胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法

技术领域

本发明属于化学分析与检测技术领域，具体地，涉及一种胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法。

背景技术

胶体果胶铋为果胶与铋组成的复合物，在水中形成稳定的胶体分散系，可用作胃粘膜保护药。胶体果胶铋是一种生物大分子铋制剂，其作用机理是服用后在人体胃酸作用下在胃粘膜表面形成胶体保护性薄膜，并刺激胃黏膜上皮细胞分泌黏液，增加对黏膜的保护作用，因此对消化性溃疡和慢性胃炎有较好的治疗作用。

原料药和药物制剂要求品质高，杂质含量低，以确保安全性、稳定性好，因此，在药物的开发生产过程中尤为需要关注主要杂质的准确含量。在胶体果胶铋合成工艺中，以硝酸铋和果胶作为起始物料，此两种起始物料均会引入硝酸盐而残留在成品中。众所周知，硝酸盐超标可能会对人体造成慢性中毒，且硝酸盐在人体内会转化为亚硝酸盐，而亚硝酸盐为强致癌物质，长期摄入会增加患癌的风险，从而带来制剂安全性问题。

胶体果胶铋质量标准收载于中国药典中，其质量标准中硝酸盐检测法为显色法，仅能对含量结果进行定性分析而不能准确定量。药典收载方法的检测原理是：在酸性溶液中，锌粉将硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与α-萘胺起耦合反应，生成紫红色偶氮染料，显色深浅与亚硝酸盐含量成正比。然而，本发明人在实践中发现胶体果胶铋在酸性条件下会迅速发生胶凝，可能会导致硝酸盐被封闭在胶凝状态的果胶铋分子中，短时间内胶体果胶铋中硝酸根不能完全被转换为亚硝酸根，从而可能导致检测结果不可靠。另一发现是锌的金属活性要强于铋，其在该检测体系中会同时置换果胶铋中的铋，用于转换硝酸根的锌粉量不足也会导致产生亚硝酸根含量的偏低，造成检测结果的偏差。

药典收载胶体果胶铋中硝酸盐检测方法是一个颜色比对的方法，存在专属性低、检测结果准确度低等问题。因此，有必要开发一种能定量地测量胶体果胶铋中硝酸盐的含量的方法，该测量方法准确度高、重现性好，从而能够确保胶体果胶铋用药安全性。

发明内容

技术问题

设计本发明以解决现有技术的上述问题，本发明的目的在于提供一种胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法，该方法采用离子色谱仪能够方便而准确地检测出胶体果胶铋中硝酸根离子的含量，从而确保胶体果胶铋的用药安全性。

技术方案

为了实现上述目的，根据本发明，本发明提供一种胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法，该方法采用离子色谱仪测量胶体果胶铋中硝酸根离子的含量，包括如下步骤：

(1)待测样品溶液制备

取胶体果胶铋1.0～1.5g，向其中加入超纯水100ml，采用旋涡振荡器进行涡旋分散，在分散后以8000rpm～12000rpm进行离心10～15min，上清液经滤膜过滤后，移取1ml至100ml容量瓶，用下面的淋洗液定容至刻度线，从而制得待测样品溶液；

(2)色谱检测

在下面色谱条件下，对上述待测样品溶液进行离子色谱分析测量，记录硝酸根离子的色谱峰面积，将该色谱峰面积代入硝酸根离子的标准曲线方程，计算得到硝酸根离子的含量，

色谱条件如下：

色谱柱：烷基季胺基质的亲水型阴离子色谱柱；

淋洗液：4.5～6.0mmol/L Na

流速：1.0～1.5ml/min

柱温：45℃

检测器温度：40℃

抑制器电流：90mA

进样体积：50μl。

有益效果

本发明提供的胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法，通过离子色谱法在特定色谱条件下方便而准确地检测出胶体果胶铋中硝酸根离子的含量，从而准确地得到胶体果胶铋中硝酸盐的含量。

由于胶体果胶铋在水中呈现胶体分散系形式，不能直接通过离子色谱柱，本发明人采用旋涡振荡器进行涡旋分散，使其能够均质地分散开，在分散后以8000rpm～12000rpm进行离心10～15min，使得胶体果胶铋中的硝酸盐完全进入上清液，由该上清液制备待测样品溶液，从而确保了该方法的准确性和重现性。

