[113.]一种在患者中杀伤靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[114.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[115.]一种在患者中将免疫应答重定向至靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[116.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一抗原决定簇(AD)结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[117.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[118.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)和第二AD存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[119.]一种在患者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一抗原决定簇(AD)和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[120.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[121.]一种在患者中向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[122.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[123.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[124.]一种重定向治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[125.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一抗原决定簇(AD)结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[126.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[127.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)和第二AD存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[128.]一种定向治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一抗原决定簇(AD)和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[129.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[130.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二个AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[131.]根据[122]-[130]中任一项所述的方法，其中增殖性病症或癌症选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病、脊髓发育不良、乳腺癌和卵巢癌；

[132.]根据[122]-[130]中任一项所述的方法，其中增殖性病症或癌症是多发性骨髓瘤；

[133.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[134.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[135.]一种重定向治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[136.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一抗原决定簇(AD)结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；

[137.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用衔接子，其中

(a)所述患者已用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及

(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD；

[138.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)和第二AD存在于所述靶细胞上；

(b)患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的所述第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[139.]一种定向治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一抗原决定簇(AD)和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；以及

(b)所述CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[140.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[141.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中

(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；

(b)所述患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；以及

(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；

[142.]根据[133]-[141]中任一项所述的方法，其中血液系统癌症选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良；

[143.]根据[133]-[141]中任一项所述的方法，其中血液系统癌症是多发性骨髓瘤；

[144.]根据[90]-[131]中任一项所述的方法，其中所述CAR包含单链可变片段(scFv)ADBD；

[145.]根据[90]-[143]中任一项所述的方法，其中所述CAR包含替代支架结合结构域(ASBD)ADBD；

[146.]根据[145]所述的方法，其中所述CAR包含D结构域，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：17-26和27或SEQ ID NO：44-1078和1079；

[147.]根据[90]-[146]中任一项所述的方法，其中所述CAR包含2个ADBD；

[148.]根据[147]所述的方法，其中所述CAR包含ASBD和scFv；

[149.]根据[147]所述的方法，其中所述CAR包含D结构域和scFv；

[150.]根据[147]所述的方法，其中所述CAR包含2个ASBD；

[151.]根据[147]所述的方法，其中所述CAR包含2个D结构域；

[152.]根据[90]-[151]中任一项所述的方法，其中所述CAR胞内结构域是信号传导结构域；

[153.]根据[152]所述的方法，其中所述CAR胞内结构域包含主要信号传导结构域；

[154.]根据[152]所述的方法，其中所述CAR胞内结构域包含CD3ζ主要信号传导结构域；

[155.]根据[153]或[154]所述的方法，其中所述CAR胞内结构域还包含共刺激信号传导结构域；

[156.]根据[155]所述的方法，其中所述CAR胞内结构域包含选自以下的共刺激信号传导结构域：CD28、41BB、CD27和CD134；

[157.]根据[156]所述的方法，其中所述CAR胞内结构域包含41BB共刺激信号传导结构域；

[158.]根据[90]-[157]中任一项所述的方法，其中所述CAR与选自以下的抗原结合：CD19、CD22、CD123、BCMA、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1；

[159.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与BCMA结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：44-338和339；

[160.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与CS1结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：780-794和795；

[161.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与CD123结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：340-772和773；

[162.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与CD19结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1030-1058和1059；

[163.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与CD22结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1060-1068和1069；

[164.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与HER2结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：800-839和840；

[165.]根据[158]所述的方法，其中所述CAR与PDL1结合，并且任选地其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1010-1016、1074-1078和1079；

[166.]根据[90]-[157]中任一项所述的方法，其中所述CAR与AFP p26结合，并且任选地包括其中所述CAR包含选自以下的序列：SEQ ID NO：841-983和984；

[167.]根据[90]-[166]中任一项所述的方法，其中所述CAR包含2个与不同靶标结合的ADBD；

[168.]根据[167]所述的方法，其中所述CAR与CD19和CD123结合；

[169.]根据[167]所述的方法，其中所述CAR与CD22和CD123结合；

[170.]根据[167]所述的方法，其中所述CAR与PDL1和CD123结合；

[171.]根据[167]所述的方法，其中所述CAR与CS1和BCMA结合；

[172.]根据[168]所述的方法，其中所述CAR包含与CD19结合的第一ASBD和与C123结合的第二ASBD；

[173.]根据[172]所述的方法，其中所述CAR包含与CD19结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[174.]根据[168]所述的方法，其中所述CAR包含与CD19结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[175.]根据[169]所述的方法，其中所述CAR包含与CD22结合的第一ASBD和与CD123结合的第二ASBD；

[176.]根据[175]所述的方法，其中所述CAR包含与CD22结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[177.]根据[169]所述的方法，其中所述CAR包含与CD22结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[178.]根据[170]所述的方法，其中所述CAR包含与PDL1结合的第一ASBD和与CD123结合的第二ASBD；

[179.]根据[178]所述的方法，其中所述CAR包含与PDL1结合的第一D结构域和与CD123结合的第二D结构域；

[180.]根据[170]所述的方法，其中所述CAR包含与PDL1结合的D结构域和与CD123结合的scFv；

[181.]根据[168]所述的方法，其中所述CAR包含与CD19结合的ASBD和与CD123结合的scFv；

[182.]根据[171]所述的方法，其中所述CAR包含与BCMA结合的第一ASBD和与CS1结合的第二ASBD；

[183.]根据[182]所述的方法，其中所述CAR包含与BCMA结合的第一D结构域和与CS1结合的第二D结构域；

[184.]根据[171]所述的方法，其中所述CAR包含与BCMA结合的D结构域和与CS1结合的scFv；

[185.]根据[171]所述的方法，其中所述CAR包含与CS1结合的D结构域和与BCMA结合的scFv；

[186.]根据[90]-[185]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含肿瘤抗原的AD，任选地其中所述肿瘤抗原选自：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1；

[187.]根据[90]-[186]所述的方法，其中所述衔接子包含AD，其是AFP p26或AFP的表位，并且任选地包含SEQ ID NO：16或1117-1123的氨基酸残基；

[188.]根据[90]-[187]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含ADBD，其是scFv；

[189.]根据[90]-[187]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含ADBD，其是ASBD；

[190.]根据[189]所述的方法，其中所述衔接子包含D结构域，并且任选地其中所述衔接子包含选自以下的序列：SEQ ID NO：17-26和27或SEQ ID NO：44-1078和1079；

[191.]根据[90]-[190]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含两个ADBD；

[192.]根据[191]所述的方法，其中所述两个ADBD(a)是相同的，(b)与相同的抗原决定簇结合，(c)与相同抗原的不同AD结合，或(d)与相同细胞上的不同抗原结合，或(e)与不同细胞上的不同抗原结合；

[193.]根据[191]或[192]所述的方法，其中所述衔接子包含两个ASBD；

[194.]根据[191]、[192]或[193]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含两个D结构域，并且任选地其中所述衔接子包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：44-1079；

[195.]根据[191]或[192]所述的方法，其中所述衔接子包含是scFv的ADBD和是ASBD的ADBD；

[196.]根据[195]所述的方法，其中所述衔接子包含是scFv的ADBD和是D结构域的ADBD；

[197.]根据[90]-[196]中任一项所述的方法，其中所述衔接子包含与选自以下的成员结合的ADBD：BCMA、CS1、HER2、CD123、CD19、CD22、TACI、BAFFR和PDL1；

[198.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与BCMA结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：44-338和339；

[199.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与CS1结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：780-794和795；

[200.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与CD123结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：340-772和773；

[201.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与CD19结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1030-1058和1059；

[202.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与CD22结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1060-1068和1069；

[203.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与HER2结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：800-839和840；

[204.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与TACI或BAFFR结合的ADBD；

[205.]根据[197]所述的方法，其中所述衔接子包含与PDL1结合的ADBD，并且任选地其中所述ADBD包含选自以下的序列：SEQ ID NO：1010-1016、1074-1078和1079；

[206.]根据[90]-[205]中任一项所述的方法，其中所述衔接子是双特异性的；

[207.]根据[206]所述的方法，其中所述衔接子包含与BCMA结合的ADBD和与CS1结合的ADBD；

[208.]根据[206]所述的方法，其中所述衔接子包含与CD19结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[209.]根据[206]所述的方法，其中所述衔接子包含与CD22结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[210.]根据[206]所述的方法，其中所述衔接子包含与PDL1结合的ADBD和与CD123结合的ADBD；

[211.]根据[90]-[210]中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是肿瘤细胞；

[212.]根据[211]所述的方法，其中肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病、脊髓发育不良、乳腺癌和卵巢癌；

[213.]根据[211]所述的方法，其中肿瘤细胞是多发性骨髓瘤；

[214.]根据[211]所述的方法，其中至少一种靶细胞是肿瘤细胞；

[215.]根据[211]所述的方法，其中所述第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞；

[216.]根据[215]所述的方法，其中所述第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于同一类型；

[217.]根据[215]所述的方法，其中所述第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同类型；

[218.]根据[214]或[215]所述的方法，其中肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病、脊髓发育不良、乳腺癌和卵巢癌；

[219.]根据[214]或[215]所述的方法，其中肿瘤细胞是多发性骨髓瘤；

[220.]根据[90]-[219]中任一项所述的方法，其中所述表达CAR的细胞是免疫效应细胞；

[221.]根据[220]所述的方法，其中所述免疫效应细胞是T细胞；

[222.]根据[220]所述的方法，其中所述免疫效应细胞是NK细胞；

[223.]根据[90]-[222]中任一项所述的方法，其中所述表达CAR的细胞杀伤靶细胞；

[224.]一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含

(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与人CD45抗原决定簇(AD)特异性结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和

(b)消除人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，

其中，工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达CD45AD的细胞，并且其中工程改造的细胞不表达CD45 AD；

[225.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使根据[224]所述的工程改造的细胞与靶细胞接触，其中所述靶细胞表达人CD45；

[226.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使根据[224]所述的工程改造的细胞与靶细胞接触，其中所述靶细胞表达人CD45；

[227.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[228.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[229.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[230.]一种耗竭记忆T细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[231.]一种治疗自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[232.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[233.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[224]所述的工程改造的细胞；

[234.]一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含

(a)嵌合抗原受体(CAR)，其包含(1)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域；和

(b)消除至少一个人CD45 AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，

其中所述第一AD不是所述至少一个人CD45 AD，其中与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达CD45AD的细胞，其中所述衔接子包含第一AD和与所述至少一个人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述至少一个人CD45 AD；

[235.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使根据[234]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，其中所述靶细胞表达CD45，并且其中所述衔接子包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[236.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使根据[234]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，其中所述靶细胞表达CD45，并且其中所述衔接子包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[237.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括使根据[234]所述的工程改造的细胞与衔接子和癌细胞接触，其中所述癌细胞表达CD45，并且其中所述衔接子包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[238.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[239.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[240.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[241.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[242.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[243.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[244.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[245.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[246.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[247.]一种耗竭记忆T细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[248.]一种耗竭记忆T细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[249.]一种耗竭记忆T细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[250.]一种治疗自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[251.]一种治疗自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[252.]一种治疗自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[253.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[254.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[255.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[256.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[257.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[234]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD；

[258.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含第一AD和与人CD45 AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[234]所述的工程改造的细胞；

[259.]一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含：

(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)消除所述第一AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，

其中，工程改造的细胞不表达所述第一AD；

[260.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使根据[259]所述的工程改造的细胞与靶细胞接触；

[261.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使根据[259]所述的工程改造的细胞与靶细胞接触；

[262.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；

[263.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；

[264.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；

[265.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；

[266.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；

[267.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使根据[259]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，其中所述衔接子包含被所述CAR识别的AD和第二ADBD；

[268.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使根据[259]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，并且其中所述衔接子包含被所述CAR识别的AD和能够与所述靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[269.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括使根据[259]所述的工程改造的细胞与衔接子和癌细胞接触，其中所述衔接子包含被所述CAR识别的AD和能够与所述癌细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[270.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与所述靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[271.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与所述靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[272.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与所述靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[259]所述的工程改造的细胞；

[273.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[274.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[275.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[259]所述的工程改造的细胞；

[276.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[277.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[278.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[259]所述的工程改造的细胞；

[279.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[280.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含被CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[281.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[259]所述的工程改造的细胞；

[282.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[283.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[259]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD；

[284.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含被所述CAR识别的AD和能够与靶细胞上的第二AD结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[259]所述的工程改造的细胞；

[285.]一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含：

(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，

其中，与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达所述第二AD的细胞，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述第二AD；

[286.]一种工程改造的人免疫效应细胞，所述细胞包含：

(a)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含(i)两个或更多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其包括与第一抗原决定簇(AD)特异性结合的第一ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；和

(b)消除第二AD在工程改造的细胞上的表达的基因修饰，

其中，与衔接子组合使用的工程改造的细胞能够在体外测定中将免疫应答定向至表达所述第二AD的细胞，其中衔接子包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中工程改造的细胞不表达所述第二AD；

[287.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；

[288.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；

[289.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；

[290.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；

[291.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；

[292.]一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在所述靶细胞上表达；

[293.]一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞与衔接子和靶细胞接触，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在所述靶细胞上表达；

[294.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括使根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞与衔接子和癌细胞接触，其中所述衔接子包含第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在所述癌细胞上表达；

[295.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中所述第二AD在所述靶细胞上表达；

[296.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在所述靶细胞上表达；

[297.]一种在受试者中将免疫应答定向至靶细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，并且其中所述第二AD在所述靶细胞上表达；

[298.]一种治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中所述第二AD在与增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥相关的靶细胞上表达；

[299.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在与增殖性病症、癌症、自身免疫性疾病、感染或同种异体移植物排斥相关的靶细胞上表达；

[300.]一种在受试者中治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含与所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，并且其中所述第二AD在与增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥相关的靶细胞上表达；

[301.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中所述第二AD在淋巴细胞靶细胞上表达；

[302.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在淋巴细胞靶细胞上表达；

[303.]一种耗竭淋巴细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，并且其中所述第二AD在淋巴细胞靶细胞上表达；

[304.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中所述第二AD在与移植相关的靶细胞上表达；

[305.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在与移植相关的靶细胞上表达；

[306.]一种调理受试者以进行移植的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含与所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，并且其中所述第二AD在与移植相关的靶细胞上表达；

[307.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括

(a)向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞；以及

(b)向所述受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中所述第二AD在与血液系统癌症相关的靶细胞上表达；

[308.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，其中已向受试者施用衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，并且其中所述第二AD在与血液系统癌症相关的靶细胞上表达；

[309.]一种治疗血液系统癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的衔接子，其包含所述第一AD和与所述第二AD特异性结合的第二ADBD，其中已向受试者施用根据[285]或[286]所述的工程改造的细胞，并且其中所述第二AD在与血液系统癌症相关的靶细胞上表达；

[310.]一种分离的衔接子多肽，所述多肽包含(1)抗原决定簇(AD)和(b)一个或多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)，

其中至少一个ADBD与人CD45 AD特异性结合，并且其中在根据[234]所述的工程改造的细胞的存在下使所述衔接子与表达CD45 AD的靶细胞接触，能够在体外测定中通过工程改造的细胞将免疫应答定向至所述靶细胞。

附图简述

图1A-1D：在一组肿瘤上使用在1:4至1:64范围内的效应细胞与靶细胞比率，将CD123特异性(cg06)CAR和BCMA特异性(bc-40)CAR的细胞溶解活性与没有已知靶特异性(α3D)的CAR进行比较。简言之，将20,000个表达bc40 CAR、cg06 CAR或α3D CAR的T细胞与数量渐增的CD123

图2A-2B：衔接子结合与衔接子和CAR结合特异性相关联。Jurkat NFAT-萤光素酶报告细胞用阴性对照CAR(α3D)、AFP(p26)结合CAR(af03)或BCMA结合CAR(bc40)转导。在图2A中，将CAR转导的Jurkat细胞与0.5μg的衔接蛋白一起孵育(4℃下20分钟)，洗涤，然后用抗HIS PE染色(克隆J095G46，4℃下20分钟)。图2B显示基于FLAG染色(克隆L5)相对于模拟转导的Jurkat细胞的CAR表达。

图3A-3C显示匹配CAR:衔接子和靶:衔接子的衔接子结合的特异性驱动靶细胞的裂解。在图3A中，在存在或不存在20,000个用BCMA结合CAR(bc40)转导的T细胞(E:T比率为1:2，供体D14-053017，第7天)的情况下，将40,000个CD123

图4A-4D显示匹配CAR:衔接子和靶:衔接子的衔接子结合的特异性驱动CAR T细胞的细胞因子产生。在图4A和图4B中，在存在或不存在CD123

图5：匹配CAR:衔接子和靶:衔接子的衔接子结合的特异性驱动CAR T细胞的增殖。将用AFP结合CAR(Af03)转导的供体D16-062717细胞进行CFSE标记(在0.5μM下10分钟)，然后在存在CD123特异性衔接子或BCMA特异性衔接子的情况下、在存在或不存在丝裂霉素C处理的CD123

图6A和图6B显示匹配CAR:衔接子和靶:衔接子的衔接子结合驱动通过表达CAR的Jurkat NFAT-萤光素酶报告细胞的信号传导。在图6A中，在存在各种衔接蛋白的情况下、在存在或不存在50,000个CD123

图7A和图7B显示具有BCMA抗原决定簇的CD123特异性衔接子可以与BCMA特异性D结构域CAR(bc40)或BCMA特异性scFv CAR(c11D5-3)一起发挥作用。在图7A中，在存在或不存在20,000个用非特异性CAR(α3D)、BCMA结合D结构域CAR(bc40)或BCMA结合scFv CAR(c11D5-3)转导的T细胞(E:T比率为1:2，供体D14-062717，第9天)的情况下，将40,000个CD123

图8A和图8B显示AFP特异性CAR通过与多种衔接蛋白一起孵育可以同时具有CD123和BCMA结合能力。将10

图9A和图9B显示双结合结构域衔接蛋白通过表达CAR的Jurkat NFAT-萤光素酶报告细胞驱动相对于单结合结构域衔接蛋白而言增强的信号传导。在图9A中，在存在CD123特异性Cg06-衔接子(Cg06-p26)或Cg06-双衔接蛋白(Cg06-p26-Cg06)的情况下、在存在50,000个CD123

图10显示截短的p26和全长p26与人FcRn的结合是pH依赖性的。

图11A-11D显示包含CS1(SLAMF7、CRACC、CD319)特异性ADBD的衔接子调节CS1阳性肿瘤的胞内信号传导和杀伤。在图11A中，当在存在表达af59-CAR的JNL10细胞(图11A)和CS1阳性肿瘤细胞系MM.1S的情况下培养时，cc02 ADBD和cc08 ADBD显示最有效的NFAT信号传导。图11B显示能够结合CS1和BCMA两者的双特异性bc98-p26-cc02衔接子的信号传导能力强于单特异性BCMA结合bc98-p26-α3DQ19E衔接子和单特异性CS1结合α3DQ19E-p26-cc02衔接子。图11C和图11D指示双特异性bc98-p26-cc02是杀伤HT929(高表达BCMA和CS1两者；图11C)和MM.1S(高表达BCMA，低表达CS1；图11D)的有效衔接子。

图12A-12C显示包含与HER2结合的ADBD的衔接子在与HER2阳性SKBR3肿瘤一起培养的表达Af59-CAR的JNL10细胞中诱导信号传导。图12A显示包含eb08 HER2结合ABDB的衔接子是此测定中最有效的刺激物。图12B显示JNL10细胞中由包含eb08的衔接子介导的NFAT信号传导大于由包含zHER:4的衔接子介导的NFAT信号传导，与由包含9.29的衔接子介导的NFAT信号传导相当，并且小于由包含G3和zHER2:342的衔接子介导的NFAT信号传导。图12C证明包含HER2结合eb08或HER2结合eb04的衔接子以剂量依赖性方式调节肿瘤裂解。

图13.与BCMA特异性衔接子(“SPRX-BCMA”)组合的用p26结合CAR转导的T细胞(“ARC-T”)与BCMA靶向的CAR-T细胞(“CART-ddBCMA”)相当地在体内消除MM.1S肿瘤细胞。在施用BCMA靶向的CAR-T细胞或用p26结合CAR转导的T细胞与BCMA特异性衔接子的组合后，通过植入了表达GFP和萤光素酶的MM.1S细胞的NGS小鼠的背侧成像测量总通量。

图14.用p26结合CAR转导的T细胞(“ARC-T”)在BCMA+B细胞白血病(NALM6-BCMA)的播散性模型中表现出与BCMA特异性衔接子(“SPRX-BCMA”)的间歇性给药相当的体内活性。在施用10

图15.I.V.施用后在小鼠中BCMA特异性衔接子(“SPRX-BCMA”)在NALM6-BCMA肿瘤细胞上的体内停留时间。

发明详述

I.定义

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。

应理解无论在本文中将实施方案用语言“包含”来描述的情况如何，都提供以“由……组成”和/或“基本上由……组成”的术语描述的另外相似的实施方案。但是，当在权利要求中作为过渡性短语使用时，每一个都应该被单独地且在适当的法律和事实背景下进行解释(例如，“包含”被认为是更开放的短语，而“由……组成”是更封闭的，而“基本上由……组成”则处于中间地带)。

如本文所用，除非另外指出，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数个/种指代物。

如本文中诸如“A和/或B”的短语中所使用的术语“和/或”旨在包括A和B两者；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案的每一种：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

如本文中在提及可测量的值诸如量、持续时间和本领域中已知的其他可测量的值时使用的术语“约”旨在涵盖自指定值的±20％的变化，或在一些实施方案中，±10％的变化，或在一些实施方案中，±5％的变化，或在一些实施方案中，±1％的变化，或在一些实施方案中，±0.1％的变化，因为此类变化适于执行所公开的方法。

术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用，是指包含经由肽键连接的来源于氨基酸的单元的生物聚合物；蛋白质可以由两条或更多条多肽链构成。

“细胞表面受体”是指能够接收信号以及穿过细胞质膜传递这种信号的分子和分子复合物。本文提供的细胞表面受体的实例是活化的整合素受体，例如转移细胞上的活化的αvβ3整合素受体。如本文所用，“细胞表面受体”还包括在细胞表面上表达的分子，其含有能够结合目的抗原决定簇靶的CAR。术语“受体”表示与分子(例如，配体)结合或以其他方式相互作用并介导配体对细胞的作用的细胞相关联蛋白。在若干个实施方案中，与受体相互作用的分子是生物学活性分子。膜结合的细胞表面受体的特征在于包含胞外配体结合结构域、跨膜结构域和通常参与信号转导的胞内效应子结构域的多结构域结构。

如本文所用的“嵌合抗原受体”或“CAR”或“CARs”是指工程化嵌合多肽，其将抗原或靶特异性移植到诸如免疫细胞(例如，T细胞，如初始T细胞、中枢记忆T细胞、效应记忆T细胞，NK细胞，NKT细胞或其多种或组合)的细胞上。CAR在本文中也被称为人工T细胞受体、嵌合T细胞受体或嵌合免疫受体。CAR与细胞免疫功能受体或衔接分子共享结构或功能性质。在结合同源抗原时，CAR可以活化其所处的细胞毒性细胞或使其失活，或调节细胞的抗肿瘤活性或以其他方式调节细胞免疫应答。在一些实施方案中，CAR包含来自T细胞受体(TCR，例如，与T细胞受体复合物相关联的ζ链)或自然杀伤细胞受体(NKR)的一个或多个元件(例如，结构域)。在一些实施方案中，CAR包含(1)特异性结合抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(2)跨膜结构域，和(3)胞内结构域。在一些实施方案中，CAR包含多于一个抗原决定簇结合结构域。在一些实施方案中，CAR包含多于一个抗原决定簇结合结构域，所述抗原决定簇结合结构域结合相同抗原的不同抗原决定簇、不同抗原上的不同抗原决定簇或由不同靶细胞表达的抗原决定簇。

如本文所用的术语“免疫细胞”是指哺乳动物免疫系统的细胞，包括但不限于抗原呈递细胞、B细胞、嗜碱性粒细胞、细胞毒性T细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、粒细胞、辅助T细胞、白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、记忆细胞、单核细胞、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、吞噬细胞、浆细胞和T细胞。

术语“T细胞”和“T淋巴细胞”可互换，并且在本文中同义使用。实例包括但不限于初始T细胞、中枢记忆T细胞、效应记忆T细胞或其组合。

如本文所用的术语“自体的”是指来源于相同个体的随后被重新引入所述个体的任何材料。

如本文所用的术语“同种异体的”是指来源于与引入材料的个体相同物种的不同动物的任何材料。当一个或多个基因座处的基因不相同时，两个或更多个个体被认为互相是同种异体的。在一些方面，来自相同物种的个体的同种异体材料可以在遗传学上充分不同以抗原性地相互作用。

术语“效应细胞”是表达一种或多种FcR并执行效应功能的白细胞。优选地，所述细胞至少表达FcRIII并执行ADCC效应功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞；其中，在某些实施方案中，优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如，从如本文所述或本领域中另外已知的血液或PBMC中分离。在一个具体的实施方案中，效应细胞是人效应细胞。

术语“效应功能”是指分化细胞的特化免疫功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞溶解活性或辅助活性，其包括细胞因子的分泌。

如本文所用的术语“免疫应答”是指包括但不限于先天免疫、体液免疫、细胞免疫、免疫、炎性响应、获得性(适应性)免疫、自身免疫和/或过度活跃免疫的免疫。免疫应答的指标可以包括免疫细胞分泌细胞因子、免疫细胞群体的扩增、抗体的产生、细胞毒性细胞的脱粒和靶细胞的杀伤。此类指标可以常规地使用本领域已知的容易获得的测定，例如ELISA或ELISpot来测量。

如本文所用的术语“衔接子”是指包含抗原决定簇(AD)和抗原决定簇结合结构域(ADBD)的多结构域可溶性蛋白，其中所述ADBD结合第二AD。除了AD和ADBD之外，衔接子还可以包含额外的AD、额外的ADBD和/或其他额外的结构域。

如本文可互换使用的术语“抗体”或“免疫球蛋白”包括全抗体。全抗体包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区构成。所述重链恒定区由三个结构域：CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区构成。所述轻链恒定区由一个结构域：Cl组成。VH区和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，称为框架区(FW)。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按照以下顺序布置的三个CDR和四个FW构成：FW1、CDR1、FW2、CDR2、FW3、CDR3、FW4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

如本文所用的术语“抗体片段”等包括抗体的任何功能结构域，诸如抗原结合片段或其单链、效应子结构域、补救受体结合表位或其部分。本文所述的抗体片段可以各种形式存在。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段，二硫键连接的Fv(sdFv)、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、scFv、微抗体、BiTE、Tandab、双抗体((VL-VH)

如本文所用的术语“单链可变片段”或“scFv”抗体是指包含通过接头肽连接的仅重链和轻链的可变区的抗体形式(例如，抗体片段)。scFv可以包含VL-接头-VH或者可以包含VH-接头-VL。ScFv抗体的长度通常为220-250个氨基酸，并且含有长度为10-25个氨基酸的接头。

如本文所用，术语“Fc区”或简单地“Fc”应理解为意指免疫球蛋白链恒定区的羧基末端部分，优选免疫球蛋白重链恒定区或其部分的羧基末端部分。例如，免疫球蛋白Fc区可以包含(1)CH1结构域、CH2结构域和CH3结构域，(2)CH1结构域和CH2结构域，(3)CH1结构域和CH3结构域，(4)CH2结构域和CH3结构域，或(5)两个或更多个结构域与免疫球蛋白铰链区的组合。在一个优选的实施方案中，免疫球蛋白Fc区至少包含免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域，并且优选缺少CH1结构域。在一个实施方案中，重链恒定区来源的免疫球蛋白的类别是IgG(Igγ)(γ亚类1、2、3或4)。可以使用其他类别的免疫球蛋白，IgA(Igα)、IgD(Igδ)、IgE(Igε)和IgM(Igμ)。适当的免疫球蛋白重链恒定区的选择在美国专利号5,541,087和5,726,044中详细讨论，其各自通过引用整体并入本文。认为从某些免疫球蛋白类别和亚类选择特定免疫球蛋白重链恒定区序列以达到特定结果在本领域的技术水平内。编码免疫球蛋白Fc区的DNA构建体的部分优选包含铰链结构域的至少一部分，且优选Fcγ的CH3结构域或者IgA、IgD、IgE或IgM中的任一种中的同源结构域的至少一部分。此外，预期免疫球蛋白重链恒定区内的氨基酸的取代或缺失可用于实施本文公开的方法和组合物。一个实例是在上面的CH2区中引入氨基酸取代以产生对Fc受体具有降低的亲和力的Fc变体(Cole,J.Immunol.159:3613(1997))。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合的抗体，且随后引起靶细胞的裂解(或其他细胞毒性效应)。为了评估目的分子的ADCC活性，可以使用在本领域中已知的任何体外ADCC测定，诸如在美国专利号5,500,362或5,821,337中描述的测定。用于此类测定的有用的效应细胞包括但不限于外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可选地或另外地，可以在体内，例如，在动物模型中评估目的分子的ADCC活性，诸如在Clynes等人,PNAS 95:652-656(1998)中所公开的动物模型中。

如本文所用的术语“抗原决定簇结合结构域”或“ADBD”是指足以赋予对靶抗原决定簇(AD)的识别和特异性结合的多肽(例如，衔接子或CAR)的序列。在一些实施方案中，ADBD是不基于抗体或抗体片段序列的抗原结合抗体片段、scFv或抗原结合肽(例如，D结构域或亲和体)。在一些实施方案中，ADBD包含不基于抗体的结合支架(例如，D结构域、亲和体、纤连蛋白结构域、纳米抗体、脂质运载蛋白结构域、锚蛋白结构域、巨型抗体(maxybody)、蛋白A结构域或亲和素结构域)。在一些实施方案中，ADBD是D结构域。在一些实施方案中，ADBD是基于抗体的结合序列。在一些实施方案中，ADBD是scFv或结构域抗体(dAb)。在一些实施方案中，ADBD具有结合细胞表面上的靶抗原的能力。在一些实施方案中，ADBD具有结合免疫效应细胞表面上的靶抗原的能力。在一些实施方案中，ADBD具有结合生长因子受体或激素受体的能力。

在特定的实施方案中，ADBD是不基于抗体支架的多肽序列，其足以赋予对靶抗原决定簇的识别和特异性结合。在一些实施方案中，不基于抗体的ADBD是具有结合细胞表面上的靶抗原的能力的多肽。在一些实施方案中，不基于抗体的ADBD具有结合生长因子受体或激素受体的能力。在一些实施方案中，ADBD是基于D结构域的多肽。在特定的实施方案中，ADBD是基于D结构域的多肽，其足以赋予对靶抗原决定簇的识别和特异性结合。在一些实施方案中，ADBD是基于D结构域的多肽，其具有结合细胞表面上的靶抗原的能力。在一些实施方案中，ADBD是基于D结构域的多肽，其具有结合生长因子受体或激素受体的能力。在一些实施方案中，ADBD是基于D结构域的多肽，其具有结合血清蛋白上的靶抗原的能力。

术语“特异性结合”或“对其具有选择性亲和力”意指相比于与可选的物质(包括与靶表位无关的蛋白质)，诸如衔接子或CAR的结合剂更频繁，更快速，以更大的持续时间，更大的亲和力或以上述的某种组合与表位、蛋白质或靶分子发生反应或缔合。由于不同物种中同源蛋白质之间的序列同一性，在若干个实施方案中，特异性结合可以包括识别多于一种物种中的蛋白质或靶的结合剂。同样，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别多于一种蛋白质或靶的结合剂。应该理解的是，在某些实施方案中，特异性结合第一靶的结合剂可以或可以不特异性结合第二靶。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管其可以包括)排他性结合，例如，结合单个靶。因此，在某些实施方案中，结合剂可以特异性结合多于一种靶。在某些实施方案中，多个靶可以由结合剂上的相同抗原结合位点结合。

