一种含有表皮细胞因子的组合物及其在褥疮修复中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种含有表皮细胞因子的组合物及其在褥疮修复中的应用。

背景技术

褥疮属于疮疡的一种，多好发于长期卧床、脊髓损伤、慢性神经系统疾病等各种消耗性疾病及老年病人，若有低蛋白血症、大小便失禁、骨折、营养不良、缺乏维生素等疾病则更易发生。根据美国全国褥疮顾问小组2007年最新临床分类，分为以下四期：第一期褥疮：淤血红润期—“红、肿、热、痛或麻木，持续30min不退”，在骨隆突处的皮肤完整伴有压之不褪色的局限性红斑。第二期褥疮：炎性浸润期—“紫红、硬结、疼痛、水疱”，真皮部分缺失，表现为一个浅的开放性溃疡，无组织坏死，也可能表现为一个完整的或破裂的血清性水疱。第三期：褥疮浅度溃疡期—表皮破损、溃疡形成，全层皮肤组织缺失，可见皮下脂肪暴露，但骨头、肌腱、肌肉未外露，伤口内有坏死组织。第四期：褥疮坏死溃疡期—真皮下组织坏死，感染扩散至肌肉层、骨面，常有全层组织缺失，伴有骨、肌腱或肌肉外露，常有潜行隧道。

现代医学认为，褥疮的发生是多种因素引起的复杂的病理过程。最主要的因素是力学因素，包括压力、剪切力与摩擦力。当受压组织持续缺血、缺氧，酸性代谢产物堆积对细胞的毒性作用致细胞变性坏死。当压力解除、恢复血液循环后，引起的再灌注损伤。另外，压力解除后，静脉充血，若组织持续充血，因缺氧可引起血管通透性增高，血楽大量渗出，组织及细胞含水增高，引起局部组织变性坏死；剪切力作用于皮肤深层，引起组织的相对位移，可阻断较大区域的血液供应，导致肌肉层、皮下组织、皮肤等全层组织损伤；摩擦力作用于上皮组织，可破坏皮肤外层的保护性角化层，从而增加褥疮的发生几率。如果医院和家属护理不当，不能勤于给患者翻身和对创面消毒，都可能引起病情的加重，甚至引发严重的全身感染，危及生命。

成纤维细胞是存在于人体各种组织中的主要结缔组织细胞，具有重要的生物学功能，包括合成胶原蛋白、细胞外基质等。干细胞因子则是一类由干细胞分泌的特殊蛋白质，能够调控细胞增殖、分化和功能。通过在凝胶中添加成纤维细胞和干细胞因子，可以提供褥疮区域所需的生长因子和信号分子，促进细胞增殖和组织修复。

现有使用成纤维干细胞因子用于修复和治疗褥疮组织。这种方式通过提供适宜的生长环境和活性成分，促进创伤区域的再生和修复过程。

但现有修复褥疮的组合物存在以下问题：

1. 成纤维干细胞因子凝胶虽然能够促使褥疮的修复，但其疗效在不同个体之间可能存在差异。对于一些严重的褥疮，仅使用该技术可能无法完全恢复正常皮肤功能。

2. 缺乏长期有效性的证据：尽管成纤维干细胞因子凝胶在实验室和初步的临床研究中表现出一定的疤痕修复作用，但对于其长期有效性，尚缺乏足够的证据支持。目前还需要深入的长期随访研究来评估其治疗效果的持久性。

3.缺乏统一标准和规范：在成纤维干细胞因子修复褥疮的使用中，缺乏统一的标准和规范，使得该技术的临床应用存在较大的差异性。这给临床医生和患者带来了一定的困扰。

发明内容

为此，本发明提供一种含有表皮细胞因子的组合物及其在褥疮修复中的应用，以解决上述存在的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明第一方面提供的一种含有表皮细胞因子的组合物在制备褥疮修复产品中的应用。

根据本发明第二方面提供的一种含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物，其特征在于，所述组合物包括表皮细胞上清液提取物、成纤维干细胞生长因子、卡波姆、透明质酸、烟酰胺、羟苯甲酯、维生素、胶原蛋白、寡肽-1和寡肽-5。

进一步的，所述组合物包括表皮细胞上清液提取物10-100ml、成纤维干细胞生长因子2-10ng/ml、卡波姆0.3 mg/ml、透明质酸 0.1-0.3mg/ml、烟酰胺0.2-0.4mg/ml、羟苯甲酯 0.2-0.5mg/ml、维生素0.3-0.6mg/ml、胶原蛋白0.2-0.6mg/ml、寡肽-1 0.1-0.3mg/ml和寡肽-5 0.1-0.3mg/ml。

表皮细胞上清液提取物：能刺激细胞外一些大分子（如透明质酸和糖蛋白等）的合成和分泌，滋润皮肤，因此它既可作为化妆品的添加剂及用于面部整形手术，促进人皮肤的新陈代谢、减少皮肤畸形；也可在医药上治疗皮肤外伤、术后创口、褥疮、口腔溃疡和坏疽、以及放射治疗引起的皮炎等。它可以加速伤口和溃疡面的愈合。