在回收率试验中，相对标准偏差RSD小于10.0％，且测得回收率在96.89％～108.22％之间，即在90％～110％之间，证明此方法准确性较高。

附图说明

图1-图3分别为参考例1-参考例3进行离子色谱分析得到的色谱图；

图4为本发明试验性实施例1标准曲线绘制中得到的硝酸根离子的标准曲线。

具体实施方式

下文，将详细地描述本发明的胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法，以促进对本发明的理解。然而，可以对本发明的实施方案进行多种不同形式的改变，并且本发明的范围不限于下面将要描述的实施方案。提供本发明的实施方案使得本公开内容清楚和完整，以向本领域普通技术人员全面地说明本发明。

根据本发明，本发明提供一种胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法，该方法采用离子色谱仪测量胶体果胶铋中硝酸根离子的含量，在所述步骤(1)待测样品溶液制备中，取胶体果胶铋1.0～1.5g，向其中加入超纯水100ml，采用旋涡振荡器进行涡旋分散，在分散后以8000rpm～12000rpm进行离心10～15min，上清液经滤膜过滤后，移取1ml至100ml容量瓶，用下面的淋洗液定容至刻度线，从而制得待测样品溶液。

由于胶体果胶铋在水中呈现胶体分散系形式，呈胶态溶液，如果不均质地分散开，大颗粒的胶体会包裹硝酸盐在里面，这样得到的待测样品溶液中硝酸盐含量就会减少，导致测量失真。本发明人采用旋涡振荡器进行涡旋分散，使其能够均质地分散开。具体地，取胶体果胶铋1.5g，向其中加入超纯水100ml，采用旋涡振荡器以2000～3000rmp进行涡旋分散5～20min，优选以3000rmp进行涡旋分散5min，在分散后以10000rpm进行离心10min，上清液经0.1μm滤膜过滤后，移取1ml至100ml容量瓶，用下面的淋洗液定容至刻度线，从而制得待测样品溶液。

在所述步骤(2)色谱检测中，在下面色谱条件下，对上述待测样品溶液进行离子色谱分析测量，记录硝酸根离子的色谱峰面积，将该色谱峰面积代入硝酸根离子的标准曲线方程，计算得到硝酸根离子的含量，

色谱条件如下：

色谱柱：烷基季胺基质的亲水型阴离子色谱柱；

淋洗液：4.5～6.0mmol/L Na

流速：1.0～1.5ml/min

柱温：45℃

检测器温度：40℃

抑制器电流：90mA

进样体积：50μl。

具体地，所采用的离子色谱仪，例如可以为青岛盛翰离子色谱仪CIC-260(来自青岛盛瀚色谱技术有限公司)；

所述色谱柱可以为烷基季胺基质的亲水型阴离子色谱柱，例如可以为青岛盛翰SH-AC-3阴离子色谱柱(250cm×4.6μm)(来自青岛盛瀚色谱技术有限公司)；

所述淋洗液可以为4.5～6.0mmol/L Na

流速：1.0ml/min

柱温：45℃

检测器温度：40℃

抑制器电流：90mA

进样体积：50μl。

根据本发明的一个实施方案，硝酸根离子的标准曲线方程按如下方法得到：精确称取硝酸钾标准品，将其溶解于所述淋洗液，制备浓度在0.1～2.0μg/ml之间不同浓度的系列硝酸根离子标准品溶液，在上述相同的色谱条件下，进行离子色谱分析，分别记录硝酸根离子的峰面积；以峰面积为纵坐标，以标准品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。

实施例

下面通过实施例对本发明的胶体果胶铋中硝酸盐的检测方法作进一步的详细说明，且本发明的保护范围不限于以下实施例，列举这些实施例仅出于示例性目的而不以任何方式限制本发明。

实验仪器与设备说明

在实验中，所用的水均为超纯水。

参考例1

精确称取硝酸钾标准品，将其溶解于下述淋洗液，制备浓度为0.5μg/ml硝酸根离子标准品溶液，0.45μm滤膜过滤后在下面的色谱条件下，进行离子色谱分析，记录色谱图如图1所示：