术语“接头”、“间隔子”和“铰链”在本文中可互换使用，是指位于衔接子或CAR的两个或更多个另外独立的功能结构域之间的肽或其他化学连接。例如，接头可以位于衔接子的抗原决定簇结构域和抗原决定簇结合结构域之间。类似地，接头可以位于CAR的两个抗原决定簇结合结构域之间或抗原结合结构域与跨膜结构域之间。用于偶联衔接子的两个或更多个结构域的合适接头在本文中描述和/或将以其他方式使本领域技术人员清楚。

如本文所用的术语“可操作地连接”指示附接两个分子以便每个分子保留至少一定水平的每个分子单独具有的功能活性(假定每个分子具有功能活性)。在一个分子不具有功能活性的实施方案中，如果另一个分子保留其至少一定水平的功能活性，则所述分子与另一分子可操作地连接在一起。可操作地连接还可以指两个非功能分子的连接。两个分子可以“可操作地连接”，无论它们直接或间接地(例如，通过接头)附接。

“靶”是指可以被衔接子或CAR或者衔接子或CAR的组件(诸如抗原决定簇结合结构域)结合的任何分子或分子的组合。

如本文所用的术语“靶细胞”是指参与疾病并且可以被本文提供的CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合物靶向的细胞。靶细胞包括受试者(例如，人或动物)中可以被CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合物靶向的任何细胞。靶细胞可以是表达或过表达由CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合物特异性结合的靶的细胞。

像“对靶的结合亲和力”、“与靶的结合”的表达和本领域已知的类似表达是指多肽的性质，其可以通过确定亲和常数(例如在给定抗原浓度下缔合和解离的衔接子的量)而直接测量。可以使用不同的方法来表征分子相互作用，诸如但不限于竞争分析、平衡分析和微量热分析，以及基于表面等离子体共振相互作用的实时相互作用分析(例如，使用

术语“抗原决定簇”和“表位”在本文中可互换使用，并且是指能够被特定结合剂(例如，衔接子或CAR)识别并特异性结合的任何分子(例如，目的靶或衔接子)的部分。当识别的分子是多肽时，表位可以由连续的氨基酸和通过蛋白质的三级折叠而并置的非连续的氨基酸和/或分子(诸如碳水化合物)的其他化学活性表面基团形成。由连续的氨基酸形成的表位通常在蛋白质变性后保留，而由三级折叠形成的表位通常在蛋白质变性后丢失。表位通常在独特的空间构象中包含至少3个氨基酸，并且更通常地，包含至少5个或8-10个氨基酸。

如本文所用的术语“来源于”指示第一分子与第二分子之间的关系。这通常是指第一分子与第二分子之间的结构相似性，并且不意味着或包括对来源于第二分子的第一分子的过程或来源的限制。例如，在来源于CD3ζ分子的胞内信号传导结构域的情况下，胞内信号传导结构域保留足够的CD3ζ结构，使得其具有所需的功能，即在适当的条件下产生信号的能力。这不意味着或包括对产生胞内信号传导结构域的特定过程的限制，例如，这不意味着，为了提供胞内信号传导结构域，必须从CD3ζ序列开始并缺失不想要的序列，或施加突变以到达胞内信号传导结构域。

术语“天然存在的”当与诸如核酸分子、多肽、抗原决定簇和宿主细胞的生物材料结合使用时，是指在自然界中发现的并且未被人类改性的那些。相反地，“非天然的”或“合成的”当与生物材料结合使用时，是指在自然界中未发现的并且已经被人类改性的那些。

如本文关于参考序列使用的“修饰”包括当与参考序列的对应氨基酸位置相比时的序列的取代、缺失、插入和/或添加。

关于参考序列的“取代”是指在参考序列的对应氨基酸位置用不同的氨基酸残基替代特定的氨基酸残基。

“保守”氨基酸取代是其中一个氨基酸残基被另一个具有相似侧链的氨基酸残基替代的一种取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中已经定义，包括碱性侧链(例如，赖氨酸(K)、精氨酸(R)、组氨酸(H))，酸性侧链(例如，天冬氨酸(D)、谷氨酸(E))，不带电的极性侧链(例如，甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)、半胱氨酸(C))，非极性侧链(例如，丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)、色氨酸(W)，β-分支侧链(例如，苏氨酸(T)、缬氨酸(V)、异亮氨酸(I))和芳族侧链(例如，酪氨酸(Y)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、组氨酸(H))。例如，苯丙氨酸取代成酪氨酸是保守取代。在一个实施方案中，衔接子或CAR的序列中的保守取代导致含有所述取代的衔接子或CAR与其结合的目的靶的保留的特异性结合。鉴定赋予、改变或维持选择性结合亲和力的核苷酸和氨基酸保守取代和非保守取代的方法是本领域已知的(参见，例如，Brummell,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi,ProteinEng.12(10):879-884(1999)；和Burks,PNAS 94:412-417(1997))。

“非保守”氨基酸取代是其中一个氨基酸残基被另一个具有相异侧链的氨基酸残基替代的一种取代。在一个实施方案中，衔接子或CAR的序列中的非保守取代导致含有所述取代的衔接子或CAR与其结合的目的靶的保留的特异性结合。

“非天然氨基酸”、“氨基酸类似物”和“非标准氨基酸残基”在本文中可互换使用。可以在如本文提供的衔接子中进行取代的非天然氨基酸是本领域已知的。在一个实施方案中，所述非天然氨基酸是可以取代脯氨酸的4-羟基脯氨酸、可以取代赖氨酸的5-羟基赖氨酸、可以取代组氨酸的3-甲基组氨酸、可以取代丝氨酸的高丝氨酸以及可以取代赖氨酸的鸟氨酸。在衔接子中可以进行取代的非天然氨基酸的另外实例包括但不限于诸如以下的分子：常见氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、A-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、羊毛硫氨酸、脱氢丙氨酸、γ-氨基丁酸、硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸氟代氨基酸、设计的氨基酸(诸如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸和Nα-甲基氨基酸)或非天然氨基酸的组合。再另外的非天然氨基酸可以包括4-氨基丁酸、4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸、2-噻吩基丙氨酸和/或氨基酸的D-异构体。如本文所讨论，在若干个实施方案中，非天然氨基酸或氨基酸类似物可以包括序列中一个或多个氨基酸的缺失。

术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合形式：核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。这些术语包括但不限于DNA、RNA、cDNA(互补DNA)、mRNA(信使RNA)、rRNA(核糖体RNA)、shRNA(小发夹RNA)、snRNA(小核RNA)、snoRNA(短核仁RNA)、miRNA(微RNA)、基因组DNA、合成DNA、合成RNA和/或tRNA。在一些实施方案中，分离的多核苷酸是包含非天然存在的核苷或核苷酸的修饰的mRNA。在一些实施方案中，修饰的mRNA包括2-硫代尿苷、假尿苷或1-甲基假尿苷。

如本文所用的术语“裸DNA”是指编码蛋白质(诸如衔接子或CAR)的DNA(例如，无组蛋白的DNA)，所述蛋白质以适当的表达取向在合适的表达载体(例如，质粒)中克隆。可以使用的病毒载体包括但不限于SIN慢病毒载体、逆转录病毒载体、泡沫病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、杂交载体和/或质粒转座子(例如睡美人转座子系统)或基于整合酶的载体系统。可以与制备和使用衔接子和CAR结合使用的其他载体在本文中描述或在本领域中另外已知。

如本文所用的术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”是指如下媒介物，通过所述媒介物，核酸序列(例如，衔接子或CAR编码序列)可以在宿主细胞(例如，克隆载体)中维持或扩增，或被引入宿主细胞，以便转化宿主并促进引入的序列的表达(例如，转录和翻译)。载体包括质粒、噬菌体、病毒等。

“宿主细胞”包括可以是或已经是编码衔接子或CAR的核酸的接受体的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包括但不限于病毒颗粒、噬菌粒、细菌、酵母、植物、动物和哺乳动物细胞。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然的、意外的或故意的突变和/或改变，后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态或总DNA补体方面)。宿主细胞包括用编码衔接子或CAR的核酸体内、体外或离体转染或感染的细胞。在一些实例中，宿主细胞能够表达衔接子。在一些实例中，宿主细胞能够表达并分泌衔接子。在一些实例中，宿主细胞能够表达CAR。在一些实例中，宿主细胞能够表达并展示其表面上的CAR。“表达”包括转录和/或翻译。

如本文所用，术语“药学上可接受的”或“生理上可耐受的”及其语法变型形式，因为它们是指组合物、载剂、稀释剂和试剂，因此可互换使用，并表示所述材料能够施用到人而没有产生治疗上禁止的不希望的生理效应，诸如恶心、头晕、胃不适以及本领域已知的其他治疗上禁止的不希望的生理效应。

免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌内(i.m.)或胸骨内注射或输注技术。

术语“刺激”(stimulate或stimulation)是指通过刺激分子与其同源配体结合而诱导的初级响应，从而介导信号转导事件，诸如但不限于通过适当受体(例如，T或NK受体)的信号转导。

“调节”(modulate或modulation)是指对振幅、频率、程度或活性的调整或调控。在另一相关方面，可以正调节(例如，频率、程度或活性的增加)或负调节(例如，频率、程度或活性的降低)这种调节。在若干个实施方案中，与施用治疗剂之前的细胞、组织或器官功能相比，称为正向或负向的调节。在另外的实施方案中，相对于正常健康的细胞、组织或器官，称为正向或负向的调节。

如本文提供的CAR细胞、衔接子和/或CAR细胞/衔接子组合物的“有效量”是足以实现具体说明的目的的量，诸如引起与CAR细胞和/或衔接子结合的靶相关的一种或多种生物学活性水平的可观察的改变。在某些实施方案中，所述改变增加靶活性的水平。在其他实施方案中，所述改变降低靶活性的水平。根据所说明的目的，“有效量”可以根据经验且以常规方式确定。术语“治疗有效量”是指CAR细胞和/或衔接子或有效“治疗”(例如，减轻)受试者(哺乳动物)中的疾病或病症(的症状)的其他治疗剂的量。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间内有效达到所需的预防结果的量。

“患者”、“受试者”、“动物”和“哺乳动物”可互换使用，并且是指哺乳动物，诸如人患者和非人灵长类动物，以及实验动物(诸如兔子、大鼠和小鼠)，和其他动物。动物包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，诸如鸡、两栖动物和爬行动物。如本文所用的“哺乳动物”是指哺乳动物纲(Mammalia)的任何成员，包括但不限于人和非人灵长类动物，诸如黑猩猩和其他猿和猴物种；农场动物，诸如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物，诸如狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，诸如小鼠、大鼠和豚鼠等，以及本领域已知的哺乳动物纲的其他成员。在一个特定的实施方案中，患者是人。所述术语不指示特定的年龄或性别。因此，成年和新生儿受试者以及胚胎和胎儿，无论是男性还是女性，都旨在包括在此术语的范围内。

如本文所用的术语“治疗”(“treat”、“treatment”和“treating”)是指治疗性治疗和预防性(prophylactic或preventative)措施，其中目标是预防或减缓(减轻或延迟)疾病、病状或病症的症状、并发症或生化指标，从而缓解症状或者阻止或抑制疾病、病状或病症的进一步发展。治疗可以是预防性的(预防或延迟疾病的发作，或预防其临床或亚临床症状的显现)，或治疗抑制或缓解在疾病、病状或病症靶向的病理状况显现后的症状，预防病理状况，追求或获得有益的结果，或者即使治疗最终不成功也降低个体发展病状的机会。需要治疗的对象包括已经患有病状的对象，以及易患所述病状的对象或要预防所述病状的对象。治疗可以用CAR细胞、衔接子和/或CAR细胞/衔接子组合物单独或与另外的治疗剂组合进行。在一些实施方案中，术语“治疗”在本文中用以指治疗性治疗和预防性措施，其中目标是预防或减缓(减轻或延迟)增殖性病症的症状、并发症或生化指标，或改善增殖性病症的一种或多种症状(优选地，一种或多种可辨别的症状)。在具体的实施方案中，术语“治疗”是指改善增殖性病症的至少一种可测量的身体参数，诸如肿瘤的生长，而不一定可由患者辨别。在其他实施方案中，术语“治疗”是指在物理上通过例如稳定可辨别的症状，在生理上通过例如稳定身体参数，或两者，抑制增殖性病症的进展。在其他实施方案中，术语“治疗”是指肿瘤大小、肿瘤细胞增殖或存活或者癌细胞计数的降低或稳定。

“癌症”、“肿瘤”或“恶性肿瘤”作为同义术语使用，并且是指许多疾病中的任一种，其特征在于细胞的不受控制的异常增殖，受影响细胞局部或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位(转移)的能力以及许多特征性结构和/或分子特征中的任一种。如本文所用的“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，以及所有癌前和癌性细胞和组织。“癌性肿瘤”或“恶性细胞”被理解为具有具体的结构性质、缺乏分化且能够浸润和转移的细胞。可以使用本文提供的CAR细胞、衔接子和/或CAR细胞/衔接子组合物治疗的癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌、脑癌、宫颈癌、皮肤癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、血癌(例如，白血病)和前列腺癌以及淋巴瘤。可以使用CAR细胞、衔接子和/或CAR细胞/衔接子组合物治疗的其他类型的癌症和肿瘤在本文中描述或在本领域中另外已知。对特定“类型”的癌症、肿瘤或肿瘤细胞的提及应理解为是指以具体疾病为特征的癌症、肿瘤或肿瘤细胞。例如，在一些实施方案中，相同类型的第一癌症和第二癌症是混合型细胞性霍奇金淋巴瘤和富含淋巴细胞的霍奇金淋巴瘤。在其他实施方案中，相同类型的第一癌症和第二癌症是前体B细胞急性成淋巴细胞白血病(ALL)和成熟B细胞ALL。不同类型的第一癌症和第二癌症的实例包括例如霍奇金淋巴瘤和ALL。

术语“肿瘤抗原”是指诸如癌症的特异性过度增殖性病症所共有的抗原。术语“肿瘤抗原”或“癌抗原”在本文中可互换使用。在某些方面，抗原来源于癌症，所述癌症包括但不限于原发性或转移性黑素瘤、胸腺瘤、淋巴瘤、肉瘤、肺癌(例如，NSCLC或SCLC)、肝癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、胶质母细胞瘤、成神经细胞瘤、子宫癌、宫颈癌、肾癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、间皮瘤和腺癌，诸如乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌和本领域已知的其他癌症。在一些实施方案中，所述癌症是B细胞急性淋巴性白血病(“BALL”)、T细胞急性淋巴性白血病(“TALL”)、急性淋巴性白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)；一种或多种慢性白血病，包括但不限于慢性髓系白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；其他的血液系统癌症或血液病状，包括但不限于B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突状细胞赘生物、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增殖性病状、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞赘生物、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。

肿瘤和癌抗原可以被进一步定义为“肿瘤特异性抗原(TSA)”、“癌特异性抗原(CSA)”、“肿瘤相关抗原(TAA)”或“癌相关抗原(CAA)”。TSA是肿瘤细胞特有的抗原，并且不出现在体内的其他细胞上。TAA是在肿瘤和一些正常细胞上都发现的抗原。TAA可以在不能诱导对抗原的免疫耐受状态的条件下在正常细胞上表达。肿瘤上TAA的表达可以在使免疫系统能够对抗原作出响应的条件下发生。当免疫系统不成熟且不能作出响应时，TAA可以在胎儿发育期间在正常细胞上表达，或者通常可以在正常细胞上以极低水平存在，但在肿瘤细胞上以高得多的水平表达。由于肿瘤的动态性质，在一些情况下，肿瘤细胞可以在某些阶段表达独特的抗原，并且在其他情况下还表达也在非肿瘤细胞上表达的抗原。因此，包括某种标记作为TAA并不排除将其认为是TSA。在一些实施方案中，含有由本文提供的CAR细胞、衔接子和/或CAR细胞/衔接子组合物特异性结合的抗原决定簇的TAA和/或TSA选自：BCMA、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33/lL3Ra、CD70、CD123、CD171(L1-CAM)、CS1、EGFRvIII、GD2、Lewis

如本文所用的术语“CS1”是指调控免疫功能的NK细胞受体，其也在B细胞、T细胞、树突状细胞、NK-T细胞和单核细胞上表达。CS1在多发性骨髓瘤中过表达，并且已经成功地靶向免疫疗法多发性骨髓瘤。Malaer&Mathew,Am J Cancer Res.7(8):1637-1641(2017)。CS1也称为SLAM7、蛋白19A、CRACC和CD319。术语“CS1”包括变体、同种型、同源物、直系同源物和旁系同源物。CS1是具有各种不同的剪接同种型的跨膜蛋白。在一些实施方案中，人CS1的氨基酸序列，包含22个氨基酸残基的N-末端信号序列(MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAA，SEQ IDNO：1119)和包含226个N-末端残基的胞外结构域(SEQ ID NO：1120)，具有Genbank登录号NP_067004(SEQ ID NO：1121)。在一些实施方案中，人CS1的氨基酸序列具有Genbank登录号NP_001269517、NP_001269518、NP_001269519、NP_001269520、NP_001269521、NP_001269522、NP_001269523、NP_001269524或NP_001269525。

如本文所用的术语“自身免疫疾病”被定义为由自身免疫应答产生的病症。自身免疫疾病是对自抗原作出不合适和过度响应的结果。自身免疫疾病的实例包括但不限于阿狄森氏病、斑秃、强直性脊柱炎、自身免疫肝炎、自身免疫腮腺炎、克罗恩氏病、糖尿病(I型)、营养不良性表皮松解症、附睾炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏病、溶血性贫血、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、重症肌无力、寻常性天疱疮、牛皮癣、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、脊椎关节病、甲状腺炎、血管炎、白癜风、粘液性水肿、恶性贫血、溃疡性结肠炎等。

如本文所用的术语“转导”是指使用病毒载体将外来核酸引入细胞中。如本文所用的“转染”是指使用重组DNA技术将外来核酸引入细胞中。术语“转化”是指将“外来的”(例如，外在的，细胞外的或其他非内源性的)核酸(DNA或RNA)序列引入宿主细胞中，使得宿主细胞将表达引入的核酸以产生所需的物质，诸如由引入的编码序列编码的蛋白质或酶。引入的核酸序列也可以被称为“克隆”或“外来”基因或序列，可以包括调控或控制序列，诸如起始、终止、启动子、信号、分泌序列或由细胞基因机制使用的其他序列。核酸序列可以包括非功能性序列或不具有已知功能的序列。接收和表达引入的核酸(例如，DNA或RNA)的宿主细胞已经被“转化”并且是“转化体”或“克隆”。引入宿主细胞的DNA或RNA可以来自任何来源，包括与宿主细胞属于相同的属或种的细胞，或不同的属或种的细胞，或者可以是非天然存在的。

术语“D结构域”是指与以下参考支架序列共有某些序列和某些结构特征的靶结合多肽：MGSWAEFKQRLAAIK TRLQALGGSEAE LAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDELQAYR HN(SEQ ID NO：1)(参见WO 2016/164305和WO 2016/164308，其各自通过引用整体并入本文)。所述参考支架是非天然存在且无靶的反平行三螺旋束参考多肽的变体，所述多肽最初被工程化为蛋白质折叠中的运动(参见，Walsh等，PNAS 96:5486-5491(1999)，其通过引用整体并入本文)。已经发现，含有具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的无靶参考支架的修饰的多肽能够特异性结合目的靶。因此，D结构域或包含D结构域的分子可以特异性(非随机)结合靶分子。尽管不希望受理论的束缚，但据信在设计D结构域时，表面暴露的残基(其可以被修饰)的结构约束赋予表面暴露的残基特异性结合目的靶的能力。

如本文所用的“共表达”是指两个或更多个蛋白质编码序列通过相同细胞或细胞群体的表达。所述编码序列可以是例如各自编码单一蛋白质或作为单一多肽链的嵌合蛋白的核酸。

如本文所用的“抗原缺失逃逸变体”是指表现出靶抗原表达的降低或缺失的细胞，所述靶抗原的抗原决定簇被本文提供的衔接子或CAR靶向。

II.抗原决定簇(AD)

抗原决定簇(AD)是能够被抗原决定簇结合区(ADBD)(例如，抗体的抗原结合片段或替代支架结合结构域(ASBD)(例如，D结构域))识别并特异性结合的表位。衔接子中和本文提供的靶细胞上的AD可以被下面讨论的CAR结合。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是存在于天然存在的蛋白质或其他分子中的AD。在一些实施方案中，AD是人内源性的AD。

在一些实施方案中，衔接子中的AD是存在于靶细胞上的AD。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是存在于跨膜蛋白中的AD，例如，存在于跨膜蛋白的胞外部分中的AD。在一些实施方案中，AD是肿瘤抗原。在一些实施方案中，AD是肿瘤相关抗原。在一些实施方案中，AD是肿瘤特异性抗原。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是癌抗原。在一些实施方案中，AD是癌症相关抗原。在一些实施方案中，AD是癌症特异性抗原。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是BCMA的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：5的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD19的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：3的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD20的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：6-9或10的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD22的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：41的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD123的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：11的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD37的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：12或13的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CS1的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1139的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。在另外的实施方案中，AD是由埃罗妥珠单抗(elotuzumab)结合的CS1的表位。

在一些实施方案中，AD是HER2的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：42的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是AFP的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：15的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是AFP p26的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ IDNO:16的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1117的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：16、1117、1118、1119、1120、1121、1122或1123的氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)在免疫效应细胞的表面上表达。

在一些实施方案中，AD是人CD45的胞外结构域(ECD)的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1106的残基29-766中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是由UCHL-1、A6或ODP4抗体结合的人CD45的表位。在一些实施方案中，AD是由4KB5、MB1、KiB3、2H4或MT2抗体结合的人CD45的表位。

在一些实施方案中，AD是CD26的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1113的残基29-766中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD30的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1114的残基19-379中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD33的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1115的残基18-259中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是CD38的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1116的残基43-300中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是人胞内蛋白质的表位。在另外的实施方案中，AD是选自以下组的膜相关受体蛋白的胞内部分的表位：细胞因子受体、趋化因子受体、T细胞受体、B细胞受体、NK细胞受体、骨髓细胞受体、内皮细胞受体和上皮细胞受体。在一些实施方案中，AD是CD3、CD137、CD279、CD223、CD152、CD28和VEGFR-2的胞内部分的表位。在一些实施方案中，AD是人核蛋白的表位。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是与恶性肿瘤相关联的肿瘤抗原的表位。在一些实施方案中，AD是来自黑素瘤的组织特异性抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的组织特异性黑素瘤抗原的表位：MART-1、酪氨酸酶和GP 100。在一些实施方案中，AD是来自前列腺癌的组织特异性抗原的表位。在一些实施方案中，所述组织特异性前列腺癌抗原选自：前列腺酸性磷酸酶(PAP)和前列腺特异性抗原(PSA)。在一些实施方案中，AD是转化相关分子的表位。在另外的实施方案中，AD是ErbB2(HER2)的表位。在一些实施方案中，AD是癌胚胎抗原的表位。在一些实施方案中，AD是癌胚抗原(CEA)的表位。在一些实施方案中，AD是B细胞淋巴瘤特异性独特型免疫球蛋白的表位。在一些实施方案中，AD是B细胞分化抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的B细胞分化抗原的表位：CD19、CD20和CD37。在一些实施方案中，AD是髓样细胞上的抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的髓样细胞抗原的表位：TSLPR和IL-7R。在一些实施方案中，AD是癌睾丸(CT)抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的癌睾丸(CT)的表位：NY-ESO-1和LAGE-1a。在一些实施方案中，AD是选自以下的抗原的表位：CS1、CD38、CD138、MUC1、HM1.24、CYP1B1、SP17、PRAME、维尔姆斯瘤1(WT1)和多发性骨髓瘤细胞上的热休克蛋白gp96。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是TSA或TAA的表位。在一些实施方案中，AD是肿瘤分化抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的肿瘤分化抗原的表位：MART1/MelanA、gp100(Pmel 17)、酪氨酸酶、TRP1和TRP2。在一些实施方案中，AD是肿瘤特异性多谱系抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的肿瘤特异性多谱系抗原的表位：MAGE1、MAGE3、BAGE、GAGE1、GAGE2和p15。在一些实施方案中，AD是过表达的胚胎抗原的表位。在一些实施方案中，AD是CEA的表位。在一些实施方案中，AD是过表达的癌基因或突变的肿瘤抑制基因产物的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的过表达的癌基因或突变的肿瘤抑制基因产物的表位：p53、Ras和HER2/neu。在一些实施方案中，AD是染色体易位产生的独特肿瘤抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的染色体易位产生的独特肿瘤抗原的表位：BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK和MYL-RAR。在一些实施方案中，AD是病毒抗原的表位。在一些实施方案中，AD是爱泼斯坦巴尔(Epstein Barr)病毒抗原EBVA的表位。在其他实施方案中，AD是人乳头瘤病毒(HPV)抗原E6或E7的表位。在一些实施方案中，AD是大的基于蛋白质的抗原的表位。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是血液肿瘤抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的抗原的表位：BCMA、CD19、CD20、CD22、CD30、CD138、CD33、CD38、CD123、CS1、ROR1、Lewis

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是实体肿瘤抗原的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的抗原的表位：双唾液酸神经节苷脂(GD2)、邻乙酰基GD2、EGFRvIII、HER2(ErbB2)、VEGFR2、FAP、间皮素、IL13Ra2(神经胶质瘤)、cMET、PSMA、叶酸受体α、L1CAM、癌胚抗原(CEA)和EGFR。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是选自以下组的抗原的表位：CD137、PDL1、CTLA4、CD47、KIR、TNFRSF10B(DR5)、TIM3、PD1、cMet、糖脂F77、EGFRvIII、HLAA2(NY-ESO-1)、LAG3、CD134(OX40)、HVEM、BTLA、TNFRSF25(DR3)、CD133、MAGEA3、PSCA、MUC1、CD44v6、CD44v6/7、CD44v7/8、IL11Ra、ephA2、CAIX、MNCAIX、CSPG4、MUC16、EPCAM(EGP2)、TAG72、EGP40、ErbB受体家族、ErbB2(HER2)、ErbB3/4、RAGE1、GD3、FAR、Lewis

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是TSA或TAA的表位。在一些实施方案中，AD是选自以下的抗原的表位：PTGER4、ITGA4、CD37、CD52、CD62L(L-选择素)、CXCR4、CD69、EVI2B(CD361)、SLC39A8、MICB、LRRC70、CLELC2B、HMHA1、LST1和CMTM6(CKLFSF6)。在一些实施方案中，AD是BCMA的表位。在一些实施方案中，AD是CS1的表位。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是选自以下的抗原的表位：PDGFRA、VEGFR1、VEGFR3、神经纤毛蛋白1(NRP1)、神经纤毛蛋白2(NRP2)、β细胞素、PLGF、RET(转染期间重排)、TIE1、TIE2(TEK)、CA125、CD3、CD4、CD7、CD10、CD13、CD25、CD32、CD32b、CD44(例如，CD44v6)、CD47、CD49e(整合素α5)、CD54(ICAM)、CD55、CD64、CD74、CD80、CD90、CD200、CD147、CD166、CD200、ESA、SHH、DHH、IHH、patched 1(PTCH1)、smoothened(SMO)、WNT1、WNT2B、WNT3A、WNT4、WNT4A、WNT5A、WNT5B、WNT7B、WNT8A、WNT10A、WNT10B、WNT16B、LKP5、LRP5、LRP6、FZD1、FZD2、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、Notch、Notch1、Notch3、Notch4、DLL4、Jagged、Jagged1、Jagged2、Jagged3、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFRSF7(CD27)、TNFSF9(41BB配体)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF10A(TRAILRl、DR4)、TNFRSF11A(RANK)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFRSF19L(KELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、ILIRI、1L1R2、IL2R、IL5R、IL6R、1L8R、IL10R、IL12R、IL13R、IL15R、IL18R、IL19R、IL21R、IL23R、XAG1、XAG3、REGIV、FGFR1、FGFR2、FGFR3、ALK、ALK1、ALK7、ALCAM、Axl、TGFb、TGFb2、TGFb3、TGFBR1、IGFIIR、BMPRI、N-钙粘蛋白、E-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白、神经节苷脂GM2、神经节苷脂GD3、PSGR、DCC、CDCP1、CXCR2、CXCR7、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR10、紧密连接蛋白(Claudin)1、紧密连接蛋白2、紧密连接蛋白3、紧密连接蛋白4、TMEFF2、神经调节蛋白、MCSF、CSF、CSFR(fms)、GCSF、GCSFR、BCAM、BRCA1、BRCA2、HLA-DR、ABCC3、ABCB5、HM 1.24、LFA1、LYNX、S100A8、S100A9、SCF、冯威勒布兰德因子(Von Willebrand factor)、Lewis Y6受体、CA G250(CA9)、CRYPTO、VLA5、HLADR、MUCl8、粘蛋白CanAg、EGFL7、整合素avb3、整合素α5β、激活素Blα、白三烯B4受体(LTB4R)、神经降压素NT受体(NTR)、5T4癌胚胎抗原、腱生蛋白C、MMP、MMP2、MMP7、MMP9、MMP12、MMP14、MMP26、组织蛋白酶G、SULF1、SULF2、MET、CA9、TM4SF1、多配体聚糖(SDCl)、肝配蛋白B4、TEM1、TGFβ1和TGFBRII。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是与自身免疫病症相关联、与免疫系统的炎性或其他病症相关联的抗原的表位，或者与调控免疫应答相关联。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是免疫抑制靶的表位。在另一个实施方案中，AD是选自以下的免疫抑制靶的表位：IL1Ra、IL6R、CD26L、CD28、CD80、FcγRIIB。在另一个实施方案中，衔接子中的AD是选自以下的免疫抑制靶的表位：CD25、CD28、CTLA4、PD1、B7H1(PDL1)、B7H4 TGFβ、TNFRSF4(OX40)、TNFRSF5(CD40)、TNFRSF9(41BB、CD137)、TNFRSF14(HVEM)、TNFRSF25(DR3)和TNFRSF18(GITR)。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是选自以下的靶的表位：IL1Rb、C3AR、C5AR、CXCR1、CXCR2、CCR1、CCR3、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、ChemR23、MPL、GP130、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9、TREM1、TREM2、CD49a(整合素α1)、整合素a5b3、α4整合素亚基、A4B7整合素、组织蛋白酶G、TNFRSF3(LTBR)、TNFRSF6(Fas、CD95)、TNFRSF6B(DcR3)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF11A(RANK)、TNFRSF16(NGFR)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)、TNFRSF21(DR6)、CD14、CD23、CD36、CD36L、CD39、CD91、CD153、CD164、CD200、CD200R、B71(CD80)、B72(CD86)、B7h、B7DC(PDL2)、ICOS、ICOSL、MHC、CD、B7H2、B7H3、B7x、SLAM、KIM1、SLAMF2、SLAMF3、SLAMF4、SLAMF5、SLAMF6、SLAMF7、TNFRSF1A(TNFR1、p55、p60)、TNFRSF1B(TNFR2)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF12(TWEAKR)、TNFRSF5(CD40)、IL1R、IL2R、IL4Ra、IL5R、IL6RIL15R、IL17R、IL17Rb、IL17RC、IL22RA、IL23R、TSLPR、B7RP1、cKit、GMCSF、GMCSFR、CD2、CD4、CD11a、CD18、CD30、CD40、CD86、CXCR3、CCR2、CCR4、CCR5、CCR8、RhD、IgE和Rh。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是与神经病症相关联的抗原的表位。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是选自以下的靶的表位：淀粉样蛋白β(Aβ)、β淀粉样蛋白、PLP、ROBO4、ROBO、LINGO、gpIIB、gpIIIa、整合素a2bB3、AOC3、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF19(TROY)和硬化蛋白。

