一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊及其制备方法。

背景技术

脑卒中是一种常见而严重的神经系统疾病，其发生与脑血管的破裂或阻塞有关，导致脑部供血不足，进而引发脑组织损伤甚至死亡，脑卒中的危险因素(高血压、高血糖等)和缺血会导致活性氧(ROS)相关酶系统活化，产生大量的ROS，远超过机体抗氧化防御系统的内源清除能力，出现氧化应激，脑卒中患者发病后超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(TAC)明显降低，丙二醛(MDA)明显升高，上述指标的改变通过促进血小板聚集、增加内皮通透性、内皮细胞局灶性病变等加重病情。脑卒中的发病率和死亡率高，对患者造成了巨大的负担，因此脑卒中的治疗和预防对于患者的生命和生活质量至关重要，通过及早的急性期治疗和综合的康复治疗，可以最大限度地减少脑损伤、恢复功能，提高患者的生活质量和预后。蒙药是一类传统中药，其在中医传统理论中被认为具有调和气血、活血化瘀、祛风通络等作用。近年来，越来越多的研究表明，蒙药中的活性成分具有抗炎、抗氧化、抗凝血、促进血管生成等生物活性，对脑卒中的治疗和预防可能具有潜在作用。目前，治疗脑卒中的药物主要包括溶栓药物和抗凝药物。其中溶栓药物用于缩小血栓，减轻血管闭塞程度。抗凝药物主要用于改善微循环，恢复血流。然而，溶栓药物需要在脑卒中发生后的几个小时内使用，以达到最佳的治疗效果，无法起到预防效果，限制了一部分患者接受溶栓治疗的机会，此外这些药物组合物往往功效单一、或安全性较差、生物利用度较低。虽然这些药物在急性期治疗中取得了一定的成效，但也存在一些不足，因此，如何开发一种可兼具治疗和预防效果，生物利用度高，疗效好，安全性佳的，治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊是亟需解决的技术问题。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提出了一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊及其制备方法。本发明选择了具有治疗和预防脑卒中作用的多种蒙药并组合，创造出独特的药物组合，可协同增效，有效治疗和预防脑卒中，本发明采用螺旋藻、钝叶角藻和蛋白核小球藻制备了增效剂，可以改善脑血管功能和降低脑卒中的风险，有助于预防脑卒中的发生。本发明制备了促进剂，可以提高药物的溶解性，增强药物生物亲和性，促进药物吸收利用。本发明采用柠檬酸和NaOH溶液浸提蒙药，可以中和或降解药材中的毒性物质，提高药物安全性。本发明添加了甘草酸、明胶和海藻酸，可降低药物的毒性，并且增强药物的疗效。本发明采用羟基乙酸，对蒙药颗粒进行修饰，改善分散性，增强吸收性。本发明制备的一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊，疗效好、安全性高、生物利用度高，可有效治疗和预防脑卒中。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊，包括胶囊外壳及内容物，所述内容物包括以下重量份的原料：三七30-40份、莲座蓟36-44份、广枣15-20份、铁线莲20-30份、人参25-32份、乌头18-25份、增效剂20-30份、促进剂8-12份。

进一步地，所述增效剂的制备方法，包括以下步骤：

(1) 将螺旋藻、钝叶角藻、蛋白核小球藻与水混合，得到混合藻液，藻与水的质量比为1:8，搅拌均匀后进行均质处理，均质压力为10 MPa，均质处理温度为70℃，得到混合浆液；

(2) 将步骤(1)所得混合浆液于85℃下灭菌30 min，然后冷却至37℃，并用柠檬酸调节pH值至5-6，加入生物酶，生物酶与混合浆液的重量比为1:1000，搅拌3-5 h，加热至95℃维持10 min，得到水解液；

(3) 将步骤(2)所得水解液以4000 r/min的转速离心10 min，上清液与10 vol%乙醇溶液混匀，乙醇溶液与上清液的体积比为8:1，加入十六烷基甜菜碱，十六烷基甜菜碱与水解液的质量体积比为1 g:1 L，在40℃下，提取1 h，过滤，得滤液1，将滤液1浓缩至固形物含量为20wt%后得到浓缩液；