色谱条件如下：

色谱柱：青岛盛翰SH-AC-3阴离子色谱柱(250cm×4.6μm)；

淋洗液：5.3mmol/L Na

流速：1.0ml/min

柱温：45℃

检测器温度：40℃

抑制器电流：90mA

进样体积：50μl。

参考例2

除淋洗液替换为3.2mmol/L Na

参考例3

除淋洗液替换为4.3mmol/L Na

下面表1示出了参考例1-参考例3的离子色谱分析数据比较

表1：参考例1-参考例3的离子色谱分析数据比较

根据上述表1和图1-图3所示，对于参考例2和参考例3，硝酸根离子出峰时间略晚，峰形较矮胖，基线向上偏移明显，且在前置色谱图中有较宽倒峰出现；而参考例1的情况下，硝酸根离子峰形更好，且基线平稳。

试验性实施例1：硝酸根离子的标准曲线绘制

精确称取硝酸钾标准品，将其溶解于下述淋洗液，制备浓度在0.1～2.0μg/ml之间不同浓度的系列硝酸根标准品溶液，0.45μm滤膜过滤后在下面的色谱条件下，进行离子色谱分析，分别记录峰面积；以峰面积为纵坐标，以标准品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线(参见图4)，得到回归方程(参见下面表2)。

色谱条件如下：

色谱柱：青岛盛翰SH-AC-3阴离子色谱柱(250cm×4.6μm)；

淋洗液：5.3mmol/L Na

流速：1.0ml/min

柱温：45℃

检测器温度：40℃

抑制器电流：90mA

进样体积：50μl

表2硝酸根离子的标准曲线试验结果

表1和图4显示，NO

实施例1

(1)待测样品溶液制备

取胶体果胶铋1.5g(202304003批号)，向其中加入超纯水100ml，采用旋涡振荡器以3000rmp进行涡旋分散5min，在分散后以10000rpm进行离心10min，上清液经0.1μm滤膜过滤后，移取1ml至100ml容量瓶，用淋洗液定容至刻度线，从而制得待测样品溶液。

(2)色谱检测

在上述硝酸根离子的标准曲线绘制中相同的色谱条件下，对上述待测样品溶液进行离子色谱分析测量，记录硝酸根离子的色谱峰面积，将该色谱峰面积代入硝酸根离子的标准曲线方程，计算并换算得到胶体果胶铋中硝酸根离子的含量为1.20％。

实施例2

(1)待测样品溶液制备

取胶体果胶铋1.5g(22013007批号)，向其中加入超纯水100ml，采用旋涡振荡器以3000rmp进行涡旋分散5min，在分散后以10000rpm进行离心10min，上清液经0.1μm滤膜过滤后，移取1ml至100ml容量瓶，用淋洗液定容至刻度线，从而制得待测样品溶液。

(2)色谱检测

在上述硝酸根离子的标准曲线绘制中相同的色谱条件下，对上述待测样品溶液进行离子色谱分析测量，记录硝酸根离子的色谱峰面积，将该色谱峰面积代入硝酸根离子的标准曲线方程，计算并换算得到胶体果胶铋中硝酸根离子的含量为0.86％。

试验性实施例2：加标回收实验

将五水合硝酸铋溶于淋洗液，制成NO

按如下公式计算回收率：

R＝C

其中，R为供试品溶液的回收率，C

表3供试品溶液1-9的回收率结果

如表3所示，测定结果的RSD小于10.0％，本发明的检测方法准确度良好。

比较例1

实施例1中的胶体果胶铋1.5g(202304003批号)，按照2020版《中国药典》第二部P1406胶体果胶铋硝酸盐检查，胶体果胶铋中硝酸盐检测合格，硝酸盐含量(以NO

精密量取标准硝酸钾溶液(精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸钾81.5mg，置50ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。每1ml相当于0.05mg的NO3)0.6ml置于纳氏比色管中，加对氨基苯磺酸-α-萘胺试液2ml及锌粉10mg，摇匀，作为对照品溶液。取本品50mg，加水100ml，搅拌后滤过，取滤液20ml置于纳氏比色管中，加对氨基苯磺酸-α-萘胺试液2ml及锌粉10mg，摇匀，作为供试品溶液。将上述两管同时放置15min，供试品溶液如显色，与对照溶液比较，不得更深(≤0.3％)。

比较例2

实施例2中的胶体果胶铋1.5g(22013007批号批号)，按照2020版《中国药典》第二部P1406胶体果胶铋硝酸盐检查，胶体果胶铋中硝酸盐检测合格，硝酸盐含量(以NO