生物化学、啤酒、烈性酒、果汁酒、醋、微生物学、酶学、突变或遗传工程

本发明涉及一种苏云金芽孢杆菌，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20588，其对草地贪夜蛾和/或南美番茄潜夜蛾具有杀虫活性。

本发明提供了利用仿生技术的菌群培养系统，其通过对菌群进行实时拍摄以得到相应的菌群图像，并对该菌群图像进行处理以得到菌群的生长状态信息，再根据该生长状态信息胸温度、湿度、pH值和气体环境多个方面对菌群的培养环境进行实时调整，以保证该菌群的培养环境能够最大限度与人体肠道内的菌群生长环境向匹配，从而提高菌群的培养效率和培养质量。

本发明公开一种微生物菌剂及其制备方法，包括如下原料，芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、木霉菌侧孢短芽孢杆菌、固氮菌、解磷菌、腐殖酸，其中，制备方法的主体结构包括发酵组件、管道组件、混合组件、灌装组件和检测抽取组件，在制作过程中具体经过步骤为S1、S2、S3、S4，本发明中，将不同的菌剂原料分开发酵，互不干扰的同时，并保证生物菌剂制作过程中的发酵，搅拌混合和灌装形成一个与整体结构，方便将对发酵温度进行统一控制，通过抽检结构方便直接对生物菌剂不同位置的原料件抽检，增加对比，提高抽检的准确性，不同的原料混合后直接通过不同的灌装头直接进行灌装，这种一体化的设计节约较多员工投入。

本发明公开了一种异养硝化好氧反硝化菌Y16及其应用，其为不动杆菌Acinetobacter pittii Y16，其保藏编号为CCTCC M 2020283，于2020年7月6日保藏于中国典型培养物保藏中心。本发明在污水处理中能显著降低污水的含氮量，具有强化脱氮的效果。

本发明公开了一种人iPS细胞基因编辑和筛选方法，将编辑质粒通过电转方法导入iPS细胞；通过抗性筛选富集产生基因编辑的细胞；低密度传代，挑取单克隆细胞集落进行扩大培养和鉴定。由EF1α启动子启动能在人iPS细胞内同时启动Cas9和筛选抗性蛋白表达的游离型质粒，此质粒进入人iPS细胞中后，可在细胞中短暂而稳定的同时表达Cas9蛋白和抗性蛋白，在质粒转录表达最旺盛的时间段，在培养环境中添加筛选物，获得外源质粒并表达抗性蛋白的iPS细胞得以存活，同时表达的Cas9蛋白在sgRNA的引导下在基因组目的序列位置进行双链切割进行基因编辑，而未获得外源质粒或质粒未表达的细胞则因不含有抗性而死亡。避免流式细胞分选仪的使用或外源基因插入到细胞基因组中。

一种酸酶法获得小球藻蛋白肽的工业生产方法，包括下述步骤：（1）将小球藻粉进行溶胀处理，得到小球藻料液；（2）酸水解：向步骤（1）溶胀后得到的小球藻料液加入盐酸进行水解；（3）酶解：将经过酸水解的小球藻料液的pH值调节至7‑9，然后在45‑60℃温度下，依次加入纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶，酶解4‑8小时，灭酶后滤除酶解液中的藻渣，得到上清液；（4）对上清液进行脱色处理，得到脱色液；（5）对步骤（4）得到的脱色液进行过滤后，得到小球藻蛋白肽溶液，小球藻蛋白肽溶液经喷雾干燥获得小球藻蛋白肽。本发明结合酸水解和生物酶水解，优势互补，能够提高小球藻的酶解效率和蛋白肽提取率。

本发明提供了一种沼液净化装置及净化方法，涉及沼气工程沼液处理技术领域，包括曝气装置，所述曝气装置包括罐体和设置在罐体内部下方的风机，沼液流入到罐体中，由风机产生流动气体，对沼液进行间歇性曝气；过滤装置，包括传送带和绕设在传送带表面并跟随移动的滤布，所述传送带的前端上方设置有料浆进料管，在传送带的下方设置有对过滤后的沼液进行回收的料斗；经过曝气装置曝气后的沼液经由进料管流到滤布上，沼液透过滤布流到料斗中，滤渣跟随滤布往后移动，所述过滤装置处于真空环境中。本发明提供的一种沼液净化装置及净化方法，通过曝气降低需氧污染物含量，过滤固体颗粒，降低沼液黏度，增加产气量。