上述靶和本文其他地方描述的那些靶旨在是说明性的，而不是限制性的。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)由嵌合抗原受体(CAR)结合。在一些实施方案中，AD由表达嵌合抗原受体的细胞结合。在一些实施方案中，AD由scFv结合。在一些实施方案中，AD由替代支架结合结构域(ASBD)结合。在一些实施方案中，AD由D结构域结合。在一些实施方案中，AD由抗体或其抗原结合片段结合。

III.抗原决定簇结合结构域(ADBD)

结合抗原决定簇(AD)的蛋白质结构域(例如，如第II节中所述)在本文中称为“抗原决定簇结合结构域”或“ADBD”。在一些实施方案中，ADBD足以赋予对目的靶的识别和特异性结合。本文所述的ADBD可以存在于衔接子中(例如，如第V节中所述)和/或存在于嵌合抗原受体(CAR)中(例如，如第VI节中所述)。

由ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)特异性结合的目的靶可以是衔接子和/或CAR期望结合的任何分子，例如，本文所述的AD中的任一种(例如，如第II节中所述)。在一些实施方案中，由ADBD特异性结合的靶可以是具有纯化、制造、配制、治疗、诊断或预后相关性或价值的任何靶。在一些实施方案中，ADBD的靶可以是天然存在的或合成的。在一些实施方案中，ADBD的靶可以是胞外组分、胞内组分、可溶性因子(例如，酶、激素、细胞因子、生长因子、毒素、毒液、污染物等)或跨膜蛋白(例如，细胞表面受体)。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)特异性结合靶细胞表面上的目的靶。在一些实施方案中，ADBD特异性结合细胞表面受体。在一些实施方案中，ADBD特异性结合目的靶，所述目的靶是选自以下的家族的成员：磷酸酶受体、生长因子受体、酪氨酸激酶受体、TNF家族受体、G-蛋白偶联受体和趋化因子受体。在一些实施方案中，ADBD结合相同家族的多个成员(例如，TNF受体TRAILR1和TRAILR2)。在一些实施方案中，ADBD结合来自不同家族的成员。因此，例如，在一些实施方案中，ADBD可以结合生长因子受体和TNF受体或G-蛋白偶联受体和趋化因子受体。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)结合肿瘤抗原。在一些实施方案中，ADBD结合肿瘤相关抗原。在一些实施方案中，ADBD结合肿瘤特异性抗原。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)结合癌抗原。在一些实施方案中，ADBD结合癌症相关抗原。在一些实施方案中，ADBD结合癌症特异性抗原。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)结合在免疫效应细胞的表面上表达的抗原。

在一些实施方案中，由ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)结合的目的靶是人蛋白质。在一个实施方案中，ADBD结合人蛋白质目的靶及其猴(例如，食蟹猴(cynomolgousmonkey))、小鼠、兔、仓鼠和/或兔直系同源物。

在另一个实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)结合目的靶上存在的肽标签。此类肽标签提供一种有用的手段，通过所述手段来检测、监测和/或将一个或多个额外的部分附接到衔接子。在一个实施方案中，ADBD特异性结合选自以下的肽标签：六组氨酸(His6)标签、myc标签和FLAG标签。其他肽标签在本文中描述或在本领域中另外已知。

对于给定ADBD结合事件的亲和力要求取决于各种因素，包括但不限于：结合基质的组成和复杂性、ADBD和靶分子两者的化合价和密度以及ADBD的功能应用。在一个实施方案中，ADBD以小于或等于5×10

在一个实施方案中，ADBD结合呈活性形式的目的靶。在一个实施方案中，ADBD可逆地结合呈活性形式的目的靶，并且还释放呈活性形式的结合的靶。在一个实施方案中，ADBD结合呈天然形式的目的靶。在具体的实施方案中，ADBD以大于或等于以下的解离速率(off-rate)或Koff结合目的靶：10

确定KD和解离速率的结合实验可以在许多条件下进行，包括但不限于[pH 6.0，0.01％吐温20]、[pH 6.0，0.1％明胶]、[pH 5.0，0.01％吐温20]、[pH 9.0，0.1％吐温20]、[pH 6.0，15％乙二醇，0.01％吐温20]、[pH 5.0，15％乙二醇，0.01％吐温20]和[pH 9.0，15％乙二醇，0.01％吐温20]。在其中制备这些溶液的缓冲液可以由本领域技术人员容易地确定，并且很大程度上取决于最终溶液的所需pH。低pH溶液(＜pH 5.5)可以例如在柠檬酸盐缓冲液、甘氨酸-HCl缓冲液或琥珀酸缓冲液中制备。高pH溶液可以例如在Tris-HCl、磷酸盐缓冲液或碳酸氢钠缓冲液中制备。出于确定例如最佳pH和/或盐浓度的目的，可以使用许多条件来确定KD和解离速率。

在一个实施方案中，ADBD以在0.1至10

在一个实施方案中，ADBD以在10

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)是抗体或其抗原片段。在一些实施方案中，ADBD是scFv。在一些实施方案中，ADBD是替代支架结合结构域。在一些实施方案中，ADBD是D结构域。

IIIa.抗体源抗原决定簇结合结构域(ADBD)

在一些实施方案中，一个或多个ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)可以来源于抗体分子，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、单结构域抗体中的一种或多种，例如，来自例如人或骆驼科来源的重链可变结构域(VH)、轻链可变结构域(VL)和可变结构域(VHH)。在一些实施方案中，ADBD来源于与其中的衔接子或CAR最终将被用于例如人的物种相同的物种。衔接子和/或CAR包含人或人源化ADBD可能是有益的。常规产生此类ADBD的组合物和技术是本领域已知的。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)包含足以赋予对靶抗原的识别和特异性结合的抗体的片段。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)是“scFv”，其可以包含含有抗体的VL链和VH链的融合蛋白，其中所述VH和VL例如通过短的柔性多肽接头(例如，本文所述的接头)连接。scFv可以根据本领域已知的方法常规制备(参见，例如，Bird等人,Science242:423-426(1988)和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988))。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)是单结构域抗原结合(SDAB)分子。SDAB分子包括含有作为单结构域多肽的一部分的互补决定区的分子。实例包括但不限于重链可变结构域、天然缺乏轻链的结合分子、来源于常规4-链抗体的单结构域、工程化结构域和除来源于抗体的那些之外的单结构域支架。SDAB分子可以来源于任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、鱼、鲨鱼、山羊、兔和牛。此术语还包括来自除骆驼科和鲨鱼以外的物种的天然存在的单结构域抗体分子。

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)包含人抗体或其片段。在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)包含人源化抗体或其片段。

抗体的人源化是本领域公知的，并且基本上可以按照Winter及其同事的方法(Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988))通过用人抗体的对应序列取代啮齿动物CDR或CDR序列，即CDR移植(EP 239,400；国际申请公开号WO 91/09967；以及美国专利号4,816,567；6,331,415；5,225,539；5,530,101；5,585,089；和6,548,640；其内容通过引用整体并入本文)进行。抗体的人源化还可以通过镶饰或表面重修(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology,28(4/5):489-498；Studnicka等人,ProteinEngineering 7(6):805-814(1994)；和Roguska等人,PNAS 91:969-973(1994))或链改组(美国专利号5,565,332)来实现，其内容通过引用整体并入本文。

IIIb.替代支架结合结构域

在一些实施方案中，ADBD(例如，衔接子和/或CAR的ADBD)是替代支架结合结构域(ASBD)。如本文所用的“替代支架结合结构域”或“ASBD”是来源于或对应于不基于抗体的结合支架的抗原决定簇结合结构域。

在一些实施方案中，本公开内容提供一种包含是ASBD的ADBD的CAR。在一些实施方案中，本公开内容提供一种包含CAR的细胞，所述CAR包含是ASBD的ADBD。在另外的实施方案中，提供包含CAR的免疫效应细胞，所述CAR包含ASBD。在一些实施方案中，本公开内容提供一种包含是ASBD的ADBD的衔接子。

在另外的实施方案中，本公开内容提供一种包含衔接子和CAR的组合物，所述衔接子和CAR各自包含ASBD。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)与靶AD的结合由结合支架的二级结构(诸如α螺旋或β片层)介导。在一些实施方案中，ASBD是基于三螺旋束的结合结构域。在一些实施方案中，ASBD是基于D结构域的结合结构域。在其他实施方案中，ASBD是基于Z结构域(亲和体)的结合结构域。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于D结构域(从头结合结构域)的AD结合结构域。基于D结构域支架的结合结构域通常由70-75个氨基酸残基组成，其中对应于非天然存在的反平行三螺旋束参考支架(SEQ ID NO：1)中的结构约束的表面暴露残基的至多20个位置的取代赋予对目的靶(AD)的靶识别和结合特异性。基于D结构域支架的结合结构域还公开在国际申请公开号WO2016164308中，其内容通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，D结构域包含与具有SEQ ID NO：1的序列的参考支架的氨基酸序列相差(例如，由于氨基酸修饰)至多20处取代的氨基酸序列。在一些实施方案中，D结构域包含选自以下的序列：SEQ ID NO：17、18和19。在一些实施方案中，D结构域包含选自以下的序列：SEQ ID NO：20-26和27。在另外的实施方案中，D结构域包含选自以下的序列：SEQ IDNO：44-1078和1079。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于Z结构域支架(亲和体)的AD结合结构域。基于Z结构域支架的结合结构域通常由58个氨基酸残基组成，其中位于三个α螺旋的第一个和第二个中的至多13个位置的取代赋予对目的靶(AD)的靶(AD)识别和结合特异性。在另外的实施方案中，Z结构域ASBD包含选自SEQ ID NO：28和29的序列。基于Z结构域(亲和体)支架的结合结构域还描述在美国专利号5,831,012中，其全部内容通过引用整体并入本文。

展示二级结构介导的靶结合的另外的ASBD的实例包括DARPin、亲和素和基于犰狳重复序列的结合支架。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于DARPin的AD结合结构域。基于DARPin的结合结构域通常含有序列SEQ ID NO：30的2-3个重复序列，分别位于N-末端加帽重复序列与C-末端加帽重复序列之间(例如，分别为序列MRGSHHHHHHGSDLGKKLLEAARAGQDDEVRILMANGA DVNAX

表1.示例性的基于二级结构的ASBD序列

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在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)与靶AD的结合特异性由ASBD上的暴露环中的氨基酸介导。具有这些结合性质的支架的实例包括adnectin、脂质运载蛋白、亲合性多聚体、knottin、fynomer、atrimer、基于kunitz结构域的结合子和基于CTLA4的结合支架。

在一些实施方案中，ASBD是基于adnectin的AD结合结构域。基于adnectin的结合结构域来源于III型纤连蛋白的第十结构域(10Fn3)。此ADBD通常是94个氨基酸的结合结构域，其采用含有通过六个环连接的七条链的β夹心折叠。adnectin结构域的一侧上的三个表面暴露环中的取代产生靶(AD)特异性结合部分。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于脂质运载蛋白的AD结合结构域、基于亲和素的AD结合结构域或基于抗运载蛋白(anticalin)的AD结合结构域。抗运载蛋白支架展示由八个反平行β链组成的保守β桶结构，并且通常由160-180个氨基酸组成。基于抗运载蛋白的结合支架的配体结合口袋由四个环构成，每个环含有至多24处取代，其共同赋予靶(AD)识别和结合特异性。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于亲合性多聚体支架的AD结合结构域。基于亲合性多聚体支架的结合结构域来源于细胞表面受体的A结构域，并且通常长度为35个氨基酸。基于亲合性多聚体的结合结构域的结构由12个保守氨基酸维持。结合结构域的至多所有的其余23个残基的取代赋予靶(AD)识别和结合特异性。在一些实施方案中，基于亲合性多聚体支架的结合结构域包含序列EFX

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于fynomer支架的AD结合结构域。fynomer结合结构域的长度通常为60-75个氨基酸，并且由通过两个柔性环连接的一对反平行β片层构成。环中的取代/插入赋予AD靶识别和结合特异性。在一些实施方案中，基于fynomer的AD结合结构域包含序列GVTLFVALYDYX

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于knottin支架的AD结合结构域。基于Knottin支架的结合结构域对应于30个氨基酸的蛋白质折叠，其由通过可变长度的环和多个二硫键连接的三条反平行的β链构成。

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于Kunitz结构域的AD结合结构域。基于Kunitz结构域的结合结构域来源于Kunitz型蛋白酶抑制剂的活性基序，并且通常长度为约60个氨基酸。此ADBD的疏水核由扭绞的双链反平行β-片层以及由三对二硫键稳定的两个α-螺旋构成。这三个环中的取代和插入赋予AD靶识别和结合特异性。在一些实施方案中，基于Kunitz结构域的AD结合结构域包含序列MHSFCAFKADX

在一些实施方案中，ASBD(例如，衔接子和/或CAR的ASBD)是基于WW结构域的AD结合结构域。基于WW结构域的结合支架的长度通常为30-35个氨基酸。在一些实施方案中，基于WW结构域的AD结合支架包含序列KLPPGWX

在一些实施方案中，基于WW结构域的AD结合支架包含序列KLPPGWX

表2.示例性的基于环的ASBD

IV.接头

接头是位于衔接子或CAR的两个或更多个另外独立的功能结构域之间的肽或其他化学连接。

用于可操作地连接单链氨基酸序列中的衔接子的两个或更多个功能结构域的合适接头包括但不限于多肽接头，诸如甘氨酸接头、丝氨酸接头、混合甘氨酸/丝氨酸接头、富含甘氨酸和丝氨酸的接头或主要由极性多肽片段构成的接头。

在一个实施方案中，接头由选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸的大部分的氨基酸组成。在一个实施方案中，衔接子或CAR中的一个或多个接头由选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺和赖氨酸的大部分的氨基酸组成。在一个实施方案中，衔接子或CAR中的一个或多个接头由选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺和赖氨酸的一个或多个氨基酸组成。在另一个实施方案中，衔接子或CAR中的一个或多个接头由空间上不受阻的大部分的氨基酸组成。在另一个实施方案中，接头中的大部分的氨基酸是甘氨酸、丝氨酸和/或丙氨酸。在一些实施方案中，衔接子或CAR接头中的一个或多个接头包含聚甘氨酸(诸如(Gly)

在一个实施方案中，衔接子或CAR包含分别直接附接(即，没有接头)到衔接子或CAR的另一组件的ADBD。在一个实施方案中，衔接子或CAR含有至少2个、至少3个、至少4个或至少5个分别直接附接到衔接子或CAR的另一个结构域的ADBD。

在另一个实施方案中，ADBD可以通过接头可操作地连接到衔接子或CAR的另一个组件。衔接子或CAR可以含有单个接头、多个接头或不含接头。在一个实施方案中，衔接子或CAR包含分别通过接头肽可操作地连接到衔接子或CAR的另一个组件的ADBD。在一个实施方案中，衔接子或CAR含有至少2个、至少3个、至少4个或至少5个分别通过相同或不同的接头可操作地连接到衔接子或CAR的另一个结构域的ADBD。

接头可以具有任何大小或组成，只要其能够以使功能结构域能够起作用(例如，抗原决定簇结合结构域结合目的靶的能力)的方式可操作地连接衔接子或CAR的功能结构域即可。在一些实施方案中，接头为约1至约100个氨基酸、约1至50个氨基酸、约1至20个氨基酸、约1至15个氨基酸、约1至10个氨基酸、约1至5个氨基酸、约2至20个氨基酸、约2至15个氨基酸、约2至10个氨基酸或约2至5个氨基酸。应当清楚，接头的长度、柔性程度和/或其他性质可能对本发明的最终多肽的性质具有一定的影响，所述性质包括但不限于对目的靶或对一种或多种其他目的靶蛋白的亲和力、特异性或亲合力。当在衔接子或CAR中使用两个或更多个接头时，这些接头可以相同或不同。在本文提供的上下文和公开内容中，本领域技术人员将能够常规地确定出于可操作地连接衔接子或CAR的功能结构域的目的的最佳接头组成和长度。

所述接头还可以是非肽接头，诸如烷基接头或PEG接头。例如，可以使用烷基接头，诸如-NH-(CH2)s-C(0)-，其中s＝2-20。这些烷基接头可以进一步被任何非空间位阻基团取代，所述非空间位阻基团诸如低级烷基，例如，C1-C6)低级酰基、卤素(例如，Cl、Br)、CN、NH2、苯基等。示例性非肽接头是PEG接头。在某些实施方案中，PEG接头具有约100至5000kDa或约100至500kDa的分子量。

用于通过化学交联偶联衔接子或CAR功能结构域的合适的接头包括但不限于同双官能化学交联化合物(诸如戊二醛)、亚氨酸酯(诸如己二酸二甲酯(DMA)、辛二亚氨酸二甲酯(DMS)和庚二亚氨酸二甲酯(DMP))或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯(诸如二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)(DSP)和二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯)(DTSSP))。用于偶联衔接子或CAR功能结构域的合适的接头的实例包括但不限于具有一个胺反应性端且在另一端具有巯基反应性部分或者在一端具有NHS酯和SH反应性基团(例如，马来酰亚胺或吡啶基)的交联接头。

在另外的实施方案中，衔接子或CAR中的一个或多个接头是可裂解的。可裂解接头的实例包括但不限于由不同类型的蛋白酶(体外或体内)识别的肽序列，所述蛋白酶诸如Tev、凝血酶、因子Xa、纤溶酶(血液蛋白酶)、金属蛋白酶、组织蛋白酶(例如，GFLG等)以及在其他有形隔室中发现的蛋白酶。

在一些实施方案中，接头是促进衔接子功能结构域或细胞毒性剂在细胞中或在细胞表面释放的“可裂解接头”。例如，可以使用酸不稳定接头(例如，腙)、蛋白酶敏感(例如，肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头或含二硫化物的接头(参见，例如Chari,Can.Res.52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020；和美国申请公开号20090110753；其各自的内容通过引用整体并入本文)，其中当组合物内化到细胞中时，期望衔接子或细胞毒性剂之间的共价附接被细胞内裂解。术语“细胞内裂解的”和“细胞内裂解”是指在细胞内对衔接子药物缀合物的代谢过程或反应，由此破坏共价附接，即通过衔接子与细胞毒性剂之间的接头连接，从而导致游离的衔接子和/或细胞毒性剂在细胞内解离。

在另外的实施方案中，CAR中的一个或多个接头是可裂解的。可裂解接头的实例包括但不限于由不同类型的蛋白酶(体外或体内)识别的肽序列，所述蛋白酶诸如Tev、凝血酶、因子Xa、纤溶酶(血液蛋白酶)、金属蛋白酶、组织蛋白酶(例如，GFLG等)以及在其他有形隔室中发现的蛋白酶。

在一些实施方案中，使用长度为约1至100个氨基酸的短寡肽或多肽接头将CAR的结构域中的任一个连接在一起。接头可以由像甘氨酸和丝氨酸(或任何其他氨基酸)的柔性残基构成，使得相邻的蛋白质结构域相对于彼此自由移动。可以选择接头的氨基酸序列组成以使CAR的潜在免疫原性最小化。当期望以确保两个相邻的结构域在空间上不彼此干扰时，可以使用更长的接头。

在一些实施方案中，优选2至10个氨基酸之间的长度在CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间形成连接。在另外的实施方案中，接头的长度在10与15个氨基酸之间，或长度在15与20个氨基酸之间、或20与30个氨基酸之间、或30与60个氨基酸之间、或60与100个氨基酸之间(或所列氨基酸之间的任何范围)。在另外的实施方案中，接头是甘氨酸-丝氨酸双联体序列。在一些实施方案中，ESD对应于人T细胞表面糖蛋白CD8α-链ESD区(例如，氨基酸残基138至182的CD8α链；Swiss-Prot登录号P01732)。在一些实施方案中，ESD对应于已经通过氨基酸取代进一步修饰以改善表达功能或免疫原性的CD8 ESD区。在另外的实施方案中，ESD对应于CD28 ESD或含有赋予改善的表达功能或免疫原性的CD28ESD修饰的序列。

可以使用本文所述和/或本领域中另外已知的技术来评价接头优化。在一些实施方案中，接头不破坏衔接子或CAR结合靶抗原决定簇和/或另一个衔接子或CAR功能结构域以适当发挥功能的能力(例如，衔接子中的效应功能结构域引发效应功能的能力或衔接子中的FcRn结合结构域结合FcRn的能力)。

V.衔接子-可溶性蛋白

本文提供多结构域可溶性衔接蛋白。衔接子包含抗原决定簇(AD)(例如，如第II节中所述)和抗原决定簇结合结构域(ADBD)(例如，如第III节中所述)。衔接子还可以包含另外的AD、另外的ADBD和/或其他另外的结构域。

在本文提供的衔接子中，AD可以是ADBD的N-末端。可选地，ADBD可以是AD的N-末端。在一些实施方案中，AD和ADBD是直接融合的。在一些实施方案中，AD和ADBD通过接头(蛋白质接头或化学接头)或另一个蛋白质结构域(例如，功能结构域)融合。

在一些实施方案中，衔接子包含位于衔接子的ADBD与另一个功能结构域之间的接头。在一些实施方案中，接头位于衔接子的两个ADBD之间。在一些实施方案中，接头位于衔接子的AD与ADBD之间。用于偶联衔接子的两个或更多个功能结构域的合适的接头对于本领域技术人员将是清楚的，并且通常可以是本领域用于连接肽、蛋白质或其他有机分子的任何接头。示例性接头在第IV节中提供。在特定的实施方案中，接头适用于构建旨在用于药物用途的蛋白质或多肽。

除了AD(或多个AD)和ADBD(或多个ADBD)之外，本文提供的衔接子还可以包含一个或多个另外的结构域，例如，赋予延长的半衰期的结构域。

在一些实施方案中，衔接子或衔接子中的ADBD是去免疫化的。

本文提供的衔接子具有包括但不限于诊断、分析和治疗应用的用途。在特定的实施方案中，衔接子与在细胞表面(例如，如第VII节中所述)上表达的嵌合抗原受体(CAR)(例如，如第VI节中所述)组合使用，例如，以杀伤靶细胞。

Va.抗原决定簇(AD)

本文提供的衔接子包含至少一个抗原决定簇(AD)。在一些实施方案中，衔接子包含单个AD。在一些实施方案中，衔接子包含两个或更多个AD。当衔接子包含两个或更多个AD时，所述AD可以相同或不同。

在本文提供的衔接子中，AD可以是任何AD或AD的组合(例如，如第II节中所述)。

在一些实施方案中，衔接子包含BCMA的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：5的序列的多肽。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：5的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD123的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：11的序列的多肽。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：11的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD19的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：2或3的序列的多肽。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：2或3的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD20的胞外结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：6-9或10的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD22的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：41的序列的多肽)。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：41的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD37的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：12或13的序列的多肽)。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ IDNO：12或13的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CS1的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：1138的序列的多肽)。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1138的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含HER2的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：42的序列的多肽)。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：42的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD45的胞外结构域(例如，包含SEQ ID NO：1106的残基29-766的序列的多肽)。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1106的残基29-766中的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含CD26、CD30、CD33或CD38的胞外结构域。在一些实施方案中，衔接子包含CD26、CD30、CD33或CD38的胞外结构域的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是AFP的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：15的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，AD是AFP p26的表位。在另外的实施方案中，AD包含SEQ IDNO:16的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：1117的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。在另外的实施方案中，AD包含SEQ ID NO：16、1117、1118、1119、1120、1121、1122或1123的氨基酸残基。

在一些实施方案中，衔接子包含p26蛋白(例如，具有SEQ ID NO：16、1117、1118、1119、1120、1121、1122或1123的序列)。本文已经发现，含有p26序列的此类融合蛋白具有令人惊奇的长血清半衰期。在一些实施方案中，衔接子具有至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少8小时、至少16小时、至少32小时、至少64小时或更久的体内血浆半衰期。在一些实施方案中，衔接子在小鼠体内具有至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少8小时、至少16小时、至少32小时、至少64小时、或多于65小时、或1-10小时、2-10小时、4-10小时、6-10小时或6-9小时的体内血浆半衰期。在一些实施方案中，衔接子在人体内具有至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少8小时、至少16小时、至少32小时、至少64小时、或多于65小时、或1-10小时、2-10小时、4-10小时、6-10小时或6-9小时的体内血浆半衰期。

在一些实施方案中，本公开内容提供一种修饰包含p26蛋白(例如，具有SEQ IDNO：16、1117、1118、1119、1120、1121、1122或1123的序列)的衔接子的体内半衰期(例如，在小鼠或人体内)的方法。在一些实施方案中，衔接子包含一种或多种靶结合DDpp。在一些实施方案中，衔接子的半衰期通过取代或缺失一个或多个在人p26蛋白中正常存在的氨基酸残基，或通过插入一个或多个在人p26蛋白中正常不存在的氨基酸残基而增加或减少。在另一个实施方案中，衔接子的p26序列通过1、2、3、5、5、10或1-20、1-10、3-10或3-5处氨基酸取代(保守和/或非保守取代)、缺失和/或插入来修饰，以便增加或减少衔接子的体内半衰期。在一个特定的实施方案中，对应于p26(SEQ ID NO：16)的217位的谷氨酰胺(Gln，Q)的氨基酸残基被另一个氨基酸残基取代。在另外的实施方案中，所述取代是Gln217Pro。在另一个实施方案中，衔接子的p26序列通过缺失1-150、1-100、1-50、1-25或1-10个氨基酸残基来修饰，以便增加或减少衔接子的体内半衰期。在另外的实施方案中，衔接子的p26序列通过1、2、3、5、5、10或1-20、1-10、3-10或3-5个氨基酸取代(保守和/或非保守取代)、缺失和/或插入来修饰，以便增加或减少衔接子与FcRn的相互作用。

在一些实施方案中，AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)是存在于天然存在的蛋白质或其他分子中的AD。在一些实施方案中，AD是人内源性的AD。

在一些实施方案中，AD是人胞内蛋白质的表位。在另外的实施方案中，AD是选自以下的人胞内蛋白质的表位：弹性蛋白Tyk2、Jak1、Jak2、Jak3、LCK、ZAP-70和GRB2。在另外的实施方案中，AD包含胞内蛋白质的5-25、5-50、5-75、5-100、5-125或5-150个氨基酸残基，多于150个氨基酸残基或所有氨基酸残基。

在一些实施方案中，由衔接子的ADBD特异性结合的目的靶本身是具有不同序列的另一个衔接子的AD。

Vb.抗原决定簇结合结构域(ADBD)

本文提供的衔接子包含至少一个抗原决定簇结合结构域(ADBD)。在一些实施方案中，衔接子含有一个ADBD。在一些实施方案中，衔接子含有至少2、3、4或5个或多于5个ADBD。在一些实施方案中，衔接子含有1-3、1-4、1-5个或多于5个不同的ADBD。在一些实施方案中，衔接子含有至少2、3、4或5个或多于5个不同的ADBD。因此，衔接子可以包含单体ADBD(即，含有一个抗原决定簇结合结构域)或多聚体ADBD(即，含有多于一个任选地由接头可操作地串联连接的抗原决定簇结合结构域)。在一些实施方案中，多聚体衔接子的使用提供增强的(例如，协同的)靶结合。在另外实施方案中，多聚体衔接子的使用允许使用单个衔接子构建体靶向多于一个靶(例如，双特异性、三特异性等)。

多聚体衔接子是同多聚体(即，含有多于一个任选地通过接头连接的相同的ADBD)(例如，同源二聚体、同源三聚体、同源四聚体等)，或者衔接子异多聚体(即，含有两个或更多个抗原决定簇结合结构域，其中存在至少两个不同的抗原决定簇结合结构域)。包含在任何特定的衔接子中的ADBD的数量可以根据所述实施方案而变化，并且可以至少部分地由其中产生衔接子的表达系统来定义。然而，在若干个实施方案中，融合蛋白可以包含约5个至约10个ADBD、约10个至约15个ADBD、约15个至约20个ADBD、约20个至约25个ADBD或约25个至约30个ADBD(包括所列数量之间的数量以及端点)的多聚体。此外，衔接子的多个结构域可以含有相同或不同的ADBD。在一些实施方案中，2、3、4、5个或多于5个结构域是串联的。

在一个实施方案中，衔接子包含两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一个实施方案中，衔接子包含结合靶抗原上的相同或不同AD的两个ADBD。与仅含有一个针对靶抗原的ADBD的组合物相比，结合相同靶抗原的两个或更多个相同ADBD的连接产生提供不同优点(例如，结合亲合力增加、靶聚集和受体活化)的多价分子。在另一个实施方案中，衔接子包含结合不同抗原的两个ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与相同细胞上的不同抗原结合的两个ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与不同细胞上的不同抗原结合的两个ADBD。两个或更多个ADBD的连接产生多价且多特异性的衔接子，所述衔接子具有独立或同时地结合多于一种靶抗原的潜力。在一些实施方案中，多价衔接子能够同时结合相同的靶抗原。在一些实施方案中，多价衔接子能够同时结合不同的靶抗原。在一些实施方案中，衔接子包含由抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由AFPP26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD26、CD30、CD33或CD38抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

本文提供的衔接子中的ADBD可以结合任何AD(例如，如第II节中所述)。在一些实施方案中，ADBD结合BCMA(例如，包含SEQ ID NO：5的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD123(例如，包含SEQ ID NO：11的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD22(例如，包含SEQ ID NO：41的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD19(例如，包含SEQID NO：3的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD20(例如，包含SEQ ID NO:6-9或10的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD37(例如，包含SEQ ID NO：12或13的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CS1(例如，包含SEQ ID NO：1138的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合HER2(例如，包含SEQ ID NO：42的序列的多肽)。在一些实施方案中，ABDB结合CD45。在一些实施方案中，本文提供的衔接子中的ABDB特异性结合人CD26、CD30、CD33或CD38的AD。衔接子可以是“单特异性的”或“多特异性的”。“多特异性的”(例如，双特异性、三特异性或更大的多特异性)的衔接子识别并结合存在于一个或多个不同分子上的两个或更多个不同表位。

在一些实施方案中，衔接子包含BCMA(例如，包含SEQ ID NO：4的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CD123(例如，包含SEQ ID NO：11的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CD22(例如，包含SEQ ID NO：24的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CD19(例如，包含SEQ ID NO：3的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CS1(例如，包含SEQ ID NO：1138的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含HER2(例如，包含SEQ ID NO：42的序列的多肽)的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CD45的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含CD26、CD30、CD33或CD38的结构域(例如，胞外结构域)。在一些实施方案中，衔接子包含结构域的片段。在另外的实施方案中，衔接子包含具有选自以下组的氨基酸序列的结构域的片段：SEQ ID NO：4或5、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：3。在一些实施方案中，衔接子包含长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸的结构域的片段。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。

在一些实施方案中，衔接子含有至少两个ADBD，所述ADBD结合并交联由ADBD结合的一个或多个靶抗原和/或含有所述一个或多个靶抗原的复合物。在一些实施方案中，交联的抗原在相同细胞上。在一些实施方案中，交联的抗原在不同细胞上。在一些实施方案中，衔接子包含由抗原决定簇(例如，上述结构域)隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD26、CD30、CD33或CD38抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由AFP P26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子含有相同ADBD中的至少两个(即，是多价的)。在一些实施方案中，多价衔接子能够同时结合相同靶抗原中的两个或更多个。在一些实施方案中，衔接子是多价的并且能够同时结合相同的靶抗原。在一些实施方案中，多价(multi-multivalent)衔接子包含由抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，多价衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，多价衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，多价衔接子包含由AFP P26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子含有至少两个结合不同抗原的ADBD(即，是多特异性的)。在一些实施方案中，多特异性衔接子能够同时结合不同的靶抗原。在一些实施方案中，衔接子也是多价的并且能够同时结合相同的靶抗原。在一些实施方案中，多特异性衔接子包含由抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由AFP P26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