(4) 向步骤(3)所得浓缩液中加入半乳糖，半乳糖和浓缩液的质量比为1:99，121℃下反应30 min，将产物与甲酸苄酯按1 g:2 mL的比例混合均匀，过滤得滤液2，与活性炭混合，活性炭与滤液2的质量体积比为1 g：80 mL，30℃下搅拌40 min，过滤得滤液3，冷冻干燥，得到增效剂。

进一步地，步骤(2)所述生物酶为酸性纤维素酶、中性纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶按2:1:1.5:1.2的质量比混合均匀而成。

进一步地，所述促进剂的制备方法，包括以下步骤：

I. 在冰水浴下，向二甲基甲酰胺溶剂中加入二乙醇胺、对氨基苯甲酰氯，二乙醇胺和对氨基苯甲酰氯的质量比为2:3，二乙醇胺与二甲基甲酰胺的质量体积比为1 g:2 mL，再加入质量比为2:1的吡啶和三乙胺，吡啶和二乙醇胺的质量比为5-8:18，搅拌15-20 min，然后在室温下搅拌反应24 h，得到反应混合物I；

II. 向步骤I所得反应混合物I中，加入脂肪酸，脂肪酸与对氨基苯甲酰氯的摩尔比为1:1，再加入碳酸二甲酯，碳酸二甲酯和对氨基苯甲酰氯的质量比为9:13，室温下搅拌6-8 h，搅拌速度为60 rpm，得到反应混合物II；

III. 将步骤II所得反应混合物II减压浓缩至原体积的30%，用丙酮洗涤3次，产物在四氢呋喃中重结晶，过滤，依次用95wt%乙醇溶液和去离子水洗涤3次，40-50℃真空干燥2-3 h，得到促进剂。

进一步地，所述脂肪酸为癸酸、十一酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸中的一种。

进一步地，所述胶囊为硬胶囊或软胶囊。

进一步地，所述胶囊外壳由胃溶性胶囊辅料或者肠溶性胶囊辅料制备而成。

进一步地，所述胶囊外壳的材料包括且不限于明胶、甘油、海藻酸钠、淀粉中的一种或几种。

本发明还提供了所述治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊的制备方法，包括以下步骤：

S1：将三七、广枣、人参、铁线莲、乌头和莲座蓟洗净后烘干，粉碎过80目筛，得到蒙药混合物，在1 mol/L的柠檬酸溶液中浸泡1-2 h，过滤后得到滤液A和沉淀A，将沉淀A再在1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡30-40 min，过滤后得到滤液B和沉淀B，蒙药混合物与柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液的质量体积比为1 g:8 mL:8 mL，合并滤液A和滤液B得到合并滤液，加入质量比为2:1:1.2的甘草酸、明胶和海藻酸，合并滤液与甘草酸的用量比为1 L:10 mg，加热到50-60℃，维持3-4 h，60℃旋转蒸发1-2 h，喷雾干燥，制得蒙药颗粒；

S2：将步骤S1所得蒙药颗粒，加入去离子水中，蒙药颗粒与去离子水的质量体积比为1 mg:100 mL，180 rpm搅拌30 min后，10000 rpm离心30-40 min，沉淀重新与去离子水按照1 g:100 mL的比例混合，加入羟基乙酸，蒙药颗粒与羟基乙酸的质量比为5:1，室温下搅拌反应4 h，8000 rpm离心15 min，沉淀用去离子水洗涤三次，50℃烘干，得到蒙药制剂；

S3：将蒙药制剂、促进剂、增效剂混合均匀，研磨粉碎过500目筛，紫外线灭菌1 h，装入胶囊，每粒胶囊装0.5 g，得到一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明选择了具有治疗和预防脑卒中作用的多种蒙药并组合，创造出独特的药物组合，可协同增效，有效治疗和预防脑卒中，药物选择和配比合理，疗效好安全性高。藻类是一类富含营养物质和生物活性化合物的植物，有一些藻类被认为具有治疗和预防脑卒中的潜力，本发明采用螺旋藻、钝叶角藻和蛋白核小球藻制备了增效剂，具有抗血栓、抗氧化、抗炎、降血压和神经保护的作用，可以改善脑血管功能和降低脑卒中的风险，有助于预防脑卒中的发生。本发明制备了促进剂，可以提高药物的溶解性，增强药物生物亲和性，促进药物吸收利用，从而增强药效。本发明通过喷雾干燥法制得蒙药颗粒，喷雾干燥法制得的颗粒粒径小，生物相容性好，更易被人体吸收，生物利用度高。本发明采用柠檬酸和NaOH溶液浸提蒙药，可以中和或降解药材中的毒性物质，减轻药物毒性，提高药物安全性。本发明添加了质量比为2:1:1.2的甘草酸、明胶和海藻酸，可降低药物的毒性，并且增强药物的疗效。本发明采用羟基乙酸，对蒙药颗粒进行修饰，改善分散性，增加蒙药颗粒的亲水性，使其更容易在水溶液中分散均匀，有助于提高蒙药颗粒的稳定性，防止其在溶液中聚集和沉淀，同时进一步增加蒙药颗粒与生物体组织的相容性，增强吸收性。本发明制备的一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊，疗效好、安全性高、生物利用度高，可有效治疗和预防脑卒中。