本发明公开了一种酶法富集油脂中多不饱和脂肪酸甘油酯的方法，属于油脂深加工领域。本发明方法为取含有多不饱和脂肪酸的油脂、脂肪酶和醇于反应器中，反应后得混合物，脱除混合物中的脂肪酸酯和游离脂肪酸，即可得到富含多不饱和脂肪酸的甘油酯；所述脂肪酶包括来源于南极假丝酵母的Candida antarctica lipase A和曲霉的Novozym ET2.0一种或两种，所述醇包括甲醇、乙醇和异丁醇的一种或两种。本发明通过利用酶的选择性及控制反应条件使甘油酯中多不饱和脂肪酸含量提高原料中甘油酯中多不饱和脂肪酸含量的1.5倍以上，副产物脂肪酸酯还可作为生物柴油，与传统法相比，反应条件温和，副产物少。

本发明公开了基于西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)保守区域的重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)检测引物、检测方法及其应用。所述RPA检测引物包括上游引物F以及下游引物R；所述上游引物F的核苷酸序列为：5'‑CTTCTATAACATGGCAATTGAAAAGGTTTACTCC‑3'；所述下游引物R的核苷酸序列为：5'‑CTTCAWTTCTYTTATGCATGTGYACGAACGC‑3'。本发明的RPA检测引物用于检测西瓜花叶病毒，灵敏度高、特异性强，能有效的控制假阴性、假阳性的出现，大大提高检测结果的准确性，可有效地筛查防控该病毒的发生危害。且本发明建立的基于西瓜花叶病毒保守区域的RPA检测方法不需要特殊仪器，检测周期短，在大豆、西瓜等植物病毒快速诊断中具有广泛的应用前景。

本发明为基因工程技术领域，具体涉及一个参与叶绿素合成相关的基因BnaC08‑CYP705a12及其应用。本发明从甘蓝型油菜黄化苗突变材料克隆分离得到该基因BnaC08‑CYP705a12，该基因与野生型有1个碱基的替换。本发明构建了PBI121‑BnaC08‑CYP705a12过表达载体并转化到野生型中，获得了PBI121‑BnaC08‑CYP705a12过表达转基因植株，叶片出现黄化表型；同时构建了RNAi‑BnaC08‑CYP705a12载体并转化到黄化苗中，获得了RNAi‑BnaC08‑CYP705a12转基因植株，转基因植株恢复绿叶表型。克隆得到的基因突变能够导致甘蓝型油菜叶绿素含量降低，从而引起油菜叶片黄化性状。

本发明提供了一种CAR‑NK细胞培养方法，包括以下步骤：S1、采集健康供者的外周血，分离得到外周血单个核细胞；S2、从外周血单个核细胞中分选出NK细胞；S3、将带有嵌合抗原受体基因的慢病毒载体感染步骤S2的NK细胞；S4、用含有白细胞介素‑2、肌醇、槲皮素葡萄糖苷、芒柄花苷、羊胎盘素、半乳糖的培养基进行CAR‑NK细胞的扩增培养，获得大量的CAR‑NK细胞。本发明的CAR‑NK细胞培养方法操作简单，培养获得的NK细胞纯度高、数量多，CAR‑NK细胞数量多、杀伤活性高。

本发明提供一种用于三叶青多糖的提取技术及提取设备，属于中药提取技术领域，本发明通过滑块二悬挂于安装板的下表面实现悬挂式承托齿板和驱动杆，滑块二卡滑动带动驱动杆的水平滑动；电机带动齿轮转动，齿轮通过与齿板咬合带动齿板，齿板推动驱动杆，驱动杆推动密封盖朝向或者远离出料口；驱动杆推动安装板二朝向提取罐运动，活动板三在活动板一的推动下转动，活动板二在限位通孔的作用下垂直于安装板二下压连接杆一，连接杆一下压一对活动杆，由于轨道高度不变，所以在此过程中密封盖上升；当操作通孔靠近驱动杆的一侧紧紧贴合在密封盖上时，活动板三垂直于安装板二，密封盖上升至完全密封住出料口。