在一个实施方案中，多特异性衔接子含有结合单个目的靶上的至少两个不同表位的至少两个ADBD(即，对于相同靶抗原是多表位的)。在另外的实施方案中，多特异性衔接子包含特异性结合目的靶上的一个表位的至少一个ADBD和特异性结合相同靶抗原上的不同表位的至少一个其他ADBD。在一个实施方案中，多特异性衔接子包含特异性结合第一靶抗原上的表位的至少一个ADBD和特异性结合第二抗原上的表位的至少一个ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含特异性结合细胞上的第一靶抗原上的表位的至少一个ADBD和特异性结合相同细胞上的第二抗原上的表位的至少一个ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含特异性结合细胞上的第一靶抗原上的表位的至少一个ADBD和特异性结合不同细胞上的第二抗原上的表位的至少一个ADBD。

在一个另外的实施方案中，衔接子包含2个或更多个ADBD，所述ADBD与其他异源蛋白(或其亚结构域)可操作地连接，并且在这样做时，将融合配偶体的多价、多特异性和/或功能性质(例如，药代动力学，诸如增加的半衰期)赋予衔接子融合蛋白。衔接子的融合配偶体的实例包括但不限于抗体、抗体亚结构域(例如，scFv或Fc结构域)、血清白蛋白、血清白蛋白亚结构域、细胞表面受体、T细胞受体(TCR)的α链、T细胞受体的β链、细胞表面受体亚结构域、肽、肽标签(例如，FLAG或myc)。ADBD的数量和位置及其在衔接子内的相应位置可以变化。例如，ADBD可以位于融合配偶体的一个或所有末端和/或散布在衔接子融合配偶体内的异源亚基内。在一些实施方案中，衔接子包含由异源蛋白(例如，抗原决定簇)隔开的2个或更多个ADBD。在一些实施方案中，异源蛋白的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，异源蛋白的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。

在一个实施方案中，衔接子是双特异性的，并且含有特异性结合两种不同靶抗原的ADBD。在另外的实施方案中，双特异性衔接子特异性结合在两种不同细胞类型的表面上表达的两种不同的靶抗原。在另外的实施方案中，双特异性衔接子特异性结合在肿瘤细胞表面上表达的两种不同的靶抗原。在另外的实施方案中，双特异性衔接子特异性结合在多发性骨髓瘤细胞表面上表达的两种不同的靶抗原(例如，BCMA和CS1)。在一个实施方案中，双特异性衔接子结合在不同细胞上表达的靶抗原。在一个另外的实施方案中，双特异性衔接子结合在肿瘤的不同细胞上表达的靶抗原。在另一个实施方案中，双特异性衔接子结合在肿瘤脉管系统或肿瘤微环境内的不同细胞上表达的靶抗原。在一个实施方案中，双特异性衔接子特异性结合癌细胞靶和免疫效应细胞靶。在一个实施方案中，双特异性衔接子特异性结合在癌细胞上表达的靶(例如，CD19)和在T淋巴细胞表面上表达的靶(例如，CD3或CD45)。在一些实施方案中，双特异性衔接子能够同时结合不同的靶抗原。在一些实施方案中，双特异性衔接子包含由抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由AFP P26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

在其中衔接子包含多于一个ADBD的一些实施方案中，所述ADBD可以是本文讨论的任何类型的ADBD(例如，在上面的第III节中描述的任何ADBD)。例如，ADBD可以是抗体、其抗原结合片段、ScFv、替代支架结合结构域、D结构域、T细胞受体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，在衔接子包含多于一个ADBD的情况下，那些ADBD可以是相同类型的抗原结合分子或者可以是不同的。例如，衔接子可以包含两个ADBD，所述ADBD是D结构域。作为D结构域的两个ADBD可以相同或不同。衔接子还可以包含是D结构域的ADBD和是scFv的ADBD。衔接子还可以包含是T细胞受体或其抗原结合片段的ADBD和是scFv的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含由抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为至少50、75、100、150、200、250、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方案中，抗原决定簇的长度为5-500、5-400、10-300、5-200、50-100、5-50、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、50-75、100-500、100-400、100-300、100-200或100-150个氨基酸。在另外的实施方案中，衔接子包含由BCMA抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由CD45抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含由AFP P26抗原决定簇隔开的两个或更多个可操作地连接的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子的ADBD是去免疫化的。

在一些实施方案中，衔接子包含ABDB，所述ABDB结合含有目的AD的抗原靶，并且对靶的功能没有可辨别的影响。可选地，在一些实施方案中，衔接子包含ADBD，所述ADBD结合含有目的AD的抗原靶，并完全或部分地抑制、拮抗、激动、阻断、增加、刺激或干扰靶的生物活性。结合可以被鉴定为激动或拮抗的，并且使用或常规修改本领域已知用于评价这种活性的测定、生物测定和/或动物模型来确定。

衔接子激动剂是指以某种方式增加或增强衔接子靶的生物活性或具有与已知的衔接子靶的激动剂相当的生物活性的衔接子。在另一个实施方案中，衔接子是其结合的靶的拮抗剂。衔接子拮抗剂是指完全或部分地阻断或以某种方式干扰衔接子靶的生物活性或具有与已知的衔接子靶的拮抗剂或抑制剂相当的生物活性的衔接子。

在一个实施方案中，衔接子特异性结合目的靶，所述目的靶是血清蛋白。在一个实施方案中，衔接子特异性结合选自以下的血清蛋白：血清白蛋白(例如，人血清白蛋白(HSA))、甲状腺素结合蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原和免疫球蛋白(例如，IgG、IgE和IgM)。不受理论的束缚，认为衔接子与载剂蛋白的结合赋予衔接子改善的药效动力学概况，其包括但不限于与其中载剂蛋白结合序列缺失的衔接子相比改善的肿瘤靶向、肿瘤渗透、肿瘤内扩散和增强的治疗活性(参见，例如，WO 01/45746，其内容通过引用整体并入本文)。

在一个实施方案中，由衔接子特异性结合的目的靶是疾病相关抗原。所述抗原可以是以下的特征性抗原：癌症和/或特定细胞类型(例如，过度增殖细胞)和/或病原体(例如，细菌细胞(例如，结核、天花和炭疽)、病毒(例如，HIV和H)、寄生虫(例如，疟疾和利什曼病)、真菌感染、霉菌、支原体、朊病毒抗原，或者与免疫系统病症相关联的抗原。

在一个另外的实施方案中，由衔接子结合的目的靶(是细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、支原体抗原、朊病毒抗原或寄生虫抗原(例如，感染哺乳动物的抗原)。在一个实施方案中，衔接子的靶是人乳头瘤病毒、炭疽、乙型肝炎、狂犬病、尼帕病毒、西尼罗病毒、脑膜炎病毒或CMV。在一个另外的实施方案中，衔接子特异性结合病原体。

Vc.衔接子功能结构域

在一些实施方案中，衔接子包含第一抗原决定簇(AD)、结合第二抗原决定簇的结构域(ADBD)，并且还包含赋予一种或多种额外期望的性质(例如，改善的制造)和/或药代动力学性质(例如，改善的半衰期)的功能结构域。衔接子的功能结构域可以位于AD与ADBD之间。衔接子也可以位于AD和ADBD两者的N-末端或AD和ADBD两者的C-末端。在一些实施方案中，在衔接子包含两个或更多个AD的情况下，衔接子的功能结构域可以位于两个或更多个AD之间、两个或更多个AD的N-末端、或者两个或更多个AD的C-末端。在一些实施方案中，在衔接子包含两个或更多个ADBD的情况下，衔接子的功能结构域可以位于两个或更多个ADBD之间、两个或更多个ADBD的N-末端、或者两个或更多个ADBD的C-末端。

在一些实施方案中，衔接子包含选自以下的功能结构域：Fc或变体Fc(例如，人Fc或变体Fc结构域)或其片段、血清蛋白(例如，人血清白蛋白)或其片段；FcRn结合结构域；血清蛋白结合结构域；细胞因子、生长因子、激素或酶；成像剂；标记剂；和肽标签。

衔接子的功能结构域可以是天然来源的或重组工程化(例如，噬菌体展示、转基因鼠(xenomouse)或合成)的结果。在某些实施方案中，衔接子的功能结构域增强半衰期，增加或降低抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，并且/或者增加或降低补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。

在一些实施方案中，衔接子包含选自以下的功能结构域：Fc或变体Fc(例如，人Fc或变体人Fc结构域)或其片段或衍生物，血清蛋白(例如，人血清白蛋白)或其片段或衍生物(例如，血清蛋白结合结构域)；FcRn结合结构域；和血清蛋白结合结构域。

在一个实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含抗体效应子结构域或抗体效应子结构域的衍生物，其赋予衔接子一种或多种效应功能，诸如结合一种或多种Fc受体的能力。在一些实施方案中，功能结构域包含具有由CH2和CH3结构域提供的效应功能的抗体的一个或多个CH2和/或CH3结构域。在一些实施方案中，功能结构域包含具有由CH2和CH3结构域提供的效应功能的抗体的CH2和/或CH3结构域的一种或多种衍生物。可以包含在衔接子中以提供效应功能并且被本发明所涵盖的其他序列对于本领域技术人员将是清楚的，并且可以基于所需的效应功能常规地选择和设计到本文涵盖的衔接子中。

在一个实施方案中，衔接子包含增加由衔接子赋予的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的功能结构域(参见，例如，Bruhns等人,Blood 113:3716-3725(2009)；Shields等人,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Lazar等人,PNAS103:4005-4010(2006)；Stavenhagen等人,Cancer Res.67:8882-8890(2007)；Horton等人,Cancer Res.68:8049-8057(2008)；Zalevsky等人,Blood 113:3735-3743(2009)；Bruckheimer,Neoplasia 11:509-517(2009)；WO2006/020114；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和WO2004/074455，其各自通过引用整体并入本文)。赋予增加ADCC的衔接子的功能结构域中所含的Fc的部分的效应功能的片段工程化修饰的实例包括对应于以下的一种或多种修饰：IgG1-S298A、E333A、K334A；IgG1-S239D、I332E；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG1-P247I、A339D或Q；IgG1-D280H、K290S，有或没有S298D或V；IgG1-F243L、R292P、Y300L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、P396L；和IgG1-F243L、R292P、Y300L、V305I、P396L；其中Fc区中残基的编号是Kabat等人的EU索引的编号(Kabat等人,Sequences of proteins of Immunological Interest,1991,第五版)。

因此，在一些实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含赋予衔接子免疫球蛋白的生物学或生物化学特性的抗体片段。在一些实施方案中，所述抗体片段赋予选自以下的特性：非共价二聚化的能力、定位在肿瘤位点的能力以及在与没有抗体片段的衔接子相比时增加的血清半衰期。在某些实施方案中，衔接子至少与没有衔接子的对应抗体片段一样稳定。在某些实施方案中，衔接子比没有衔接子的对应抗体片段更稳定。衔接蛋白稳定性可以使用包括例如ELISA技术的已建立的方法来测量。在一些实施方案中，衔接子在37℃下在全血中(体内或离体)中稳定至少约10小时、至少约15小时、至少约20小时、至少约24小时、至少约25小时、至少约30小时、至少约35小时、至少约40小时、至少约45小时、至少约48小时、至少约50小时、至少约55小时、至少约60小时、至少约65小时、至少约70小时、至少约72小时、至少约75小时、至少约80小时、至少约85小时、至少约90小时、至少约95小时或至少约100小时(包括所列出的那些时间之间的任何时间)。在一个实施方案中，衔接子含有免疫球蛋白效应子结构域或半衰期影响结构域，其对应于其中恒定区结构域中的一个或多个的至少一部分已被改变以便提供所需的生物化学特性的免疫球蛋白结构域或片段，所述生物化学特性诸如在与具有对应的未改变的免疫球蛋白序列的免疫球蛋白片段相比时，降低或增加的效应功能、非共价二聚化的能力、增加的定位在肿瘤位点的能力、降低的血清半衰期或增加的血清半衰期。恒定区结构域的这些改变可以是氨基酸取代、插入或缺失。

在一个实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域或免疫球蛋白效应子结构域的衍生物的氨基酸序列，其赋予衔接子抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在另外的实施方案中，衔接子包含已被修饰以增加ADCC的免疫球蛋白效应子结构域的序列(参见，例如Bruhns,Blood 113:3716-3725(2009)；Shields,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Lazar,PNAS103:4005-4010(2006)；Stavenhagen,Cancer Res.67:8882-8890(2007)；Horton,Cancer Res.68:8049-8057(2008)；Zalevsky,Blood 113:3735-3743(2009)；Bruckheimer,Neoplasia 11:509-517(2009)；WO 06/020114；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和WO 04/074455，其各自的内容通过引用整体并入本文)。包含在衔接子中的氨基酸序列中的增加ADCC的免疫球蛋白片段工程化修饰的实例包括具有对应于以下的一种或多种修饰的免疫球蛋白效应子结构域序列：IgG1-S298A、E333A、K334A；IgG1-S239D、I332E；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG1-P247I、A339D或Q；IgG1-D280H、K290S，有或没有S298D或V；IgG1-F243L、R292P、Y300L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、P396L；和IgG1-F243L、R292P、Y300L、V305I、P396L；其中Fc区中残基的编号是Kabat等人的EU索引的编号(Kabat等人,Sequences of proteins of ImmunologicalInterest,1991第五版，通过引用并入本文)。

在另外的实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域或免疫球蛋白效应子结构域的衍生物的氨基酸序列，其赋予所述衔接子抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在另外的实施方案中，衔接子包含已被修饰以增加抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)的免疫球蛋白效应子结构域的序列(参见，例如Shields等人,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001)；Lazar等人,PNAS103:4005-4010(2006)；Stavenhagen等人,Cancer Res.67:8882-8890(2007)；Richards等人,Mol.Cancer Ther.7:2517-2527(2008)；Horton等人,Cancer Res.68:8049-8057(2008),Zalevsky等人,Blood 113:3735-3743(2009)；Bruckheimer等人,Neoplasia11:509-517(2009)；WO 06/020114；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和WO 04/074455，其各自的内容通过引用整体并入本文)。包含在衔接子中的氨基酸序列中的增加ADCP的免疫球蛋白片段工程化修饰的实例包括具有对应于下列中的一种或多种修饰的免疫球蛋白效应子结构域序列：IgG1-S298A、E333A、K334A；IgG1-S239D、I332E；IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG1-P247I、A339D或Q；IgG1-D280H，K290S，有或没有S298D或V；IgG1-F243L、R292P、Y300L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、P396L；IgG1-F243L、R292P、Y300L、V305I、P396L；和IgG1-G236A、S239D、I332E；其中残基的编号是Kabat等人的EU索引的编号(Kabat等人,Sequences of proteins ofImmunological Interest,1991第五版，通过引用并入本文)。

在另外的实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域或免疫球蛋白效应子结构域的衍生物的氨基酸序列，其赋予衔接子补体依赖性细胞毒性(CDC)。在另外的实施方案中，衔接子包含已被修饰以增加补体依赖性细胞毒性(CDC)的免疫球蛋白效应子结构域的序列(参见，例如Idusogie等人,J.Immunol.166:2571-2575(2001)；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；和Natsume等人,CancerRes.68:3863-3872(2008)，其各自的内容通过引用整体并入本文)。举例来说，衔接子可以含有抗体片段或结构域，所述抗体片段或结构域含有增加CDC的以下修饰中的一种或多种：IgG1-K326A、E333A；IgG1-K326W、E333S、IgG2-E333S；其中残基的编号是Kabat等人的EU索引的编号(Sequences of proteins of Immunological Interest,1991第五版，通过引用并入本文)。

在另外的实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域或免疫球蛋白效应子结构域的衍生物的氨基酸序列，其赋予衔接子结合FcγRIIb受体的能力。在另外的实施方案中，衔接子包含已被修饰以增加对FcγRIIb受体的抑制性结合的免疫球蛋白效应子结构域的序列(参见，例如Chu等人,Mol.Immunol.45:3926-3933(2008))。包含在衔接子中的氨基酸序列中的增加与抑制性FcγRIIb受体的结合的免疫球蛋白片段工程化修饰的实例是IgG1-S267E、L328F。

IgG的半衰期由其与新生儿受体FcRn的pH依赖性结合介导。在某些实施方案中，衔接子含有功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域或免疫球蛋白效应子结构域的衍生物的氨基酸序列，其赋予衔接子结合新生儿受体FcRn的能力。在某些实施方案中，衔接子含有功能结构域，所述功能结构域包含已被修饰以增强与FcRn的结合的免疫球蛋白FcRn结合结构域的序列(参见，例如Petkova等人,Int.Immunol.18:1759-1769(2006)；Dall'Acqua等人,J.Immunol.169:5171-5180(2002)；Oganesyan等人,Mol.Immunol.46:1750-1755(2009)；Dall'Acqua等人,J.Biol.Chem.281:23514-23524(2006),Hinton等人,J.Immunol.176:346-356(2006)；Datta-Mannan等人,DrugMetab.Dispos.35:86-94(2007)；Datta-Mannan等人,J.Biol.Chem.282:1709-1717(2007)；WO 06/130834；Strohl,Curr.Op.Biotechnol.20:685-691(2009)；and Yeung等人,J.Immunol.182:7663-7671(2009)，其各自的内容通过引用整体并入本文)。

在另外的实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含已被修饰以在pH 6.0而不是pH 7.4下对FcRn具有选择性亲和力的免疫球蛋白效应子结构域的序列。举例来说，衔接子功能结构域可以含有抗体片段或结构域，所述抗体片段或结构域含有增加半衰期的以下修饰中的一种或多种：IgG1-M252Y、S254T、T256E；IgG1-T250Q、M428L；IgG1-H433K、N434Y；IgG1-N434A；和IgG1-T307A、E380A、N434A；其中残基的编号是Kabat等人的EU索引的编号(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,1991第五版，通过引用并入本文)。

根据另一个实施方案，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含对应于免疫球蛋白效应子结构域的氨基酸序列，其已被修饰以在其选自以下的对应于Fc区(例如，Fcγ)位置的序列中含有至少一处取代：238、239、246、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438和439，其中Fc区中的残基的编号根据Kabat等人的EU编号系统(Sequences of proteins ofImmunological Interest,1991第五版，通过引用并入本文)。在一个具体的实施方案中，衔接子含有包含免疫球蛋白效应子结构域衍生物的序列的功能结构域，其中至少一个对应于位置434的残基是选自以下的残基：A、W、Y、F和H。根据另一个实施方案，衔接子包含具有以下相应取代的免疫球蛋白效应子片段衍生物的序列：S298A/E333A/K334A。在一个另外的实施方案中，衔接子包含具有对应于K322A的取代的免疫球蛋白效应子结构域衍生物。在另一个实施方案中，衔接子包含具有以下取代中的一个或任意组合的免疫球蛋白效应子结构域衍生物的序列：K246H、H268D、E283L、S324G、S239D和I332E。根据又一实施方案，衔接子包含具有对应于D265A/N297A的取代的免疫球蛋白效应子结构域衍生物的序列。

在某些实施方案中，衔接子包含功能结构域，所述功能结构域包含免疫球蛋白效应子结构域的序列，其已经使用本领域已知的技术进行了糖基工程化或突变以增加效应功能。例如，包含在衔接子中的恒定区结构域序列的失活(通过点突变或其他手段)可以降低循环衔接子的Fc受体结合，从而增加肿瘤定位。在其他情况下，恒定区修饰可能与本发明的某些实施方案一致减轻补体结合，并因此降低缀合细胞毒素的血清半衰期和非特异性缔合。恒定区的又其他修饰可以用于修饰二硫键或寡糖部分，其由于增加的抗原特异性或抗体柔性而允许增强的定位。所述修饰所产生的生理特征、生物利用度和其他生化效应(诸如肿瘤定位、生物分布和血清半衰期)可以使用公知的免疫学技术容易地测量和定量，而无需过多的实验。

作为化学缀合物的衔接子

促进与目的靶的特异性结合的衔接子可以与多种化合物化学缀合，所述化合物诸如荧光染料、放射性同位素、色谱组合物(例如，珠粒、树脂、凝胶等)和化学治疗剂。衔接子缀合物具有包括但不限于纯化、诊断、分析、制造和治疗应用的用途。

衔接子序列中半胱氨酸的固有缺乏提供了出于位点特异性缀合的目的引入独特半胱氨酸的机会。

在一些实施方案中，衔接子含有至少一个反应性残基。反应性残基可用作例如缀合物(诸如化疗药物)的附接位点。所述反应性残基可以是例如半胱氨酸、赖氨酸或另一种反应性残基。因此，半胱氨酸可以加到衔接子的N-末端或C-末端或衔接子序列内。半胱氨酸可以被取代成衔接子的序列中的另一个氨基酸。另外，赖氨酸可以加到衔接子的任一端或衔接子序列内，并且/或者赖氨酸可以被取代成衔接子序列中的另一个氨基酸。在一个实施方案中，反应性残基(例如，半胱氨酸、赖氨酸等)位于ADBD的环序列(例如，SEQ ID NO：22-25或26的Z1和Z2)中。在一个实施方案中，反应性残基位于衔接子的组件之间，例如，位于衔接子融合蛋白的ADBD与其他组件之间的接头中。反应性残基(例如，半胱氨酸、赖氨酸等)也可以位于衔接子的序列内。在一个实施方案中，衔接子包含至少一个、至少两个、至少三个反应性残基。在一个实施方案中，衔接子包含至少一个、至少两个或至少三个半胱氨酸残基。

Vd.衔接子的产生

可用于实践所提供的方法的衔接子的产生可以使用本领域已知的用于化学合成的各种标准技术、半合成方法和重组DNA方法学来进行。还提供了一种用于产生衔接子的方法，所述衔接子单独地存在或作为多结构域融合蛋白的一部分，作为可溶性剂和细胞相关蛋白。

在若干个实施方案中，衔接子的总体产生方案包括获得参考蛋白质支架和鉴定支架内用于修饰的多个残基。根据所述实施方案，参考支架可以包含具有一个或多个α-螺旋区或其他三级结构的蛋白质结构。一旦鉴定，则可以例如通过氨基酸的取代来修饰多个残基。在一些实施方案中，取代是保守的，而在其他实施方案中，进行非保守取代。在一些实施方案中，将天然氨基酸(例如，丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸中的一种)取代到参考支架中的用于修饰的靶向位置处。在某些实施方案中，所述修饰不包括半胱氨酸或脯氨酸中的取代。在特定实施方案中所需的所有鉴定的位置处进行修饰之后，可以例如在质粒、细菌、噬菌体或其他载体中重组表达所产生的修饰的多肽(例如，候选衔接子)(例如，以增加修饰的多肽中每一种的数量)。然后可以纯化并筛选修饰的多肽以鉴定那些与特定的目的靶具有特异性结合的修饰的多肽。在若干个实施方案中，某些修饰的多肽相对于参照支架将显示对目的靶的增强的结合特异性，在一些实施方案中，参照支架可以表现出对给定的目的靶的很少结合或不结合。在另外的实施方案中，根据目的靶，参考支架可以显示一定的与目的靶的相互作用(例如，非特异性相互作用)，而某些修饰的多肽将表现出至少约两倍、至少约五倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍或至少约100倍(或更多倍)增加的对目的靶的结合特异性。任选地，可以使参考序列和/或修饰的多肽(例如，衔接子)去免疫。例如，可以鉴定并修饰潜在免疫原性的残基或基序，以便降低或消除对衔接子的潜在免疫应答。下面更详细地提供关于衔接子的产生、选择和分离的各种实施方案的另外细节。

Ve.衔接子的重组表达

在一些实施方案中，衔接子是“重组产生的”(即，使用重组DNA技术产生)。可用于合成衔接子融合蛋白的示例性重组方法包括但不限于基于聚合酶链式反应(PCR)的合成、连环化、无缝克隆和递归定向连接(RDL)(参见，例如Meyer等人,Biomacromolecules 3:357-367(2002),Kurihara等人,Biotechnol.Lett.27:665-670(2005),Haider等人,Mol.Pharm.2:139-150(2005)；and McMillan等人,32:3643-3646(1999)，其各自的内容通过引用整体并入本文)。

还提供了包含编码衔接子的多核苷酸序列的核酸。此类多核苷酸任选地还包含一个或多个表达控制元件。例如，多核苷酸可以包含一个或多个启动子或转录增强子、核糖体结合位点、转录终止信号和聚腺苷酸化信号作为表达控制元件。多核苷酸可以插入任何合适的载体内，所述载体可以包含在任何合适的宿主细胞内以进行表达。

编码衔接子的核酸的表达通常通过将编码衔接子的核酸与表达载体中的启动子可操作地连接来实现。典型的表达载体含有用于调控所需的核酸序列的表达的转录和翻译终止子、起始序列和启动子。本领域已知的方法可以用于常规构建含有编码衔接子的核酸序列以及适当的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括但不限于体外重组DNA技术、合成技术和体内重组/基因重组。多核苷酸的表达可以在本领域已知的任何合适的表达宿主中进行，所述表达宿主包括但不限于细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞。在一个实施方案中，编码衔接子的核酸序列与合适的启动子序列可操作地连接，使得核酸序列在宿主中转录和/或翻译成衔接子。可用于在大肠杆菌(E.coli)中表达的启动子包括但不限于T7启动子。

在一个实施方案中，将包含衔接子编码核酸的载体引入宿主细胞(例如，噬菌粒)中以表达衔接子。所述载体可以保持为游离基因或与染色体整合，只要可以转录编码治疗剂的插入序列即可。载体可以通过标准重组DNA技术构建。载体可以是质粒、噬菌体、粘粒、噬菌粒、病毒或本领域已知的任何其他类型，其被用于在原核或真核细胞中复制和表达。本领域技术人员将了解，本领域已知的多种组件(诸如表达控制元件)可以包含在这种载体中，所述组件包括多种转录信号，诸如启动子和调控RNA聚合酶与启动子的结合的其他序列。任何已知的或已证明在载体将在其中表达的细胞中有效的启动子都可以用于引发衔接子的表达。合适的启动子可以是诱导型(例如，调控的)或组成型的。合适的启动子的非限制性实例包括SV40早期启动子区、包含在劳斯肉瘤病毒的3'长末端重复序列中的启动子、HSV-1(单纯疱疹病毒-1)胸苷激酶启动子、金属硫蛋白基因的调控序列等，以及以下动物转录控制区，其表现出组织特异性并且已经用于转基因动物：在胰腺腺泡细胞中有活性的弹性蛋白酶I基因控制区，在胰腺β细胞中有活性的胰岛素基因控制区，在睾丸、乳腺、淋巴和肥大细胞中有活性的小鼠乳腺肿瘤病毒控制区，在肝脏中有活性的白蛋白基因控制区，在肝脏中有活性的α-甲胎蛋白基因控制区，在肝脏中有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制区，在红系细胞中有活性的β-珠蛋白基因控制区，在脑中的少突胶质细胞中有活性的髓磷脂碱性蛋白基因控制区，在骨骼肌中有活性的肌球蛋白轻链-2基因控制区，和在下丘脑中有活性的促性腺激素释放激素基因控制区。在一个特定的实施方案中，启动子是在淋巴细胞中有活性的免疫球蛋白基因控制区。

在一个实施方案中，编码衔接子的一种或若干种核酸在组成型启动子或另选地调控表达系统的控制下表达。合适的调控表达系统包括但不限于四环素-调控的表达系统、蜕皮激素诱导型表达系统、lac-开关表达系统、糖皮质激素-诱导型表达系统、温度-诱导型启动子系统和金属硫蛋白金属-诱导型表达系统。如果宿主细胞系统内含有编码衔接子的若干种不同的核酸，则所述核酸中的一些可以在组成型启动子的控制下表达，而其他核酸可以在调控型启动子的控制下表达。表达水平可以通过包括蛋白质印迹分析和RNA印迹分析的本领域已知的方法来确定。

可以利用多种宿主-表达载体系统来表达编码衔接子的核酸。含有编码衔接子或其部分或片段的核酸的载体包括质粒载体、单链和双链噬菌体载体以及单链和双链RNA或DNA病毒载体。噬菌体和病毒载体也可以使用已知的感染和转导技术以包装或包封病毒的形式引入宿主细胞中。此外，病毒载体可以是有复制能力的，或者，可选地，是复制缺陷的。可选地，也可以使用无细胞翻译系统，以使用来源于DNA表达构建体的RNA来产生蛋白质(参见，例如WO86/05807和WO89/01036；和美国专利号5,122,464，其各自通过引用整体并入本文)。

通常，可以使用任何类型的细胞或培养的细胞系来表达本文提供的衔接子。在一些实施方案中，用于产生工程化宿主细胞的背景细胞系是噬菌体、细菌细胞、酵母细胞或哺乳动物细胞。可以使用多种宿主-表达载体系统来表达衔接子的编码序列。哺乳动物细胞可以用作宿主细胞系统，所述宿主细胞系统用含有目的靶的编码序列和衔接子的编码序列的重组质粒DNA或粘粒DNA表达载体转染。

所述细胞可以是来自生物体(包括人)的原代分离物、培养物或者转化或转基因性质的细胞系。在一些实施方案中，宿主细胞是人细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是人T细胞。在一些实施方案中，宿主细胞来源于人患者。

可用的宿主细胞包括但不限于微生物，诸如用含有衔接子编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有衔接子编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia))；用含有衔接子编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒属(Baculovirus))感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus)，CaMV；烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus)，TMV)感染的或用含有衔接子编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统。在特定的实施方案中，使用哺乳动物细胞系统来产生衔接子。哺乳动物细胞系统通常利用重组表达构建体，其含有来源于哺乳动物细胞的基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或来源于哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)。

在产生衔接子时可用作宿主细胞的原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，诸如大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。用于原核宿主细胞的表达载体通常含有一种或多种表型选择标记基因(例如，编码赋予抗生素抗性或提供自养需求的蛋白质的基因)。可用的原核宿主表达载体的实例包括pKK223-3(Pharmacia,Uppsala,Sweden)、pGEMl(Promega,Wis.,USA)、pET(Novagen,Wis.,USA)和pRSET(Invitrogen,Calif.,USA)系列的载体(参见，例如Studier,J.Mol.Biol.219:37(1991)和Schoepfer,Gene 124:83(1993))。原核宿主细胞表达载体中常用的示例性启动子序列包括T7(Rosenberg等人,Gene 56:125-135(1987))、β-内酰胺酶(青霉素酶)、乳糖启动子系统(Chang等人,Nature 275:615(1978))；和Goeddel等人,Nature281:544(1979))、色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等人,Nucl.Acids Res.8:4057,(1980))和tac启动子(Sambrook等人,1990,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,2d Ed.,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.)。

在一个实施方案中，使用真核宿主细胞系统，其包括用含有衔接子的编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母细胞，诸如美国申请号60/344,169和WO03/056914(在非人真核宿主细胞中产生人样糖蛋白的方法)(其各自的内容通过引用整体并入本文)中教导的表达系统。可以用于产生本发明的组合物(诸如DBD)的示例性酵母包括来自酵母属、毕赤酵母属、放线菌属(Actinomycetes)和克鲁维酵母属(Kluyveromyces)的酵母。酵母载体通常含有来自2mu酵母质粒的复制起点序列、自主复制序列(ARS)、启动子区、聚腺苷酸化序列、转录终止序列和选择标记基因。酵母表达构建体中启动子序列的实例包括来自金属硫蛋白、3-磷酸甘油酸激酶(Hitzeman,J.Biol.Chem.255:2073(1980))和其他糖酵解酶的启动子，所述糖酵解酶例如为烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、葡萄糖磷酸异构酶和葡糖激酶。用于酵母表达以及酵母转化方案的另外合适的载体和启动子是本领域已知的。参见，例如Fleer,Gene107:285-195(1991)和Hinnen,PNAS 75:1929(1978)。

昆虫和植物宿主细胞培养系统也可用于产生本发明的组合物。此类宿主细胞系统包括，例如，用含有DBD的编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或用含有DBD的编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统，包括但不限于美国专利号6,815,184；美国公开号60/365,769和60/368,047；以及WO2004/057002、WO2004/024927和WO2003/078614中教导的表达系统，其各自的内容通过引用整体并入本文。

