用于癌症治疗的联合疗法

交叉引用

本申请要求2020年12月11日提交的美国临时专利申请第63/124,669号；2021年6月24日提交的美国临时专利申请第63/214,736号；2021年11月9日提交的美国临时专利申请第63/277,555号；和2021年11月24日提交的美国临时专利申请第63/283,035号的权益；每个专利都通过引用整体并入本文。

背景技术

Src同源-2磷酸酶(SHP2)是一种在各种组织和细胞类型中广泛表达的非受体蛋白磷酸酶(参见综述：Tajan M等人.,Eur J Med Genet 2016 58(10):509-25；Grossmann KS等人,Adv Cancer Res 2010 106:53-89)。SHP2由位于其NH2末端的两个Src同源2(N-SH2和C-SH2)结构域、催化性PTP(蛋白酪氨酸磷酸酶)结构域和具有调节特性的C末端尾构成。在基态下，SH2结构域与PTP结构域之间的分子间相互作用阻止底物进入催化口袋，使SHP2保持为封闭的自抑制构象。响应于刺激，带有磷-酪氨酸基序的SHP2激活蛋白结合至SH2结构域，导致活性位点暴露和SHP2的酶促激活。

发明内容

本文公开的实施方案总体上涉及与利用SHP2抑制剂结合KRAS G12C抑制剂来治疗癌症的联合疗法相关(包括同时提供意想不到的程度的协同作用)的组合物和方法。

SHP2在基本细胞功能方面起重要作用，包括增殖、分化、细胞周期维持和运动。通过对其相关联的信号传导分子进行去磷酸化，SHP2响应于广泛的生长因子、细胞因子和激素而调节多种细胞内信号传导通路。SHP2参与的细胞信号传导过程包括RAS-MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)、PI3K(磷酸肌醇3-激酶)-AKT和JAK-STAT通路。

SHP2在该通路上也发挥信号增强作用，作用于RTK的下游和RAS的上游。对MAPK信号传导的药物抑制产生抗性的一种常见机制涉及RTK的激活，RTK的激活刺激MAPK信号传导的再激活。RTK激活经由直接结合并通过衔接蛋白募集SHP2。这些相互作用导致SHP2从封闭(无活性)构象转变为开放(活性)构象。SHP2是RAS信号传导再激活的重要促进因素，其在原发性和继发性抗性中绕过药物抑制。SHP2的抑制实现全面削弱上游RTK信号传导的效果，所述信号传导通常驱动致癌信号传导和适应性肿瘤逃逸(参见Prahallad,A.等人CellReports 12,1978-1985(2015)；Chen YN,Nature 535,148-152(2016))，这些文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。

除了SHP2之外，RAS-MAPK信号转导通路包括Ras蛋白家族。该家族包括在信号转导通路中起作用的三种相关GTP酶(K-、N-和HRAS)。特别是KRAS，已知具有指示致癌状态的多种突变。KRAS突变体，诸如发生在氨基酸残基12处的突变(即，G12X)，通常被认为会导致癌症。例如，G12C突变发生在约13％的NSCLC患者中以及1％至3％的结直肠癌和实体瘤中。

在第一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：

和KRAS抑制剂。

在一些实施方案中，癌症包含KRAS G12C突变。

在一些实施方案中，癌症为肺癌。

在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。

在一些实施方案中，癌症为食道癌。

在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂选自AMG 510(索托拉西布(sotorasib)，LUMAKRAS

在一些实施方案中，KRAS抑制剂为AMG 510。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂为MRTX849。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂为ARS-3248。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂为BI 1701963。

在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。

在一些实施方案中，施用为口服。

在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂的给药量在每天1mg至1,000mg的范围内。

在第二方面，本公开提供一种治疗对象的肺癌或食道癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：

和AMG 510。

在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。

在一些实施方案中，AMG 510每天施用一次或两次。

在一些实施方案中，对象为人。

在第三方面，本公开提供一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：

和MRTX849。

在一些实施方案中，癌症为肺癌、结直肠癌、食道癌或乳腺癌。

在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。

在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。

在一些实施方案中，MRTX849每天施用一次或两次。

在一些实施方案中，对象为人。

在一些实施方案中，提供试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和KRAS抑制剂。

在一些实施方案中，式I的化合物和KRAS抑制剂在单独的包装中。

在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。

在一些实施方案中，KRAS抑制剂为AMG 510、MRTX849、ARS-3248、GDC-6036、BI1701963、替吡法尼和BBP-454中的一种或多种。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成药物组合物。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成口服组合物。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次或两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经连续28天的周期施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐以约10mg至约140mg的量一天施用一次。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。

在一些实施方案中，癌症选自肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤(neurolastoma)、黑色素瘤和急性髓性白血病。

附图说明

图1示出表明式I的化合物和AMG 510协同组合以抑制NCI-H358细胞中KRAS G12C突变的细胞增殖的数据。

图2A示出用式I的化合物单独和与AMG 510的组合处理的NCI-H358细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用式I的化合物单独和与AMG 510的组合处理的NCI-H358细胞的表列IC50数据。

图2B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的AMG 510(1nM)不会降低NCI-H358细胞中的细胞生存力。

图3示出表明式I的化合物和AMG 510协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H2122中的细胞增殖的数据。

图4A示出用式I的化合物单独和与各种浓度的AMG 510的组合处理的NCI-H2122细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图4B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的AMG 510(1nM)不会降低NCI-H2122细胞中的细胞生存力。

图5示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H358细胞中的细胞增殖。

图6A示出用式I的化合物单独(实心圆)和与1nM的阿达格拉西布的组合(实心正方形)处理的NCI-H358细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图6B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的1nM的阿达格拉西布不会降低NCI-H358细胞中的细胞生存力。

图7示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H2122细胞中的细胞增殖。

图8示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的KYSE-410细胞中的细胞增殖。

图9A示出用式I的化合物单独(实心圆，线条1)和与1nM(实心正方形，线条2)、5nM(实心圆，线条3)或10nM(实心正方形，线条4)的阿达格拉西布的组合处理的NCI-H2122细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图9B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的1nM、5nM或10nM的阿达格拉西布不会降低NCI-H2122细胞中的细胞生存力。

图10A示出用载体(实心圆，线条1)、单独的阿达格拉西布(30mg/kg QD，实心三角形，线条2)、单独的10mg/kg/剂量BID的式I的化合物(实心圆，线条3)、30mg/kg QD剂量的式I的化合物(实心三角形，线条4)、式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心圆，线条5)以及式I的化合物(30mg/kg/QD)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心三角形，线条6)处理的KRAS G12C突变的CRC022 PDX肿瘤异种移植物模型的肿瘤体积(mm

图10B示出用载体(实心圆，线条1)、单独的阿达格拉西布(30mg/kg Qd，实心三角形，线条2)、单独的式I的化合物(10mg/kg/剂量BID，实心圆，线条3)、30mg/kg QD的单独的式I的化合物(实心三角形，线条4)、式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心圆，线条5)以及式I的化合物(30mg/kg/QD)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心三角形，线条6)处理的KRAS G12C突变的H2122 CDX肿瘤异种移植物模型的肿瘤体积(mm

图11示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型SW1573中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图12示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H358中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图13示出在KRAS G12C突变食道鳞状细胞癌CDX模型KYSE-410中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图14示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CO-04-0310中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图15示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CR2528中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图16A示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H2122中，用单独的式I的化合物(30mg/kg QD)、单独的索托拉西布(100mg/kg QD)以及式I的化合物(30mg/kg QD)和索托拉西布(100mg/kg QD)的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

图16B示出用载体(实心圆，线条1)、单独的索托拉西布(100mg/kg QD，实心圆，线条2)、单独的式I的化合物(10mg/kg/剂量BID，实心圆，线条3)以及式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和索托拉西布(100mg/kg QD，实心圆，线条4)的组合处理的KEAP1突变且KRASG12C突变的NSCLC CDX模型NCI-H2122肿瘤异种移植物模型中，肿瘤体积相对于治疗周期(天数)的图。

图17示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CRC022中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。