本发明公开了一种表达腺苷蛋氨酸合酶的枯草芽孢杆菌及应用，属于基因工程技术领域。本发明在枯草芽孢杆菌异源表达酿酒酵母来源的腺苷蛋氨酸合酶，并通过启动子适配性改造，构建了一株高水平表达腺苷蛋氨酸合酶的枯草芽孢杆菌。进一步通过对其进行发酵条件优化，提高其腺苷蛋氨酸合酶表达水平，使重组菌的酶活高达0.925U·mL，较出发菌株提高了180％，也是首次SAM合酶以枯草芽孢杆菌作为宿主的表达。

本发明公开了微生物脂质提取物作为细胞脂滴诱导试剂的应用，本发明所述的微生物脂质提取物可作为诱导脂滴产生的试剂或者用于制备诱导脂滴产生的试剂，开拓了微生物脂质提取物的新用途，为构建脂滴细胞模型提供了新选择，并有效解决了目前常用的脂滴诱导试剂如油酸的水溶性很差，限制了其脂滴诱导的效率，以及脂滴诱导剂如环孢菌素和全氟类化合物等存在安全性不佳等缺点。

本发明涉及重组肌肽水解酶突变体，含有该酶突变体基因的重组表达载体和重组表达转化体，该重组酶的制备方法，以及该重组酶用于逆水解制备L‑肌肽的方法。与现有技术相比，本发明的重组肌肽水解酶突变体具有较好的热稳定性和较低的最适pH，可以直接使用相对廉价的L‑组氨酸盐酸盐作为原料催化制备L‑肌肽，并且可以达到更高的产物浓度，在L‑肌肽的生产中将具有很好的工业应用前景。

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于表达Agrin蛋白的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过重叠延伸RT‑PCR获得Agrin全长基因片段，重组至真核表达质粒上，从而可以高效地在真核细胞中表达Agrin蛋白，并且以上述表达的Agrin蛋白作为抗原与血清中的Agrin抗体进行高效结合，所使用试剂均为常规试剂，检测成本较低，并且有助于重症肌无力致病机制研究的开展并且具有作为疾病生物标志物的潜在功能，为后续辅助患者精准诊疗提供指导。

本发明公开了一种与结直肠癌转移及预后相关的分子标记物及其应用。其中，所述的分子标记物为TSG‑6基因。本发明人研究发现，TSG‑6基因在临床结直肠癌组织中表达水平升高，且其表达水平与转移发生及不良预后显著相关，能够通过多个调控途径促进结直肠癌发生转移。本发明通过对结直肠癌中TSG‑6基因表达水平的检测，将TSG‑6作为肿瘤分子诊断标记物应用于临床结直肠癌转移诊断及预后评估中，为结直肠癌转移发生早期诊断及结直肠癌患者预后评估提供了新的分子标记物。

本发明公开了一种诊断强直性脊柱炎的生物标志物，为人外周血单个核细胞中的hsa_circ_0007352。本发明利用微阵列分析用于检测外周血单个核细胞中差异表达的circRNA，并证实这些候选circRNA确实存在差异并且可以用作潜在的强直性脊柱炎诊断生物标记。结果发现强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中的hsa_circ_0007352表达改变可以作为诊断强直性脊柱炎的标志物，这将有助于探索这种疾病的发病机理，并为强直性脊柱炎的诊断提供新的方向，具有广泛的临床应用前景。

本发明公开了一种大蒜银杏等副产物复配发酵型饲料用发酵罐，发酵罐本体的上方通过铰链转动连接有上盖，发酵罐本体的内壁之间滑动连接有滑板，滑板的侧边与发酵罐本体的内表面之间压接有密封环，发酵罐本体的左侧且位于滑板的下方左右固定贯穿有加料管，本发明涉及发酵型饲料技术领域。该大蒜银杏等副产物复配发酵型饲料用发酵罐，通过在发酵罐本体的内部设置有滑板和密封环，配合连通管、弹簧、第二单向阀和活塞，可以在下料口打开下料后，带动密封环和滑板的下滑，在移动的过程中刮下附着在发酵罐本体内表面的残余饲料，从而使装置在使用后内部无残留不需要清洗即可再次使用，增加了工作效率，避免残留饲料腐败变质。