附图说明

为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1 为本发明实施例1所述促进剂的化学结构图；

图2 为本发明实施例1所述促进剂的核磁共振谱图，其中，a为

图3 为本发明实施例1所述蒙药制剂的扫描电镜图；

图4 为本发明实施例1-3和对比例1-3所述蒙药组合物胶囊内容物的细胞毒性测试图；

图5 为本发明实施例1-3和对比例1-3所述蒙药组合物胶囊内容物对大鼠氧化应激的影响效果图；

图6 为本发明实施例1-3和对比例1-3所述蒙药组合物胶囊内容物的溶解率测试图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。

需要说明的是，无特殊说明外，本发明中涉及到的化学试剂均通过商业渠道购买。

实施例1：本实施例提供了一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物，包括以下重量份的原料：三七40份、莲座蓟44份、广枣20份、铁线莲30份、人参32份、乌头25份、增效剂30份、促进剂12份。

本实施例所述增效剂的制备方法，包括以下步骤：

(1) 将螺旋藻、钝叶角藻、蛋白核小球藻与水混合，得到混合藻液，藻与水的质量比为1:8，搅拌均匀后进行均质处理，均质压力为10 MPa，均质处理温度为70℃，得到混合浆液；

(2) 将步骤(1)所得混合浆液于85℃下灭菌30 min，然后冷却至37℃，并用柠檬酸调节pH值至6，加入生物酶，生物酶为酸性纤维素酶、中性纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶按2:1:1.5:1.2的质量比混合均匀而成，生物酶与混合浆液的重量比为1:1000，搅拌5 h，加热至95℃维持10 min，得到水解液；

(3) 将步骤(2)所得水解液以4000 r/min的转速离心10 min，上清液与10 vol%乙醇溶液混匀，乙醇溶液与上清液的体积比为8:1，加入十六烷基甜菜碱，十六烷基甜菜碱与水解液的质量体积比为1 g:1 L，在40℃下，提取1 h，过滤，得滤液1，将滤液1浓缩至固形物含量为20wt%后得到浓缩液；

(4) 向步骤(3)所得浓缩液中加入半乳糖，半乳糖和浓缩液的质量比为1:99，121℃下反应30 min，将产物与甲酸苄酯按1 g:2 mL的比例混合均匀，过滤得滤液2，与活性炭混合，活性炭与滤液2的质量体积比为1 g：80 mL，30℃下搅拌40 min，过滤得滤液3，冷冻干燥，得到增效剂。

本实施例所述促进剂的制备方法，包括以下步骤：

I. 在冰水浴下，向二甲基甲酰胺溶剂中加入二乙醇胺、对氨基苯甲酰氯，二乙醇胺和对氨基苯甲酰氯的质量比为2:3，二乙醇胺与二甲基甲酰胺的质量体积比为1 g:2 mL，再加入质量比为2:1的吡啶和三乙胺，吡啶和二乙醇胺的质量比为8:18，搅拌20 min，然后在室温下搅拌反应24 h，得到反应混合物I；

II. 向步骤I所得反应混合物I中，加入癸酸，癸酸与对氨基苯甲酰氯的摩尔比为1:1，再加入碳酸二甲酯，碳酸二甲酯和对氨基苯甲酰氯的质量比为9:13，室温下搅拌8 h，搅拌速度为60 rpm，得到反应混合物II；

III. 将步骤II所得反应混合物II减压浓缩至原体积的30%，用丙酮洗涤3次，产物在四氢呋喃中重结晶，过滤，依次用95wt%乙醇溶液和去离子水洗涤3次，50℃真空干燥3 h，得到促进剂，化学结构式如图1所示，核磁共振谱图如图2所示，分子式为C