具体实施方式

I.综述

本发明实施方案提供治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：

和具有G12C突变的KRAS的抑制剂。下面的实例表明此种组合的意想不到的协同作用。本文公开的采用式I的化合物或其药学上可接受的盐的联合疗法，与和带有G12C突变的KRAS的抑制剂组合使用的替代性SHP2抑制剂的组合相比，可表现出更好的结果。此外，式I的化合物的SHP2抑制剂和KRAS G12C的抑制剂的组合提供允许使用在单一疗法中单独使用的任一药剂的较低剂量的方法，这可帮助减少潜在的副作用。特别地，联合疗法可在表达G12C突变的癌细胞中为有效的。因此，此类治疗适合使用伴随式诊断来帮助进行恰当的患者群体选择。本领域技术人员将认识到这些和其他优点。

人类KRAS G12C突变的肿瘤在其活性状态(GTP结合)与非活性状态(GDP结合)之间保留了显著的内在核苷酸循环。KRAS G12C抑制剂(G12Ci)通过与KRAS的非活性状态(GDP结合)结合，并通过核苷酸交换防止其再激活，而显示出有希望的活性。RTK及其下游介体蛋白中的一种—SHP2—的负反馈激活用作潜在的适应性抗性机制。SHP2是鸟嘌呤核苷酸循环所需要的，并且其活性促进了KRAS G12C肿瘤的生长。

II.定义

除非另外特别指出，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与这些实施方案所针对领域的普通技术人员通常理解的相同含义。此外，与本文描述的方法或材料类似或等同的任何方法或材料可用于实践本文的实施方案。出于本文公开的实施方案的目的，对以下术语进行定义。

如本文所用，“一个”、“一种”或“该”不仅包括具有一个成员的方面，而且还包括具有多于一个成员的方面。例如，除非上下文另外明确指出，否则单数形式一个”、“一种”或“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个此类细胞，且提及“所述药剂”包括提及本领域技术人员已知的一种或多种药剂等等。

“药学上可接受的赋形剂”是指帮助向对象施用活性剂和由对象吸收的物质。可用于本发明实施方案的药物赋形剂包括但不限于结合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂、包衣、甜味剂、调味剂和着色剂。本领域技术人员将认识到，其他药物赋形剂在本发明实施方案中也是有用的。

“治疗”是指成功治疗或改善损伤、病理或病况的任何迹象，包括任何客观或主观参数，诸如减轻；缓解；症状的减轻或使损伤、病理或病况对患者来说更易耐受；退化或衰退的速率减慢；使退化的终点衰弱更少；改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可基于客观或主观参数；包括身体检查、神经精神检查和/或精神评估的结果。

“施用”指口服施用、作为栓剂施用、局部接触、肠胃外施用、静脉内施用、腹膜内施用、肌内施用、病变内施用、鼻内施用或皮下施用、鞘内施用或向对象植入缓释装置，例如微量渗透泵。在本文公开的联合疗法的上下文中，施用可在不同时间或同时或基本上同时进行。

如本文所用，“共同施用”或“联合施用”是指在施用一种或多种另外的疗法的同时、之前或之后施用本文所述的组合物。本文提供的化合物可单独施用或者可共同施用于患者。共同施用意指包括单独地或组合地(多于一种化合物)同时或顺序施用化合物。共同施用意指包括在同一天、在同一周内和/或在同一个治疗时间表内施用化合物。化合物可具有不同的施用方案，但如果它们在同一个治疗时间表内使用，则仍然为共同施用。例如，帕博西尼(palbociclib)可以在四周的治疗时间表中每天施用一次，持续三周，并且如果其在四周的治疗时间表内的任何时间施用，则式I的化合物与帕博西尼共同施用。

“治疗有效量”是指其施用后产生治疗效果的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，Lieberman,PharmaceuticalDosage Forms(vols.1-3,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology ofPharmaceutical Compounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；和Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第20版，2003,Gennaro编辑,Lippincott,Williams&Wilkins)，所述文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。在致敏细胞中，治疗有效剂量通常可低于非致敏细胞的常规治疗有效剂量。

“抑制”和“抑制剂”是指部分或完全阻断或禁止特定行为或功能的化合物或部分或完全阻断或禁止特定行为或功能的方法。

“癌症”指在哺乳动物(例如，人类)中发现的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、癌和肉瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括脑癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、宫颈癌、胃癌、卵巢癌、肺癌、头癌、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括甲状腺癌、内分泌系统癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肝癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、直肠癌、胃癌和子宫癌。另外的实例包括甲状腺癌、胆管癌、胰腺腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、皮肤黑色素瘤、结肠腺癌、直肠腺癌、胃腺癌、食道癌、头颈部鳞状细胞癌、乳腺浸润性癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑肿瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌或外分泌胰腺肿瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、结直肠癌、乳头状甲状腺癌、肝细胞癌或前列腺癌。

“KRAS G12C抑制剂”通常是指带有G12C突变的任何KRAS抑制剂。此类抑制剂包括本领域已知的共价结合至12-半胱氨酸残基的那些抑制剂，诸如AMG 510(Amgen)和MRTX849(Mirati)。KRAS G12C抑制剂的其他实例在未决的美国临时申请第63/082,221号(2020年9月23日提交的TRICYCLIC PYRIDONES AND PYRIMIDONES)和第63/116,146号(2020年11月19日提交的PYRROLIDINE-FUSED HETEROCYCLES)中公开，这两篇申请通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本段和本文别处列出的抑制剂中的一种或多种以及所并入申请中的那些可从本文阐述的实施方案中的一种或多种中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。

“对象”指患有或易患可通过施用本文提供的药物组合物来治疗的疾病或病况的活生物体。非限制性实例包括人类、其他哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、奶牛、鹿、马以及其他非哺乳动物。在一些实施方案中，患者是人。

III.给药方法

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成药物组合物。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成口服组合物。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次或两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经连续28天的周期施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐以约10mg至约140mg的量一天施用一次。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。

在一些实施方案中，癌症选自肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤和急性髓性白血病。

IV.联合方法

在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：

和KRAS G12C的抑制剂。如本文所公开的，观察到超过对此类联合施用的预期的显著的协同作用。可使用任何合适的抑制剂，包括本文公开的任何抑制剂。实例包括但不限于AMG 510(索托拉西布，LUMAKRAS

在一些实施方案中，本文公开的方法适用于其中存在KRAS G12C突变的任何癌症的治疗。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为卵巢癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，癌症为胆管癌。如本领域技术人员所理解的，肿瘤可从肿瘤的第一或原发部位转移到一个或多个其他身体组织或部位。特别地，对于肿瘤和癌症，诸如乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、肾癌和结直肠癌，已经很好地证明了向中枢神经系统的转移(即，继发性CNS肿瘤)和尤其是向脑的转移(即，脑转移)。因此，本文公开的方法也可用于向其他器官的转移(即，转移性肿瘤生长)的治疗。

在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。不受理论的束缚，癌细胞中MAPK信号传导的抑制可导致PD-L1表达的下调，并增加癌细胞被免疫系统检测到的可能性。此类第三MAPK通路抑制剂可基于MAPK通路中蛋白质的其他突变。在一些实施方案中，可采用任何MAPK通路抑制剂，包括靶向KRAS、NRAS、HRAS、PDGFRA、PDGFRB、MET、FGFR、ALK、ROS1、TRKA、TRKB、TRKC、EGFR、IGF1R、GRB2、SOS、ARAF、BRAF、RAF1、MEK1、MEK2、c-Myc、CDK4、CDK6、CDK2、ERK1和ERK2的那些。示例性的MAPK通路抑制剂包括但不限于阿法替尼(afatinib)、奥希替尼(osimertinib)、埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、达克替尼(dacomitinib)、凡德他尼(vandetanib)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、曲美替尼(trametinib)、贝美替尼(binimetinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、优立替尼(ulixertinib)、LTT462和LY3214996。在一些实施方案中，以上列出的抑制剂中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。

本文公开的方法可与其他化疗剂组合。此类药剂的实例可见于V.T.Devita和S.Hellman(编辑)的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers；所述文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本领域普通技术人员将能够基于药物和所涉及疾病的具体特征来辨别哪些药剂的组合将是有用的。

在一些实施方案中，所述方法可包括共同施用至少一种细胞毒性剂。如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；和毒素，诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体。

细胞毒性剂的实例可选自抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂、LDH-A抑制剂；脂肪酸生物合成的抑制剂；细胞周期信号传导抑制剂；HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂；和癌症代谢抑制剂。