本发明涉及沼气工程与沼液热水解工程耦合高效热量循环利用系统，包括缸套水热量循环系统、烟气余热利用系统、热水解热量循环利用系统和沼液余热循环利用系统；缸套水热量循环系统包括内燃发电机组、热水循环箱、厌氧发酵池和厌氧发酵池加热盘管；烟气余热利用系统包括内燃发电机组、烟气余热热水换热器和烟气余热蒸汽锅炉；热水解热量循环利用系统包括进料反应器、闪蒸反应器和闪蒸反应器伴热管；沼液余热循环利用系统包括沼液出料泵、沼液换热器和沼液冷却器。本发明的有益效果是：通过缸套水热量循环系统，充分利用内燃发电机组缸套水的热量，满足厌氧发酵池的供热需求，使厌氧发酵池在极端工况下仍能满足38℃左右的恒温发酵。

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种提高微藻抗逆性能、增加生物产量和高附加值化合物的方法。该方法为：将核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的基因或包含该基因的载体导入微藻中。本发明经实验证明转入DXS基因的微藻在弱光、高光、缺氮和缺微量元素环境下其生长速率有了明显提高，生长后的藻株中的生物量和高值代谢物含量也有提高，证明了DXS基因能有效的提高微藻耐微藻耐弱光、高光、缺氮和缺微量元素环境胁迫。本发明培育出耐微藻耐弱光、高光、缺氮和缺微量元素藻株的方法也简便而有效，为提高植物耐微藻耐弱光、高光、缺氮和缺微量元素性和提高高值化合物含量提供了新的有效选择。

本发明公开了一种大型高传质循环式通风发酵罐，其结构包括支撑台、罐体、进气管、电机，罐体垂直焊接在支撑台顶部，进气管贯穿罐体顶部，电机垂直安装在罐体顶部中心位置，罐体设有轴承、转盘、循环管、排料口、分散装置，由于通过循环管输送的过程中，混合物随着循环管的直径缩小被挤压呈团状，通过分散装置对掉落的发酵物混合液承接，通过刀片将团状的混合物粉碎，有利于罐体内部的发酵混合物，充分与氧气的接触，加快发酵物质的发酵速度，由于粉碎后的物质滞留在转动轮外壁，导致转动轮的重力加大转动速度减慢，通过转动轮转动与内置块配合，通过刮条将刀片外壁的物质清除，有利于保持刀片外壁整洁，加快刀片将团状的物质粉碎分散。

本发明公开了一种Msi1在制备用于治疗胃癌制剂及预测化疗药物耐受中的应用，MSI1蛋白在恶性肿瘤细胞中表达异常，并且在介导肿瘤细胞的增殖，引起胃癌细胞对化疗耐受中具有重要的意义。但利用传统的体外细胞成瘤模型研究Msil蛋白在胃癌中的作用，由于细胞系通常已经丢失了来源肿瘤组织的分子特征及肿瘤异质性,这将导致其对临床药物疗效的预测效果大打折扣。而PDTX裸鼠模型能够很好弥补这一缺陷，可以更为准确预测肿瘤药物疗效。本发明旨在通过建立胃癌PDTX模型，评估胃癌患者瘤组织内MSI1基因拷贝数及蛋白表达情况与临床化疗药物预后的关系，指导胃癌患者的个体化治疗。

本发明公开了齐整小核菌内源小核菌胶水解酶及应用，属于酶工程技术领域。本发明从齐整小核菌中挖掘出14个潜在的β‑葡聚糖酶基因，在毕赤酵母中对潜在的水解酶基因进行异源表达并进行功能验证，筛选获得了对小核菌胶具有正向水解效果的小核菌胶水解酶及其编码基因。该小核菌胶水解酶能够在pH 6.0的条件下对小核菌胶进行水解，使数均分子量由2.748×10Da降低至1.923×10Da，克服小核菌胶三维结构的束缚直接对糖苷键进行切割。