本实施例还提供了所述治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊的制备方法，包括以下步骤：

S1：将三七40 g、广枣20 g、人参32 g、铁线莲30 g、乌头25 g和莲座蓟44 g洗净后烘干，粉碎过80目筛，得到蒙药混合物，在1 mol/L的柠檬酸溶液中浸泡2 h，过滤后得到滤液A和沉淀A，将沉淀A再在1 mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡40 min，过滤后得到滤液B和沉淀B，蒙药混合物与柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液的质量体积比为1 g:8 mL:8 mL，合并滤液A和滤液B得到合并滤液，加入质量比为2:1:1.2的甘草酸、明胶和海藻酸，合并滤液与甘草酸的用量比为1 L:10 mg，加热到60℃，维持4 h，60℃旋转蒸发2 h，喷雾干燥，制得蒙药颗粒；

S2：将步骤S1所得蒙药颗粒，加入去离子水中，蒙药颗粒与去离子水的质量体积比为1 mg:100 mL，180 rpm搅拌30 min后，10000 rpm离心40 min，沉淀重新与去离子水按照1g:100 mL的比例混合，加入羟基乙酸，蒙药颗粒与羟基乙酸的质量比为5:1，室温下搅拌反应4 h，8000 rpm离心15 min，沉淀用去离子水洗涤三次，50℃烘干，得到蒙药制剂，蒙药制剂的扫描电镜图如图3所示，粒径小，形状近似球形，呈很好的分散状态，表明具有良好的稳定性，易于吸收利用；

S3：将步骤S2制得的蒙药制剂和促进剂12 g、增效剂30 g混合均匀，研磨粉碎过500目筛，紫外线灭菌1 h，得到一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物。

实施例2： 本实施例提供了一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物，包括以下重量份的原料：三七30份、莲座蓟36份、广枣15份、铁线莲20份、人参25份、乌头18份、增效剂20份、促进剂8份。

本实施例所述增效剂的制备方法，包括以下步骤：

(1) 将螺旋藻、钝叶角藻、蛋白核小球藻与水混合，得到混合藻液，藻与水的质量比为1:8，搅拌均匀后进行均质处理，均质压力为10 MPa，均质处理温度为70℃，得到混合浆液；

(2) 将步骤(1)所得混合浆液于85℃下灭菌30 min，然后冷却至37℃，并用柠檬酸调节pH值至5，加入生物酶，生物酶为酸性纤维素酶、中性纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶按2:1:1.5:1.2的质量比混合均匀而成，生物酶与混合浆液的重量比为1:1000，搅拌3 h，加热至95℃维持10 min，得到水解液；

(3) 将步骤(2)所得水解液以4000 r/min的转速离心10 min，上清液与10 vol%乙醇溶液混匀，乙醇溶液与上清液的体积比为8:1，加入十六烷基甜菜碱，十六烷基甜菜碱与水解液的质量体积比为1 g:1 L，在40℃下，提取1 h，过滤，得滤液1，将滤液1浓缩至固形物含量为20wt%后得到浓缩液；

(4) 向步骤(3)所得浓缩液中加入半乳糖，半乳糖和浓缩液的质量比为1:99，121℃下反应30 min，将产物与甲酸苄酯按1 g:2 mL的比例混合均匀，过滤得滤液2，与活性炭混合，活性炭与滤液2的质量体积比为1 g：80 mL，30℃下搅拌40 min，过滤得滤液3，冷冻干燥，得到增效剂。

本实施例所述促进剂的制备方法，包括以下步骤：

I. 在冰水浴下，向二甲基甲酰胺溶剂中加入二乙醇胺、对氨基苯甲酰氯，二乙醇胺和对氨基苯甲酰氯的质量比为2:3，二乙醇胺与二甲基甲酰胺的质量体积比为1 g:2 mL，再加入质量比为2:1的吡啶和三乙胺，吡啶和二乙醇胺的质量比为5:18，搅拌15 min，然后在室温下搅拌反应24 h，得到反应混合物I；