化疗剂包括可用于癌症治疗的化学化合物。化疗剂的实例包括埃罗替尼(

化疗剂还包括(i)用于调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫西芬(包括

化疗剂还包括抗体，诸如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(

化疗剂还包括“EGFR抑制剂”，它指与EGFR或其突变形式结合或以其他方式直接相互作用，并阻止或降低其信号传导活性的化合物，且替代地称为“EGFR拮抗剂”。此类药剂的实例包括结合至EGFR的抗体和小分子。结合至EGFR的抗体的实例包括MAb 579(ATCC CRLHB 8506)、MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb 528(ATCC CRL8509)(参见美国专利第4,943,533号，Mendelsohn等人)及其变体，诸如嵌合体225(C225或西妥昔单抗；

化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括前述段落中提到的EGFR靶向药物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如购自Takeda的TAK165；CP-724,714，ErbB2受体酪氨酸激酶的口服选择性抑制剂(Pfizer和OSI)；双HER抑制剂，诸如EKB-569(购自Wyeth)，其优先结合EGFR但抑制HER2和EGFR二者过度表达的细胞；拉帕替尼(GSK572016；购自Glaxo-SmithKline)，口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI-166(购自Novartis)；泛HER抑制剂诸如卡奈替尼(CI-1033；Pharmacia)；Raf-1抑制剂，诸如购自ISIS Pharmaceuticals的抑制Raf-1信号传导的反义剂ISIS-5132；非HER靶向TK抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(

化疗剂还包括地塞米松、干扰素、秋水仙碱、氯苯氨啶、环孢菌素、两性霉素、甲硝唑、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、氨磷汀、三氧化砷、天冬酰胺酶、活BCG、贝伐单抗、蓓萨罗丁、克拉屈滨、氯法拉滨、达贝泊汀α、地尼白介素、右雷佐生、依泊汀α、厄洛替尼、非格司亭、醋酸组氨瑞林、替伊莫单抗、干扰素α-2a、干扰素α-2b、来那度胺、左旋咪唑、美司钠、甲氧沙林、诺龙、尼拉拉滨、诺非妥莫单抗、奥普瑞白介素、帕利夫明、氨羟二磷酸二钠、培加酶、培加帕加司、培非格司亭、培美曲塞二钠、普卡霉素、卟吩姆钠、奎纳克林、拉布立酶、沙格司亭、替莫唑胺、VM-26、6-TG、托瑞米芬、维甲酸、ATRA、戊柔比星、唑来膦酸盐和唑来磷酸及其药学上可接受的盐。

化疗剂还包括氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、新戊酸替可的松、曲安奈德、去炎松醇、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟轻松、氟轻松醋酸酯、倍他米松、倍他米松磷酸钠、地塞米松、地塞米松磷酸钠、氟考龙、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-戊酸酯、阿可罗米松二丙酸酯、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、氟考龙己酸酯、氟考龙新戊酸酯和醋酸氟泼尼定；免疫选择性抗炎肽(ImSAID)，诸如苯基丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(FEG)及其D-异构体形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics，LLC)；抗风湿药物，诸如咪唑硫嘌呤、环孢素(环孢霉素A)、D-青霉胺、金盐、羟化氯喹、来氟米特米诺环素、柳氮磺胺吡啶、肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断剂诸如依那西普(Enbrel)、英夫利昔单抗(Remicade)、阿达木单抗(Humira)、塞妥珠单抗(Cimzia)、戈利木单抗(Simponi)、白细胞介素1(IL-1)阻断剂诸如阿那白滞素(Kineret)、T细胞共刺激阻断剂如阿巴西普(Orencia)、白细胞介素6(IL-6)阻断剂诸如托珠单抗

化疗剂还包括具有镇痛、退热和抗炎作用的非类固醇抗炎药。NSAID包括环加氧酶的非选择性抑制剂。NSAID的具体实例包括阿司匹林，丙酸衍生物诸如布洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦和萘普生，乙酸衍生物诸如吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、双氯芬酸，烯醇酸衍生物诸如吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、屈昔康、氯诺昔康和伊索昔康，芬那酸衍生物诸如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、托芬那酸和COX-2抑制剂诸如塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞考昔、罗非考昔和伐地考昔。NSAID可用于病况的症状缓解，病况为诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、炎性关节病、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、赖特综合征、急性痛风、痛经、骨转移疼痛、头痛和偏头痛、术后疼痛、炎症和组织损伤引起的轻度至中度疼痛、发热、肠梗阻和肾绞痛。

在某些实施方案中，化疗剂包括但不限于多柔比星、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康、干扰素、铂衍生物、紫杉烷(例如，紫杉醇、多西紫杉醇)、长春花生物碱(例如，长春花碱)、蒽环霉素(例如，多柔比星)、表鬼臼毒素(例如，依托泊苷)、顺铂、mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素)、甲氨蝶呤、放线菌素D、尾海兔素10、秋水仙碱、曲美沙特、氯苯氨啶、环孢霉素、道诺霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂(例如，苯丁酸氮芥)、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑和甲磺酸伊马替尼等。在其他实施方案中，本文公开的化合物与生物药剂诸如贝伐单抗或帕尼单抗联合施用。

在某些实施方案中，本文公开的化合物或其药学上可接受的组合物与抗增殖剂或化疗剂联合施用，所述抗增殖剂或化疗剂选自以下中的任一种或多种：阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化砷、门冬酰胺酶、阿扎胞苷、活BCG、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博莱霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、放线菌素D、达贝泊汀α、道诺霉素、地尼白介素、右丙亚胺、多西紫杉醇、多柔比星(中性)、盐酸多柔比星、丙酸屈他雄酮、表柔比星、依泊汀α、厄洛替尼、雌莫司汀、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥珠单抗、醋酸戈舍瑞林、醋酸组氨瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、甲酰四氢叶酸、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司丁、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、甲氨喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、尼拉拉滨、诺非妥莫单抗、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸盐、培加酶、培门冬酶、聚乙二醇非格司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、卟吩姆钠、甲基苄肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、索拉非尼、链脲菌素、苹果酸舒尼替尼、滑石粉、他莫西芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内酯、硫鸟嘌呤、6-TG、噻替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸、ATRA、乌拉莫司汀、戊柔比星、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸盐或唑来膦酸。

在一些实施方案中，式I的化合物的给药量可以是治疗癌症的任何合适的量。例如，给药量可以是1mg体重至500mg之间的每日剂量。作为另一个实例，每日剂量可以在约20mg至400mg的范围内(或其间的任何子范围或子值，包括端点)。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是10mg至300mg。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是10mg至100mg。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是5mg至50mg。每日剂量可通过在一天内施用单次施用的剂量(例如，QD)或经由多次施用(例如BID、TID、QID等)以提供每日总剂量来实现。在一些实施方案中，KRAS抑制剂的给药量是任何合适的量。例如，它可以是每天1mg至1,000mg范围内的量(或其间的任何子范围或子值，包括端点)。KRAS抑制剂的给药量可与任何给定的KRAS抑制剂的批准给药量相同或更少，并且可以取决于给定的适应症。例如，AMG 510可在500mg至1,000mg的范围内每天施用一次。例如，MRTX849可在500mg至1200mg的范围内每天施用一次。应理解，上面列举的范围中的每一个可包括其中的任何子范围或子点，包括端点在内。应理解，上面列举的范围中的每一个可包括其中的任何子范围或子点，包括端点在内。成年人的常用剂量范围通常为5mg至2g/天。以离散单位提供的片剂或其他剂型可方便地含有一定量的一种或多种化合物，所述化合物在该剂量或其倍数下是有效的，例如，含有5mg至500mg，通常约10mg至200mg的单位。可与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定施用方式而变化。在一些实施方案中，施用为口服。

在一些实施方案中，提供治疗对象的肺癌或食道癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐和AMG 510。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，AMG 510每天施用一次或两次。例如，药物可如本文所述共同施用。

在一些实施方案中，提供治疗对象的肺癌、结直肠癌、食道癌或乳腺癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐和阿达格拉西布。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，阿达格拉西布每天施用一次或两次。例如，药物可如本文所述共同施用。