本发明涉及医疗检测技术领域，具体公开了一种具有基因检测芯片的乳腺癌预检测系统；包括机箱主体、触控操作屏、自动扫描检测机构、基因检测芯片和控制面板，触控操作屏设置在机箱主体的上方，触控操作屏与机箱主体之间设置有多角度调节机构；自动扫描检测机构包括红外线扫描仪、红外线扫描仪处理模块以及多方位摆动机构，红外线扫描仪与红外线扫描仪处理模块之间电性连接，红外线扫描仪处理模块与单片机之间电性连接；机箱主体的前侧面设置有凹槽，凹槽的中间处开设有竖向滑口，竖向滑口的两侧开设有竖向限位滑槽。本发明公安开的具有基因检测芯片的乳腺癌预检测系统用各保温水箱对其进行恒温处理，其对温度的控制更加精确。

一种向海雁雁掌黄皮多肽的提取方法及其应用属于动物多肽提取与开发技术领域，具体涉及一种向海雁雁掌黄皮多肽提取和在制备防冻护肤霜中的应用。所述的多肽提取工艺如下：先通过石油醚脱脂后，进行水解得到向海雁雁掌黄皮蛋白，经过平衡透析纯化后获得向海雁雁掌黄皮多肽提取物。本发明具有制作流程简单、低成本的优点，在体外冷损伤细胞模型考察其抗冷损伤活性实验中证明向海雁雁掌黄皮多肽具有一定的抗冷损伤活性的优点。应用于抗冷损伤的护肤霜中，能够减少冷损伤的发生率。将丢弃的海雁雁掌黄皮进行利用，减少了生物资源浪费与环境污染。

发明涉及枯草芽孢杆菌N‑42‑2在防治芒果炭疽病中的应用。本发明从芒果果皮上筛选到一株枯草芽孢杆菌N‑42‑2，保藏编号为CGMCC No.20670。该株枯草芽孢杆菌N‑42‑2的发酵液能够对芒果炭疽菌菌丝具有抑制作用，其产生的挥发性气体能够抑制芒果炭疽菌菌丝的生长，且对芒果采后炭疽病的室内防治中，具有较好的防治效果。

一种基于微棱镜光反射原理的微藻生物膜生长载体，所述生长载体由折射率大于空气的透明材质加工而成，生长载体下表面由多个相互平行排布的直角棱柱组成，生长载体的上表面由多个相互平行的凹槽道组成，微藻生物膜附着在生长载体上表面的凹槽内。光源位于该生长载体上表面的正上方。通过上述结构改进，既增大了该生长载体上表面的粗糙度，又增大了微藻生物膜的受光比表面积，从而提高微藻生物膜的生物质产量。

本发明公开了一种分批式生物反应器，其结构包括支撑脚、反应器、进料阀门、驱动电机，支撑脚的上端设有反应器，进料阀门设置在反应器前端面，驱动电机安装在反应器的顶部，反应器包括、搅拌桨、进料装置，进料装置包括加料口、密封装置、通料管、截气装置、出料口，密封装置包括固定座、旋转槽、复位弹簧、闭合板、卡合块，闭合板包括活动槽、缓冲块、活动杆、拉伸弹簧、密封头、密封槽，本发明通过复位弹簧与闭合板中的卡合块活动配合，能够让流动的催化剂推动闭合板进行流动，而在添加完催化剂之后，能够让复位弹簧复位带动两个闭合板进行闭合，避免在加入催化剂的时候有空气进入到中与果酱接触发生霉变的情况。

本发明公开的是一种能够利用大肠杆菌高效表达并分泌人生长激素的方法，经过双酶切后插入到载体pET28a(+)相应的酶切位点上得到pET28a‑ST Ⅱ‑hGH重组载体，工程菌：含有pET28a‑ST Ⅱ‑hGH重组表达载体的大肠杆菌，表达人生长激素蛋白：将含有pET28a‑ST Ⅱ‑hGH重组表达载体的大肠杆菌，培养、诱导，收集表达了人生长激素蛋白的菌体；纯化重组人生长激素：菌体破碎、超滤、层析，加入核糖体结合位点避免使用昂贵限制性内切酶Nco Ⅰ，去除了pET28a(+)上多余序列，利用了载体原来的T7启动子来启动目的基因表达，常规载体实现人生长激素在大肠杆菌中的高效分泌表达，提高了生长激素的表达量。