在一个另外的实施方案中，可以使用宿主细胞系统，包括用重组病毒表达载体(例如，腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、慢病毒)感染的动物细胞系统，包括经工程化以含有在双微染色体中稳定扩增(CHO/dhfr)或不稳定扩增的编码衔接子的DNA的多个拷贝的细胞系(例如，鼠细胞系)。在一个实施方案中，包含编码衔接子的多核苷酸的载体是多顺反子。可用于产生这些组合物的示例性哺乳动物细胞包括293细胞(例如，293T和293F)、CHO细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、YO骨髓瘤细胞、P3X63小鼠骨髓瘤细胞、PER细胞、PER.C6(Crucell,Netherlands)细胞VERY、Hela细胞、COS细胞、MDCK细胞、3T3细胞、W138细胞、BT483细胞、Hs578T细胞、HTB2细胞、BT20细胞、T47D细胞、CRL7O30细胞、HsS78Bst细胞、杂交瘤细胞和其他哺乳动物细胞。可用于实施本发明的另外的示例性哺乳动物宿主细胞包括但不限于T细胞。表达系统和选择方法的一些实例描述于以下参考文献和其中引用的参考文献中：Borth等人,Biotechnol.Bioen.71(4):266-73(2000),Werner等人,Arzneimittelforschung/Drug Res.48(8):870-80(1998),Andersen等人,Curr.Op.Biotechnol.13:117-123(2002),Chadd等人,Curr.Op.Biotechnol.12:188-194(2001),和Giddings,Curr.Op.Biotechnol.12:450-454(2001)。表达系统和选择方法的另外的实例描述于Logan等人,PNAS 81:355-359(1984),Birtner等人,MethodsEnzymol.153:51-544(1987))中。哺乳动物宿主细胞表达载体的转录和翻译控制序列通常来源于病毒基因组。哺乳动物表达载体中常用的启动子序列和增强子序列包括来源于多瘤病毒、腺病毒2、猿猴病毒40(SV40)和人巨细胞病毒(CMV)的序列。用于哺乳动物宿主细胞的示例性可商购获得的表达载体包括pCEP4(Invitrogen)和pcDNA3(Invitrogen)。

用于将核酸引入宿主细胞(例如，哺乳动物宿主细胞)中的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质体转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔和本领域已知的其他方法。用于产生包含载体和/或外源性核酸的细胞的方法是本领域公知的。参见，例如Sambrook等人(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,NewYork)。

用于将目的多核苷酸引入宿主细胞中的生物方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，并且特别是逆转录病毒载体，已经成为将基因插入哺乳动物(例如，人)细胞中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可以来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺相关病毒，并且可以是本领域已知的其他病毒载体。参见，例如美国专利号5,350,674和5,585,362，其各自的内容通过引用整体并入本文。

用于将目的DNA和RNA多核苷酸引入宿主细胞中的方法包括细胞的电穿孔，其中将电场施加到细胞以便增加细胞膜的渗透性，从而允许将化学品、药物或多核苷酸引入细胞中。可以使用电穿孔将衔接子编码DNA或RNA构建体引入哺乳动物或原核细胞中。

在一个优选的实施方案中，细胞的电穿孔引起CAR在T细胞、NK细胞、NKT细胞的表面上的表达。这种表达在细胞的寿命期间可以是瞬时的或稳定的。电穿孔可以用包括MaxCyte

将多核苷酸引入宿主细胞中的化学手段包括胶体分散系统，诸如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠粒和基于脂质的系统，其包括水包油乳剂、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒介物的示例性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊泡)。在利用非病毒递送系统的情况下，示例性递送媒介物是脂质体。预期使用脂质制剂以将核酸引入宿主细胞中(体外、离体或体内)。在另一个方面，所述核酸可以与脂质缔合。与脂质缔合的核酸可以包封在脂质体的水性内部，散布在脂质体的脂质双层内，通过与脂质体和寡核苷酸两者缔合的连接分子附接到脂质体，截留在脂质体中，与脂质体复合，分散在含有脂质的溶液中，与脂质混合，与脂质组合，作为悬浮液包含在脂质中，包含胶束或与胶束复合，或者以其他方式与脂质缔合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关联的组合物不限于溶液中的任何特定结构。例如，它们可以以双层结构存在，作为胶束存在，或具有“坍塌”结构。它们也可以简单地散布在溶液中，可能形成尺寸或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，其可以是天然存在的或合成的脂质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪滴以及含有长链脂族烃及其衍生物的化合物类别，诸如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。

适合使用的脂质可以从商业来源获得。例如，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)可以从Sigma,St.Louis,MO获得；磷酸双十六烷基酯(“DCP”)可以从K&K Laboratories(Plainview,NY)获得；胆固醇(“Choi”)可以从Calbiochem-Behring获得；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)和其他脂质可以从Avanti Polar Lipids,Inc.(Birmingham,AL)获得。脂质在氯仿或氯仿/甲醇中的储备溶液可以在约-20℃下储存。氯仿可以作为唯一的溶剂使用，因为其比甲醇更易于蒸发。“脂质体”是涵盖通过产生封闭的脂质双层或聚集体而形成的各种单层和多层脂质媒介物的通称。脂质体可被表征为具有带有磷脂双层膜和内部水性介质的囊泡结构。多层脂质体具有被水性介质隔开的多个脂质层。当磷脂悬浮在过量的水性溶液中时，它们自发形成。脂质组分在形成闭合结构之前经历自身重排，并在脂质双层之间截留水和溶解的溶质(Ghosh等人,Glycobiology 5:505-510(1991))。然而，还涵盖在溶液中具有与正常囊泡结构不同的结构的组合物。例如，脂质可以呈现胶束结构或仅作为脂质分子的非均匀聚集体存在。还预期lipofectamine-核酸复合物。

不管是用于将外源性核酸引入宿主细胞中的方法，还是重组核酸序列在宿主细胞中的存在，都可以通过本领域已知的多种测定常规地确认。此类测定包括例如本领域已知的“分子生物学”测定，诸如DNA印迹和RNA印迹、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，诸如，例如通过免疫学手段(ELISA和蛋白质印迹)或通过本文所述的测定来检测特定肽的存在或不存在，以鉴定落在本发明范围内的剂。

报告基因用于鉴定潜在转染的细胞并用于评价调控序列的功能性。通常，报告基因不存在于接受体生物体、组织或细胞中或不由其表达的基因，并且所述基因编码其表达由一些易于检测的性质(例如，酶活性)显现出来的多肽。在DNA已被引入接受体细胞中之后合适的时间，测定报告基因的表达。合适的报告基因的非限制性列表可以包括编码萤光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌的碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白基因的基因(例如，Ui-Tei等人,FEBS Lett.479:79-82(2000))。合适的表达系统是本领域已知的，并且可以使用已知的技术制备或商业获得。通常，具有显示报告基因的最高表达水平的最小5'侧翼区的构建体被鉴定为启动子。此类启动子区可以常规地与报告基因连接，并用于评价剂调节启动子驱动的转录的能力。

许多选择系统可以用于哺乳动物宿主-载体表达系统，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等人,Cell 22:817(1980))基因，其可以分别用于tk

Vf.衔接子纯化

一旦衔接子已通过重组表达产生，它就可以通过本领域中已知的任何用于纯化重组蛋白的方法来纯化，例如通过色谱法(例如，离子交换色谱、亲和色谱和尺寸柱色谱)、离心、差异溶解度或通过用于蛋白质纯化的任何其他标准技术来纯化。在另外的实施方案中，衔接子任选地与本文所述或本领域中另外已知的异源多肽序列融合以促进纯化。更特别地，设想用于亲和纯化的衔接子亲和柱的配体(例如，抗体及其他亲和基质)，以及任选地，在使用本领域已知的技术最终制备衔接子之前，从组合物中除去被这些配体结合的衔接子或衔接子融合组合物的其他组分。

Vg.衔接子的化学合成

除了重组方法，衔接子产生也可以使用本领域已知的多种液相和固相化学方法使用所需多肽的有机化学合成来进行。各种自动合成仪是可商购获得的，并且可以根据已知的方案使用。参见，例如Tam等人,J.Am.Chem.Soc.105:6442(1983)；Merrifield,Science232:341-347(1986)；Barany和Merrifield,The Peptides,Gross and Meienhofer,eds,Academic Press,New York,1-284；Barany等人,Int.J.Pep.Protein Res.30:705-739(1987)；Kelley等人，Genetic Engineering Principles and Methods,Setlow,J.K.,ed.Plenum Press,NY.1990,vol.12,pp.1-19；Stewart等人,Solid-Phase PeptideSynthesis,W.H.Freeman Co.,San Francisco,1989。这些方法学的一个优点是它们允许将非天然氨基酸残基掺入衔接子的序列中。

用于本发明方法的衔接子可以在合成或翻译期间或之后例如，通过糖基化、乙酰化、苄基化、磷酸化、酰胺化、聚乙二醇化、甲酰化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解、与抗体分子连接、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒酰化、硫酸化、泛蛋白化等进行修饰(参见，例如Creighton,Proteins:Structures and Molecular Properties,2d Ed.(W.H.Freeman andCo.,N.Y.,1992)；Postranslational Covalent Modification of Proteins,Johnson,ed.(Academic Press,New York,1983),pp.1-12；Seifter,Meth.Enzymol.182:626-646(1990)；Rattan,Ann.NY Acad.Sci.663:48-62(1992))。在具体的实施方案中，肽在N-末端乙酰化和/或在C-末端酰胺化。

多种化学修饰中的任一种可以通过已知技术进行，所述技术包括但不限于乙酰化、甲酰化等。另外，衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。

VI.嵌合抗原受体

如本文所提供，嵌合抗原受体(CAR)是多结构域蛋白，其包含含有ADBD的胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。此类CAR可以在细胞表面上表达(例如，如第VII节中所述)并且与衔接子组合使用(例如，如第V节中所述)，例如以杀伤靶细胞。在若干个实施方案中，ADBD至少部分地由如本文所公开的靶结合多肽组成。在若干个实施方案中，胞内信号传导结构域选自以下组：人CD3ζ结构域、41BB结构域、CD28结构域及其任意组合。根据所述实施方案，共刺激信号传导区包含选自以下组的共刺激分子的胞内结构域：CD27、CD28、4lBB、OX40、CD30、CD40、PD1、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7H3、与CD83特异性结合的配体及其任意组合。在若干个实施方案中，CAR包含融合蛋白，所述融合蛋白包括另外的靶结合多肽。还提供了编码CAR的分离的核酸序列，所述CAR包含靶结合多肽作为靶向区的一部分(或全部)。

在一些实施方案中，CAR的ADBD包含至少一个替代支架结合结构域(例如，D结构域或亲和体)，其被设计成赋予膜结合的CAR结合特异性。包含替代支架结合结构域的受体可以由任何细胞类型表达。

在一个实施方案中，CAR由以下元件构成：胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域，其中所述胞质结构域包含信号传导结构域。在另一个实施方案中，CAR由胞外结构域和跨膜结构域构成。在另外的实施方案中，CAR由胞外结构域构成，所述胞外结构域由一个或多个具有相同或不同特异性的ADBD构成。在一个实施方案中，CAR的胞内结构域(例如，胞质结构域)包含CD3ζ链的胞内结构域。在另一个实施方案中，CAR的胞内信号传导结构域由CD3ζ链的胞内结构域的一部分构成。在另外的实施方案中，CAR的胞内结构域包含CD3ζ链的胞内结构域和共刺激信号传导区。共刺激信号传导区是指CAR的一部分，其包含共刺激分子的胞内结构域的全部或一部分。能够赋予CAR共刺激性质的共刺激分子和这些分子的部分是本领域已知的，并且可以常规地掺入CAR中。另外，可以掺入这些胞内信号传导和共刺激结构域的截短或突变以进一步增强或降低受体信号传导。在优选的实施方案中，T细胞被遗传修饰以稳定表达CAR。在此类实施方案中，CAR的胞质结构域可以被设计成包含CD28和/或41BB信号传导结构域本身，或者与可在本发明背景中使用的任何其他所需胞质结构域组合的CD28和/或41BB信号传导结构域。在一个实施方案中，CAR的胞质结构域可以被设计成还包含CD3-ζ的信号传导结构域。在一个实施方案中，CAR包含胞外结构域，具有穿过细胞膜的跨膜结构域的胞外蛋白质接头(诸如在T细胞或NK细胞中存在)，和胞质结构域，其任选地包含多个信号传导模块。在若干个实施方案中，CAR还可以包含表位标签。在若干个实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括但不限于CD3-ζ、41BB和CD28信号传导模块及其组合。

VIa.CAR胞外抗原决定簇结合结构域

本文提供的CAR包含一个或多个抗原决定簇结合结构域(ADBD)。CAR的ADBD可以是本文所述的任何ADBD(例如，如第III节中所述)。示例性ADBD包含多肽，例如，抗体分子(其包含抗体及其抗原结合片段，例如，免疫球蛋白、单结构域抗体(sdAb)和scFv)或非抗体支架(例如，D结构域或亲和体)。

根据待靶向的所需抗原，可以将CAR的胞外结构域工程化以包含一个或多个特异性结合所需抗原靶的抗原决定簇结合结构域(ADBD)。例如，在一个实施方案中，将CAR工程化以靶向CD19，并且将CD19结合ADBD掺入CAR的胞外结构域中。可选地，CAR的胞外结构域可以包含多于一个ADBD，从而赋予CAR多特异性或多价性。

CAR的胞外结构域中ADBD的选择取决于待靶向的一种或多种细胞的身份。例如，可以将CAR的胞外结构域工程化以特异性结合相同细胞或另一个细胞上的细胞表面蛋白，诸如受体。在其他实施方案中，将CAR的胞外结构域工程化以特异性结合可溶性分子，诸如免疫球蛋白。在其他实施方案中，由CAR结合的目的靶包括与病毒、细菌和寄生虫感染，免疫系统的疾病和病症(例如，自身免疫疾病)相关联的那些目的靶。

在其他实施方案中，CAR的胞外结构域含有一个或多个结合配体的ADBD，所述配体充当与癌症相关联的靶细胞上的细胞表面标记。在一些实施方案中，ADBD靶向并结合肿瘤或癌抗原(例如，TAA、TSA、CAA、CSA或者本文所述或本领域中另外已知的其他肿瘤抗原)。因此，本文提供了用于产生CAR的方法，它们在产生嵌合细胞(诸如人T细胞和自然杀伤细胞)中的用途，以及这些嵌合T和NK细胞在过继性免疫疗法中的用途。

ADBD的选择可以取决于限定靶细胞表面的配体或受体的类型和数量。例如，可以选择ADBD来识别充当与特定疾病状态相关联的靶细胞上的细胞表面标记的配体或受体。可以充当配体或受体的细胞表面标记的实例包括与特定疾病状态相关联的细胞表面标记，例如，病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫感染、自身免疫疾病和与不需要的细胞增殖相关联的病症(例如，癌症，诸如本文所述的癌症)的细胞表面标记。

由CAR的ADBD特异性结合的目的靶可以是CAR或衔接子期望结合的任何分子，例如，第IIa节中所述的AD中的任一种。

在一些实施方案中，ADBD结合表4中所列的靶。在另外的实施方案中，ADBD包含1、2、3、4、5、1-5、1-10或多于10个表3中所列的D结构域序列(例如，SEQ ID NO：44-1078或1079)。在一些实施方案中，ADBD包含1、2、3、4、5、1-5、1-10个或多于10个表3中所列的不同D结构域序列。

在一些实施方案中，ADBD结合BCMA(例如，包含SEQ ID NO：5的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：44-338和339。

在一些实施方案中，ADBD结合CS1(例如，包含SEQ ID NO：1138的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：780-794和795。

在一些实施方案中，ADBD结合HER2(例如，包含SEQ ID NO：42的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：800-839和840。

在一些实施方案中，ADBD结合CD123(例如，包含SEQ ID NO：11的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：340-772和773。

在一些实施方案中，ADBD结合AFP(例如，包含SEQ ID NO：14或15的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合AFP p26(例如，包含SEQ ID NO：16、1117、1118、1119、1120、1121、1122或1123的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQID NO:841-983和984。

在一些实施方案中，ADBD结合CD137(例如，包含SEQ ID NO：1081的序列的多肽)。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：985-990和991。

在一些实施方案中，ADBD结合CD47。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：992-995和996。

在一些实施方案中，ADBD结合CTLA4。在另外的实施方案中，ADBD包含SEQ ID NO：997的DD序列。

在一些实施方案中，ADBD结合DR5。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：998-1006、1070-1072和1073。

在一些实施方案中，ADBD结合KIR。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：1007、1008和1009。

在一些实施方案中，ADBD结合PDL1。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：1010-1016、1074-1078和1079。

在一些实施方案中，ADBD结合TIM3。在另外的实施方案中，ADBD包含SEQ ID NO：1017的DD序列。

在一些实施方案中，ADBD结合PD1。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：1018、1019和1020。

在一些实施方案中，ADBD结合CD137。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：985-990和991。

在一些实施方案中，ADBD结合CD19(例如，包含SEQ ID NO：3的序列的多肽)。在一些实施方案中，ADBD结合CD20(例如，包含SEQ ID NO：6-9或10的序列的多肽)。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：1030-1058和1059。

在一些实施方案中，ADBD结合CD22(例如，包含SEQ ID NO：41的序列的多肽)。在另外的实施方案中，ADBD包含选自以下组的DD序列：SEQ ID NO：1060-1068和1069。

在一些实施方案中，ADBD结合胞内蛋白。在另外的实施方案中，ADBD包含结合选自以下组的胞内蛋白的DD序列：弹性蛋白、Tyk2、Jak1、Jak2、Jak3、LCK、ZAP-70和GRB2。

在一些实施方案中，ADBD结合人CD45的胞外结构域(ECD)(例如，SEQ ID NO：1106的残基29-766)。

在一些实施方案中，ADBD结合CD26(例如，SEQ ID NO：1113的残基29-766)。

在一些实施方案中，ADBD结合CD30(例如，SEQ ID NO：1114的残基19-379)。

在一些实施方案中，ADBD结合CD33(例如，SEQ ID NO：1115的残基18-259)。

在一些实施方案中，ADBD结合CD38(例如，SEQ ID NO：1116的残基43-300)。

在一些实施方案中，ADBD结合肿瘤抗原或癌抗原，所述肿瘤抗原或癌抗原包含由来源于哺乳动物的癌症或肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫识别的一种或多种抗原性癌表位。

在一些实施方案中，ADBD结合在免疫效应细胞的表面上表达的AD。

在一些实施方案中，CAR结合存在于天然存在的蛋白质或其他分子中的AD(例如，在衔接子中和/或在靶细胞上)。在一些实施方案中，CAR结合人内源性的AD。

在一些实施方案中，本文提供的CAR包含结合MHC呈递的肽的ADBD(例如，抗体片段或ASBD)。通常，来源于内源性蛋白的肽填充I类主要组织相容性复合物(MHC)分子的口袋，并被CD8+T淋巴细胞上的T细胞受体(TCR)识别。I类MHC复合物由所有有核细胞组成型表达。在癌症中，病毒特异性和/或肿瘤特异性肽/MHC复合物代表一类独特的用于免疫疗法的细胞表面靶。已经描述了靶向来源于人白细胞抗原(HLA)-A1或HLA-A2背景中的病毒或肿瘤抗原决定簇的肽的TCR样抗体(参见，例如Sastry等人,J.Virol.85(5):1935-1942(2011)；Sergeeva等人,Blood 117(16):4262-4272(2011)；Verma等人,J.Immunol.184(4):21562165(2010)；Willemsen等人,Gene Ther.8(21):1601-1608(2001)；Dao等人,Sci.Transl.Med.5(176):176ra33(2013)；Tassev等人,Cancer Gene Ther.19(2):84-100(2012))。例如，TCR样抗体可以通过筛选文库(诸如人scFv噬菌体展示文库)来鉴定。因此，在一些实施方案中，本公开内容提供一种包含ADBD的CAR，所述ADBD结合选自在细胞内表达的上述任何肿瘤抗原的分子的MHC呈递的肽，例如，p53、BCR-Ab1、Ras、K-ras、NY-ESO-1和c-met。

在一些实施方案中，CAR包含是抗体或其抗原结合片段的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含是scFv的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含是替代支架结合结构域的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含是D结构域的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含T细胞受体或其抗原结合片段。

本文还提供了CAR，其中所述CAR包含多个ADBD。在一些实施方案中，CAR包含多个相同的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含多个不同的ADBD。在一些实施方案中，CAR包含结合相同抗原决定簇的多个ADBD。在一些实施方案中，CAR包含多个ADBD，其中所述结合结构域结合不同的AD。在一些实施方案中，CAR包含多个ADBD，其中所述结合结构域结合相同细胞上的不同AD。在一些实施方案中，CAR包含多个ADBD，其中所述结合结构域结合不同细胞上的不同AD。

在一些实施方案中，CAR包含多个(例如，2、3、4、5或多于5个)ADBD(例如，D结构域、亲和体或scFv)，其中每个ADBD能够结合靶抗原。在一个实施方案中，CAR的两个或更多个ADBD可以结合不同的AD。在一个另外的实施方案中，CAR的两个或更多个ADBD可以结合相同的抗原，例如，相同抗原上的相同或不同的表位。在一个实施方案中，CAR的多个ADBD彼此连接，例如，第一ADBD的C-末端连接第二ADBD的N-末端。在一个实施方案中，第一ADBD的C-末端通过共价键(例如，肽键)与第二ADBD的N-末端连接。

在一些实施方案中，接头或铰链区包含在一个或多个ADBD之间，例如，接头或铰链区位于第一ADBD的C-末端与第二ADBD的N-末端之间。举例来说，包含两个ADBD(例如，ADBD

VIb.胞外间隔结构域

在一些实施方案中，CAR包含胞外间隔结构域。如本文所用，术语“胞外间隔结构域”或“ESD”是指置于ADBD与跨膜结构域之间的CAR的多肽序列。在一个实施方案中，胞外间隔结构域允许细胞的外表面与ADBD具有足够的距离以及使细胞与ADBD之间的空间位阻最小化的柔性。

在特定的实施方案中，胞外间隔结构域足够短或足够柔性，使得其不干扰包含CAR的细胞与携带AD的细胞(例如，靶细胞)的接合。在一个实施方案中，胞外间隔结构域的长度为2至20、5至15、7至12或8至10个氨基酸。在一些实施方案中，ESD结构域包含至少50、20或10个残基。在一些实施方案中，ESD的长度为10至300、10至250或10至200个残基。

在一些实施方案中，ESD从细胞延伸的距离足够短，使得铰链不会妨碍CAR ADBD与靶细胞表面的接合。在一些实施方案中，ESD从细胞毒性细胞的表面延伸小于20、15或10纳米。因此，ESD的适用性可以受ESD的线性长度、氨基酸残基的数量和柔性的影响。举例来说，IgG4 ESD可以长达200个氨基酸，但由于Ig结构域折叠，其从细胞毒性细胞的表面延伸的距离较小。CD8αESD，其长度为约8nm，约43个氨基酸。相反，IgG4C2和C3 ESD的长度为约200个氨基酸，但与细胞毒性细胞的表面的距离与CD8αESD相当。虽然不希望受理论的束缚，但延伸的相似性受柔性的影响。

在一些实施方案中，胞外间隔结构域包括但不限于抗体或其片段或衍生物的Fc片段、抗体或其片段或衍生物的铰链区、抗体的CH2区、抗体的CH3区、人工间隔序列或其组合。胞外间隔结构域的另外的实例包括但不限于CD8a铰链，和由多肽制成的人工间隔区，所述人工间隔区可以与例如IgG(诸如人IgG4)的Gly3或CH1和CH3结构域一样小。在一些实施方案中，胞外间隔结构域是以下中的任一个或多个：(i)IgG4的铰链区、CH2区和CH3区，(ii)IgG4的铰链区，(iii)IgG4的铰链区和CH2区，(iv)CD8a的铰链区，(v)IgG1的铰链区、CH2区和CH3区，(vi)IgG1的铰链区，或(vi)IgG1的铰链区和CH2区。其他胞外间隔结构域对于本领域技术人员是显而易见的，并且可以与本文提供的替代实施方案结合使用。

在一些实施方案中，ESD是天然存在的序列。在一些实施方案中，CAR的ESD对应于来自人蛋白质、其片段或短寡肽或多肽接头的ESD。在一些实施方案中，CAR ESD对应于人Ig(免疫球蛋白)ESD(铰链)或其片段。在一个实施方案中，ESD包含IgG4 ESD的氨基酸序列(例如，由IgG4 ESD的氨基酸序列组成)。在一个实施方案中，例如，铰链包含IgD铰链的氨基酸序列(例如，由IgD铰链的氨基酸序列组成)。在一些实施方案中，铰链可以是人CD8铰链或其片段。在一个实施方案中，例如，铰链包含CD8铰链的氨基酸序列(例如，由CD8铰链的氨基酸序列组成)。

在一些实施方案中，ESD是人工序列。在一个实施方案中，ESD是包含甘氨酸-丝氨酸双联体的短寡肽接头。

在一些实施方案中，CAR不含胞外间隔结构域。

VIc.跨膜结构域

如本文所用的术语“跨膜结构域”(TMD)是指细胞表面表达的蛋白质(诸如CAR)的区域，其跨越质膜。在一些实施方案中，TMD连接胞外序列(例如，胞外ADBD)和胞内序列(诸如胞内信号传导结构域)。在一些实施方案中，CAR的跨膜结构域是跨膜蛋白(例如，I型跨膜蛋白)的跨膜区、人工疏水序列或其组合。其他跨膜结构域对于本领域技术人员将是显而易见的，并且可以与本发明的替代实施方案结合使用。

可以将CAR设计成含有与受体的胞外结构域融合的跨膜结构域。如上所述，胞外结构域和跨膜结构域的融合可以在有或没有接头的情况下完成。在一个实施方案中，使用与CAR中的结构域中的一个天然相关联的跨膜结构域。在一个具体的实施方案中，CAR中的跨膜结构域是CD8跨膜结构域。在一些情况下，CAR的跨膜结构域包含CD8铰链结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域通过氨基酸取代被选择或修饰以促进或抑制与其他表面膜蛋白的缔合。

跨膜结构域可以来源于天然来源或合成来源。当来源是天然来源时，结构域可以来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。出于本文中的目的的特定用途的跨膜区可以来源于选自下组的成员(即，至少包含所述成员的跨膜区)：T细胞受体的α链、β链或ζ链；CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。在一些实施方案中，跨膜结构域来源于NKR的跨膜区。在另外的实施方案中，跨膜结构域来源于选自由以下组成的组的分子的跨膜区：KIRDS2、OX40、TNFR2、LFA1(CD11a、CD18)、ICOS、41BB、GITR、LTBR、BAFFR、HVEM、NKp80(KLRF1)、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGB7、VLA1、VLA6、IA4、ITGAX、CD11c、ITGB1 CD27、CD29、ITGB2、CD2、CD11a、CD11b、CD11d、CD18、CD19、CD40、CD49a、CD49d、CD49f、CD84、CD96、CD100、CD103、CD160、CD162、CD226、CD229、CEACAM1、CRTAM、PSGL1、SLAM(SLAMF1)、SLAMF4、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAMF7、SLAMF8、SELPLG和PAG/Cbp。可选地，跨膜结构域可以是合成的，并且优选地主要包含疏水性残基，诸如亮氨酸和缬氨酸。在另外的实施方案中，跨膜结构域在跨膜结构域的每个末端包含FWV(苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸)的三联体。

示例性NKR结构域，例如跨膜结构域、铰链或干结构域或胞内(例如胞质)结构域(由所述结构域所来源的NKR鉴定)。杀伤性免疫球蛋白KIR2DL1受体(KIR)包括KIR2DL2/L3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DL1/S1、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR2DP1、KIR2DP1、NCR；NKp30、NKp44、NKp46、SLAM；受体SLAM、CD48、CD229、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME、CD2F-10、SLAMF6、SLAMF7；Fc结合受体CD16、FcgRIII、CD64、Ly49；受体Ly49、凝集素相关NK Ly49A细胞受体、Ly49C；其他NK受体NKG2D、CD160(含TM的剪接变体)DNAM1、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100、NKp80、CEACAM1和CD244。

VId.胞内信号传导结构域

本文描述了可以用于根据本发明的嵌合抗原受体(CAR)的胞内信号传导结构域。

如本文所用的“胞内信号传导结构域”(ISD)或“胞质结构域”是指CAR中转导效应功能信号并指导细胞执行其专门功能(例如，细胞溶解活性和辅助活性，包括细胞因子分泌)的部分。

CAR的胞质结构域(即，胞内信号传导结构域)负责活化经工程化以表达CAR的免疫细胞的正常效应功能中的至少一个。术语“效应功能”是指细胞的专门功能。T细胞的效应功能例如包括细胞溶解活性和包括细胞因子分泌的辅助活性。因此，术语“胞内信号传导结构域”是指CAR蛋白中转导效应功能信号并指导细胞执行专门功能的部分。虽然通常可以采用对应于天然存在的受体的整个胞内信号传导结构域，但在许多情况下，不必使用整条链。就使用胞内信号传导结构域的截短部分而言，可以使用这种截短部分代替完整的链，只要其转导效应功能信号即可。因此，术语胞内信号传导结构域意在包含胞内信号传导结构域的足以转导效应功能信号的任何截短部分。在一个实施方案中，CAR中的胞内信号传导结构域包括在抗原受体接合后共同作用以起始信号转导的T细胞受体(TCR)的胞质序列以及共同受体的序列，或具有功能能力的这些序列的任何衍生物或变体。转导效应功能信号的结构域的实例包括但不限于T细胞受体复合物的ζ链或其同源物(例如，η链、FcsRly和β链、MB 1(Iga)链、B29(Ig)链等)中的任一种、人CD3ζ链、CD3多肽(Δ、δ和ε)、syk家族酪氨酸激酶(Syk、ZAP70等)、src家族酪氨酸激酶(Lck、Fyn、Lyn等)和参与T细胞转导的其他分子(诸如CD2、CD5和CD28)。

在一些实施方案中，当与其融合的胞外结构域(例如，ADBD)结合同源AD时，CAR的胞内信号传导结构域产生胞内信号。CAR的胞内信号传导结构域可以包括主要胞内信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。在一个实施方案中，构建CAR以在免疫细胞(例如，T或NK细胞)中表达，使得表达的CAR包含来源于通常与免疫细胞相关联的多肽的诸如主要胞内信号传导结构域和/或共刺激信号传导结构域的结构域。例如，在一些实施方案中，CAR用于在T细胞中表达，并且包含41BB结构域和CD3ζ结构域。在另一个实施方案中，构建CAR分子以在免疫细胞中表达，使得表达的CAR包含来源于通常不与免疫细胞相关联的多肽的结构域。例如，在一些实施方案中，用于在T细胞中表达的CAR包含来源于NK细胞的KIR结构域。在一个替代实施方案中，用于在NK细胞中表达的CAR包含来源于T细胞的41BB结构域和CD3ζ结构域(参见例如，WO2013/033626，通过引用并入本文)。

CAR的胞内信号传导结构域包含足够的主要刺激分子序列以例如在与其融合的ADBD结合同源AD时产生胞内信号。在特定的实施方案中，CAR的胞内信号介导选自以下组的T细胞响应：增殖、细胞因子分泌、杀伤、活化和分化。

在一个实施方案中，CAR的胞内信号传导区包含含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的结构域。在另外的实施方案中，CAR胞内信号传导区包含来自选自以下的分子的含ITAM的结构域：TCRζ(CD3ζ)、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FCER1B)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD5、CD22、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、CD32(FcγRIIa)、CD79a和CD79b。在一个具体的实施方案中，CAR的胞内信号传导结构域包含CD3ζ信号传导结构域。在另一个具体的实施方案中，CAR的胞内信号传导结构域包含DAP12信号传导结构域。在一些实施方案中，含ITAM的信号传导结构域与天然存在的含ITAM的结构域的对应残基具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性，或相差不超过30、25、20、15、10、5、4、3、2或1个氨基酸残基。