在一些实施方案中，对象为人。在一些实施方案中，对象是除人以外的哺乳动物，诸如灵长类动物、啮齿类动物、狗、猫或其他小动物。

组合物

本文公开的式I的化合物可以作为盐存在。本发明实施方案包括此类盐，其可以是药学上可接受的盐。适用的盐形式的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐和与氨基酸诸如谷氨酸的盐。这些盐可通过本领域技术人员已知的方法制备。还包括碱加成盐，诸如钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基盐或镁盐或类似的盐。当本发明实施方案的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯酸或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及衍生自有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐。本发明实施方案的某些特定化合物包含碱性和酸性官能团二者，这使得所述化合物能够被转化成碱或酸加成盐。

其他盐包括在本发明实施方案的方法中使用的化合物的酸或碱盐。药学上可接受的盐的说明性实例是无机酸(盐酸、氢溴酸、磷酸等)盐、有机酸(乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸等)盐和季铵(甲基碘、乙基碘等)盐。应当理解，药学上可接受的盐是无毒的。关于合适的药学上可接受的盐的其他信息可见于Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985中，其所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。

药学上可接受的盐包括活性化合物的盐，其用相对无毒的酸或碱制备，这取决于在本文所描述的化合物上发现的特定取代基。当本发明实施方案的化合物含有相对酸性的官能团时，碱加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需碱(纯碱或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基盐或镁盐或类似的盐。当本发明实施方案的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯酸或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及衍生自相对无毒的有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如，Berge等人，"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)，其所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本发明实施方案的某些特定化合物包含碱性和酸性官能团二者，这使得所述化合物能够被转化成碱或酸加成盐。

化合物的中性形式优选通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生。化合物的母体形式在某些物理性质(诸如在极性溶剂中的溶解度)上不同于各种盐形式。

本发明实施方案的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且囊括在本发明实施方案的范围内。本发明实施例的某些化合物可以多种结晶或非晶形式存在。一般来说，所有物理形式对于本发明实施方案所设想的用途都是等同的，并且都旨在落入本发明实施方案的范围内。

本发明实施方案的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；在绝对立体化学方面，氨基酸的对映异构体、外消旋体、非对映异构体、互变异构体、几何异构体、立体异构形式可被定义为(R)-或(S)-或定义为(D)-或(L)-，且单个异构体都囊括在本发明实施方案的范围内。本发明实施方案的化合物不包括本领域已知的太不稳定而无法合成和/或分离的那些化合物。本发明实施方案意味着包括外消旋和光学纯形式的化合物。光学活性(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体可使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。

除非另外说明，否则本发明实施方案的化合物还可在构成此类化合物的原子中的一个或多个处含有非自然比例的原子同位素。例如，本发明实施方案的化合物可用放射性或稳定同位素标记，诸如例如氘(

除了盐形式，本发明实施方案还提供前药形式的化合物。本文所描述的化合物的前药是在生理条件下容易发生化学变化以提供本发明实施方案的化合物的那些化合物。此外，前药可在离体环境中通过化学或生物化学方法转化为本发明实施方案的化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂一起放置在透皮贴剂储库中时，前药可以缓慢转化为本发明实施方案的化合物。

在一些实施方案中，提供了包含式I的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物被配置为口服片剂制剂。

本发明实施方案的化合物可以多种口服、肠胃外和局部剂型制备和施用。口服制剂包括适合患者摄食的片剂、丸剂、粉剂、糖衣丸、胶囊、液体、锭剂、凝胶、糖浆、浆剂、混悬剂等。本发明实施方案的化合物也可通过注射，即静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内注射来施用。此外，本文所描述的化合物可通过吸入，例如鼻内吸入施用。此外，本发明实施方案的化合物可经皮施用。本文公开的式I的化合物也可通过眼内、阴道内和直肠内途径施用，包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂配方(对于类固醇吸入剂的实例，参见Rohatagi,J.Clin.Pharmacol.35:1187-1193,1995；Tjwa,Ann.Allergy AsthmaImmunol.75:107-111,1995)，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。因此，本发明实施方案还提供了药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载剂和/或赋形剂以及式I的化合物或式I的化合物的药学上可接受的盐。

为了从本发明实施方案的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载剂可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒。固体载剂可以是一种或多种物质，其也可以用作稀释剂、调味剂、表面活性剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或封装材料。关于配制和施用技术的细节很好地描述于科学和专利文献中，参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，Maack Publishing Co，Easton PA(“Remington's”)的最新版本，所述文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。

在粉剂中，载剂是细分的固体，其与细分的活性组分混合。在片剂中，活性组分与具有必需粘合性质的载剂和所需附加赋形剂以合适的比例混合，并被压制成所需形状和大小。

粉剂、胶囊和片剂优选地含有5％或10％至70％的活性化合物。合适的载剂是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括活性化合物与作为载剂的囊封材料的配方，从而提供胶囊，其中含有或不含有其他赋形剂的活性组分被载剂包围，从而与其缔合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服施用的固体剂型。

合适的固体赋形剂是碳水化合物或蛋白质填充剂，包括但不限于糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来自玉米、小麦、大米、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素，诸如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及蛋白质诸如明胶和胶原蛋白。如果需要，可加入崩解剂或增溶剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，诸如海藻酸钠。

糖衣丸芯提供有合适的包衣，诸如浓缩糖溶液，其还可含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或糖衣丸包衣中加入染料物或颜料，用于产品识别或表征活性化合物的量(即剂量)。本文公开的药物制剂也可口服使用，例如使用由明胶制成的推入配合胶囊，以及由明胶和包衣诸如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入配合胶囊可含有与填充剂或粘合剂诸如乳糖或淀粉、润滑剂诸如滑石粉或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合的式I的化合物。在软胶囊中，式I的化合物可溶解或悬浮在合适的液体中，诸如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇，有或没有稳定剂。

液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可在聚乙二醇水溶液中配制为溶液。

适于口服使用的水溶液可通过将活性组分溶解在水中并根据需要加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。适用于口服使用的水性悬浮液可通过将细分的活性组分分散在具有以下物质的水中来制备：粘性材料，诸如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶，和分散剂或湿润剂，诸如天然磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七亚乙基氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂诸如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂诸如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。配方可针对渗透压进行调整。

还包括固体形式的制剂，其旨在在使用前不久被转化为用于口服施用的液体形式的制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。除了活性组分之外，这些制剂可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

油悬浮液可通过将式I的化合物悬浮在植物油诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或溶解在矿物油诸如液体石蜡；或者这些的混合物中来配制。油悬浮液可含有增稠剂，诸如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂以提供可口的口服制剂，诸如甘油、山梨醇或蔗糖。这些制剂可通过添加抗氧化剂诸如抗坏血酸来保存。作为可注射的油载体的实例，参见Minto,J.Pharmacol.Exp.Ther.281:93-102,1997，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本文公开的药物制剂也可以是水包油乳液的形式。油相可以是如上所述的植物油或矿物油，或其混合物。合适的乳化剂包括天然树胶，诸如阿拉伯树胶和黄蓍胶，天然磷脂诸如大豆卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯诸如山梨聚糖单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯。乳剂还可含有甜味剂和调味剂，如在糖浆和酏剂的制剂中。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂或着色剂。

本文公开的式I的化合物的药物制剂可以盐的形式提供，并且可与碱形成，即阳离子盐，诸如碱金属和碱土金属盐，诸如钠、锂、钾、钙、镁，以及铵盐诸如铵、三甲基-铵、二乙基胺和三-(羟甲基)-甲基-铵盐。

药物制剂优选为单位剂型。在此类形式中，制剂被细分成含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，诸如包装片剂、胶囊和小瓶或安瓶中的粉剂。此外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可以是适当数量的包装形式的这些药剂中的任一种。

根据特定的应用和活性组分的效力，单位剂量制剂中活性组分的量可从0.1mg至10000mg，更典型地从1.0mg至1000mg，最典型地从10mg至500mg进行变化或调整。如果需要，所述组合物还可含有其他相容治疗剂。

剂量方案还考虑了本领域熟知的药代动力学参数，即吸收率、生物利用度、代谢、清除率等(参见，例如，Hidalgo-Aragones(1996)J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58:611-617；Groning(1996)Pharmazie51:337-341；Fotherby(1996)Contraception 54:59-69；Johnson(1995)J.Pharm.Sci.84:1144-1146；Rohatagi(1995)Pharmazie 50:610-613；Brophy(1983)Eur.J.Clin.Pharmacol.24:103-108；最新的Remington’s,见上文；上述参考文献中的每一者的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用)。现有技术允许临床医生针对每个个体患者、GR和/或MR调节剂以及所治疗的疾病或病况确定剂量方案。