本发明公开了一种生物技术研发操作台，包括撑机构、操作机构、控制机构和传送机构，支撑机构正面顶端固定安装有操作机构，控制机构正面内侧设有控制机构，操作机构顶端表面固定安装有传送机构，支撑机构由箱体、门框、门框把手和固定底座组成，支撑机构正面内侧设有箱体，支撑机构表面中心位置固定安装有门框，门框中心位置设有门框把手。该生物技术研发操作台，通过开设的观察箱、冷却箱体、加热箱体和夹持箱体，方便工作人员对微生物进行全方位的研究，方便使用者使用，提高了装置的功能多样性和便利性，启动驱动电机，观察箱固定安装的放大镜和LED灯，且支撑柱顶端固定连接有转动球体，方便工作人员对微生物进行旋转式放大观察，方便简单。

本发明公开了一种丙烯酰胺生产系统，包括储存装置、反应釜、过滤装置、除杂装置和收集装置，其中，储存装置用于储存反应所需的微生物菌体。储存装置的出料端通过管路与反应釜的进料端连通，反应釜的出料端通过管路与过滤装置的进料端连通，过滤装置的滤液出料端通过管路与除杂装置的进料端连通，除杂装置的出料端通过管路与收集装置连通。根据本发明的丙烯酰胺生产系统，使得整个生产丙烯酰胺水溶液的流程较为简便，便于生产出高纯度的丙烯酰胺溶液，同时也节省了投入的时间和人力。

本发明涉及修饰的免疫细胞及其在免疫治疗中的用途，所述免疫细胞为来自外周血的PD‑1T细胞。所述免疫治疗用于肿瘤治疗或与病毒感染相关的疾病的治疗和预防。

本发明公开了一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用。本发明以熊蜂生假丝酵母为研究对象，预测、克隆、筛选、评价强组成型启动子。以增强型绿色荧光蛋白为报告基因，通过上述所选启动子驱动其表达，分析绿色荧光强度差异及转录水平差异，最终获得了一个具有强转录活性的组成型启动子PX。该启动子与已知强组成型PGPD启动子相比，在以葡萄糖或油酸为唯一碳源及不同培养时期均具有最高强度的转录活性。该实验在熊蜂生假丝酵母中首次以增强型绿色荧光蛋白为报告基因，通过转录组水平分析得到一段具有转录活性强的DNA序列，具有良好的应用前景，丰富了合成生物学元件，同时也为该菌种在其基因工程改造及外源基因表达奠定了理论基础。

本发明属于农业技术领域，具体涉及用于杂交构树全株发酵的发酵菌液及其制备方法和应用。本发明的杂交构树全株发酵的发酵菌液由毕赤酵母菌、圆酵母、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等益生菌与糖类混合发酵制成。本发明的发酵菌液能够有效降解构树中的木质素、纤维素。

一株嘧菌酯单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明公开了一株分泌嘧菌酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC04，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19175。本发明以嘧菌酯完全抗原免疫BALB/c小鼠，取高效价、低IC小鼠脾细胞，通过PEG方法与骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对嘧菌酯具有较好的特异性和检测灵敏度（IC值为0.03 ng/mL），为食品中嘧菌酯残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

本发明提供一种探针引物组合及其检测试剂盒，探针引物组合包括可与靶核苷酸序列杂交的探针寡核苷酸、用于扩增包含靶核苷酸序列的核酸区域的第一引物寡核苷酸、第二引物寡核苷酸，所述探针寡核苷酸连接有第一标记分子，所述第一引物寡核苷酸或所述第二引物寡核苷酸连接有第二标记分子，所述探针寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的一条单链，连接有所述第二标记分子的引物寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的另一条单链，所述第一标记分子、第二标记分子提供不同的可检测信号，所述第一标记分子、第二标记分子靠近时发生荧光能量共振转移。本发明设计的单标记探针，不会因构象变化产生非特异的荧光信号，背景更低。

本发明公开了一种生物样本处理芯片装置及处理方法。芯片装置包含装置本体，所述装置本体设置有用于容纳溶液的腔体，所述腔体分隔成若干个处理腔室，相邻所述处理腔室上端连通，每个所述处理腔室设置有用于添加反应液的第一进样孔，所述装置本体上设置有用于向所述腔体内添加油溶液的第二进样孔，所述腔体设置有用于腔体内气体交换的气压平衡孔。本发明可以确保在液体样本处理与转移过程中，与外部环境隔离，有效避免了样本处理过程中产生的生物气溶胶对环境的污染。

