一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物

技术领域

本发明属于天然药物化学、中药化学和心血管药理学领域，具体涉及一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物。

背景技术

《中国心血管健康与疾病报告2020》指出，我国现有心血管病患者约3.3亿，其中冠心病1139万。心血管病患病率处于持续上升阶段，死亡率仍居首位，高于肿瘤和其他疾病，占居民疾病死亡构成比约45％。目前，心脑血管病仍以缺血性心脏病为主，以心脑血管病出院总人次数统计，占比为36.95％，居首位。心脑血管病具有高患病率、高死亡率和高医疗费用的特点，使其成为我国重要的公共卫生问题。因此，发现和发明对缺血性疾病，尤其是缺血性心脏病具有良好预防和治疗作用的药物，具有重要的社会意义。而从中药或天然药物中寻找新的抗心肌缺血、对心肌缺血缺氧有保护作用的活性先导化合物，并对其进行结构优化，既是发现新药的有效途径之一，也是天然药物化学、中药化学和心血管药理学领域的重点研究方向之一。

罗汉松实Semen Podocarpi是一种中药，是罗汉松科罗汉松属植物罗汉松Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don或短叶罗汉松Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don var.maki(Sieb.)Endl.的果实，由种子和花托组成。罗汉松广泛分布于我国南方地区，在江苏、福建、浙江、湖北、广西和广东等地都有分布。广西北海市是罗汉松之乡，有全国最大的罗汉松种植基地。《中药大辞典》记载，罗汉松实具有活血止痛、治心胃痛和大补元气等功效，可用于心悸和怔忡。心胃痛是指心前区疼痛发作时，导致恶心呕吐、胃脘冷痛等胃肠症状，其本质是心肌缺血引起心前区疼痛，从而导致胃脘疼痛。罗汉松实通过改善心肌缺血，减轻心前区疼痛，从而具有治心胃痛的功效。在民间，罗汉松实可作为中药复方组分之一，用于心律失常或改善脑组织血液循环。由此可见，罗汉松实对缺血性心脑血管疾病有一定的预防和治疗作用。然而，目前关于罗汉松实双黄酮类成分及药理作用的研究报道较少。

国内学者黎霜等，采用HPLC法同时测定了穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的含量(黎霜，黄可龙，施树云，等.深绿卷柏中的穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的反相高效液相色谱法同时测定.时珍国医国药，2012，23(4)：854-857)。该学者还从深绿卷柏中分离获得橡胶树双黄酮，并测定了其与牛血清白蛋白的结合作用(黎霜.深绿卷柏中双黄酮提取、分析及其与牛血清作用机理研究.中南大学，2012.)。

国外学者Chaabi等，从竹柏属植物中分离得到一些双黄酮化合物，并测试了这些化合物对磷酸二酯酶的抑制活性，但橡胶树双黄酮对磷酸二酯酶没有抑制作用(Chaabi，M.，Antheaume，C.，Weniger，B.，et al.Biflavones of Decussocarpus rospigliosii asphosphodiesterases inhibitors.Planta Medica，73(12)，1284-1286.)。Yeh等从罗汉松枝叶中分离得到橡胶树双黄酮，发现其对拓扑异构酶I有抑制作用(Yeh，P.H.，Shieh，Y.D.，Hsu，L.C.，et al.Naturally occurring cytotoxic[3’→8”]-biflavonoids fromPodocarpus nakaii.Journal of Traditional and Complementary Medicine，2(3)，220-226.)。

在发明专利方面，国内外已公开的与橡胶树双黄酮有关的发明专利只有2件：

(1)石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司(CN200810054750)，具有二肽基肽酶IV抑制作用的黄酮类化合物。该专利公开了橡胶树双黄酮对二肽基肽酶IV具有良好的抑制作用。

(2)Beth Israel Deaconess Medical Center INC.(WO2021US59263)，Compoundsand Methods for Treating Viral Infections。该专利公开了2，3-二羟基橡胶树双黄酮对SAR-CoV-2蛋白酶具有良好的抑制作用。

上述论文及发明专利都没有公开橡胶树双黄酮对心肌损伤的预防和保护作用，也没有公开其在制备具有预防和保护心肌损伤作用的药物或保健食品方面的用途。综上所述，据我们所知，至今未见有从罗汉松实中提取分离橡胶树双黄酮，并对其抗心肌缺血作用或心肌损伤预防和保护作用的研究报道。