式I的化合物制剂的单次或多次施用可根据患者所需和耐受的剂量和频率来施用。制剂应提供足够量的活性剂以有效治疗疾病状态。因此，在一个实施方案中，用于口服施用式I的化合物的药物制剂的每日剂量为约0.5至约30mg/千克体重/天，包括其中的所有子范围和子值，包括端点在内。在替代的实施方案中，使用的剂量为约1mg至约20mg/kg患者体重/天。与口服施用相比，可使用较低的剂量，特别是当将药物施用于解剖学上隐蔽的部位，诸如脑脊液(CSF)空间，进入血流、体腔或器官的内腔时。局部施用可使用显著更高的剂量。用于制备用于肠胃外施用的包含式I的化合物的制剂的实际方法是本领域技术人员已知的或显而易见的，并且更详细地描述于出版物诸如Remington's中，见上文。还参见Nieman,In"Receptor Mediated Antisteroid Action,"Agarwal等人编辑,De Gruyter,New York(1987)，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。

在一些实施方案中，共同施用包括在第二活性剂的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内(或24小时时间段内的任何子时间范围或子时间值)施用一种活性剂。共同施用包括同时、近似同时(例如，在彼此的约1、5、10、15、20或30分钟(或例如0-30分钟的任何子时间范围或子时间值)内)或以任何顺序依次施用两种活性剂。在一些实施方案中，共同施用可通过共同配制来实现，即制备包含两种活性剂的单一药物组合物。在一些实施方案中，活性剂可单独配制。在一些实施方案中，活性剂和/或辅助剂可彼此连接或缀合。例如，可同时施用至少一个施用剂量的药物。例如，可在彼此的几分钟或小于一小时内施用至少一个施用剂量的药物。例如，可在不同的时间，但在同一天或不同的几天施用至少一个施用剂量的药物。

在将包含本文公开的式I的化合物的药物组合物在一种或多种可接受的载剂中配制后，可将其放置在合适的容器中并贴上标签用于指定病况的治疗。对于式I的化合物的施用，此类标签将包括例如关于施用量、施用频率和施用方法的说明书。

药物给药量

当然，本文化合物的剂量方案将根据已知因素而变化，诸如特定药剂的药效学特征及其施用方式和途径；受体的物种、年龄、性别、健康状况、医疗条件和体重；症状的性质和程度；同期治疗的种类；治疗的频率；施用途径、患者的肾功能和肝功能以及所需效果。临床医师可确定预防、对抗或阻止疾病或病症发展所需的药物的有效量并对此开处方。

作为一般指导，当用于指示效果时，每种活性成分的每日口服剂量将在约0.001至约1000mg/kg体重之间，优选地在约0.01至约100mg/kg体重/天之间，并且最优选地在约0.1至约20mg/kg/天之间。在一些实施方案中，式(I)的化合物可以约10mg/天至约200mg/天的剂量施用。在一些实施方案中，式(I)的化合物可以约10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天、110mg/天、120mg/天、130mg/天、140mg/天、150mg/天、160mg/天、170mg/天、180mg/天、190mg/天或200mg/天的剂量施用。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。

取决于患者的病况和预期的治疗效果，治疗剂的给药频率可以变化，例如从每天一次到每天六次。也就是说，给药频率可以是QD，即每天一次，BID，即每天两次；TID，即每天三次；QID，即每天四次；每天五次，或者每天六次。在另一个实施方案中，给药频率可以是BIW，即每周两次，TIW，即一周三次，或QIW，即一周四次。

取决于患者的病况和预期的治疗效果，治疗周期可具有不施用治疗剂的一段时间。如本文所用，“间隔施用”是指治疗剂施用后紧接着为空白日或空白周。例如，治疗周期可以是3周长，其包括2周治疗剂的给药，随后1周不施用治疗剂。在一些实施方案中，治疗周期为4周长，包括3周给药，随后1周不施用治疗剂。

如本文所用，术语“治疗周期”是指施用治疗剂的预定时间段。通常，在每个治疗周期结束时对患者进行检查，以评估疗法的效果。

在一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约3或更多天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约3天至约60天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约5天至约50天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约7天至约28天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有28天。在一个实施方案中，治疗周期具有约29天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约30天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约31天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约一个月的治疗周期。在另一个实施方案中，治疗周期是从3周到8周的任何时间长度。在另一个实施方案中，治疗周期是从3周到6周的任何时间长度。在又一个实施方案中，治疗周期为3周。在另一个实施方案中，治疗周期为一个月。在另一个实施方案中，治疗周期为4周。在另一个实施方案中，治疗周期为5周。在另一个实施方案中，治疗周期为6周。在另一个实施方案中，治疗周期为7周。在另一个实施方案中，治疗周期为8周。治疗周期的持续时间可包括所述范围内的任何值或子范围，包括端点。

如本文所用，术语“共同施用”或“共施用”是指以协同方式一起施用(a)另外的治疗剂和(b)式(I)的化合物或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。例如，共同施用可以是同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。

在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案是历经连续28天的周期每天一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物的每天一次给药方案可以是但不限于20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天。式(I)的化合物可施用20mg至60mg的任何剂量，一天一次。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。

在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案是历经连续28天的周期每天两次。在一些实施方案中，式(I)的化合物的每天两次给药方案可以是但不限于10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天。式(I)的化合物可施用20mg至80mg的任何剂量，一天两次。在一些实施方案中，式(I)的化合物可施用10mg/天至100mg/天的任何剂量。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。

在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在6周的时间段内，每天一次，每天20mg至60mg的任何剂量，持续两周，然后中断一周(例如2周给药，1周停止)。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在6周的时间段内，每天两次，10mg至100mg的任何剂量，每天两次，持续两周，然后中断一周(例如2周给药，1周停止)。

在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在8周的时间段内，每天一次，每天20mg至60mg的任何剂量，持续三周，然后中断一周(例如3周给药，1周停止)。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在8周的时间段内，每天两次，10mg至100mg的任何剂量，一天两次，持续三周，然后中断一周(例如8周给药，1周停止)。

在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在每周的第1天和第2天每天两次，持续8周。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药量可以是，但不限于10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。

在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。

当一周多次施用式I的化合物时，剂量可在该周内的任一天或几天的组合中施用。例如，每周施用三次可以包括在以下时间施用：第1、第3天和第5天；第1天、第2天和第3天；第1天、第3天和第5天；等等。每周施用两天可以包括在以下时间施用：第1天和第2天；第1天和第3天；第1天和第4天；第1天和第5天；第1天和第6天；第1天和第7天；等等。

癌症

在一些实施方案中，癌症具有G12C KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12DKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12R KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12SKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12V KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12WKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G13D KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有H95DKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有H95Q KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有H95RKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有Q61H KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有G12DKRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有Q61K KRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有Q61RNRAS突变。在一些实施方案中，癌症具有R68S KRAS突变。

在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12C突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12D突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12S突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12V突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G13D突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS Q61H突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS Q61K突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRASG12R突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12W突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS H95D突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS H95Q突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS H95R突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS G12D突变NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC为KRAS R68S突变NSCLC。

在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12C NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12D NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12S NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12V NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G13DNSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的Q61H NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的Q61K NSCLC。在一些实施方案中，癌症为NRAS治疗的Q61R NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12R NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12WNSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的H95D NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的H95Q NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的H95R NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的G12D NSCLC。在一些实施方案中，癌症为经KRAS治疗的R68SNSCLC。

在一些实施方案中，癌症为结直肠癌(CRC)。在一些实施方案中，CRC为KRAS突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS G12C突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS G12D突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS G12S突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS G12V突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS G13D突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRASQ61H突变CRC。在一些实施方案中，CRC为KRAS Q61K突变CRC。在一些实施方案中，CRC为NRAS突变CRC。在一些实施方案中，CRC为NRAS Q61R突变CRC。