II. 向步骤I所得反应混合物I中，加入亚麻酸，亚麻酸与对氨基苯甲酰氯的摩尔比为1:1，再加入碳酸二甲酯，碳酸二甲酯和对氨基苯甲酰氯的质量比为9:13，室温下搅拌6h，搅拌速度为60 rpm，得到反应混合物II；

III. 将步骤II所得反应混合物II减压浓缩至原体积的30%，用丙酮洗涤3次，产物在四氢呋喃中重结晶，过滤，依次用95wt%乙醇溶液和去离子水洗涤3次，40℃真空干燥2 h，得到促进剂。

本实施例还提供了所述治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊的制备方法，包括以下步骤：

S1：将三七30 g、广枣15 g、人参25 g、铁线莲20 g、乌头18 g和莲座蓟36 g洗净后烘干，粉碎过80目筛，得到蒙药混合物，在1 mol/L的柠檬酸溶液中浸泡1 h，过滤后得到滤液A和沉淀A，将沉淀A再在1 mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡30 min，过滤后得到滤液B和沉淀B，蒙药混合物与柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液的质量体积比为1 g:8 mL:8 mL，合并滤液A和滤液B得到合并滤液，加入质量比为2:1:1.2的甘草酸、明胶和海藻酸，合并滤液与甘草酸的用量比为1 L:10 mg，加热到50℃，维持3 h，60℃旋转蒸发1 h，喷雾干燥，制得蒙药颗粒；

S2：将步骤S1所得蒙药颗粒，加入去离子水中，蒙药颗粒与去离子水的质量体积比为1 mg:100 mL，180 rpm搅拌30 min后，10000 rpm离心30 min，沉淀重新与去离子水按照1g:100 mL的比例混合，加入羟基乙酸，蒙药颗粒与羟基乙酸的质量比为5:1，室温下搅拌反应4 h，8000 rpm离心15 min，沉淀用去离子水洗涤三次，50℃烘干，得到蒙药制剂；

S3：将步骤S2所得蒙药制剂与促进剂8 g、增效剂20 g混合均匀，研磨粉碎过500目筛，紫外线灭菌1 h，得到一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物。

实施例3：本实施例提供了一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物，包括以下重量份的原料：三七35份、莲座蓟40份、广枣18份、铁线莲25份、人参30份、乌头20份、增效剂25份、促进剂10份。

本实施例所述增效剂的制备方法，包括以下步骤：

(1) 将螺旋藻、钝叶角藻、蛋白核小球藻与水混合，得到混合藻液，藻与水的质量比为1:8，搅拌均匀后进行均质处理，均质压力为10 MPa，均质处理温度为70℃，得到混合浆液；

(2) 将步骤(1)所得混合浆液于85℃下灭菌30 min，然后冷却至37℃，并用柠檬酸调节pH值至5.5，加入生物酶，生物酶为酸性纤维素酶、中性纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶按2:1:1.5:1.2的质量比混合均匀而成，生物酶与混合浆液的重量比为1:1000，搅拌4h，加热至95℃维持10 min，得到水解液；

(3) 将步骤(2)所得水解液以4000 r/min的转速离心10 min，上清液与10 vol%乙醇溶液混匀，乙醇溶液与上清液的体积比为8:1，加入十六烷基甜菜碱，十六烷基甜菜碱与水解液的质量体积比为1 g:1 L，在40℃下，提取1 h，过滤，得滤液1，将滤液1浓缩至固形物含量为20wt%后得到浓缩液；

(4) 向步骤(3)所得浓缩液中加入半乳糖，半乳糖和浓缩液的质量比为1:99，121℃下反应30 min，将产物与甲酸苄酯按1 g:2 mL的比例混合均匀，过滤得滤液2，与活性炭混合，活性炭与滤液2的质量体积比为1 g：80 mL，30℃下搅拌40 min，过滤得滤液3，冷冻干燥，得到增效剂。

本实施例所述促进剂的制备方法，包括以下步骤：

I. 在冰水浴下，向二甲基甲酰胺溶剂中加入二乙醇胺、对氨基苯甲酰氯，二乙醇胺和对氨基苯甲酰氯的质量比为2:3，二乙醇胺与二甲基甲酰胺的质量体积比为1 g:2 mL，再加入质量比为2:1的吡啶和三乙胺，吡啶和二乙醇胺的质量比为7:18，搅拌18 min，然后在室温下搅拌反应24 h，得到反应混合物I；