本发明公开了miR‑125b‑2‑3p在制备诊断、预防和/或治疗肾纤维化的产品中的应用。本发明利用miR‑125b‑2‑3p标志物检测肾纤维化不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。本发明提供将miR‑125b‑2‑3p用于制备预防和/或治疗肾纤维化的药物组合物，其中所述药物中miR‑125b‑2‑3p或其模拟物可以促进E‑cadherin表达，抑制Vimentin表达，有利于缓解和/或治疗肾纤维化。

本发明涉及恒温培养技术领域，具体为一种生物制药用具有恒温功能的微生物菌种培养装置，包括培养装置本体，所述培养装置本体包括恒温箱，所述恒温箱的正面安装有箱门，所述箱门的正面安装有观察窗，所述观察窗的左侧安装有把手，所述恒温箱的底面安装有支腿，所述把手的左侧安装有控制电脑，所述控制电脑的上侧安装有显示屏，所述控制电脑的下侧安装有开关，所述恒温箱内部的右侧面安装有降温装置。本发明在使用时，如果需要对菌种进行观测，无需将培养皿从培养装置本体的内部取出，可通过电子显微镜直接对培养皿的内部进行观测，使培养皿内部的菌种始终处于适宜的生长温度，以保证菌种不受外界的影响，以提高观测数据的准确性。

本发明涉及橡胶草基因编辑技术领域，具体涉及利用CRISPR/Cas9系统同时敲除橡胶草1‑SST和1‑FFT基因的方法。本发明提供的特异性靶向菊糖合成酶基因1‑SST和1‑FFT的sgRNA能够高效引导内切酶蛋白Cas9在靶点位置进行切割并产生双链DNA断裂，结合抗性筛选和DNA测序实现精确、高效的同时敲除橡胶草菊糖合成酶基因1‑SST和1‑FFT。本发明提供一种方便、高效的方法创制橡胶草菊糖合成酶基因突变体，有效地避免了常规诱变育种中存在的周期长、突变不确定性、筛选难度大、成本高等问题，为橡胶草优良种质的选育提供了新方法。

本发明公开了一种用于检测艰难梭菌的核酸适配体及应用，属于分析检测领域。一种通过体外筛选获得的适配体检测艰难梭菌的方法，能够特异性识别艰难梭菌毒素B蛋白降解片段。本发明还公开了一种利用上述适配体构建纸基分析器件的方法，用疏水蜡打印图案纸构建工作区域，在工作区域内以3D DNA适配体作为识别元件，通过其与蛋白降解片段特异性结合释放探针，引发滚环扩增反应，产物使底物颜色发生变化。颜色信号与蛋白降解片段浓度之间存在线性关系，从而实现对毒素B的定量检测。此方法灵敏度高，特异性好，可以对艰难梭菌毒素B进行有效测量，检出限为60pM，检测效果优于现有酶联免疫法检测试剂盒(150pM)，达到了快速检测的要求。

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种引物探针组合、检测试剂盒及其应用。本发明通过设计第一类Y引物和第二类Y引物，且第一类Y引物可以与登革病毒的特异性引物部分互补，第二类Y引物可以与寨卡病毒的特异性引物部分互补，形成“Y”型结构，用于阻止非特异性延伸反应的启动，以避免因登革病毒和寨卡病毒基因组序列相似性较高而导致的检测特异性不足的问题，从而提高登革病毒和/或寨卡病毒检测过程中的特异性和准确性，具有良好的应用前景和市场价值。

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种亚细胞定位表达载体及构建方法，在TA载体中获得ccdB毒性蛋白，同时利用PCR在Gateway载体p2FGW7中扩增得到eGFP片段，在pCambia载体中获得多克隆位点以及载体的骨架，获得P35s∷ccdB‑eGFP片段。用多克隆位点进行酶切后，所获得的线性片段中不再含有ccdB蛋白，同时获得黏性末端，可以利用连接酶将含有相应黏性末端的目的片段插入到载体中。本发明的亚细胞定位载体既可以用于瞬时转化，研究亚细胞定位，也可以利用农杆菌介导的方法，获得稳定的转基因植株；获得的转基因材料可以用于下一步的生理生化与功能分析。