虽然有一些文献报道了其它双黄酮化合物的抗心肌缺血或心肌损伤保护作用，但不同的双黄酮化合物化学结构不同，它们的药理作用也不一定相同或相似。化学结构的差异所引起的药理活性差异，本领域专业人员是难以预知的。

发明内容

本发明旨在提供一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物。

本发明所述的对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物，其特征在于：

(1)所述双黄酮化合物的制备方法为：取罗汉松种子，用70％乙醇回流提取两次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，得浸膏，所得浸膏用乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩，得乙酸乙酯组分，乙酸乙酯组分用硅胶柱色谱分离，以体积比为1∶1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏，浸膏用硅胶柱色谱分离，以体积比为5∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏，浸膏再用硅胶柱色谱分离，以体积比为40∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩后再用硅胶柱色谱分离，以体积比为1∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，挥干溶剂，析出晶体，即得；

(2)按(1)所述的制备方法获得的双黄酮化合物为橡胶树双黄酮，其质量百分含量大于等于98％。

本发明所述的双黄酮化合物，可用于制备具有预防和保护心肌损伤作用的药物或保健食品；可制成口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂或丸剂。

本发明所述的双黄酮化合物，经体外H

以下将以具体实施例对本发明的内容作进一步的详细说明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

附图说明

图1橡胶树双黄酮化学结构

图2橡胶树双黄酮核磁共振碳谱

图3橡胶树双黄酮核磁共振氢谱

具体实施方式

实施例1

取罗汉松种子10kg，用60kg70％乙醇回流提取两次，每次1小时，合并提取液，60℃减压浓缩，回收溶剂，得浸膏，按浸膏与水的质量体积比为1比3的比例，将浸膏分散于水中，用与水相同体积的乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩，回收溶剂，得乙酸乙酯组分。乙酸乙酯组分用硅胶柱色谱分离，以体积比为1∶1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏；浸膏用硅胶柱色谱分离，先以体积比为5∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得浸膏；浸膏再用硅胶柱色谱分离，以体积比为40∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，洗脱液减压浓缩后再用硅胶柱色谱分离，以体积比为1∶1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，挥干溶剂，析出晶体，即得。所得晶体通过熔点测定、红外光谱、质谱和核磁共振波谱测定，综合解析，确证其结构为橡胶树双黄酮。具体数据和解析如下。

所得晶体熔点为：235.2-237.5℃，红外光谱(KBr，cm

1

在

实施例2

本发明所述双黄酮化合物对H

1.H9c2心肌细胞损伤模型的建立

将H9c2接种于含10％胎牛血清、1％青霉素和链霉素的DMEM高糖培养液中，于37℃、5％CO

2.橡胶树双黄酮对H

细胞接种于96孔板内，培养24h后，分为：空白对照组，造模组(H

数据采用SPSS17.0软件处理，实验结果均以均数±标准差表示，各组间采用单因素方差分析法分析，P＜0.05时差异有统计学意义。

3.结果

实验结果见表1。结果显示，造模组用400μM H

表1不同浓度橡胶树双黄酮对H

注：与空白对照组相比

综上所述，本发明所述对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物：橡胶树双黄酮，能显著提高H

实施例3

一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物，按以下方法制成口服液。

取质量百分含量为99％的橡胶树双黄酮100g，过60目筛，用1000mL蒸馏水溶解，加入阿斯巴甜5g，苯甲酸钠3g，混匀，过滤，装入10mL茶色玻璃瓶或30mL茶色聚酯瓶，紫外线灭菌30min，即得。

实施例4

一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物，按以下方法制成颗粒剂。

取质量百分含量为99.5％的橡胶树双黄酮1kg，过60目筛，加入淀粉1kg，糊精0.5kg混合均匀，喷入浓度为50％的乙醇，混匀，用16目筛制粒，干燥，用20目筛整粒，装袋，即得。

实施例5

一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物，按以下方法制成胶囊剂。

取质量百分含量为99％的橡胶树双黄酮100g，过60目筛，加入淀粉100g，糊精50g，混合均匀，喷入浓度为60％的乙醇，混匀，用16目筛制粒，干燥，用20目筛整粒，装填硬胶囊，即得。

实施例6

一种对心肌损伤有预防和保护作用的双黄酮化合物，按以下方法制成片剂。

取质量百分含量为99％的橡胶树双黄酮10kg，过60目筛，加入淀粉10kg，糊精5kg，微晶纤维素1kg，混合均匀，喷入70％乙醇，混匀，用24目筛制粒，干燥至颗粒水分含量大于4％小于8％，整粒，压片，制成片剂。