在一些实施方案中，癌症具有一种或多种获得性突变。在一些实施方案中，获得性突变源于一线治疗。在一些实施方案中，一线治疗为KRAS抑制剂。在一些实施例中，KRAS抑制剂为KRAS G12C抑制剂。在一些实施方案中，KRAS G12C抑制剂为阿达格拉西布。在一些实施方案中，KRAS G12C抑制剂为索托拉西布。在一些实施方案中，癌症为实体瘤癌。在一些实施方案中，癌症为NSCLC。

在一些实施方案中，获得性突变为获得性KRAS突变。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12C。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12D。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12R。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12V。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12W。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G13D。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS H95D。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS H95D。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS H95Q。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS H95R。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS Q61H。在一些实施方案中，获得性突变为KRAS R68S。

在一些实施方案中，获得性突变为获得性MAPK通路突变。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为MAP2K1 K57N。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为MAP2K1 K57T。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为CCDC6-RET。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为RITI P128L。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为PTEN G209V。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为BRAF V600E。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为MAP2K1 199_K104del。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为MAP2K1 K57N。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为EML4-ALK。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为EGFR A289A。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为FGFR3-TACC3。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为AKAP9-BRAF。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为RAF1-CCDC176。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为RAF1-TRAK1。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为NRAS Q61K。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为MAP2K1 E102_1103DEL。在一些实施方案中，获得性MAPK通路突变为NRF1-BRAF。

在一些实施方案中，获得性突变为KRAS G12C再激活突变。在一些实施方案中，KRAS G12C再激活突变为RKRAS G12C基因扩增。在一些实施方案中，KRAS G12C再激活突变为NF1 R22637(LoF)。

在一些实施方案中，获得性突变为非G12C激活KRAS突变。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS G12D。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS G12R。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS G12V。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS G12W。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS G13D。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRAS Q61H。在一些实施方案中，非G12C激活KRAS突变为KRASQ61K。

在一些实施方案中，获得性突变为空间阻碍KRAS G12C突变。在一些实施方案中，空间阻碍KRAS G12C突变为KRAS R68S。在一些实施方案中，空间阻碍KRAS G12C突变为KRASH95D。在一些实施方案中，空间阻碍KRAS G12C突变为KRAS H95Q。在一些实施方案中，空间阻碍KRAS G12C突变为KRAS H95R。在一些实施方案中，空间阻碍KRAS G12C突变为KRASY96C。

在一些实施方案中，获得性突变为RTK激活突变。在一些实施方案中，RTK激活突变为EGFR A289V。在一些实施方案中，RTK激活突变为RET M918T。在一些实施方案中，RTK激活突变为MET基因扩增。在一些实施方案中，RTK激活突变为EML-ALK。在一些实施方案中，RTK激活突变为CCDC6-RET。在一些实施方案中，RTK激活突变为FGFR3-TACC3。

在一些实施方案中，获得性突变为下游RAS/MAPK激活突变。在一些实施方案中，下游RAS/MAPK激活突变为BRAF V600E。在一些实施方案中，下游RAS/MAPK激活突变为MAP2KI99_K104del。在一些实施方案中，下游RAS/MAPK激活突变为MAP2K1 I99_K104del。在一些实施方案中，下游RAS/MAPK激活突变为MAP2K1 E102_I103del。在一些实施方案中，下游RAS/MAPK激活突变为RAF融合。

在一些实施方案中，获得性突变为平行通路激活突变。在一些实施方案中，平行通路激活突变为PIK3CA H1047R。在一些实施方案中，平行通路激活突变为PIK3R1 S361fs。在一些实施方案中，平行通路激活突变为PTEN N48K。在一些实施方案中，平行通路激活突变为PTEN G209V。在一些实施方案中，平行通路激活突变为RIT1 P128L。

试剂盒和产品

一些实施方案涉及包含式I的化合物和/或至少一种KRAS G12C抑制剂的试剂盒和产品。例如，试剂盒或产品可包括含有式I的化合物的包装或容器。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合单独提供的KRAS G12C抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。

在一些方面，试剂盒或产品可包含式I的化合物和至少一种KRAS G12C抑制剂。在一些实施方案中，KRAS G12C抑制剂为例如AMG 510。在一些实施方案中，KRAS G12C抑制剂为例如MRTX849。此类试剂盒可包括一个或多个容器或包装，其将一种或两种组合药物一起包含在单个容器和/或包装中，或者包含在单独的包装/容器中。在一些情况下，这两种药物分开包裹，但包含在单个包装、容器或盒子中。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合KRAS G12C抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。

实施例

一般程序

所有的起始材料和溶剂都是从商业来源获得的，或者是根据文献引文制备的。

实施例1

本实施例证明式I的化合物与KRAS G12C抑制剂的协同组合。

细胞增殖测定：将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上，并用单独的式I的化合物或式I的化合物和固定浓度的AMG 510进行处理。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Prism GraphPad绘制图表。

联合细胞增殖测定：将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用Tecan D300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的AMG 510处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型产生组合数据。组合协同作用在结果表中用正数表示。负数代表组合的拮抗作用。

这些实验的结果示于图1至4中，并在下文进一步讨论。

图1示出表明式I的化合物和AMG 510协同组合以抑制NCI-H358细胞中KRAS G12C突变的细胞增殖的数据。

图2A示出用式I的化合物单独和与AMG 510的组合处理的NCI-H358细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用式I的化合物单独和与AMG 510的组合处理的NCI-H358细胞的表列IC50数据。

图2B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的AMG 510(1nM)不会降低NCI-H358细胞中的细胞生存力。

图3示出表明式I的化合物和AMG 510协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H2122中的细胞增殖的数据。

图4A示出用式I的化合物单独和与各种浓度的AMG 510的组合处理的NCI-H2122细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图4B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的AMG 510(1nM)不会降低NCI-H2122细胞中的细胞生存力。

总之，该数据集表明，式I的化合物和KRAS G12C抑制剂的组合提供对KRAS G12C突变的癌细胞生存力的协同抑制。式I的化合物的活性可在带有KRAS G12C突变的细胞中通过与KRAS G12C抑制剂组合来协同增强。

实施例2

这些实验的结果示于图7至10中，并在下文进一步讨论。

图5示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H358细胞中的细胞增殖。

图6A示出用式I的化合物单独(实心圆)和与1nM的阿达格拉西布的组合(实心正方形)处理的NCI-H358细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图6B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的1nM的阿达格拉西布不会降低NCI-H358细胞中的细胞生存力。

表1.NCI-H358细胞中的CellTiter-Glo IC50的总结。

图7示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的NCI-H2122细胞中的细胞增殖。

图8示出HSA协同作用和拮抗作用的矩阵表示，表明式I的化合物和阿达格拉西布协同组合以抑制KRAS G12C突变的KYSE-410细胞中的细胞增殖。

图9A示出用式I的化合物单独(实心圆，线条1)和与1nM(实心正方形，线条2)、5nM(实心圆，线条3)或10nM(实心正方形，线条4)的阿达格拉西布的组合处理的NCI-H2122细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。

图9B示出CTG活性百分比的条形图，表明单独的1nM、5nM或10nM的阿达格拉西布不会降低NCI-H2122细胞中的细胞生存力。

表2.NCI-H2122细胞中的CellTiter-Glo IC50的总结。

图10A示出用载体(实心圆，线条1)、单独的阿达格拉西布(30mg/kg QD，实心三角形，线条2)、单独的10mg/kg/剂量BID的式I的化合物(实心圆，线条3)、30mg/kg QD剂量的式I的化合物(实心三角形，线条4)、式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心圆，线条5)以及式I的化合物(30mg/kg/QD)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心三角形，线条6)处理的KRAS G12C突变的CRC022 PDX肿瘤异种移植物模型的肿瘤体积(mm

图10B示出用载体(实心圆，线条1)、单独的阿达格拉西布(30mg/kg Qd，实心三角形，线条2)、单独的式I的化合物(10mg/kg/剂量BID，实心圆，线条3)、30mg/kg QD的单独的式I的化合物(实心三角形，线条4)、式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心圆，线条5)以及式I的化合物(30mg/kg/QD)和30mg/kg QD的阿达格拉西布的组合(实心三角形，线条6)处理的KRAS G12C突变的H2122 CDX肿瘤异种移植物模型的肿瘤体积(mm