II. 向步骤I所得反应混合物I中，加入肉豆蔻酸，肉豆蔻酸与对氨基苯甲酰氯的摩尔比为1:1，再加入碳酸二甲酯，碳酸二甲酯和对氨基苯甲酰氯的质量比为9:13，室温下搅拌7 h，搅拌速度为60 rpm，得到反应混合物II；

III. 将步骤II所得反应混合物II减压浓缩至原体积的30%，用丙酮洗涤3次，产物在四氢呋喃中重结晶，过滤，依次用95wt%乙醇溶液和去离子水洗涤3次，45℃真空干燥2.5h，得到促进剂。

本实施例还提供了所述治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊的制备方法，包括以下步骤：

S1：将三七35 g、广枣18 g、人参30 g、铁线莲25 g、乌头20 g和莲座蓟40 g洗净后烘干，粉碎过80目筛，得到蒙药混合物，在1 mol/L的柠檬酸溶液中浸泡1.5 h，过滤后得到滤液A和沉淀A，将沉淀A再在1 mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡35 min，过滤后得到滤液B和沉淀B，蒙药混合物与柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液的质量体积比为1 g:8 mL:8 mL，合并滤液A和滤液B得到合并滤液，加入质量比为2:1:1.2的甘草酸、明胶和海藻酸，合并滤液与甘草酸的用量比为1 L:10 mg，加热到55℃，维持3.5 h，60℃旋转蒸发1.5 h，喷雾干燥，制得蒙药颗粒；

S2：将步骤S1所得蒙药颗粒，加入去离子水中，蒙药颗粒与去离子水的质量体积比为1 mg:100 mL，180 rpm搅拌30 min后，10000 rpm离心35 min，沉淀重新与去离子水按照1g:100 mL的比例混合，加入羟基乙酸，蒙药颗粒与羟基乙酸的质量比为5:1，室温下搅拌反应4 h，8000 rpm离心15 min，沉淀用去离子水洗涤三次，50℃烘干，得到蒙药制剂；

S3：将步骤S2所得蒙药制剂与促进剂10 g、增效剂25 g混合均匀，研磨粉碎过500目筛，紫外线灭菌1 h，得到一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊内容物。

对比例1与实施例1的区别仅在于，不添加增效剂。

对比例2与实施例1的区别仅在于，不添加促进剂。

对比例3与实施例1的区别仅在于，所述蒙药颗粒的制备方法，包括以下步骤：将三七、广枣、人参、铁线莲、乌头和莲座蓟洗净后烘干，粉碎过80目筛，得到蒙药混合物，将蒙药混合物加入去离子水中，蒙药混合物与去离子水的质量体积比为1 g:16 mL加热到60℃，浸泡4 h，滤液60℃旋转蒸发2 h，喷雾干燥，制得蒙药颗粒。

实验例1：用噻唑蓝(MTT)法测定实施例1-3和对比例1-3所制蒙药组合物胶囊内容物的细胞毒性。按照m胶囊内容物/v完全培养基=50 mg/mL的比例，将紫外线灭菌1 h的胶囊内容物完全浸泡于完全培养基中，于37℃水浴中浸提24 h而得到浸提液原液。取对数生长期的L-929，经消化后调节L-929浓度至2×10

图4结果显示，对比例1-3的RGR小于实施例1-3组，其中对比例3最小，但实施例1-3和对比例1-3制得胶囊内容物毒性等级均为0-1，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊无细胞毒性，安全可靠。

实验例2：取160只雄性SD大鼠(体重240±20 g)，适应性喂养1周后，随机分为8组，每组20只，分别为假手术组，模型组和实施例1-3、对比例1-3组，各实施例和对比例制得的胶囊内容物以羧甲基纤维素钠溶液助悬制成混悬剂，给药前摇匀，每天给各组小鼠相应药物灌胃，实施例1-3和对比例1-3组分别按50 mg内容物重量/kg体重给药，假手术组、模型组给予等量的羧甲基纤维素钠溶液，均给药4周。给药结束后第2天制备大鼠脑缺血再灌注模型，术前12 h禁食，自由饮水。各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液(0.3 mL/100 g)麻醉，侧卧位固定于手术台上，实验过程中维持大鼠肛温37±1℃。剃毛，消毒皮肤，颈部正中切口长度约20 mm，暴露颈总动脉，钝性分离颈内动脉，夹闭颈总动脉和颈内动脉，将尼龙线经颈外动脉主干切口缓慢向颈内动脉入颅方向轻柔推进，以颈总动脉分叉处为标记，推进18±0.5mm遇到轻微阻力，即到达较细的大脑中动脉停止，结扎阻断大脑中动脉，使局部脑血流充分阻断，缝合伤口，留置长约3 cm的尼龙线于体外，碘伏消毒手术区。缺血1 h后将线轻轻拽出10 min，实现再灌注。假手术组：不插线结扎，其余处理同模型组和实施例以及对比例组。手术过程中采用经颅多普勒血流分析仪监测脑血流情况。