在本发明中特别有用的含ITAM的主要胞质信号传导序列的实例包括来源于以下的那些：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。特别优选的是，CAR中的胞质信号传导分子包含来源于CD3ζ的胞质信号传导序列。

在一个优选的实施方案中，CAR的胞质结构域包含CD3-ζ信号传导结构域本身，或者与可在CAR的背景中使用的任何其他所需的胞质结构域组合的CD3-ζ信号传导结构域。例如，CAR的胞质结构域可以包含CD3ζ链部分和共刺激信号传导区。共刺激信号传导区是指CAR的包含共刺激分子的胞内结构域的部分。共刺激分子是淋巴细胞对抗原有效响应所需要的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。此类分子的实例包括CD27、CD28、41BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7H3、TIM1和LAG3。

如本文所用的“共刺激结构域”(CSD)是指CAR的增强记忆细胞的增殖、存活和/或发育的部分。CAR可以包含一个或多个共刺激结构域。每个共刺激结构域包含例如TNFR超家族成员中任一个或多个的共刺激结构域，所述TNFR超家族成员选自CD28、CD137(4lBB)、CD134(OX40)、Dap10、CD27、CD2、CD5、ICAM1、LFA1(CD1la/CD18)、Lck、TNFRI、TNFRII、Fas、CD30和CD40或其组合。其他共刺激结构域(例如，来自其他蛋白质)对于本领域技术人员将是显而易见的，并且可以与本发明的替代实施方案结合使用。

在一些实施方案中，CAR的胞内结构域包含含ITAM的结构域和共刺激信号传导结构域，所述共刺激信号传导结构域包含当与其融合的胞外ADBD结合同源配体时足以产生胞内信号的共刺激分子的功能片段或类似物。在一些实施方案中，CAR包含对应于选自以下的分子中存在的共刺激信号传导结构域的共刺激信号传导结构域：CD137(4lBB)、OX40、LIGHT、TNFR2、TRANCE/RANKL、GITR、BAFFR、HVEM、B7H3、CDS、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB7、VLA1、VLA6、C49f、IA4、LFA1、CD2、CD4、CD7、CD8α、CD8β、CD1lA、CD11B、CD11C、CD11D、CD18、CD19、CD27、CD28、CD29、CD30、CD40、CD49A、CD49D、CD69、CD84、CD96、CD100、CD103、CD150、CD160、CD162、CD226、CD229、CD278、ICAM1、CEACAM1、CRTAM、PSGL1、SLAMF1、SLAMF4、SLAMF6、SLAMF7、SLAMF8、LTBR、LAT、GADS、PAG/Cbp、SLP76、NKG2C、NKp30、NKp44、NKp46和NKp80。

在一些实施方案中，CAR包含对应于选自由41BB、CD28、CD27、ICOS和OX40组成的组的分子中存在的共刺激结构域的共刺激结构域。

在一些实施方案中，CAR包含多个共刺激结构域。在特定的实施方案中，CAR从胞外到胞内方向包含以下共刺激信号传导结构域：41BB-CD27、CD27-41BB、41BB-CD28、CD28-41BB、OX40-CD28、CD28-OX40、CD28-41BB或41BB-CD28。

在一些实施方案中，CAR的共刺激信号传导结构域与天然存在的共刺激结构域的对应残基具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，或相差不超过30、25、20、15、10、5、4、3、2或1个氨基酸残基。

多肽接头可以位于CAR的相邻元件之间。例如，接头可以位于相邻的ADBD之间，或ADBD与跨膜结构域之间，或跨膜结构域与胞质结构域之间，或相邻的胞质结构域之间。CAR的胞质信号传导部分内的胞质信号传导序列可以以随机或特定的顺序彼此连接。任选地，短接头，优选长度在2与10个氨基酸之间，可以形成连接。甘氨酸-丝氨酸双联体提供特别合适的接头。

VIe.CAR的表达

CAR是有意与细胞相关联，并且在表达它们的细胞的背景中使用。一个特定的实施方案涉及已被转导以表达CAR的T细胞的过继性细胞转移的策略。优选地，可以将所述细胞遗传修饰以在其表面上稳定表达CAR，从而赋予新的MHC非依赖性的靶特异性。

多种病毒源载体可以用于其中使用病毒进行转染和将其整合到哺乳动物细胞基因组中的应用中。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。慢病毒载体特别适于实现长期基因转移(例如，过继性T细胞免疫疗法)，因为它们允许转基因的长期稳定整合及其在子细胞中的传代。慢病毒载体与来源于致癌逆转录病毒(诸如鼠白血病病毒)的载体相比具有额外的优点，因为它们可以转导非增殖细胞，诸如肝细胞。它们还具有低免疫原性的额外优点。通常，合适的载体含有在至少一种生物体中有功能的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切核酸酶位点和一个或多个选择标记(例如，国际申请公开号WO 01/96584和WO 01/29058；和美国专利号6,326,193)。若干种载体启动子序列可用于转基因的表达。合适启动子的一个实例是即刻早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。这种启动子序列是强组成型启动子序列，其能够驱动与其可操作地连接的任何多核苷酸序列的高水平表达。合适的启动子的另一个实例是EF-1a。然而，也可以使用其他组成型启动子序列，包括但不限于猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复序列(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽白血病病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒即刻早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、以及人基因启动子(诸如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子)。诱导型启动子包括但不限于金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。

为了评估CAR多肽或其部分的表达，引入细胞中的表达载体还可以含有选择标记基因或报告基因或两者，以促进从试图通过病毒载体转染或感染的细胞群体中鉴定和选择表达细胞。在其他方面，所述选择标记可以携带在单独的DNA片段上并用于共转染程序中。选择标记和报告基因两者都可以侧接适当的调控序列，以能够在宿主细胞中表达。可以的选择标记包括例如抗生素抗性基因(诸如neo)，并且是本领域中另外已知的。

在本发明的T细胞的扩增和遗传修饰之前，从受试者获得T细胞的来源。T细胞可以从许多来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在本文提供的某些实施方案中，可以使用本领域可获得的任何数量的T细胞系。

T细胞分离、培养、活化和扩增方法的全面讨论可见于WO2012079000中，其内容通过引用整体并入本文。

另外提供一种包含编码本文所述的CAR的核酸的宿主细胞。还提供一种包含编码CAR的核酸序列的组合物。

VII.嵌合抗原受体细胞

本公开内容提供调控经修饰以表达一种或多种不同的CAR的细胞的特异性和活性的组合物和方法。

在一些实施方案中，细胞被工程化以表达本文所述的CAR中的一种或多种。此类含CAR的细胞，被称为“CAR细胞”，在单一疗法和组合疗法中使用，所述联合疗法包括例如用于杀伤靶细胞的其他治疗剂，诸如本文所述的衔接子。

在一些实施方案中，CAR细胞包含编码CAR的核酸序列，其中CAR包含至少部分地由结合目的靶的ADBD组成的胞外结构域、跨膜结构域和信号传导结构域。在若干个实施方案中，编码的CAR多肽特异性结合肿瘤抗原(并因此发挥将表达CAR的细胞递送至肿瘤的功能)。在若干个实施方案中，由CAR结合的肿瘤抗原与血液恶性肿瘤相关联。在另外的实施方案中，由CAR结合的肿瘤抗原与实体瘤相关联。在另外的实施方案中，CAR被工程化以结合实体瘤和血液肿瘤两者。根据所述实施方案，表达CAR的细胞可以是免疫效应细胞(例如，T细胞或自然杀伤(NK)细胞)或另一种细胞类型。在若干个实施方案中，当CAR的抗原结合结构域结合其靶向的肿瘤抗原时，细胞(无论是T细胞、NK细胞或其他细胞类型)表现出抗肿瘤免疫性。

在一些实施方案中，在扩增和遗传修饰或其他修饰之前，细胞来源(例如，T细胞或自然杀伤细胞)可以使用本领域已知的技术从受试者常规获得。术语“受试者”旨在包括其中可以引发免疫应答的活生物体(例如，哺乳动物)。T细胞可以从包括但不限于外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤的来源获得。

在一些实施方案中，例如，当CAR的ADBD与可以存在于靶细胞的表面上和/或衔接子中的AD相互作用时，CAR细胞能够杀伤靶细胞。在一些实施方案中，例如，当CAR的ADBD与可以存在于靶细胞的表面上和/或衔接子中的AD相互作用时，CAR细胞能够脱粒。在一些实施方案中，例如，当CAR的ADBD与可以存在于靶细胞的表面上和/或衔接子中的AD相互作用时，CAR细胞能够分泌一种或多种细胞因子。

在一些实施方案中，含CAR的细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，含CAR的细胞是免疫效应细胞。在另外的实施方案中，含CAR的免疫细胞是细胞毒性细胞。在另外的实施方案中，细胞毒性细胞选自T细胞、NK细胞或培养的NK细胞(例如，NK92细胞)。

在某些实施方案中，免疫效应细胞包含免疫球蛋白或其他肽结合分子的细胞表面受体，诸如免疫球蛋白恒定区的受体，并且包括通常称为“Fc受体”(“FcR”)的受体类别。许多FcR已经在结构和/或功能上得到表征，并且是本领域已知的，包括具有与免疫球蛋白重链同种型的限制性亚组相互作用的特异性能力的FcR，或者以不同亲和力与Fc结构域相互作用和/或可以在某些条件下在免疫效应细胞的限制性亚组上表达的FcR(例如，Kijimoto-Ochichai等人,Cell Mol.Life.Sci.59:648(2002)；Davis等人,Curr.Top.Microbiol.Immunol.266:85(2002)；Pawankar,Curr.Opin.Allerg.Clin.Immunol.1:3(2001)；Radaev等人,Mol.Immunol.38:1073(2002)；Wurzburg等人,Mol.Immunol.38:1063(2002)；Sulica等人,Int.Rev.Immunol.20:371(2001)；Underhill等人,Ann.Rev.Immunol.20:825(2002)；Coggeshall,Curr.Dir.Autoimm.5:1(2002)；Mimura等人,Adv.Exp.Med.Biol.495:49(2001)；Baumann等人,Adv.Exp.Med.Biol.495:219(2001)；Santoso等人,Ital.Heart J.2:811(2001)；Novak等人,Curr.Opin.Immunol.13:721(2001)；Fossati等人,Eur.J.Clin.Invest.31:821(2001))，其各自的内容通过引用整体并入本文。

能够介导ADCC的细胞是免疫效应细胞的实例。其他免疫效应细胞包括自然杀伤细胞、肿瘤浸润T淋巴细胞(TIL)、细胞毒性T淋巴细胞和粒细胞，诸如包含过敏响应机制的细胞。因此，免疫效应细胞包括但不限于造血来源的细胞，包括在骨髓和淋巴谱系内处于各种分化阶段并且可以(但不是必需)表达一种或多种类型的功能细胞表面FcR的细胞，诸如T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、红细胞和前体、祖细胞(例如，造血干细胞)以及此类细胞的静止、活化和成熟形式。其他免疫效应细胞可以包括能够介导免疫功能的非造血来源的细胞，例如内皮细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、破骨细胞、上皮细胞和其他细胞。免疫效应细胞还可以包括介导细胞毒性或细胞抑制事件，或内吞、吞噬或胞饮事件，或实现细胞凋亡诱导，或实现微生物免疫或微生物感染中和的细胞，或者介导过敏性、炎性、超敏性和/或自身免疫应答的细胞。

在一些实施方案中，含CAR的细胞是T细胞。在一些实施方案中，含CAR的细胞是NK细胞。在另外的实施方案中，含CAR的细胞是B细胞。可以任选地使用其他免疫细胞和/或不同免疫细胞类型的组合。在一些实施方案中，细胞类型(例如，NK细胞和T细胞)的组合是有利的，因为它们协同作用以治疗疾病或病状(例如，过度增殖性病症，诸如癌症)。当使用组合时，各种细胞类型可以靶向相同、不同或重叠的肿瘤抗原决定簇。

在一些实施方案中，含CAR的免疫细胞是T细胞，并且CAR的ADBD与同源配体(即，目的靶)的结合刺激T细胞以引发胞内信号传导。在另外的实施方案中，CAR的ADBD与同源配体的结合刺激T细胞以产生细胞因子并脱粒，从而导致对在其表面上表达目的靶的细胞(例如，癌细胞)的细胞毒性作用。在另外的实施方案中，含CAR的T细胞响应于结合目的靶而增殖。在一些实施方案中，含CAR的T细胞的活性不导致T细胞表现出与T细胞耗竭相关联的表型。在CAR细胞是T细胞的一些实施方案中，CAR的跨膜结构域包含41BB或CD28，并且胞质结构域包含T细胞受体α、β或ζ链。

在一些实施方案中，含CAR的免疫细胞是NK细胞，跨膜结构域包含CD28，并且胞质结构域包含T细胞受体的ζ链。

在一些实施方案中，已经将含CAR的免疫细胞工程化以结合由癌细胞表达的目的靶。在另外的实施方案中，含CAR的细胞结合选自以下组的肿瘤抗原：CD137、PDL1、CD123、CTLA4、CD47、KIR、DR5、TIM3、PD1、EGFR、TCR、CD19、CD20、CD22、ROR1、间皮素、CD33、LL3Ra、cMet、PSMA、糖脂F77、EGFRvIII、GD2、NY-ESO-1和MAGE A3。在另外的实施方案中，含CAR的细胞结合上述肿瘤抗原中的2、3、4、5或更多种。

在一些实施方案中，CAR细胞的CAR结合两种或更多种目的靶。在另外的实施方案中，CAR还包含含有SEQ ID NO：17-26或27的氨基酸的第二多肽，所述多肽能够特异性结合由癌细胞表达的第二目的靶，并且其中第二多肽与第二目的靶的特异性结合大于根据SEQID NO:1的多肽与第二目的靶的结合。

在一些实施方案中，将CAR细胞工程化以表达本文公开的衔接子(例如，如第V节中所述)。

在另外的实施方案中，将CAR细胞工程化以表达第二CAR。在一些实施方案中，第二CAR包含含有ADBD的胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。在一个另外的实施方案中，第二CAR由胞外结构域构成，所述胞外结构域由一个或多个具有相同或不同特异性的ADBD(例如，如本文中第VI部分中所述)构成。在一些实施方案中，第二CAR能够在结合目的靶后转导效应功能信号。在另外的实施方案中，第二CAR包含含有ADBD的胞外结构域和跨膜结构域或其他细胞表面结合结构域，但不能在结合目的靶后信号传导。

在一些实施方案中，将CAR细胞工程化，使得CAR编码序列被位点特异性地引入对应宿主细胞中高度表达的基因的基因座中。在一些实施方案中，将CAR编码序列引入T细胞受体基因座中。在另外的实施方案中，将CAR编码序列引入细胞的T细胞受体α恒定区(TRAC)中。缺乏功能性TCR和/或HLA的表达的修饰的细胞可以常规地使用本领域已知的任何合适的手段获得，包括例如siRNA、shRNA、CRISPR、TALEN和/或ZFN。

在一些实施方案中，免疫效应细胞可以是同种异体免疫效应细胞，例如，T细胞或NK细胞。

VIIa.CAR细胞的遗传修饰

为了避免或降低本文公开的CAR细胞靶向对它们自身的免疫应答(例如，杀伤)的可能性，可以将CAR细胞遗传修饰以降低或消除由CAR细胞直接通过本文提供的CAR或间接通过本文提供的衔接子靶向的一个或多个AD的表达。例如，可以将本文提供的具有特异性结合人CD45的AD的ADBD的CAR细胞或本文提供的适合与包含特异性结合人CD45的AD的ADBD的衔接子组合使用的CAR细胞工程化，以降低或消除由ADBD识别的人CD45 AD的表达。在一些实施方案中，CAR细胞是人免疫效应细胞。

在一些实施方案中，CAR细胞包含遗传修饰，其降低或消除由本文提供的CAR或衔接子结合的一种AD的表达。在一些实施方案中，CAR细胞包含遗传修饰，其降低或消除由本文提供的CAR或衔接子结合的多于一种AD的表达。在一些实施方案中，CAR细胞包含多于一种遗传修饰，其降低或消除由本文提供的CAR或衔接子结合的多于一种AD的表达。在一些实施方案中，所述多于一种AD包含在单个抗原中。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。在一些实施方案中，AD是人CD26、CD30、CD33或CD38 AD。在一些实施方案中，CAR细胞是人免疫效应细胞。

在一些实施方案中，与没有遗传修饰的参考细胞相比，遗传修饰使AD的表达降低约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％。在一些实施方案中，遗传修饰消除AD的表达。

在一些实施方案中，与没有遗传修饰的参考细胞相比，遗传修饰使包含AD的多肽的表达降低约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％。在一些实施方案中，遗传修饰消除包含AD的多肽的表达。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。在一些实施方案中，AD是人CD26、CD30、CD33或CD38 AD。

在一些实施方案中，遗传修饰是编码AD的基因或其片段中的缺失、插入或取代。在一些实施方案中，遗传修饰是编码AD的基因或其片段中的缺失、插入或取代，其消除AD的表达。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。在一些实施方案中，AD是人CD26、CD30、CD33或CD38AD。

在一些实施方案中，遗传修饰是用编码包含AD的多肽的同源物、变体或衍生物的核苷酸序列取代编码包含AD的多肽的基因或其片段，其中所编码的同源物、变体或衍生物不包含AD。在一些实施方案中，同源物是非人灵长类同源物。在一些实施方案中，同源物来源于恒河猴(rhesus macaque)。在一些实施方案中，同源物来源于食蟹猴(cynomolgusmonkey)。在一些实施方案中，变体是天然存在的变体。在一些实施方案中，变体是剪接变体。在一些实施方案中，变体具有改变的糖基化模式。在一些实施方案中，变体或衍生物能够进行信号传导。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。在一些实施方案中，AD是人CD26、CD30、CD33或CD38 AD。

遗传修饰可以降低或消除CAR或衔接子结合所需的任何AD的表达，例如，在第IIa节中描述的AD中的任一种的表达。

可用于实施所提供的方法的包含遗传修饰的CAR细胞的产生可以使用本领域已知的用于重组DNA方法学、基因操纵和基因组编辑的多种标准技术来进行。本文所述的缺乏AD的表达的遗传修饰的CAR细胞可以常规地使用本领域已知的任何合适的手段获得，包括例如siRNA、shRNA、CRISPR、TALEN和/或ZFN。CAR细胞的基因操纵方法描述于例如美国专利申请公开20170204372中，其通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，将CAR细胞工程化以消除或降低功能性T细胞受体(TCR)和/或人白细胞抗原(HLA)(例如，I类HLA和/或II类HLA)的表达。缺乏功能性TCR和/或HLA的表达的修饰的细胞可以常规地使用本领域已知的任何合适的手段获得，包括例如siRNA、shRNA、CRISPR、TALEN和/或ZFN。

在一些实施方案中，将CAR细胞工程化以消除或降低可能降低CAR细胞发动免疫效应响应的能力的分子的表达。在另外的实施方案中，将CAR细胞工程化以消除或降低选自以下的分子的表达：PD1、PDL1、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFRβ。在一些实施方案中，CAR细胞已被工程化以消除或降低上述分子中的2、3、4、5或更多种的表达。缺乏上述分子中的一种或多种的表达的修饰的细胞可以常规地使用本领域已知的任何合适的手段获得，包括例如siRNA、shRNA、CRISPR、TALEN和/或ZFN。

在另外的实施方案中，将CAR细胞工程化以消除或降低以下中的一种或多种的表达：(a)功能性TCR和HLA；和(b)选自以下的分子：PD1、PDL1、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFRβ。在另外的实施方案中，CAR细胞已被工程化以消除或降低上述分子中的2、3、4、5、6或更多种的表达。

VIII.组合物

本文描述了包含CAR细胞(例如，如第VII节中所述)和衔接子(例如，如第V节中所述)的组合物。

例如，在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，衔接子的结合使靶细胞上的第二AD或含有第二AD的复合物交联。在一些实施方案中，衔接子包含来源于非天然存在的支架的ADBD。在一些实施方案中，衔接子含有不被靶细胞表达的AD。在一些实施方案中，衔接子含有在分泌蛋白上的AD。在一些实施方案中，衔接子含有α甲胎蛋白AD。在一些实施方案中，衔接子的AD不是核蛋白。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)的替代支架结合结构域(ASBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，所述ADBD包含与靶细胞上的第二AD结合的ASBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的D结构域。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是第V节中所述的任何衔接子。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，组合物包含(a)表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的第一D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；以及(b)衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的第二D结构域。所述CAR细胞可以是本文所述的任何CAR细胞(例如，如第VII节中所述)，并且/或者所述衔接子可以是本文所述的任何衔接子(例如，如第V节中所述)。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除第一AD或第二AD的表达的遗传修饰。

在某些实施方案中，CAR包含单链可变片段(scFv)ADBD。在其他实施方案中，CAR包含替代支架结合结构域(ASBD)ADBD。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域。

在一些实施方案中，CAR包含2个ADBD。在其他实施方案中，CAR包含ASBD和scFv。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域和scFv。在一些实施方案中，CAR包含2个ASBD。在另外的实施方案中，CAR包含2个D结构域。

在一些实施方案中，CAR胞内结构域是信号传导结构域。在另外的实施方案中，CAR胞内结构域包含主要信号传导结构域。在某些实施方案中，CAR胞内结构域包含CD3ζ主要信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR胞内结构域还包含共刺激信号传导结构域。在另外的实施方案中，共刺激信号传导结构域选自：CD28、41BB、CD27和CD134。在特定的实施方案中，CAR胞内信号传导结构域包含41BB共刺激信号传导结构域。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在一些实施方案中，CAR结合CD26。在一些实施方案中，CAR结合CD30。在一些实施方案中，CAR结合CD33。在一些实施方案中，CAR结合CD38。在另外的实施方案中，CAR结合CD45。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD19、CD22、CD123、BCMA、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在另外的实施方案中，CAR结合BCMA。在另外的实施方案中，CAR结合CS1。在其他实施方案中，CAR结合CD123。在其他实施方案中，CAR结合CD19。在其他实施方案中，CAR结合CD22。在其他实施方案中，CAR结合TACI。在其他实施方案中，CAR结合BAFFR。在其他实施方案中，CAR结合PDL1。在其他实施方案中，CAR结合HER2。

在一些实施方案中，CAR包含2个结合单独靶的ADBD。在另外的实施方案中，CAR结合BCMA和CS1。在另外的实施方案中，CAR结合CD19和CD123。在其他实施方案中，CAR结合CD22和CD123。在其他实施方案中，CAR结合PDL1和CD123。在一些实施方案中，CAR结合CD45和第二靶。在某些实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一ASBD和结合CS1的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一D结构域和结合CS1的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含与BCMA结合的D结构域和结合CS1的scFv。在其他实施方案中，CAR包含结合CS1的D结构域和结合BCMA的scFv。在某些实施方案中，CAR包含结合CD19的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在一些实施方案中，CAR包含结合CD45 AD的第一D结构域和结合第二AD的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的D结构域和结合CD123的scFv。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合CD19的ASBD和结合CD123的scFv。

在一些实施方案中，衔接子包含肿瘤抗原的AD。在另外的实施方案中，肿瘤抗原选自以下组：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、TACI、BAFFR和PDL1。在另外的实施方案中，肿瘤抗原是HER2。

在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含是ASBD的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含D结构域。

在一些实施方案中，衔接子包含两个ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含两个ADBD，它们(a)是相同的，(b)与相同的抗原决定簇结合，(c)与相同抗原的不同AD结合，(d)与相同细胞上的不同抗原结合，或(d)与不同细胞上的不同抗原结合。在另外的实施方案中，衔接子包含两个ASBD。在某些实施方案中，衔接子包含两个D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是ASBD的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是D结构域的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在某些实施方案中，衔接子包含与CD45结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD26结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD30结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD33结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD38结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD45结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在某些实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与HER2结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与TACI结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BAFFR结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子是双特异性的。在另外的实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD和与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子与人CD45结合的AD和第二AD。

在一些实施方案中，靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是AML肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是CLL肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是MM肿瘤细胞。

在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在另外的实施方案中，癌细胞选自以下组：乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌和肺癌。在另外的实施方案中，癌细胞是乳腺癌。在一些实施方案中，癌细胞是卵巢癌。

在一些实施方案中，组合物包含至少两种靶细胞。在一些实施方案中，至少一种靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于相同的肿瘤类型。在其他实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同的肿瘤类型。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。

在一些实施方案中，表达CAR的细胞是免疫效应细胞。在另外的实施方案中，免疫效应细胞是T细胞。在其他实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞。在一些实施方案中，表达CAR的细胞杀伤靶细胞。在一些实施方案中，衔接子与AD的结合阻断包含AD的抗原的活性。在一些实施方案中，表达CAR的细胞包含降低或消除本文所述的AD的表达的遗传修饰。在一些实施方案中，表达CAR的细胞包含降低或消除人CD45 AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，所述组合物在患者(例如，人患者)体内。

在一些实施方案中，CAR细胞结合存在于靶细胞和衔接子两者上的AD。在其他实施方案中，CAR细胞结合存在于衔接子上但不存在于靶细胞上的AD。在一些实施方案中，AD是天然存在的蛋白质/分子。在一些实施方案中，AD是人蛋白质/分子。

IX.包括接触靶细胞的方法

本文描述了使用方法，其包括使靶细胞与CAR细胞(例如，如上文在第VII节中所述)和衔接子(例如，如上文在第V节中所述)或组合物(例如，如上文在第VIII节中所述)接触。

例如，在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使所述靶细胞与本文所述的组合物(例如，如第VIII节中所述)中的任一种接触。在另一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使所述靶细胞与本文所述的组合物(例如，如第VIII节中所述)中的任一种接触。如本文所用，“接触”可以指体外(例如，在细胞培养物中)接触靶细胞或体内(例如，在患者体内)接触靶细胞。

在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一AD的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。

在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；(b)包含所述第一靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；并且(c)所述CAR包含(i)与所述靶细胞或所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种向一种或多种靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中(a)第一AD存在于第一靶细胞上；(b)包含所述第一靶细胞的所述组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)；并且(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)和(ii)第二AD；并且(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种向靶细胞递送免疫应答的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞接触，其中(a)第一抗原决定簇(AD)存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；并且(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含第一靶细胞的组合物与衔接子接触，其中，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞上的第一AD结合的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与第一AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与衔接子接触，其中(a)包含所述靶细胞的所述组合物还包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一AD的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且(b)所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD(例如，D结构域)。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且(c)包含(i)结合所述靶细胞或所述衔接子上的所述第一AD的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种杀伤一种或多种靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于第一靶细胞上；(b)包含所述第一靶细胞的所述组合物还包含第二靶细胞和衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且(c)所述CAR包含(i)与所述第一靶细胞或所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；并且(c)所述CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

在一个实施方案中，一种杀伤靶细胞的方法，所述方法包括使包含靶细胞的组合物与表达CAR的细胞接触，其中(a)第一AD存在于所述靶细胞上；(b)包含所述靶细胞的所述组合物还包含衔接子，其包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；并且(c)所述CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。

所述接触可以在体外、离体或体内发生。在一个实施方案中，所述接触例如在向已经接受表达CAR的细胞的患者施用衔接子之后，或在向已经接受衔接子的患者施用表达CAR的细胞之后发生在患者(例如人患者)中。

在一些实施方案中，CAR细胞包含消除由本文所述的CAR或本文所述的衔接子识别的AD的表达的遗传修饰。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。在一些实施方案中，CAR细胞包含消除由CAR或被CAR结合的衔接子识别的AD的表达的遗传修饰。在一些实施方案中，AD是人CD45 AD。

在某些实施方案中，CAR包含单链可变片段(scFv)ADBD。在其他实施方案中，CAR包含替代支架结合结构域(ASBD)ADBD。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域。

在一些实施方案中，CAR包含2个ADBD。在其他实施方案中，CAR包含ASBD和scFv。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域和scFv。在一些实施方案中，CAR包含2个ASBD。在另外的实施方案中，CAR包含2个D结构域。

在一些实施方案中，CAR胞内结构域是信号传导结构域。在另外的实施方案中，CAR胞内结构域包含主要信号传导结构域。在某些实施方案中，CAR胞内结构域包含CD3ζ主要信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR胞内结构域还包含共刺激信号传导结构域。在另外的实施方案中，共刺激信号传导结构域选自：CD28、41BB、CD27和CD134。在特定的实施方案中，CAR胞内信号传导结构域包含41BB共刺激信号传导结构域。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在另外的实施方案中，CAR结合CD26。在其他实施方案中，CAR结合CD30。在其他实施方案中，CAR结合CD33。在其他实施方案中，CAR结合CD38。在一些实施方案中，CAR结合CD45。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD19、CD22、CD123、BCMA、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在另外的实施方案中，CAR结合BCMA。在其他实施方案中，CAR结合CS1。在其他实施方案中，CAR结合CD123。在其他实施方案中，CAR结合CD19。在其他实施方案中，CAR结合CD22。在其他实施方案中，CAR结合TACI。在其他实施方案中，CAR结合BAFFR。在其他实施方案中，CAR结合PDL1。在其他实施方案中，CAR结合HER2。

在一些实施方案中，CAR包含2个结合单独靶的ADBD。在另外的实施方案中，CAR结合CD19和CD123。在其他实施方案中，CAR结合BCMA和CS1。在其他实施方案中，CAR结合CD22和CD123。在其他实施方案中，CAR结合PDL1和CD123。在一些实施方案中，CAR结合CD45和第二靶。在某些实施方案中，CAR包含结合CD19的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在某些实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一ASBD和结合CS1的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一D结构域和结合CS1的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CS1的D结构域和结合BCMA的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合CD45 AD的第一D结构域和结合第二AD的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的D结构域和结合CD123的scFv。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合CD19的ASBD和结合CD123的scFv。

在一些实施方案中，衔接子包含肿瘤抗原的AD。在另外的实施方案中，肿瘤抗原选自以下组：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。

在一些实施方案中，衔接子包含肿瘤抗原的AD。在另外的实施方案中，肿瘤抗原选自以下组：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。

在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含是ASBD的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含D结构域。

在一些实施方案中，衔接子包含两个ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含两个ADBD，它们(a)是相同的，(b)与相同的抗原决定簇结合，(c)与相同抗原的不同AD结合，(d)与相同细胞上的不同抗原结合，或(e)与不同细胞上的不同抗原结合。在一些实施方案中，衔接子包含两个ASBD。在某些实施方案中，衔接子包含两个D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是ASBD的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是D结构域的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在某些实施方案中，衔接子包含与CD26结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD30结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD38结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD45结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在某些实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与HER2结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与TACI结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BAFFR结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子是双特异性的。在另外的实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD和与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子与人CD45结合的AD和第二AD。

在一些实施方案中，靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是AML肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是CLL肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是MM肿瘤细胞。

在一些实施方案中，组合物包含至少两种靶细胞。在一些实施方案中，至少一种靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于相同的肿瘤类型。在其他实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同的肿瘤类型。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是多发性骨髓瘤(MM)。在本文提供的杀伤靶细胞的方法中，所述靶细胞可以是肿瘤细胞。可以根据本文提供的方法靶向的示例性癌细胞在第X节中讨论。

在一些实施方案中，靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是多发性骨髓瘤(MM)。

在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在另外的实施方案中，癌细胞选自以下组：乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌和肺癌。在一些实施方案中，癌细胞是乳腺癌。在一些实施方案中，癌细胞是卵巢癌。

在一些实施方案中，组合物包含至少两种靶细胞。在一些实施方案中，至少一种靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于相同的肿瘤类型。在其他实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同的肿瘤类型。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是多发性骨髓瘤(MM)。

在本文提供的杀伤靶细胞的方法中，靶细胞可以是免疫系统的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是B细胞。在一些实施方案中，靶细胞是T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是幼稚T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是记忆T细胞。

在本文提供的杀伤靶细胞的方法中，靶细胞可以是细菌细胞(例如，结核、天花和炭疽)、寄生虫细胞(例如，疟疾或利什曼病)、真菌细胞、霉菌、支原体或感染病毒(例如，HIV、乙型肝炎、狂犬病、尼帕病毒、西尼罗病毒、脑膜炎病毒或CMV)的细胞。