本发明提供了靶向miR‑29b的gRNA、AAV8‑CRISPR/Cas9系统及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了靶向miR‑29b的gRNA，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。gRNA在细胞水平上对miR‑29b具有较强的特异性结合能力，仅对miR‑29b具有靶向编辑作用，对于同家族的miR‑29a和miR‑29c没有影响，且具有更强的编辑效率，能有效抑制miR‑29b的表达。一种包含所述的gRNA靶向miR‑29b的AAV8‑CRISPR/Cas9系统。靶向miR‑29b的gRNA或AAV8‑CRISPR/Cas9系统在制备治疗肌肉萎缩的药物中的应用。

本发明公开了一种猪ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，通过G418筛选出稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白。本发明具有：①快速：仅需1小时反应时间；②简单：不受片段酶切位点的影响，无需酶切；③高效：阳性率达95％以上；④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2通过靶向降解AngII发挥舒张血管、抑制炎症及抗纤维化等多种机体保护功能；同时作为严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)的功能性受体，其临床意义非凡。本发明为深入研究猪ACE2作为潜在的病毒受体在猪冠状病毒感染中发挥的生物学功能及分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。

本发明公开了一种自稳定加氧型细胞培养箱，包括壳体，所述壳体内壁固定连接有箱体，箱体下端固定连接有气囊，所述气囊下端通过弹簧与壳体内底部弹性连接，所述箱体下端开设有滑塞腔，所述滑塞腔内壁对称密封滑动连接有两个相吸的磁性滑塞，两个所述磁性滑塞相互靠近的侧壁共同固定连接有吸气囊，所述气囊内壁通过单向排气管与吸气囊内壁固定连接。本发明通过壳体受到震动使得气囊内的气体进入吸气囊内，进而推动两个磁性滑塞向相互远离的方向滑动，即壳体受到的震动对箱体竖向的冲击力带动两块磁性滑塞向相互远离的方向滑动，进而壳体对箱体的做功转化为磁性滑塞沿箱体下端平行方向的磁力势能，保证了细胞的活性。

本发明涉及流体分析技术领域，公开了一种微量流体控制机构，包括第一座体和转盘；第一座体内形成有流体转移通道和多个第一腔室；第一座体的第一端面上开设有与流体转移通道连通的第一开口，流体转移通道内滑设有活塞，活塞和第一开口之间形成转移腔；第一座体的第一端面上开设有多个沿预定圆周环形分布的第二开口，各第二开口与对应的第一腔室连通；转盘的端面上沿预定圆周的径向设置有转移槽；转盘能够分别绕预定圆周的中心旋转至多个预定位置，当转盘处于预定位置时，对应的第二开口与转移腔通过转移槽连通。本发明的流体样品转移方式简单，操作容易，能够快速、便捷地实现流体样品在多个第一腔室内的转移以进行多种处理。

本发明AroG的突变体及其在产氨基酸基因工程菌中的应用，公开了一种3‑脱氧‑α‑阿拉伯庚酮糖酸‑7‑磷酸合酶AroG的突变体和调控因子RpoS的失活在产色氨酸菌株的构建中的应用。利用本发明获得的基因工程菌进行发酵，可以获得L‑色氨酸的有效积累，能够明显提高其产量，具有产业化应用价值。

本发明公开了一种微生态益生菌制剂的制备方法，涉及一种益生菌制剂制备方法，包括培养步骤与储液步骤：培养步骤，用自来水灌入用于培养的罐中，把适量的糖放入罐后搅拌20分钟以上搅拌后确认SC值是否有5.0以上，停止搅拌放入适量的培养菌，确认并记录PH值和SC值停止搅拌的1个小时后确认是否有发酵，到培养完为止，每天都要记录相关数值，在PH值4.5以下，SC值3.0以下再没有变化时就是培养完成了；储液步骤，把培养液从培养的罐中抽进到储液的罐中，在储液的罐中内保管2周后便可作为完成品出货。本发明制备方法简单，采用简单的恒温培养设备即可完成制备，降低了生产成本，适合大批量推广。