缺血再灌注24 h内密切观察各组动物状况，参考ZeaLonga评分标准评价行为缺陷，其中0分为正常，无神经损伤症状；1分为不能完全伸展对侧前肢；2分为爬行时向对侧转圈；3分为行走时身体向对侧倾倒；4分为不能自发行走，意识丧失。结果如表1所示。**表示与模型组有极显著差异，*表示与模型组有显著差异。

表1 各组大鼠行为学评分

表1结果显示，与模型组相比，实施例和对比例组大鼠行为学评分明显降低，且实施例1-3组的评分较对比例1-3组低，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊可以改善神经功能缺损。

给药后再灌注24 h后，处死各组动物，每组随机取10只大鼠的全脑，称取脑组织湿重，切片，2%氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中染色30 min，固定，分离苍白区(梗死区，未被染色)和非苍白区(正常区)，脑梗死体积(%)=(梗死区范围湿重/脑组织湿重)×100%。将染色后的脑组织置烘箱中干燥至恒重，称其干重，按下式计算脑含水量：脑含水量(%)=[(脑组织湿重-脑组织干重)/脑组织湿重]×100%。结果如表2所示。**表示与模型组有极显著差异，*表示与模型组有显著差异。

表2 各组大鼠脑梗死体积及脑含水量

表2结果显示，与模型组相比，实施例和对比例组大鼠脑梗死体积、脑含水量明显降低，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊可以改善减轻脑水肿程度，降低脑梗死面积。

给药后再灌注24 h后，处死各组剩余10只大鼠，迅速取脑称重，用生理盐水制成10wt%脑组织匀浆液。低温离心，取上清液，按试剂盒说明书方法检测大脑组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果如图5所示。

图5结果显示，与模型组相比，实施例和对比例组大鼠脑组织中MDA含量明显降低，GSH含量及SOD活性明显升高，实施例效果最佳，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊可以减轻氧化应激、保护脑组织免受氧自由基损伤，保护脑组织，适用于脑卒中的预防和治疗。

实验例3：配置100 mL pH 1.2的盐酸溶液和100 mL pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液，加入实施例1-3和对比例1-3制得的蒙药组合物胶囊内容物，加入量为0.3 g/100 mL，重量记为m

图6结果显示，实施例1-3组的溶解率高于对比例1-3，尤其高于对比例2，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊生物相容性好，吸收率高，更易被人体吸收利用，生物利用度高，可提高治疗和预防脑卒中的效果。

实验例4：取80只雄性SD大鼠(体重240±20 g)，适应性喂养1周后，随机分为8组，每组10只，分别为假手术组，模型组和实施例1-3、对比例1-3组，适应性喂养1周后，按照实验例2的方法，制备大鼠脑缺血再灌注模型。术后将各实施例和对比例制得的胶囊内容物以羧甲基纤维素钠溶液助悬制成混悬剂，给药前摇匀，每天给各组小鼠相应药物灌胃，实施例1-3和对比例1-3组分别按50 mg内容物重量/kg体重给药，假手术组、模型组给予等量的羧甲基纤维素钠溶液，给药2周后，根据实验例2的方法，进行行为学评分，计算脑梗死体积和脑含水量，结果如表3所示。

表3 蒙药组合物胶囊内容物对脑卒中的治疗效果

表3结果显示，与模型组相比，实施例和对比例组大鼠行为学评分、大鼠脑梗死体积和脑含水量明显降低，且实施例1-3组较对比例1-3组低，表明本发明一种治疗和预防脑卒中的蒙药组合物胶囊可以改善神经功能缺损，可以减轻脑水肿程度，降低脑梗死面积，具有治疗脑卒中的效果。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。

本发明旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。