成纤维干细胞生长因子： 能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞。

卡波姆：有增稠、悬浮等重要用途，工艺简单，稳定性好，广泛应用于乳液、膏霜、凝胶中。

透明质酸：是肌肤中的一种重要成分，具有表皮组织修复的功能。

烟酰胺：可促进生物氧化过程和组织新陈代谢，对维持正常组织(特别是皮肤)的完整性。

羟苯甲酯：广谱抗菌活性，能抑制革兰氏阴性、阳性细菌，对酵母菌及霉菌有较强的抑制作用，与传统的防腐产品(例如：苯甲酸钠)相比，具有使用浓度低，广谱高效，并且安全经济，使用效期长。广泛用于化妆品、医药、食品及其它工业产品的防腐。

维生素E：维生素E的作用主要有保护皮肤的功能，能够修复受损细胞膜、恢复细胞正常功能，并促进血液循环，有助淡化瘀痕。

胶原蛋白：能维持皮肤和组织器官的形态和结构，也是修复各损伤组织的重要原料物质。

寡肽-1：能促进细胞生长和提高细胞活性，修复受损肌肤。修复胶原纤维和弹性纤维。

寡肽-3：可诱导干细胞分化，促进组织修复，修复基底层成纤维细胞。

宴肽5：特异性刺激上皮细胞的新陈代谢，修复角质层，增加鱼质层厚度增强胶原蛋白和弹性蛋白的活力。

进一步的，所述表皮细胞上清液提取物是使用表皮干细胞加入含有诱导药物的诱导培养基中进行诱导定向培养，在进行中等程度损伤处理，最后收集营养所分泌的营养因子并进行纯化，得表皮细胞上清液提取物。

进一步的，所述表皮细胞诱导药物包括维生素E、寡肽-3、成纤维干细胞生长因子、海藻糖、半胱氨酸、雷帕霉素。

进一步的，所述表皮细胞诱导药物包括维生素E 0.01μL/ml、寡肽-3 0.3μL/ml、成纤维干细胞生长因子0.2μL/ml、海藻糖0.2μL/ml、半胱氨酸0.1μL/ml、雷帕霉素0.5μL/ml。

维生素E：维生素E是一种重要的抗氧化剂，有助于保护细胞和组织不受氧化损伤。

寡肽-3：可诱导干细胞分化，促进组织修复，修复基底层成纤维细胞。

成纤维干细胞生长因子：能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞。

海藻糖：可用于细胞再生。

半胱氨酸：半胱氨酸能参与体内多种氧化还原反应，对细胞具有一定保护作用。

雷帕霉素：诱导细胞自噬，抗衰。

根据本发明第三方面提供的一种含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物的制备方法，所述方法包括：

步骤一，将卡波姆溶解在表皮细胞上清液提取物中，得到卡波姆溶液；

步骤二，依次向卡波姆溶液加入成纤维干细胞生长因子、透明质酸、烟酰胺、羟苯甲酯、维生素、羟苯甲酯、胶原蛋白、寡肽-5和寡肽-1，搅拌均匀，得到混合溶液；

步骤三，将混合溶液放到23-28℃下40-60min，得到组合物。

本发明具有如下优点：

1. 促进组织再生：表皮细胞因子能够激活体内存在的干细胞，并促使其分化为具有修复功能的细胞，从而促进受损组织的再生和修复。这种技术可以更有效地促进新组织的生长和褥疮的愈合。

2. 低风险性：表皮细胞因子修复褥疮技术是一种相对安全的治疗方法。

3. 多功能性：除了促进褥疮修复外，表皮细胞因子还具有其他多功能性。它可以促进血管生成、抗炎作用和免疫调节等，对于细胞再生和组织修复过程中的其他问题也能有所帮助。

4.利用表皮细胞分泌多种因子提取混合液对褥疮进行修复。如：EGF（表皮生长因子）、 FGF（表皮生长因子）、 VEGF（血管内皮生长因子）、BFGF(神经营养因子)、 KGF（成纤维细胞生长因子）。

5.使用的细胞代次高，一般第6-7代的细胞，每单位原代细胞可用的量更多，成本降低，因此能够更高效的用于褥疮修复的临床治疗研究。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。

本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。

图1为本发明实施例1提供的表皮细胞诱导前后对比图；其中，A-诱导前；B-诱导后；

图2为本发明实施例1提供的CD31、角质19、胶原蛋白表达的Western blot检测图；

图3为本发明实施例1一种表皮干细胞多种因子诱导前后含量图；

图4为本发明实验例1提供的褥疮的志愿者使用实施例3组合物前后对比图；其中，A-使用前；B使用10天后；C使用20天后；

图5为本发明实验例1提供的无创的志愿者使用实施例3组合物前后对比图；其中，A-使用前；B使用10天后。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例提供一种表皮细胞上清液提取物：