实施例3：式I的化合物和阿达格拉西布的组合对KRAS

细胞系获自ATCC(NCI-H358#CRL-5807和NCI-H2122#CRL-5985)。KYSE-410获自Millipore Sigma(#94072023)。将细胞在含有10％FBS和青霉素/链霉素(Pencillion/Stremtomycin)的RPMI中培养，并保持在37℃/5％CO

细胞增殖测定：将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用Tecan D300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的阿达格拉西布处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且通过Combenefit软件产生组合数据。

将阿达格拉西布敏感细胞NCI-H358分装到96孔板中。过夜孵育后，通过使用TecanD300e数字分配器组合矩阵方案，将式I的化合物和阿达格拉西布加入细胞中。孵育5天后进行CellTiter-Glo测定，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型计算组合协同作用。数据用颜色代码的面积和强度表示，其中协同作用用蓝色表示，累加作用用绿色表示，并且拮抗作用用红色表示。组合数据显示对NSCLC KRAS

通过细胞生存力测定对组合进行研究。将NCI-H358细胞分装到96孔板上。过夜孵育后，用单独的式I的化合物或式I的化合物与固定最终浓度的阿达格拉西布(1nM)的组合处理细胞，并且5天后进行CellTiter-Glo测定。单独的阿达格拉西布(1nM)处理没有显示出对NCI-H358中的细胞生存力的抑制(图6A)。然而，固定浓度的阿达格拉西布(1nM)增加了NCI-H358细胞中式I的化合物的敏感性(图6A)。在1nM最终浓度的阿达格拉西布治疗情况下，式I的化合物的IC50有约3×降低。

为了使对KRAS

该组合通过后续的生存力测定得到证实。将NCI-H2122细胞分装到96孔板中。过夜孵育后，用单独的式I的化合物或式I的化合物和固定最终浓度的阿达格拉西布(1、5和10nM)的组合处理细胞，并且5天后进行CellTiter-Glo测定。单独的阿达格拉西布处理显示出对NCI-H2122中的细胞生存力小于10％的抑制(图9B)。然而，固定浓度的阿达格拉西布在NCI-H2122细胞中剂量依赖性地增加了式I的化合物的敏感性(图9A)。在阿达格拉西布处理情况下，式I的化合物的IC50剂量依赖性地从2785nM降低到190nM。总的来说，数据表明式I的化合物和阿达格拉西布的组合在KRAS

实施例4–靶向患有晚期非小细胞肺癌的患者的丝裂原激活的蛋白激酶通路的药剂的1b/2期研究

这项研究将包括：1)在患有晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的研究参与者中评估当与其他癌症疗法组合时，式I的化合物的逐步增加剂量的安全性和耐受性；2)确定与其他癌症疗法组合时式I的化合物的最大耐受剂量(MTD)和/或推荐剂量(RD)；3)评估式I的化合物与其他癌症疗法组合的抗肿瘤活性；和4)当联合施用时，式I的化合物和其他癌症疗法的药代动力学(PK)特征的评估。

1b/2期研究将包括评估患有晚期NSCLC的研究参与者中与其他癌症疗法组合的式I的化合物的安全性、耐受性和抗肿瘤活性。该研究将包括剂量递增队列，其中对患有拥有Kirsten大鼠肉瘤G12C突变(KRAS G12Cm)的晚期NSCLC的研究参与者施用式I的化合物加索托拉西布。对患有KRAS G12Cm NSCLC的研究参与者口服联合施用式I的化合物和索托拉西布，给药剂量依次递增，直至出现不可接受的毒性、疾病进展或撤销同意。随后将进行剂量扩大，并且将评估从患有晚期EGFRm或KRAS G12Cm NSCLC的研究参与者的相应剂量递增队列中鉴定的以RD口服施用的式I的化合物。

纳入标准

年龄≥18岁.

愿意并能够给出书面知情同意书。

患有经组织学或细胞学确诊的NSCLC，存在对EGFR抑制剂敏感的EGFR突变或KRASG12C突变。

根据实体瘤疗效评价标准(RECIST)1.1版中的可测量疾病

充足的骨髓和器官功能。具有0或1的东部肿瘤协作组(ECOG)表现状态：

·0级：完全活动，能够不受限制地进行所有病前表现；

·1级：身体剧烈活动受限，但可以走动，并且能够从事轻度或久坐性质的工作，例如轻度家务劳动、办公室工作。

愿意遵守所有协议要求的访问、评估和程序。

能够吞咽口服药物。

排除标准

并行采用针对NSCLC的任何系统性抗癌疗法进行治疗，包括任何批准的或研究中的药剂。

对于患有KRAS G12Cm NSCLC的参与者：接受过SHP2、ERK或KRAS G12C抑制剂的既往疗法(取决于考虑招募的队列)。

招募7天内进行姑息性放疗。

对用索托拉西布治疗有不可接受的毒性史。

招募28天内有大型手术。

招募时，既往系统疗法的未解决毒性大于NCI不良事件通用术语标准(CTCAE)1级，但不认为有安全风险的毒性除外(例如，脱发、白癜风和既往化疗导致的2级神经病变)。

第一剂量前≤5年的其他恶性肿瘤病史，除了在治愈目的的治疗后无病>2年或患有原位癌的患者。

有症状和不稳定的脑转移瘤或脊髓压迫，除了已完成确定性疗法(手术或放疗)、不使用类固醇并且在完成确定性疗法和类固醇后至少2周内具有稳定的神经病学状态的患者。

需要类固醇治疗的间质性肺病(ILD)、药物性ILD或放射性肺炎的病史或临床活动性。

心血管功能受损或有临床意义的心血管疾病。

视网膜色素上皮脱离(RPED)、中心性浆液性视网膜病变、视网膜静脉阻塞(RVO)或RPED或RVO的诱发因素的病史或当前证据。

任何严重或未受控制的系统性疾病的证据，或任何其他导致患者不适合参与本研究的重大临床病症或实验室发现的证据。

孕妇或哺乳期妇女。

根据局部标签，索托拉西布的使用禁忌。

实施例5–在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型SW1573中，对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式1的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个27天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式1的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％/50％w/w PEG400/PG的载体中制备组合药剂索托拉西布，每周用HCl酸化，并在2-8℃下储存。

雌性Balb/c裸鼠购自维通利华(Vital River)(中国北京)。小鼠在植入时为6-8周龄。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的动物室中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign(中国上海)机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。此外，在GenenDesign进行这项研究的所有部分并且遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。

CDX的制备

SW1573是一种拥有KRAS G12C突变的人类NSCLC细胞系。该细胞系购自ATCC。早期传代的SW1573细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)的L-15培养基中，在37℃下，在空气中5％CO

小鼠在皮下植入前用异氟烷麻醉。使用注射器将含有5×10

治疗

荷瘤小鼠在随机分组当天接受治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照、10mg/kg/剂量BID和30mg/kg QD的式I的化合物单一疗法以及30和100mg/kgQD的索托拉西布单一疗法来对小鼠给药。也在式I的化合物+索托拉西布的两个联合治疗组中对小鼠进行治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物和100mg/kg QD的索托拉西布的组合给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和100mg/kg QD的索托拉西布的组合给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。当满足研究方案中定义的终止标准时，研究终止。

结果

图11示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型SW1573中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图11所示，在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型SW1573中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例6：在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H358中，对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。在整个28天施用中，在100mM乙酸缓冲液的载体中制备式I的化合物的测试制品，并在环境条件下储存。在整个28天施用中，在50％PEG400/50％PG的载体中制备组合药剂索托拉西布，用HCl酸化，并在2-8℃下储存。

雌性裸(Nu/nu)小鼠购自Jackson Laboratory(US)。小鼠在植入时为6-8周龄。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的动物室中，并使其适应新环境3天。

CDX的制备

NCI-H358是一种拥有KRAS G12C突变的人类NSCLC细胞系。该细胞系购自ATCC。早期传代的NCI-H358细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基中，在37℃下，在空气中5％CO

小鼠在皮下植入前用异氟烷麻醉。使用注射器将含有5×10

治疗

随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体、10mg/kg/剂量BID和30mg/kg QD的式I的化合物单一疗法以及10mg/kg QD的索托拉西布单一疗法来对小鼠给药。也在式I的化合物+索托拉西布的两个联合治疗组中对小鼠进行治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物和10mg/kg QD的索托拉西布给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和10mg/kg QD的索托拉西布给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合治疗组中，首先给药式I的化合物，然后一小时后给药索托拉西布。当满足研究方案中定义的终止标准时，研究终止。

