组合技术

本发明公开了一种DNA和RNA共建库的方法及试剂盒，涉及生物技术领域。所述方法，包括以下步骤：1)RNA片段化及DNA的变性；2)一链cDNA的合成及链置换反应；3)DNA 3'接头连接；4)文库扩增。所述试剂盒包含：工具酶、工具酶反应体系、接头体系、PCR反应体系以及Low‑EDTA‑TE。本发明实现对DNA/RNA样本同时完成测序的建库，打破了常规的建库手段，规避了必须DNA和RNA分别建库的繁琐操作，有效的节省成本。

本发明公开了一种检测ctDNA中肿瘤特异基因的变异和甲基化的方法，该方法可以在一份样本中同时检测ctDNA中的肿瘤特异基因的变异(包括点突变、插入缺失突变、HBV整合等多种突变形式)和/或甲基化的方法，不仅样本量需求低，而且该方法制备的MC文库可以支持10‑20次的后续检测，每次检测的结果都可以代表全部原始ctDNA标本的突变状况及酶切位点覆盖区域的甲基化修饰情况，且不会造成灵敏度和特异性的降低。本发明对肿瘤早期筛查、病情追踪、疗效评估、预后预测等具有重要的临床意义，有重大的应用价值。

本发明提供了一种RNA文库的构建方法。该构建方法包括：采用逆转录引物对片段化的RNA进行逆转录，得到第一链cDNA，逆转录引物从5’端至3’端依次包括：已知序列和随机序列；采用环化酶将第一链cDNA进行单链接头连接得到连接产物；对连接产物进行PCR扩增得到RNA文库。通过在对RNA逆转录合成第一链cDNA的同时即引入了第一测序引物序列，随后直接通过环化酶进行单链接头连接引入第二测序引物序列，最后根据第一测序引物序列和第二测序引物序列设计合适的扩增引物对接头连接产物进行PCR扩增，即可得到RNA文库。该方法既无需第二链cDNA的合成，也无需其他消化过程直接实现链特异性，操作简单，节省工时。

本发明提供了高通量的化合物库构建和筛选方法以及反应装置。具体地，本发明的方法包括：(a)提供一反应器，所述的反应器包括n个各自独立并可寻址的反应腔室；(b)在所述的n个反应腔室中，进行m个各自独立的合成反应，从而构建获得一化合物库；以及(c)在进行了所述合成反应的反应腔室中，进行活性测试。在本发明中，可以在同一反应体系中，完成化合物的制备以及筛选过程，由于本发明的反应均为几乎定量生成产物，因此产物无需分离即直接可用于酶学乃至细胞学的活性测试实验。

本发明公开了靶向BRD4蛋白的抗肿瘤多肽及其应用，本发明的微阵列筛选方法，具有原料用量小、通量高、误差小的优点。基于高通量筛选的靶向BRD4‑BD1/BRD4‑BD2结构域的多肽具有高亲和力、高选择性的优点，以及这些多肽在检测或治疗癌症中的作用。所述多肽具有亲和力高、特异性强的特点。而且，本发明首创了运用“一珠一肽”技术筛选BRD4蛋白的高亲和力和高选择性的多肽序列。本发明可以快速建立一个没有任何“偏好性”且种类多样性的多肽化合物库，克服了传统筛选方法步骤繁琐、筛选实验速度慢和效率低的缺点。