在一些实施方案中，表达CAR的细胞是免疫效应细胞。免疫效应细胞是参与免疫应答的细胞，例如，参与促进免疫效应响应的细胞。免疫效应细胞的实例包括T细胞(例如，α/βT细胞和γ/δT细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、肥大细胞和骨髓源吞噬细胞。免疫效应功能或免疫效应响应是例如增强或促进靶细胞的免疫攻击的免疫效应细胞的功能或响应。在一些实施方案中，免疫效应功能或响应是指T或NK细胞促进靶细胞的杀伤或抑制靶细胞的生长或增殖的性质。例如，主要刺激和共刺激是T细胞的免疫效应功能或响应的实例。在特定的实施方案中，免疫效应功能或响应通过所公开的CAR、衔接子和/或CAR和衔接子组合物的作用促进。这种功能或响应导致例如CAR细胞在增殖、细胞因子产生、细胞毒性或细胞表面标记(诸如CD25、CD69和CD107a)的上调方面更有效。

在一些实施方案中，免疫效应细胞是T细胞。在其他实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞。在一些实施方案中，表达CAR的细胞杀伤靶细胞。在一些实施方案中，衔接子与AD的结合阻断包含AD的抗原的活性。

在一些实施方案中，CAR细胞在直接与靶细胞结合后杀伤靶细胞。在一些实施方案中，CAR细胞在与衔接子结合后杀伤靶细胞，其中衔接子与靶细胞结合(例如，如图3A-3C中所描绘)。

在一些实施方案中，CAR与靶细胞和/或与衔接子的结合导致表达CAR的细胞中的胞内信号传导。

在一些实施方案中，CAR与靶细胞和/或与衔接子的结合导致脱粒。根据细胞类型，脱粒可以导致抗微生物、细胞毒性或其他分子从免疫细胞中的分泌颗粒中释放。像穿孔素(成孔细胞毒素)或粒酶(在靶细胞中诱导凋亡的丝氨酸蛋白酶)的分子帮助T细胞和NK细胞杀伤肿瘤细胞(或其他细胞类型)。

在一些实施方案中，CAR与靶细胞和/或与衔接子的结合导致表达CAR的细胞分泌细胞因子。所述细胞因子可以是例如干扰素γ(IFNγ)。

在一些实施方案中，CAR与靶细胞和/或与衔接子的结合导致表达CAR的细胞的增殖。

X.治疗用途

本文描述了向患者中的靶细胞递送免疫应答和/或杀伤患者中的靶细胞的方法，其包括向所述患者施用衔接子(如本文所述(例如，如第V节中所述))和/或本文所述的CAR细胞(例如，如第VII节中所述)。本文还描述了治疗增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法，其包括向患者施用本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)和/或本文所述的CAR细胞(例如，如第VII节中所述)。在特定的实施方案中，本文提供了治疗血液系统癌症或自身免疫疾病的方法，其包括向患者施用本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)和/或本文所述的CAR细胞(例如，如第VII节中所述)。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上，并且CAR包含(i)与所述靶细胞上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；并且CAR包含(i)ADBD，其是结合所述第一AD的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的任何表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)。在包括施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，所述患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在一个实施方案中，所述患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在一个实施方案中，所述患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种治疗。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法的一些实施方案中，所述患者先前已经用衔接子(除了表达CAR的细胞之外)治疗。在一些实施方案中，施用到所述患者的衔接子和先前施用到所述患者的衔接子结合不同的AD(例如，在相同或不同的靶细胞上)。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，所述患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合所述靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在一个实施方案中，所述患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在一个实施方案中，所述患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是与所述靶细胞上的第二AD结合的ASBD。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以包含本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法的一些实施方案中，所述患者包含衔接子(除了表达CAR的细胞之外)。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子和患者所包含的衔接子结合不同的AD(例如，在相同或不同的靶细胞上)。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种在患者中将免疫应答重定向至靶细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向患者中的靶细胞杀伤的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向患者中的淋巴细胞耗竭的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的治疗的方法包括向患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种重定向血液系统癌症的治疗的方法包括向患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种重定向自身免疫疾病或病症的治疗的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，所述患者已经用表达CAR的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在包括向患者施用衔接子的重定向患者中的靶细胞杀伤的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种治疗。在一个实施方案中，所述患者包含表达CAR的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一靶细胞上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与第二靶细胞上的第二AD结合的ADBD。在包括向患者施用衔接子的重定向患者中的靶细胞杀伤的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以包含本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种。在包括向患者施用衔接子的重定向患者中的靶细胞杀伤的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在一个实施方案中，第一AD和第二AD存在于靶细胞上，患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其包含与所述靶细胞上的第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种治疗。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在一个实施方案中，第一AD和第二AD存在于靶细胞上，患者包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，患者包含衔接子，其包含(i)第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；患者包含衔接子，其包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；患者包含衔接子，其包含(i)ADBD，其包含与所述靶细胞上的第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以包含本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在一个实施方案中，一种向患者中的靶细胞递送免疫应答的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，一种耗竭患者中的淋巴细胞的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，一种治疗患者中的增殖性病症、癌症、自身免疫疾病、感染或同种异体移植物排斥的方法包括向所述患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在某些实施方案中，一种治疗血液系统癌症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在某些实施方案中，一种治疗自身免疫疾病或病症的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在一个实施方案中，第一AD和第二AD存在于靶细胞上，衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)与所述靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与靶细胞或衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，衔接子包含(i)第一AD和(ii)与靶细胞上的第二AD结合的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；衔接子包含(i)与所述靶细胞上的第一AD结合的ADBD和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于靶细胞上；衔接子包含(i)ADBD，其包含与所述靶细胞上的第一AD结合的ASBD，和(ii)第二AD；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种。在包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子的杀伤患者中的靶细胞的方法中，所述表达CAR的细胞和所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，表达CAR的细胞和衔接子在单一药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，表达CAR的细胞和衔接子在单独的药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，CAR细胞包含降低或消除由CAR或衔接子结合的AD的表达的遗传修饰。

在某些实施方案中，CAR包含单链可变片段(scFv)ADBD。在其他实施方案中，CAR包含替代支架结合结构域(ASBD)ADBD。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域。

在一些实施方案中，CAR包含2个ADBD。在其他实施方案中，CAR包含ASBD和scFv。在另外的实施方案中，CAR包含D结构域和scFv。在一些实施方案中，CAR包含2个ASBD。在另外的实施方案中，CAR包含2个D结构域。

在一些实施方案中，CAR胞内结构域是信号传导结构域。在另外的实施方案中，CAR胞内结构域包含主要信号传导结构域。在某些实施方案中，CAR胞内结构域包含CD3ζ主要信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR胞内结构域还包含共刺激信号传导结构域。在另外的实施方案中，共刺激信号传导结构域选自：CD28、41BB、CD27和CD134。在特定的实施方案中，CAR胞内信号传导结构域包含41BB共刺激信号传导结构域。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在另外的实施方案中，CAR结合CD45。在其他实施方案中，CAR结合CD26。在其他实施方案中，CAR结合CD30。在其他实施方案中，CAR结合CD33。在其他实施方案中，CAR结合CD38。在一些实施方案中，CAR结合CD45 AD。

在一些实施方案中，CAR结合选自以下的抗原：CD19、CD22、CD123、BCMA、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在另外的实施方案中，CAR结合BCMA。在其他实施方案中，CAR结合CS1。在其他实施方案中，CAR结合CD123。在其他实施方案中，CAR结合CD19。在其他实施方案中，CAR结合CD22。在其他实施方案中，CAR结合TACI。在其他实施方案中，CAR结合BAFFR。在其他实施方案中，CAR结合PDL1。在其他实施方案中，CAR结合HER2。

在一些实施方案中，CAR包含2个结合单独靶的ADBD。在另外的实施方案中，CAR结合CD19和CD123。在其他实施方案中，CAR结合BCMA和CS1。在其他实施方案中，CAR结合CD22和CD123。在其他实施方案中，CAR结合PDL1和CD123。在一些实施方案中，CAR结合CD45和第二靶。在某些实施方案中，CAR包含结合CD19的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD19的D结构域和结合CD123的scFv。在某些实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一ASBD和结合CS1的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合BCMA的第一D结构域和结合CS1的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CS1的D结构域和结合BCMA的scFv。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在一些实施方案中，CAR包含结合CD45 AD的第一D结构域和结合第二AD的第二D结构域。在其他实施方案中，CAR包含结合CD22的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一ASBD和结合CD123的第二ASBD。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的第一D结构域和结合CD123的第二D结构域。在一些实施方案中，CAR包含结合PDL1的D结构域和结合CD123的scFv。在一些实施方案中，CAR包含结合CD19的ASBD和结合CD123的scFv。

在一些实施方案中，衔接子包含肿瘤抗原的AD。在另外的实施方案中，肿瘤抗原选自以下组：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。

在一些实施方案中，衔接子包含肿瘤抗原的AD。在另外的实施方案中，肿瘤抗原选自以下组：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。

在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含是ASBD的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含D结构域。

在一些实施方案中，衔接子包含两个ADBD。在另外的实施方案中，衔接子包含两个ADBD，它们(a)是相同的，(b)与相同的抗原决定簇结合，(c)与相同抗原的不同AD结合，(d)与相同细胞上的不同抗原结合，或(e)与不同细胞上的不同抗原结合。在一些实施方案中，衔接子包含两个ASBD。在某些实施方案中，衔接子包含两个D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是ASBD的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含是scFv的ADBD和是D结构域的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：CD45、CD26、CD30、CD33和CD38。在某些实施方案中，衔接子包含与CD26结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD30结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD33结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD38结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD45结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子包含结合选自以下的成员的ADBD：BCMA、CD123、CD19、CD22、CS1、HER2、TACI、BAFFR和PDL1。在某些实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与TACI结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BAFFR结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD。

在一些实施方案中，衔接子是双特异性的。在另外的实施方案中，衔接子包含与CD19结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与BCMA结合的ADBD和与CS1结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与CD22结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在其他实施方案中，衔接子包含与PDL1结合的ADBD和与CD123结合的ADBD。在一些实施方案中，衔接子包含结合CD45 AD的ADBD和结合第二AD的ADBD。

在一些实施方案中，靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在另外的实施方案中，肿瘤细胞选自以下组：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是AML肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是CLL肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是MM肿瘤细胞。

在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在另外的实施方案中，癌细胞选自以下组：乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌和肺癌。在另外的实施方案中，癌细胞是乳腺癌。在一些实施方案中，癌细胞是卵巢癌。

在一些实施方案中，组合物包含至少两种靶细胞。在一些实施方案中，至少一种靶细胞是肿瘤细胞。在另外的实施方案中，第一靶细胞和第二靶细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于相同的肿瘤类型。在其他实施方案中，第一肿瘤细胞和第二肿瘤细胞属于不同的肿瘤类型。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性白血病、慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。在一些实施方案中，肿瘤细胞选自：急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，肿瘤细胞是多发性骨髓瘤(MM)。

在一些实施方案中，表达CAR的细胞是免疫效应细胞。在另外的实施方案中，免疫效应细胞是T细胞。在其他实施方案中，免疫效应细胞是NK细胞。在一些实施方案中，表达CAR的细胞杀伤靶细胞。在一些实施方案中，衔接子与AD的结合阻断包含AD的抗原的活性。

在实施方案中，一种杀伤患者中的靶细胞的方法包括向所述患者施用衔接子和表达CAR的细胞。所述衔接子和所述表达CAR的细胞可以在相同的药物组合物中或在不同的药物组合物中施用。所述衔接子和所述表达CAR的细胞可以在不同的药物组合物中施用。所述衔接子和所述表达CAR的细胞可以同时或连续施用。

在杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法的一个实施方案中，患者已经被诊断为患有癌症并且所述靶细胞是癌细胞。在一个实施方案中，所述癌细胞是前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、结直肠癌细胞、肺癌细胞、骨肉瘤细胞或胶质母细胞瘤细胞。因此，在一些实施方案中，本文提供的方法治疗癌症。

可以治疗的癌症包括未血管化或尚未实质血管化的肿瘤以及血管化的肿瘤。癌症可以包括非实体瘤(诸如血液肿瘤，例如白血病和淋巴瘤)或者可以包括实体瘤。待治疗的癌症类型包括但不限于癌瘤、胚细胞瘤和肉瘤，以及某些白血病或淋巴恶性肿瘤，良性和恶性肿瘤，以及恶性肿瘤例如，肉瘤、癌瘤和黑素瘤。还包括成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症。

实体瘤诸如肉瘤和癌瘤的实例包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤和其他肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、髓样甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、睾丸瘤、精原细胞瘤、膀胱癌、黑素瘤和CNS肿瘤(诸如神经胶质瘤(诸如脑干神经胶质瘤和混合神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、颅咽管瘤(craniopharyogioma)、室管膜瘤、松果体瘤(pineaioma)、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤(menangioma)、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤和脑转移瘤)。在一些实施方案中，实体瘤是乳腺癌。在一些实施方案中，实体瘤是卵巢癌。

在另一个实施方案中，本文所述的方法可用于治疗患有血液系统癌症的患者。血液(或血源性)癌症的实例包括白血病，包括急性白血病(诸如急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、急性髓系白血病和成髓细胞、早幼粒细胞、骨髓单核细胞、单核细胞和红白血病)、慢性白血病(诸如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性髓系白血病和慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惰性和高级形式)、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链疾病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。血液(或血源性)癌症的其他实例包括急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是AML。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是CLL。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是MM。

在一些实施方案中，癌症是复发的难治性癌症。在一些实施方案中，癌症是复发癌症。在一些实施方案中，癌症在化疗后复发。在一些实施方案中，癌症在用生物剂治疗后复发。在一些实施方案中，生物剂是治疗性抗体或CAR-T细胞。在一些实施方案中，癌症是难治性癌症。在一些实施方案中，癌症是化疗难治的。在一些实施方案中，癌症是用生物剂治疗难治的。在一些实施方案中，生物剂是治疗性抗体或CAR-T细胞。

在一些实施方案中，癌症是复发的难治性血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是化疗后复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是在用生物剂治疗后复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，生物剂是治疗性抗体或CAR-T细胞。在一些实施方案中，癌症是自体骨髓移植后复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是在同种异体骨髓移植后复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是在造血干细胞移植(HSCT)后复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，HSCT是自体HSCT。在一些实施方案中，癌症是难治性血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是化疗难治的血液系统癌症。在一些实施方案中，癌症是用生物剂治疗难治的血液系统癌症。在一些实施方案中，生物剂是治疗性抗体或CAR-T细胞。在一些实施方案中，血液系统癌症是急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，血液系统癌症是AML。在一些实施方案中，血液系统癌症是CLL。在一些实施方案中，血液系统癌症是MM。在一些实施方案中，靶细胞是B细胞。在一些实施方案中，靶细胞是T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是幼稚T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是记忆T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是骨髓瘤细胞。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ASBD。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种治疗。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法的一些实施方案中，所述患者先前已经用衔接子(除了表达CAR的细胞之外)治疗。在一些实施方案中，施用到所述患者的衔接子和先前施用到所述患者的衔接子结合不同的AD(例如，在相同或不同的多发性骨髓瘤细胞上)。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合CS1，并且先前施用到患者的衔接子结合BCMA。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合BCMA，并且先前施用到患者的衔接子结合CS1。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ASBD。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以包含本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法的一些实施方案中，所述患者包含衔接子(除了表达CAR的细胞之外)。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子和患者所包含的衔接子结合不同的AD(例如，在相同或不同的多发性骨髓瘤细胞上)。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合CS1，并且患者所包含的衔接子结合BCMA。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合BCMA，并且患者所包含的衔接子结合CS1。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，一种重定向免疫应答到患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向患者中的多发性骨髓瘤细胞杀伤的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向患者中的淋巴细胞耗竭的方法包括向所述患者施用衔接子。在另一个实施方案中，一种重定向多发性骨髓瘤的治疗的方法包括向患者施用衔接子。在某些实施方案中，一种重定向自身免疫疾病或病症的治疗的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第一抗原决定簇(AD)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)抗原决定簇结合结构域(ADBD)，其是结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ADBD。在一个实施方案中，患者已经用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗，其中所述CAR包含(i)结合第一抗原决定簇(AD)(例如，AFP p26或其变体)的抗原决定簇结合结构域(ADBD)，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)ADBD，其是结合所述多发性骨髓瘤细胞(例如，CS1或BCMA)上的第二AD的ASBD。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种治疗。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法的一些实施方案中，所述患者先前已经用衔接子(除了表达CAR的细胞之外)治疗。在一些实施方案中，施用到所述患者的衔接子和先前施用到所述患者的衔接子结合不同的AD(例如，在相同或不同的多发性骨髓瘤细胞上)。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合CS1，并且先前施用到患者的衔接子结合BCMA。在一些实施方案中，施用到患者的衔接子结合BCMA，并且先前施用到患者的衔接子结合CS1。在包括向患者施用衔接子的重定向患者中的多发性骨髓瘤细胞杀伤的方法中，所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在一个实施方案中，第一AD(例如，BCMA)和第二AD(例如，CS1)存在于多发性骨髓瘤细胞上，患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞上的第二AD的ADBD；并且CAR包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞或衔接子上的所述第一AD的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)第一AD(例如，BCMA)和(ii)结合多发性骨髓瘤细胞上的第二AD(例如，CS1)的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于多发性骨髓瘤细胞上(例如，CS1)；患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ADBD和(ii)第二AD(例如，BCMA)；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于多发性骨髓瘤细胞上(例如，CS1)；患者已用衔接子治疗，所述衔接子包含(i)ADBD，其包含结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ASBD，和(ii)第二AD(例如，BCMA)；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以已经用本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种治疗。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用表达CAR的细胞。在一个实施方案中，第一AD(例如，BCMA)和第二AD(例如，CS1)存在于多发性骨髓瘤细胞上，患者包含衔接子，其包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞上的第二AD的ADBD；并且CAR包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞或衔接子上的所述第一AD的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，患者包含衔接子，其包含(i)第一AD(例如，BCMA)和(ii)结合多发性骨髓瘤细胞上的第二AD(例如，CS1)的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于多发性骨髓瘤细胞上(例如，CS1)；患者包含衔接子，其包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ADBD和(ii)第二AD(例如，BCMA)；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于多发性骨髓瘤细胞上(例如，CS1)；患者包含衔接子，其包含(i)ADBD，其包含结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ASBD，和(ii)第二AD(例如，BCMA或AFP p26或其变体)；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且/或者所述患者可以包含本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用表达CAR的细胞的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在一个实施方案中，第一AD(例如，BCMA)和第二AD(例如，CS1)存在于多发性骨髓瘤细胞上，衔接子包含(i)所述第一AD和(ii)结合所述多发性骨髓瘤细胞上的第二AD的ADBD；并且CAR包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞或衔接子上的所述第一AD的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，衔接子包含(i)第一AD(例如，BCMA)和(ii)结合多发性骨髓瘤细胞上的第二AD(例如，CS1)的ADBD；并且CAR包含(i)与所述衔接子上的所述第一AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD(例如，CS1)存在于多发性骨髓瘤细胞上；衔接子包含(i)结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ADBD和(ii)第二AD(例如，BCMA)；并且CAR包含(i)ADBD，其是与所述第二AD结合的ASBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在一个实施方案中，第一AD存在于多发性骨髓瘤细胞上(例如，CS1)；衔接子包含(i)ADBD，其包含结合多发性骨髓瘤细胞上的第一AD的ASBD，和(ii)第二AD(例如，BCMA或AFP p26或其变体)；并且CAR包含(i)与所述第二AD结合的ADBD，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域。在包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞可以是本文所述的表达CAR的细胞(例如，如第VII节中所述)中的任一种并且所述衔接子可以是本文所述的衔接子(例如，如第V节中所述)中的任一种。在一些实施方案中，衔接子包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合CS1、BCMA或CS1和BCMA的ADBD(例如，D结构域)。在一些实施方案中，CAR包含结合AFP p26或其变体的ADBD(例如，D结构域)。在包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子的杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法中，所述表达CAR的细胞和所述衔接子可以在药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，表达CAR的细胞和衔接子在单一药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，表达CAR的细胞和衔接子在单独的药学上可接受的组合物中。在一些实施方案中，患者患有复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用生物剂(例如抗体或CAR-T细胞)治疗后复发的多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，患者患有在用靶向CS1或BCMA的抗体或CAR-T细胞治疗后复发的多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用衔接子。在一个实施方案中，已向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii))胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，与BCMA结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。在一个实施方案中，与AFP p26结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，CAR包含SEQ ID NO：1164的氨基酸序列。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.07mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.4mg、约0.8mg、约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg、约20mg、约24mg、约28mg、约40mg、或约80mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg至约200mg、约0.5mg至约100mg、约1mg至约50mg、约2mg至约25mg、或约2mg至约12mg施用。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，每天施用衔接子。在一些实施方案中，每天两次、每天三次或每天四次施用衔接子。在一些实施方案中，每隔一天施用衔接子。在一些实施方案中，每三天施用衔接子。在一些实施方案中，每周施用两次衔接子。在一些实施方案中，每周施用衔接子。在一些实施方案中，施用衔接子持续7天。在一些实施方案中，施用衔接子持续约一周至约2个月。在一些实施方案中，在治疗期间以相同的频率施用衔接子。在一些实施方案中，施用频率在治疗期间减少。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子持续约一周，随后每周施用两次。在一个实施方案中，已向患者施用约50x10

在一个实施方案中，向患者中的多发性骨髓瘤细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中的多发性骨髓瘤细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的多发性骨髓瘤的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在一个实施方案中，CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，与BCMA结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，衔接子包含SEQID NO：1165的氨基酸序列。在一个实施方案中，与AFP p26结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，CAR包含SEQ ID NO：1164的氨基酸序列。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.07mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg至约200mg、约0.5mg至约100mg、约1mg至约50mg、约2mg至约25mg、或约2mg至约12mg施用。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，每天施用衔接子。在一些实施方案中，每天两次、每天三次或每天四次施用衔接子。在一些实施方案中，每隔一天施用衔接子。在一些实施方案中，每三天施用衔接子。在一些实施方案中，每周两次施用衔接子。在一些实施方案中，每周施用衔接子。在一些实施方案中，施用衔接子持续7天。在一些实施方案中，施用衔接子持续约一周至约2个月。在一些实施方案中，在治疗期间以相同的频率施用衔接子。在一些实施方案中，施用频率在治疗期间减少。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子持续约一周，随后每周施用两次。在一个实施方案中，施用约50x10

在一个实施方案中，向患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞的方法包括向患者施用衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的B细胞淋巴瘤或白血病的方法包括向患者施用衔接子，其中B细胞淋巴瘤或白血病细胞表达BCMA。在一个实施方案中，已向患者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii))胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，患者包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，与BCMA结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。在一个实施方案中，与AFP p26结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，CAR包含SEQID NO：1164的氨基酸序列。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.07mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg至约200mg、约0.5mg至约100mg、约1mg至约50mg、约2mg至约25mg、或约2mg至约12mg施用。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，每天施用衔接子。在一些实施方案中，每天两次、每天三次或每天四次施用衔接子。在一些实施方案中，每隔一天施用衔接子。在一些实施方案中，每三天施用衔接子。在一些实施方案中，每周两次施用衔接子。在一些实施方案中，每周施用衔接子。在一些实施方案中，施用衔接子持续7天。在一些实施方案中，施用衔接子持续约一周至约2个月。在一些实施方案中，在治疗期间以相同的频率施用衔接子。在一些实施方案中，施用频率在治疗期间减少。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子持续约一周，随后每周施用两次。在一个实施方案中，已向患者施用约50x10

在一个实施方案中，向患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞递送免疫应答的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，杀伤患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，耗竭患者中表达BCMA的B细胞淋巴瘤或白血病细胞的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子。在另一个实施方案中，治疗患者中的B细胞淋巴瘤或白血病的方法包括向患者施用表达CAR的细胞和衔接子，其中所述B细胞淋巴瘤或白血病细胞表达BCMA。在一个实施方案中，CAR包含(i)与AFP p26或其变体结合的D结构域，(ii)跨膜结构域，和(iii)胞内结构域；并且衔接子包含(i)AFP p26或其变体和(ii)与BCMA结合的D结构域。在一个实施方案中，与BCMA结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。在一个实施方案中，与AFP p26结合的D结构域包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列。在一个实施方案中，CAR包含SEQ ID NO：1164的氨基酸序列。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.07mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg至约200mg、约0.5mg至约100mg、约1mg至约50mg、约2mg至约25mg、或约2mg至约12mg施用。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，每天施用衔接子。在一些实施方案中，每天两次、每天三次或每天四次施用衔接子。在一些实施方案中，每隔一天施用衔接子。在一些实施方案中，每三天施用衔接子。在一些实施方案中，每周两次施用衔接子。在一些实施方案中，每周施用衔接子。在一些实施方案中，施用衔接子持续7天。在一些实施方案中，施用衔接子持续约一周至约2个月。在一些实施方案中，在治疗期间以相同的频率施用衔接子。在一些实施方案中，施用频率在治疗期间减少。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子持续约一周，随后每周施用两次。在一个实施方案中，施用约50x10

在一个实施方案中，本文所述的方法可用于抑制肿瘤生长、降低新血管形成、降低血管发生、诱导分化、减小肿瘤体积和/或降低肿瘤的致瘤性。

在杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法的一个实施方案中，患者已被诊断患有免疫系统的疾病或病症，并且靶细胞是免疫系统的细胞。因此，在一些实施方案中，本文提供的方法治疗免疫系统的疾病或病症。

在一些实施方案中，所述免疫系统的疾病或病症是自身免疫疾病或病症。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是I型糖尿病、系统性硬化症、多发性硬化症、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、牛皮癣、炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或斑秃。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是I型糖尿病。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是系统性硬化症。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是多发性硬化症。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是类风湿性关节炎。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是炎性肠病(IBD)。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是克罗恩氏病。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是溃疡性结肠炎。

在杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法的一个实施方案中，靶细胞是免疫系统的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是B细胞。在一些实施方案中，靶细胞是T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是幼稚T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是记忆T细胞。

在杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法的一个实施方案中，所述患者已被诊断为患有自身免疫疾病或病症，并且所述靶细胞是表达CD45 AD的免疫系统的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是B细胞。在一些实施方案中，靶细胞是T细胞。在一些实施方案中，靶细胞是记忆T细胞。在一些实施方案中，靶细胞表达CD45。在一些实施方案中，靶细胞表达CD45RO。

在杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法的一个实施方案中，所述患者患有感染，并且所述靶细胞是细菌细胞(例如，结核、天花和炭疽)、寄生虫细胞(例如，疟疾或利什曼病)、真菌细胞、霉菌、支原体或感染病毒(例如，HIV、乙型肝炎、狂犬病、尼帕病毒、西尼罗病毒、脑膜炎病毒或CMV)的细胞。因此，在一些实施方案中，本文提供的方法治疗感染。

在一个实施方案中，本文所述的方法可用于准备或调理患者以进行骨髓移植(BMT)或造血干细胞移植(HSCT)。因此，在一些实施方案中，本文提供的杀伤患者中的靶细胞的方法或重定向患者中的靶细胞杀伤的方法调理受试者以进行BMT或HSCT。在一些实施方案中，本文提供的方法调理受试者以进行HSCT。在一些实施方案中，HSCT是自体HSCT。在一些实施方案中，本文公开的用于调理患者的方法不包括高剂量化疗或全身照射(TBI)。在一些实施方案中，本文公开的用于调理的方法包括降低强度的化疗。在一些实施方案中，本文公开的用于调理的方法包括全身照射。在一些实施方案中，患者大于65岁。在一些实施方案中，患者患有癌症。在一些实施方案中，患者患有血液系统癌症。在一些实施方案中，患者患有复发的血液系统癌症。在一些实施方案中，血液系统癌症是急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)或多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，患者患有自身免疫疾病或病症。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是I型糖尿病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病或溃疡性疾病。

在若干个实施方案中，衔接子和/或嵌合抗原受体细胞的施用是静脉内的，但是对于给定的治疗方案，可以使用其他途径，诸如动脉内、肌内、局部或其他可接受的途径。

还提供了可用于实践本文所述的治疗方法的治疗组合物。在一个实施方案中，本文提供的治疗组合物含有生理学上可耐受的载剂以及作为活性成分溶解或分散在其中的至少一种如本文所述的衔接子。在另一个实施方案中，本文提供的治疗组合物含有生理学上可耐受的载剂以及作为活性成分溶解或分散在其中的至少一种如本文所述的CAR细胞。在一个优选的实施方案中，当出于治疗目的而施用到人患者时，治疗组合物是非免疫原性的。

含有溶解或分散在其中的活性成分的药物组合物的制备是本领域公知的。通常，将此类组合物制备成无菌注射剂，作为水性或非水性的液体溶液或悬浮液。然而，也可以制备在使用前适于在液体中溶解或悬浮的固体形式。所述制备物也可以被乳化。因此，含衔接子的组合物可以采取溶液、悬浮液、片剂、胶囊、持续释放制剂或粉末的形式，或其他组合物形式。在一些实施方案中，配制衔接子组合物以确保或优化体内分布。例如，血脑屏障(BBB)排除许多高度亲水的化合物，并且如果需要，制备组合物以便通过例如在脂质体中配制来增加跨BBB的转移。关于制造脂质体的方法，参见，例如美国专利号4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含一种或多种选择性转运至特定细胞或器官中的部分，从而增强靶向药物递送(参见，例如Ranade,Clin.Pharmacol.29:685(1989))。

衔接子(和/或CAR细胞)可以与药学上可接受且与活性成分相容并且以适用于本文所述的治疗方法的量的其他活性成分和/或赋形剂混合。合适的赋形剂是，例如，水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等及其组合。此外，如果需要，所述组合物可以含有少量的辅助物质，诸如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂和本领域已知的增强活性成分的有效性的其他辅助物质。

治疗性衔接子制剂可以包含其中的组分的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括与无机酸(例如像盐酸或磷酸)或有机酸(诸如乙酸、酒石酸、扁桃酸)形成的酸加成盐(与多肽的游离氨基形成)以及本领域已知的其他药学上可接受的盐。与游离羧基形成的盐也可以来源于无机碱(例如像氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁)和有机碱(诸如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因)以及来源于本领域已知的无机碱的其他盐。

生理上可耐受的载剂是本领域已知的。液体载剂的示例是无菌水性溶液，其不含除活性成分和水之外的物质，或者含有缓冲液(诸如生理pH值的磷酸钠)、生理盐水或两者，诸如磷酸盐缓冲盐水。此外，水性载剂可以含有多于一种缓冲盐，以及盐(诸如氯化钠和氯化钾)、葡萄糖、丙二醇、聚乙二醇和其他溶质。

除了水之外并且排除水，液体组合物还可以含有液相。此类另外的液相的示例是甘油、植物油(诸如棉籽油)、有机酯(诸如油酸乙酯)和水-油乳剂。

在一个实施方案中，治疗组合物含有衔接子，所述衔接子的量通常为按总治疗组合物的重量计的至少0.1重量％。重量百分比是按总组合物计的衔接子的重量比。因此，例如，0.1重量％是每100克总组合物中有0.1克衔接子。

含衔接子的治疗组合物通常含有按单位体积的组合物计约10微克(μg)/毫升(ml)至约100毫克(mg)/毫升(ml)的衔接子作为活性成分，并且更优选含有约1mg/ml至约10mg/ml(即，约0.1重量％至1重量％)。

用于施用衔接子的剂量范围是大到足以产生其中由靶分子介导的疾病症状得到改善的所需效果的那些剂量范围。所述剂量不应大到引起不良副作用，诸如高粘滞综合征、肺水肿、充血性心力衰竭和本领域已知的其他不良副作用。通常，剂量将随患者的年龄、病状、性别和疾病程度而变化，并且可以由本领域技术人员确定。在任何并发症的情况下，剂量可以由个别医师调整。