结果

图12示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H358中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图12所示，在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H358中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例7：在KRAS G12C突变食道鳞状细胞癌CDX模型KYSE-410中，对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式1+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个21天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％w/w聚乙二醇400(PEG400)+50％w/w丙二醇(PG)的载体中制备组合药剂索托拉西布，并在2-8℃下储存。

雌性裸(Nu/nu)小鼠购自Jackson Laboratory(US)。小鼠在植入时为6-7周龄。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的动物室中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据Explora BioLabs(San Diego,CA)机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。此外，在Explora BioLabs进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。

CDX的制备

KYSE-410是拥有KRAS G12C突变的人类食道鳞状细胞癌细胞系，购自ATCC，并在含有RPMI-1640加10％胎牛血清(FBS)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO

小鼠在皮下植入前用异氟烷麻醉。使用注射器将含有4×10

治疗

随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg/剂量BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的式I的化合物或100mg/kgQD的索托拉西布对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和索托拉西布的联合治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物给药；两个联合组均用100mg/kg QD的索托拉西布给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，索托拉西布在进行式I的化合物BID给药或QD给药的第一剂量后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第21天终止。

结果

图13示出在KRAS G12C突变食道鳞状细胞癌CDX模型KYSE-410中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图13所示，在KRAS G12C突变食道鳞状细胞癌CDX模型KYSE-410中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例8：在KRAS G12C突变CRC PDX模型CO-04-0310中，对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％w/w聚乙二醇400(PEG400)+50％w/w丙二醇(PG)的载体中制备组合药剂索托拉西布，并在2-8℃下储存。

雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司(Beijing VitalRiver Laboratory Animal Technology Co.,Ltd.)。小鼠在植入时为6-8周龄。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。

PDX的制备

CO-04-0310 PDX模型是在无锡AppTec针对临床前疗效研究而建立的。该PDX模型衍生自一名82岁中国女性CRC患者。通过全外显子组测序和PCR测序证实了PDX模型CO-04-0310中的KRAS G12C突变。用适当的外科擦洗液和酒精在右侧胁腹上清洁小鼠皮肤。使用18g套管针将从PDX模型收获的肿瘤碎片(15-30mm

治疗

随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg/剂量BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和30mg/kg QD的索托拉西布对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和索托拉西布的联合治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物和30mg/kg QD的索托拉西布给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和30mg/kg QD的索托拉西布给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。

结果

图14示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CO-04-0310中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图14所示，在KRAS G12C突变CRC PDX模型CO-04-0310中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例9：在KRAS G12C突变CRC PDX模型CR2528中，对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个24天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％w/w聚乙二醇400(PEG400)+50％w/w丙二醇(PG)的载体中制备组合药剂索托拉西布，并在2-8℃下储存。

雌性Balb/c裸鼠购自斯贝福(北京)实验动物技术有限公司(SPF(Beijing)Laboratory Animal Technology Co,Ltd.)(中国北京)。小鼠在植入时为7-9周龄。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据Crown Bioscience(中国北京)机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在Crown Bioscience(中国北京)进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)

PDX的制备

CR2528 PDX模型是在Crown Bio针对临床前疗效研究而建立的。该PDX模型衍生自一名73岁中国男性CRC患者。通过RNA测序和外显子组测序二者均证实了PDX模型CR2528中的KRAS G12C突变。用适当的外科擦洗液和碘伏在右侧胁腹上清洁小鼠皮肤。使用18g套管针将从PDX模型收获的肿瘤碎片(直径2-3mm)皮下植入雌性Balb/c裸鼠的右侧胁腹。当平均肿瘤大小达到204mm

治疗

随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、30mg/kg QD的索托拉西布、10mg/kg/剂量BID的单独的式I的化合物和30mg/kg QD的单独的式I的化合物对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和索托拉西布的联合治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物和30mg/kg QD的索托拉西布给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和30mg/kg QD的索托拉西布给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，索托拉西布在进行式I的化合物QD剂量或第一BID剂量后一小时给药。

结果

图15示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CR2528中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图15所示，在KRAS G12C突变CRC PDX模型CR2528中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例10：在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H2122中对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个14天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％w/w聚乙二醇400(PEG400)+50％w/w丙二醇(PG)的载体中制备组合药剂索托拉西布，并在2-8℃下储存。

雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。小鼠在植入时为6-8周龄。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案和指南进行。动物设施和程序是根据实验动物护理和使用指南(NRC，2011)的标准操作，并得到了实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的认可。具体来说，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都符合IACUC审查和批准的研究方案以及适用的标准操作程序(SOP)。

CDX的制备

NCI-H2122是拥有KRAS

治疗

随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液或100mg/kg QD的索托拉西布或30mg/kg QD的式I的化合物的单一疗法治疗对小鼠给药。另一组接受30mg/kg QD的式I的化合物和100mg/kg QD的索托拉西布的联合治疗。

结果

图16A示出在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H2122中，用单独的式I的化合物(30mg/kg QD)、单独的索托拉西布(100mg/kg QD)以及式I的化合物(30mg/kg QD)和索托拉西布(100mg/kg QD)的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。图16B示出用载体(实心圆，线条1)、单独的索托拉西布(100mg/kg QD，实心圆，线条2)、单独的式I的化合物(10mg/kg/剂量BID，实心圆，线条3)以及式I的化合物(10mg/kg/剂量BID)和索托拉西布(100mg/kgQD，实心圆，线条4)的组合处理的KEAP1突变且KRAS G12C突变的NSCLC CDX模型NCI-H2122肿瘤异种移植物模型中，肿瘤体积相对于治疗周期的图。

结论

如图16A和图16B所示，在KRAS G12C突变NSCLC CDX模型NCI-H2122中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

实施例11：在KRAS G12C突变CRC PDX模型CRC022中对单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物+索托拉西布组合的体内研究

材料和方法

在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中制备，并在环境条件下储存。在50％w/w聚乙二醇400(PEG400)+50％w/w丙二醇(PG)的载体中制备组合药剂索托拉西布，并在2-8℃下储存。

雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。小鼠在植入时为6-8周龄。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案和指南进行。动物设施和程序是根据实验动物护理和使用指南(NRC，2011)的标准操作，并得到了实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的认可。具体来说，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都符合IACUC审查和批准的研究方案以及适用的标准操作程序(SOP)。

PDX的制备

CRC022 PDX模型是在GenenDesign(中国上海)针对临床前疗效研究而建立的。该PDX模型衍生自一名49岁中国女性CRC患者。通过全外显子组测序和PCR测序证实了PDX模型CRC022中的KRAS G12C突变。将从PDX模型收获的肿瘤碎片皮下植入雌性Balb/c裸鼠的右侧胁腹。用异氟烷对小鼠进行麻醉，并且在整个植入程序中保持麻醉。用适当的外科擦洗液和酒精在右侧胁腹上清洁小鼠皮肤。使用套管针的尖端进行小的皮肤切口，并且通过用10-12g套管针的探针进行钝性解剖，从而沿着右侧胸壁形成1.5cm的皮下口袋。将肿瘤碎片(15-30mm

治疗

随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、30mg/kg QD的式I的化合物单一疗法和100mg/kg QD的索托拉西布单一疗法对小鼠给药。另一组接受30mg/kg QD的式I的化合物和100mg/kg QD的索托拉西布的联合治疗。每种化合物的给药体积为5mL/kg。在联合组中，索托拉西布在进行式I的化合物QD给药后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。

结果

图17示出在KRAS G12C突变CRC PDX模型CRC022中，用单独的式I的化合物、单独的索托拉西布以及式I的化合物和索托拉西布的组合的方案治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。

结论

如图17所示，在KRAS G12C突变CRC PDX模型CRC022中，相对于各自的单一疗法，式I的化合物和索托拉西布的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。

尽管为清楚理解的目的，已经通过图示和实施例的方式详细描述了前述实施方案，但是本领域技术人员将会理解，在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和修改。此外，本文提供的每篇参考文献都通过引用整体并入，如同每篇参考文献都通过引用单独并入一样。当本申请与本文提供的参考文献之间存在冲突时，以本申请为准。