使用第七代表皮细胞，铺于六孔板上使用α-MEM培养基进行培养，生长密度达到80%，细胞生长状态良好，细胞活率>95%，形态符合表皮干细胞形态，细胞表面分子流式结果符合表皮干细胞相关分子指标：ci2B1、Q3B1、Q5B1、a6B4及ay35等，显微镜下观察细胞形态符合表皮干细胞形态。上清吸出，吸干净残液后用PBS缓冲液反复洗涤3次，洗好后将PBS缓冲液残余液吸干，吸干后贴着孔板壁缓慢加入诱导培养基2ml/孔（诱导药物： 维生素E0.01μL/ml，寡肽-3 0.3μL/ml，成纤维干细胞生长因子0.2μL/ml ，海藻糖0.2μL/ml ，半胱氨酸0.01μL/ml ，雷帕霉素 0.5μL/ml），操作完成后将孔板放入培养箱（5% CO

CD31、角质19、胶原蛋白表达的Western blot检测如图2所示。

收取表皮细胞上清并进行细胞计数，后续进行EGF（表皮生长因子）、 FGF（表皮生长因子）、 VEGF（血管内皮生长因子）、BFGF(神经营养因子)、 KGF（成纤维细胞生长因子）等因子的Elisa检测，并对结果进行作图处理。结果如图3所示。

实施例2

本实施例提供一种含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物：

表皮细胞上清液提取物10ml、成纤维干细胞生长因子2ng/ml、卡波姆0.3 mg/ml、透明质酸0.1mg/ml、烟酰胺0.2mg/ml、羟苯甲酯 0.2mg/ml、维生素E 0.3mg/ml、胶原蛋白0.2mg/ml、寡肽-1 0.1mg/ml和寡肽-5 0.1mg/ml。

实施例3

本实施例提供一种含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物：

表皮细胞上清液提取物50ml、成纤维干细胞生长因子5ng/ml、卡波姆0.3 mg/ml、透明质酸0.2mg/ml、烟酰胺0.3mg/ml、羟苯甲酯 0.23mg/ml、维生素E 0.5mg/ml、胶原蛋白0.4mg/ml、寡肽-1 0.2mg/ml和寡肽-5 0.2mg/ml。

实施例4

本实施例提供一种含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物：

表皮细胞上清液提取物100ml、成纤维干细胞生长因子10ng/ml、卡波姆0.3 mg/ml、透明质酸0.3mg/ml、烟酰胺0.4mg/ml、羟苯甲酯 0.5mg/ml、维生素E 0.6mg/ml、胶原蛋白0.6mg/ml、寡肽-1 0.3mg/ml和寡肽-5 0.3mg/ml。

实施例5

本实施例提供一种实施例2-4含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物的制备方法：

1）将卡波姆溶解在表皮细胞上清液提取物中，得到卡波姆溶液；

2）依次向卡波姆溶液加入成纤维干细胞生长因子、透明质酸、烟酰胺、羟苯甲酯、维生素E、胶原蛋白、寡肽-1和寡肽-5，搅拌均匀，得到混合溶液；

3）将混合溶液放到23-28℃下40-60min，得到组合物。

对比例1

本对比例除将表皮细胞上清液提取物用生理盐水替代外，其他与实施例3完全一致。

对比例2

本对比例除成纤维干细胞生长因子用生理盐水替代外，其他与实施例3完全一致。

实验例

体表溃疡型小鼠创面愈合实验：

选取SPF级昆明种小鼠18只，雌雄各半，体重(80--120)g。随机取健康小鼠，雌雄兼用，背部用宠物电推剪去毛，乙醚麻醉，腹卧位固定，选择在背中部脊柱以下、距尾根部上1.5cm处，以碘伏消毒皮肤后，剪除直径约为2cm的皮肤，深至皮下筋膜。在创面滴加浓度为5.0×10

表1 褥疮敷料对体表溃疡模型小鼠创面愈合的影响(创面面积，cm

由表1的实验结果可以看出，本发明的含有表皮细胞因子的用于修复褥疮的组合物含有表皮细胞上清液提取物和成纤维干细胞生长因子等的促伤口愈合成分，多种成分配合使用，可在术后7天内将体表溃疡模型的小鼠创面愈合率提升至99％以上，明显高于仅使用单一促伤口愈合成分时的愈合率。以上数据证明，表皮细胞上清液提取物和成纤维干细胞生长因子的配伍组合在促伤口愈合方面具有协同增效作用，可以保持创面湿润，具有生肌效果，加速诱导创面皮肤的修复愈合。

病例1，王某某，褥疮3期，因卧床6年，因为出现褥疮，且一直处于溃烂状态，使用实施例3组合物，1日3次，涂抹10天后，褥疮有所改善，涂抹20天后褥疮结痂，对比图如图4所示。

病例2，张某某，褥疮1期，卧床一年，使用实施例3组合物，1日3次，涂抹10天后，结痂，对比图如图5所示。

本发明能够促进褥疮修复，且风险低。具有多功能性强，具有抗炎和免疫调节作用。可以利用多因子分泌提取混合液对褥疮进行修复。使用的细胞使用代次高，降低成本。可以为褥疮修复事业研究提供了更好的帮助。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。