衔接子可以通过注射或通过随时间的逐渐输注而胃肠外施用。尽管靶分子通常可以通过全身施用进入体内，并且因此最经常通过静脉内施用治疗组合物来治疗，但是在靶向的组织可能含有靶分子的情况下，也可以预期其他组织和递送手段。因此，衔接子可以静脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内、经皮施用，并且可以通过蠕动手段递送。衔接子也可以通过气雾剂递送到气道和肺。

含衔接子的治疗组合物可以常规地静脉内施用，例如通过注射单位剂量施用。术语“单位剂量”在提及本文提供的治疗组合物使用时，是指适合作为用于受试者的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有经计算产生所需治疗效果的预定量的活性物质以及所需要的稀释剂；例如，载剂或媒介物。在一个具体的实施方案中，含衔接子的治疗组合物皮下施用。

在一些实施方案中，衔接子以与剂量制剂相容的方式且以治疗有效量施用。施用的量取决于待治疗的受试者、受试者系统利用活性成分的能力和所需的治疗效果的程度。需要施用的活性成分的精确量取决于医学从业者的判断，并且对于每个个体是独特的。然而，本文公开了用于全身应用的合适剂量范围，并且其取决于施用途径。合适的施用方案也是可变的，但典型的是初始施用，随后一小时或多小时的间隔重复给药，随后进行注射或其他施用。可选地，预期足以将血液中的浓度维持在体内疗法指定的范围内的连续静脉内输注。

衔接子组合物以符合良好医疗实践的方式进行配制、给药和施用。在此背景下考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、病症的原因、剂的递送部位、施用方法、施用时间安排以及医学从业者已知的其他因素。用于施用衔接子的剂量范围是大到足以产生其中由靶分子介导的疾病症状得到改善的所需效果的那些剂量范围。所述剂量不应大到引起不良副作用，诸如高粘滞综合症、肺水肿、充血性心力衰竭和本领域已知的其他不良副作用。通常，剂量将随患者的年龄、病状、性别和疾病程度而变化，并且可由本领域技术人员确定。在任何并发症的情况下，剂量可以由个别医师调整。

用于治疗和预防用途的有效剂量方案和量，即，“给药方案”，将取决于多种因素，包括疾病或病症的原因、阶段和严重性，所治疗的哺乳动物的健康状况、身体状况、年龄，以及衔接子递送的部位和模式。复合物的治疗功效和毒性以及形成可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学、药理学和毒理学程序来确定。从这些程序获得的数据同样可以用于配制用于人使用的剂量范围。此外，治疗指数(即，在50％群体中治疗有效的剂量除以50％群体致死的剂量(ED50/LD50))可以使用已知程序容易地确定。剂量优选在包括ED50而很少或没有毒性的浓度范围内，并且可以根据所用的剂型、患者的敏感性和施用途径在此范围内变化。

剂量方案还考虑了本领域已知的药代动力学参数，诸如药物吸收速率、生物利用度、代谢和清除率(参见，例如，Hidalgo-Aragones,J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58:611-617(1996)；Groning等人,Pharmazie 51:337-341(1996)；Fotherby,Contraception 54:59-69(1996)；和Johnson等人,J.Pharm.Sci.84:1144-1146(1995))。临床医生确定每个所治疗的受试者的剂量方案完全在本领域的技术水平内。此外，衔接子组合物的单次或多次施用可以根据需要的剂量和频率来施用并且被受试者所耐受。预防性治疗和治疗性治疗的持续时间将根据所治疗的特定疾病或病状而变化。一些疾病适于急性治疗，而其他疾病需要长期、慢性疗法。衔接子可以连续施用，或与额外的治疗剂同时施用。

在一些实施方案中，衔接子以约1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg或约1mg/kg至约5mg/kg施用。

在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约10mg/kg、约10μg/kg至约10mg/kg、约20μg/kg至约10mg/kg，或约50μg/kg至约10mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约1μg/kg至约5mg/kg、约1μg/kg至约2mg/kg、约1μg/kg至约1mg/kg、约1μg/kg至约5mg/kg、或约1μg/kg至约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1μg/kg至约10mg/kg、约5μg/kg至约5mg/kg、约10μg/kg至约2mg/kg、约20μg/kg至约1mg/kg或约50μg/kg至约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.04mg/kg、约0.07mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg或约2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.07mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.01mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.3mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.4mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.5mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.6mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.7mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.8mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.9mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1mg/kg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.2mg至约200mg、约0.5mg至约100mg、约1mg至约50mg、约2mg至约25mg、或约2mg至约12mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约0.4mg、约0.8mg、约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg、约20mg、约24mg、约28mg、约40mg、或约80mg施用。在一些实施方案中，衔接子以约1.6mg、约2.8mg、约3mg、约4mg、约8mg、约12mg、约16mg或约20mg施用。在一些实施方案中，衔接子是静脉内施用的。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，衔接子包含特异性与BCMA结合的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含具有SEQ ID NO：201的氨基酸序列的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。

在一些实施方案中，施用多于一个剂量的衔接子。在一些实施方案中，衔接子的多于一个剂量是恒定剂量。在一些实施方案中，衔接子以不同剂量施用。在一些实施方案中，施用的衔接子的量随时间增加。在一些实施方案中，施用的衔接子的量随时间减少。在一些实施方案中，首先以约0.1mg/kg至约5mg/kg的低剂量施用衔接子，随后约0.01mg/kg至约0.5mg/kg的高剂量施用。在一些实施方案中，衔接子是静脉内施用的。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，衔接子包含特异性与BCMA结合的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含具有SEQ ID NO：201的氨基酸序列的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。

在一些实施方案中，每天施用衔接子。在一些实施方案中，每天施用衔接子两次。在一些实施方案中，每天施用衔接子三次。在一些实施方案中，每天施用衔接子四次。在一些实施方案中，每12小时施用衔接子。在一些实施方案中，每8小时施用衔接子。在一些实施方案中，每6小时施用衔接子。在一些实施方案中，每4小时施用衔接子。在一些实施方案中，每隔一天施用衔接子。在一些实施方案中，每三天施用衔接子。在一些实施方案中，每周两次施用衔接子。在一些实施方案中，每周施用衔接子。在一些实施方案中，衔接子是静脉内施用的。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，衔接子包含特异性与BCMA结合的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含具有SEQ ID NO：201的氨基酸序列的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。

在一些实施方案中，施用衔接子持续7天。在一些实施方案中，施用衔接子持续2周。在一些实施方案中，施用衔接子持续3周。在一些实施方案中，施用衔接子持续4周。在一些实施方案中，施用衔接子持续1个月。在一些实施方案中，施用衔接子持续2个月。在一些实施方案中，施用衔接子持续3个月。在一些实施方案中，衔接子是静脉内施用的。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，衔接子包含特异性与BCMA结合的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含具有SEQ ID NO：201的氨基酸序列的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ ID NO：1165的氨基酸序列。

在一些实施方案中，在治疗期间以相同的频率施用衔接子。在一些实施方案中，施用频率在治疗期间减少。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子持续约一周，随后每周施用两次。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子一次至三次持续约一周，然后每天施用。在一些实施方案中，首先每天施用衔接子一次至三次持续约一周，随后每周两次或每周施用。在一些实施方案中，衔接子是静脉内施用的。在一些实施方案中，衔接子是皮下施用的。在一些实施方案中，衔接子包含特异性与BCMA结合的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含具有SEQ ID NO：201的氨基酸序列的D结构域。在一些实施方案中，衔接子包含SEQ IDNO：1165的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，衔接子与一种或多种另外的治疗剂组合施用。

衔接子诸如衔接融合蛋白的治疗有效量可以是使得当以生理上可耐受的组合物施用时足以达到约0.1微克(μg)/毫升(ml)至约100μg/ml、优选约1μg/ml至约5μg/ml且通常约5μg/ml的血浆浓度的量。换句话说，剂量可以在约0.1mg/kg至约300mg/kg、优选约0.2mg/kg至约200mg/kg、最优选约0.5mg/kg至约20mg/kg之间变化，每天一次或多次剂量施用，持续一天或若干天。

在一个实施方案中，所述疾病或病症是免疫系统的疾病或病症，诸如炎症或自身免疫疾病。

本文提供的表达CAR的细胞可以单独施用，或与稀释剂和/或与其他组分(诸如化疗剂、抗体、细胞因子或细胞群)组合作为药物组合物施用。本文提供的组合物优选配制用于静脉内施用，其可以施用一次或多次。

CAR修饰的T细胞还可以充当用于哺乳动物的离体免疫和/或体内疗法的疫苗类型。优选地，哺乳动物是人。

可以用衔接子或CAR细胞治疗的癌症包括未血管化或尚未实质血管化的肿瘤以及血管化的肿瘤。癌症可以包括非实体瘤(诸如血液肿瘤，例如白血病和淋巴瘤)或者可以包括实体瘤。待用衔接子治疗的癌症类型包括但不限于癌瘤、胚细胞瘤和肉瘤，以及某些白血病或淋巴恶性肿瘤、良性和恶性肿瘤，以及恶性肿瘤例如，肉瘤、癌瘤和黑素瘤。还包括成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症。

实体瘤诸如肉瘤和癌瘤的实例包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤和其他肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、髓样甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、睾丸瘤、精原细胞瘤、膀胱癌、黑素瘤和CNS肿瘤(诸如神经胶质瘤(诸如脑干神经胶质瘤和混合神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤和脑转移瘤)。在一些实施方案中，实体瘤是乳腺癌。在一些实施方案中，实体瘤是卵巢癌。

在另一个实施方案中，本文所述的衔接子和/或CAR细胞可用于治疗患有血液系统癌症的患者。血液(或血源性)癌症的实例包括白血病，包括急性白血病(诸如急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、急性髓系白血病和成髓细胞、早幼粒细胞、骨髓单核细胞、单核细胞和红白血病)、慢性白血病(诸如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性髓系白血病和慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惰性和高级形式)、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链疾病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。血液(或血源性)癌症的其他实例包括急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是AML。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是CLL。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是MM。

在一个实施方案中，衔接子和/或CAR的抗原决定簇结合结构域部分被设计成治疗特定的癌症。可以治疗的癌症包括未血管化或尚未实质血管化的肿瘤以及血管化的肿瘤。癌症可以包括非实体瘤(诸如血液肿瘤，例如白血病和淋巴瘤)或者可以包括实体瘤。待用CAR治疗的癌症类型包括但不限于癌瘤、胚细胞瘤和肉瘤，以及某些白血病或淋巴恶性肿瘤、良性和恶性肿瘤，以及恶性肿瘤例如，肉瘤、癌瘤和黑素瘤。还包括成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症。

血液(或血源性)癌症的实例包括白血病，包括急性白血病(诸如急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、急性髓系白血病和成髓细胞、早幼粒细胞、骨髓单核细胞、单核细胞和红白血病)、慢性白血病(诸如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性髓系白血病和慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惰性和高级形式)、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链疾病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。血液(或血源性)癌症的其他实例包括急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是AML。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是CLL。在一些实施方案中，血液(或血源性)癌症是MM。

实体瘤诸如肉瘤和癌瘤的实例包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤和其他肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、髓样甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、睾丸瘤、精原细胞瘤、膀胱癌、黑素瘤和CNS肿瘤(诸如神经胶质瘤(诸如脑干神经胶质瘤和混合神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤和脑转移瘤)。

在一个实施方案中，癌症和病症可以使用靶向CD19、CD20、CD22和ROR1的衔接子或CAR细胞治疗。在一个具体的实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合靶向CD22，并用于治疗B细胞淋巴瘤。在另一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合靶向CD19，并且用于治疗包括但不限于以下的癌症和病症：前B ALL(儿科适应症)、成人ALL、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和同种异体骨髓移植后的抢救。在另一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合靶向CS1，并且用于治疗多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合靶向BCMA，并且用于治疗多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合靶向CS1和BCMA，并且用于治疗多发性骨髓瘤。

如本文所用的“B细胞相关疾病”包括B细胞免疫缺陷、自身免疫疾病和/或与B细胞相关联的过度/失控的细胞增殖(包括淋巴瘤和/或白血病)。其中本文提供的CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合可以用于治疗方法的此类疾病的实例包括但不限于：系统性红斑狼疮(SLE)、糖尿病、类风湿性关节炎(RA)、反应性关节炎、多发性硬化症(MS)、寻常天疱疮、乳糜泻、克罗恩氏病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、自身免疫甲状腺病、X-连锁的无丙种球蛋白血症、前B急性成淋巴细胞白血病、系统性红斑狼疮、常见变异免疫缺陷、慢性淋巴细胞性白血病、与选择性IgA缺乏和/或IgG亚类缺乏相关联的疾病、B系淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤和/或非霍奇金淋巴瘤)、免疫缺陷伴胸腺瘤、短暂性低丙种球蛋白血症和/或高IgM综合征以及病毒介导的B细胞疾病，诸如EBV介导的淋巴组织增殖性病症和其中B细胞参与病理生理学的慢性感染。

在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向间皮素以治疗间皮瘤、胰腺癌、卵巢癌和本领域已知的其他表达间皮素的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向CD33/IL3Ra以治疗急性髓系白血病和本领域已知的其他表达CD33/IL3Ra的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向c-Met以治疗三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌和本领域已知的其他表达c-Met的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向PSMA以治疗前列腺癌和本领域已知的其他表达PSMA的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向糖脂F77以治疗前列腺癌和本领域已知的其他表达糖脂F77的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向EGFRvIII以治疗胶质母细胞瘤和本领域已知的其他表达EGFRvIII的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向GD2以治疗成神经细胞瘤、黑素瘤和本领域已知的其他表达GD2的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合被设计成靶向NY-ESO-1以治疗骨髓瘤、肉瘤、黑素瘤和本领域已知的其他表达NY-ESO-1的癌症。在一个实施方案中，CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合可以被设计成靶向MAGEA3以治疗骨髓瘤、肉瘤、黑素瘤和本领域已知的其他表达MAGEA3的癌症。然而，本发明不应被解释为仅限于本文公开的抗原靶和疾病。相反，本发明应被解释为包括与疾病相关联的任何抗原靶，其中CAR、衔接子和/或CAR/衔接子组合可以用于治疗所述疾病。

在一个优选的实施方案中，CAR在T细胞中表达，并且提供用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括将表达CAR的宿主细胞施用到癌症患者，其中癌细胞在其表面上表达肿瘤抗原，并且其中所述衔接子特异性结合靶抗原。衔接子和CAR结合的示例性靶抗原决定簇包括但不限于BCMA、CS1、CD19、CD123、TSLPR和CD267。在一些实施方案中，CAR在T细胞中表达，并且提供用于治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括将表达CAR的宿主细胞施用到多发性骨髓瘤患者，其中肿瘤细胞在其表面上表达BCMA和/或CS1，并且其中衔接子特异性结合BCMA、CS1或BCMA和CS1。

本文提供了制品，其包括含有衔接子、CAR细胞和/或CAR细胞/衔接子组合物的试剂盒。所述制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶或注射器。容器可以由各种材料(诸如玻璃或塑料)形成。容器容纳一种或多种衔接子、CAR细胞、编码衔接子的核酸和/或本公开的载体或宿主细胞。标签或包装插页可以包括用于向患者施用衔接子、CAR细胞和/或CAR细胞/衔接子组合物的说明书。此类试剂盒具有包括但不限于衔接子、CAR细胞和/或CAR/衔接子组合物的治疗应用的用途。

现在将通过对根据本发明的实验的描述来说明本发明的各种实施方案。提供以下实施例以促进所公开的实施方案的实施，并且不应被解释为以任何方式限制本公开内容的其余部分。在实施例中，参考附图。

实施例

实施例1.示例性D结构域和AD

表3.示例性D结构域

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表4.示例性抗原决定簇序列

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表5：示例性衔接子

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表6：示例性ADBD CAR序列

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实施例2.D结构域CAR T细胞杀伤表达D结构域靶的肿瘤细胞

在一组肿瘤上使用在1:4至1:64范围内的效应细胞与靶细胞比率评估表达ADBDCAR的T细胞的细胞溶解活性。将CD123结合CAR(cg06，SEQ ID NO：1090)的细胞溶解活性、BCMA结合CAR(bc40，SEQ ID NO：1091)的细胞溶解活性与没有已知靶特异性的CAR(α3D-Q19E，SEQ ID NO：1089)进行比较。

将10,000个表达所指示的CAR的T细胞与数量渐增的CD123

实施例3.衔接子结合与衔接子和CAR结合特异性相关联

Jurkat NFAT-萤光素酶报告细胞用阴性对照CAR(α3D-Q19E，SEQ ID NO：1089)、p26结合CAR(af03，SEQ ID NO：1092)或BCMA结合CAR(bc40，SEQ ID NO：1091)转导。在图2A中，将CAR转导的Jurkat细胞与0.5μg的衔接蛋白(SEQ ID NO：1082-1085)一起在4℃下孵育20分钟，洗涤，然后用抗HIS PE染色(克隆J095G46，4℃下20分钟)。还基于FLAG染色(克隆L5)相对于模拟转导的Jurkat细胞评价了CAR表达(图2B)。

实施例4.匹配CAR:衔接子的衔接子结合和靶:衔接子特异性驱动靶细胞的裂解

在存在或不存在20,000个用BCMA结合CAR(bc40，SEQ ID NO：1091)转导的T细胞(E:T比率为1:2，供体D14-053017，第7天)的情况下，将40,000个CD123

在图3B中，在存在或不存在20,000个用p26结合CAR(Af03，SEQ ID NO：1092)或Af05，SEQ ID NO：1093)转导的T细胞(E:T比率为1:2，供体D16-061317，第7天)的情况下，将40,000个CD123

在图3C中，在存在或不存在10,000个模拟转导或用p26结合CAR(Af03，SEQ ID NO：1092或Af05，SEQ ID NO：1093)转导的T细胞(E:T比率为1:4，供体D15-062017，第8天)的情况下，将40,000个BCMA

实施例5.匹配CAR:衔接子的衔接子结合和靶:衔接子特异性驱动由CAR T细胞进行的细胞因子产生

在存在或不存在CD123

实施例6.CAR T细胞在暴露于衔接子后增殖，所述衔接子由CAR结合并与表达由衔接子识别的AD的肿瘤结合

在图5中，将用AFP结合CAR(Af03，SEQ ID NO：1092)转导的供体D16-062717细胞进行CFSE标记(在0.5μM下10分钟)，然后在存在CD123结合衔接子(cg06-p26，SEQ ID NO：1084)或BCMA结合衔接子(bc40-p26，SEQ ID NO：1085)的情况下、在存在或不存在丝裂霉素C处理的CD123

实施例7.匹配CAR:衔接子的衔接子结合和靶:衔接子特异性通过CAR T细胞进行信号传导

在存在各种衔接子(cg06-BCMA，SEQ ID NO：1082；α3D-BCMA，SEQ ID NO：1083；或cg06-p26，SEQ ID NO：1084)的情况下、在存在或不存在50,000个CD123

在存在衔接子(α3DQ19E-BCMA，SEQ ID:1086；bc40-p26，SEQ ID NO：1085)的情况下、在存在或不存在50,000个BCMA

图6A和图6B显示匹配CAR:衔接子和靶:衔接子的衔接子结合驱动通过表达CAR的Jurkat NFAT-萤光素酶报告细胞的信号传导。

实施例8.含有D结构域或ScFv的衔接子驱动CAR细胞:衔接子介导的靶细胞的裂解

评价具有BCMA AD(SEQ ID NO：1082)的CD123结合衔接子与从WO 2010/104949A2获得的对照CAR(α3DQ19E，SEQ ID NO：1089)、BCMA结合CAR(bc40，SEQ ID NO：1091)或BCMA特异性scFv CAR(c11D5-3)一起发挥作用的能力。

在存在或不存在20,000个用对照CAR(SEQ ID NO：1089)、BCMA结合CAR(SEQ IDNO:1091)或BCMA结合scFv CAR(c11D5-3)转导的T细胞(E:T比率为1:2，供体D14-062717，第9天)的情况下，将40,000个CD123

图7A和图7B显示具有BCMA抗原决定簇的CD123特异性衔接子可以与BCMA特异性D结构域CAR(bc40)或BCMA特异性scFv CAR(c11D5-3)一起发挥作用。

实施例9.使用多个衔接子将CAR细胞靶向多个抗原靶

将10

图8A和图8B显示AFP特异性CAR通过与多种衔接蛋白一起孵育可以同时具有CD123和BCMA结合能力。

实施例10.使用双重结合结构域衔接子增强CAR信号传导

在存在CD123结合衔接子(cg06-p26，SEQ ID NO：1084)或二价衔接子(cg06-p26-cg06，SEQ ID NO：1087)的情况下、在存在50,000个CD123

图9A和图9B显示双结合结构域衔接蛋白通过表达CAR的Jurkat细胞驱动相对于单结合结构域衔接蛋白而言增强的信号传导。

实施例11.CD45特异性D结构域CAR T细胞杀伤表达CD45的靶细胞

用包含CD45特异性D结构域的CAR转导T细胞。使用CRISPR/Cas9基因工程技术将产生表达包含人CD45特异性D结构域的CAR的CD45-CAR T细胞。CD45特异性gRNA和crRNA和Cas9将从商业来源获得。使用针对细胞增殖、生存力和/或细胞毒性的测定，例如7-AAD染色和铬释放测定，评估CD45-CAR T细胞的自身裂解活性。将CD45-CAR T细胞的自身裂解与表达包含CD45特异性D结构域的相同CAR的CD45+对照CAR T细胞进行比较。

在一组CD45+靶细胞上使用在1:4至1:64范围内的效应细胞与靶细胞的比率评估表达包含人CD45特异性D结构域的CAR的CD45-T细胞的细胞溶解活性。将CD45-CAR T细胞的细胞溶解活性与不具有已知靶特异性的CAR进行比较。

实施例12.CD45特异性衔接子指导靶细胞的裂解

使用CRISPR/Cas9基因工程技术将产生CD45-CAR T细胞。CD45特异性gRNA和crRNA和Cas9将从商业来源获得。使用针对细胞增殖、生存力和/或细胞毒性的测定，例如7-AAD染色和铬释放测定，评估CD45-CAR T细胞的自身裂解活性。将CD45-CAR T细胞的自身裂解与CD45+对照CAR T细胞进行比较。

在一组CD45+靶细胞上使用在1:4至1:64范围内的效应细胞与靶细胞的比率评估表达包含人CD45特异性D结构域的CAR的CD45-T细胞的细胞溶解活性。将CD45-CAR T细胞的细胞溶解活性与不具有已知靶特异性的CAR进行比较。

在存在或不存在用p26结合CAR转导的CD45-T细胞的情况下，将CD45+靶细胞与包含CD45特异性D结构域和p26的各种衔接子一起孵育16小时。16小时后，洗涤细胞并评估萤光素酶活性。基于在不存在T细胞或衔接蛋白的情况下培养的靶细胞的孔评估裂解百分比。将以相同比率培养的CD45特异性CAR T细胞的对照用作裂解的阳性对照。

实施例13.包含截短的p26的衔接子在细胞毒性测定中具有改善的生物活性

p26结构的分析揭示预测残基的N-末端延伸增加聚集和/或蛋白水解的可能性。所述N-末端序列还含有预测的二硫键对，如果半胱氨酸未配对，则所述二硫键对可能使蛋白质不稳定，或者如果形成二硫键，则所述二硫键对可能加强次优的蛋白质构象。为了消除这些潜在的发展倾向，制备了p26的N-末端截短变体。在p26(G17-V229)(SEQ ID NO：1118)中，除去p26的前16个残基以消除半胱氨酸的二硫键对(C4-C13)。在p26(K23-V229)(SEQ IDNO:1120)中，除去p26的前22个残基以另外消除预测的白蛋白3结构域的起点。在p26(Q26-V229)中，除去前25个残基以消除K23截短之后的两个疏水残基(YI)，因此使N-末端与预测的p26球状区齐平。使用ELISA评估全长p26和截短的p26与FcRn的结合。包含全长p26或截短的p26(Q26-V229)变体的衔接子以pH依赖性方式结合FcRn，在pH6.0下观察到的结合亲和力高于在pH7.4下观察到的结合亲和力。

在各种基于萤光素酶的细胞毒性测定中，测试包含全长p26或截短的p26(G17-V229)、p26(K23-V229)或p26(Q26-V229)变体的衔接子的生物活性。令人惊奇地，包含截短的p26的衔接子具有比包含全长p26的衔接子更高的生物活性。

在存在10,000个用p26结合CAR(Af59，SEQ ID NO：1133)转导的T细胞(E:T比率为1:4)的情况下，将40,000个BCMA

在存在10,000个用p26结合CAR(Af59，SEQ ID NO：1133)转导的T细胞(E:T比率为1:4)的情况下将40,000个BCMA

在截短的p26中存在Q127P取代不改变衔接子的生物活性。在存在10,000个用p26结合CAR(Af59，SEQ ID NO：1133)转导的T细胞(E:T比率为1:4)的情况下，将40,000个BCMA

包含截短的p26变体的二价衔接子在性能上也比包含全长p26的对应衔接子更好。在存在10,000个用p26结合CAR(Af59，SEQ ID NO：1133)转导的T细胞(E:T比率为1:4)的情况下，将40,000个BCMA

实施例14.截短的p26和全长p26与人FcRn的结合是pH依赖性的全长p26和截短的p26与FcRn的结合使用ELISA形式进行评估，其中将96孔板的孔用衔接子(bc40-p26(SEQ IDNO：1085)、bc98-p26(Q26-V229)-bc98(SEQ ID NO：1132)、HSA、bc40(SEQ ID NO：197，带有HIS-标签)或未涂覆)在4℃下涂覆过夜。然后将孔用PBS+1％鱼明胶在22℃下封闭1小时。然后将平行孔用PBS+0.1％吐温在pH 6.0或7.4下洗涤。将PBS+1％鱼明胶(pH 6.0或7.4)中的生物素化人FcRn连续稀释并添加到孔中，并且在22℃下孵育1小时。在用PBS+0.1％吐温在pH6.0或7.4下洗涤后，添加链霉抗生物素蛋白-HRP(在PBS+1％鱼明胶中在pH 6.0或7.4下)。最后一次洗涤后，使用TMB试剂产生信号，并且通过读取A450处的吸光度定量。如图10中所示，包含全长p26或截短的p26(Q26-V229)变体的衔接子以pH依赖性方式结合FcRn，在pH 6.0下观察到的结合亲和力高于在pH 7.4下观察到的结合亲和力。

实施例15.包含CS1(SLAMF7、CRACC、CD319)特异性ADBD的衔接子调节CS1阳性肿瘤的胞内信号传导和杀伤

通过在人CS1蛋白的胞外结构域上淘选ADBD噬菌体文库来分离CS1结合结构域(ADBD)。代表性的CS1结合ADBD以双特异性形式与非结合α3DQ19E(SEQ ID NO：1021)一起与p26融合，以产生用于与表达af59-CAR(SEQ ID NO：1133)的JNL10细胞或表达af59-CAR的人T细胞组合进行功能测试的衔接蛋白。

在所测试的衔接子之中，当在存在表达af59-CAR的JNL10细胞和CS1阳性肿瘤细胞系MM.1S的情况下培养时，cc02 ADBD和cc08 ADBD显示最有效的NFAT信号传导(图11A)。

cc02 CS1 ADBD(SEQ ID NO：781)与p26以及非结合α3DQ19EDD(SEQ ID NO：1021)或BCMA结合bc98 DD(SEQ ID NO：201)融合。评估所得衔接子在存在BCMA阳性和CS1阳性细胞系MM.1S的情况下诱导表达af59-CAR的JNL10细胞中的信号传导的能力。如图11B中所示，能够结合CS1和BCMA两者的双特异性bc98-p26-cc02衔接子的信号传导能力强于单特异性的BCMA结合bc98-p26-α3DQ19E衔接子和单特异性的CS1结合α3DQ19E-p26-cc02衔接子。

将af59-CAR(SEQ ID NO：1133)转导到正常人T细胞中，并评估这些细胞使用所指示的衔接子杀伤H929(BCMA++，CS1+)和MM.1S(BCMA++，CS1++)肿瘤的能力。图11C和图11D中所示的数据指示双特异性bc98-p26-cc02是杀伤HT929(高表达BCMA和CS1两者)和MM.1S(高表达BCMA，低表达CS1)的有效衔接子。

实施例16.包含HER2结合ADBD的衔接子诱导与HER2阳性SKBR3肿瘤细胞α3D(Q19E)-p26-Eb(08)或基于亲和体/Darpin的衔接子一起培养的表达Af59-CAR的JNL10细胞中的信号传导

通过在人HER2蛋白的胞外结构域上淘选ADBD噬菌体文库来分离HER2(ERBB2，CD340)结合结构域(ADBD)。代表性的HER2结合ADBD以双特异性形式与非结合α3DQ19E(SEQID NO:1021)一起与p26融合，以产生用于与表达af59-CAR(SEQ ID NO：1133)的JNL10细胞或表达af59-CAR的人T细胞组合进行功能测试的衔接蛋白。

当在存在表达af59-CAR的JNL10细胞和HER2阳性SKBR3肿瘤细胞的情况下培养时，衔接子在其诱导JNL10 NFAT信号传导的能力方面证明了一系列的活性。如图12A中所示，包含eb08的衔接子是此测定中最有效的刺激物。

然后将包含eb08的衔接子与含有来源于亲和体(zHER2(4)和zHER2(342))或DARPin(9.29和G3)的HER2结合结构域的其他衔接子进行比较。如图12B中所示，JNL10细胞中由包含eb08的衔接子介导的NFAT信号传导大于由包含zHER:4的衔接子介导的NFAT信号传导，与由包含9.29的衔接子介导的NFAT信号传导相当，并且小于由包含G3和zHER2:342的衔接子介导的NFAT信号传导。

将包含HER2结合eb08和HER2结合eb04结构域的衔接子诱导肿瘤(SKBR3)杀伤的能力与含有来源于亲和体(zHER2(4)和zHER2(342))或DARPin(9.29和G3)的其他HER2结合结构域的衔接子进行比较。将每个衔接子与用结合每个衔接子中存在的p26的af59-CAR转导的正常人T细胞一起孵育。在效应子与靶的比率为1:5时，在16小时基于萤光素酶的测定中定量SKBR3裂解。图12C中所示的测定的结果证明，包含eb08或eb04的衔接子以剂量依赖性方式调节肿瘤裂解。

实施例17.与BCMA特异性衔接子组合用p26结合CAR转导的T细胞的施用在体内消除MM.1S肿瘤细胞

NSG小鼠(NOD-scid IL2Rg

SEQ ID NO：1164:

MAFLWLLSCWALLGTTFGDEMGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAAIREWLQAYRHNGGGGDGGGGSGTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

SEQ ID NO：1165:

MGSWSEFWARLGAIRERLDALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAGTIKRFLQAYRHNGGGGDGGGGSGGGGSGLEKCFQTENPLECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGQKLISKTRAALGVGGGGSGGGGSGGGGSMGSWSEFWARLGAIRERLDALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAGTIKRFLQAYRHN

SEQ ID NO：1166:

MAFLWLLSCWALLGTTFGDEMGSWSEFWARLGAIRERLDALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAGTIKRFLQAYRHNGGGGDGGGGSGTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

实施例18.用p26结合CAR转导的T细胞在BCMA+B细胞白血病的播散性模型中表现出与间歇性给药的BCMA特异性衔接子相当的体内活性

将表达GFP和萤光素酶的1×10

在I.V.衔接子施用后在小鼠中评估BCMA特异性衔接子(bc98-p26-bc98，SEQ IDNO：1165)(“SPRX-BCMA”)在NALM6-BCMA肿瘤细胞上的体内停留时间。在注射后的不同时间点收集股骨，冲洗，固定样品，并通过抗标签抗体检测肿瘤细胞上的衔接子结合。结合在图15(左侧)中以阳性百分比表示。还提供了每个时间点的代表性直方图(图15，右)。

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