生物化学、啤酒、烈性酒、果汁酒、醋、微生物学、酶学、突变或遗传工程

本发明公开了一种共表达L‑苏氨酸醛缩酶与PLP合酶的工程菌及应用。一种共表达L‑苏氨酸醛缩酶与PLP合酶的工程菌，在表达菌株中转入L‑苏氨酸醛缩酶基因和PLP合酶基因而得。本发明工程菌中外源导入L‑苏氨酸醛缩酶基因与PLP合酶基因，两个酶共表达，PLP合酶过表达能够提高菌株内源性辅酶PLP的合成量，将共表达后的工程菌破碎制备粗酶液，然后将L‑苏氨酸醛缩酶和辅酶PLP共固定化制备的共固定化酶能够显著降低L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸生产过程中外源PLP的使用量，提高了L‑苏氨酸醛缩酶和PLP的使用效率，降低生产成本。本方法反应条件温和、绿色环保、生产工艺简单、重复利用效率高、成本低廉，在L‑syn‑对甲砜基苯丝氨酸生产中具有广阔的应用前景。

本发明提供一种稳定高表达蛋白的单拷贝细胞株的构建方法及其应用，所述方法基于293T细胞的可以快速精确插入且能稳定高水平表达目的基因。所述方法通过随机插入结合高通量筛选策略建立了一个稳定、高效表达且可替换目的基因的293T细胞株。基于此细胞株，我们成功表达了属于GPCR家族之一的腺苷A2A受体蛋白(ADORA2A)。利用这种方法可以进行反复的盒式重组替换，可将欲被表达或优化的抗体或别的蛋白质基因快速准确地插入到该细胞基因盒中，且不会破坏基因框的完整性。

本发明公开一种靶向抑制SOS1基因表达的siRNA及其应用。所述siRNA的序列为：正义链：5′‑GCAGAATCTTCACCATCTA‑3′；反义链：5′‑TAGATGGTGAAGATTCTGC‑3′。本发明通过检测SOS1的mRNA水平及蛋白水平的表达量变化，筛选出SOS1有效siRNA序列，SOS1‑siRNA#3，可以有效抑制CML细胞的增殖能力、克隆形成能力，并且在动物体内有效抑制移植瘤的生长，同时增加了CML细胞对imatinib的药物敏感性。因此，SOS1是慢性粒细胞白血病治疗的一个潜在的新靶点，而SOS1‑siRNA具有潜在的克服imatinib耐药性的价值。

本发明涉及一种用于从多能干细胞中生产生物工程化心肌(BHM)的方法，所述方法通常包括，通过定向组织形成，诱导中胚层分化、心肌分化和心肌成熟的步骤。该方法是一种稳健的、无血清的且可再生的生产用于多种应用的BHM的途径，并且可应用于多种多能干细胞系。本发明还涉及通过本文公开的方法生产的BHM，以及所述BHM在药物和毒性筛选中的用途，和其在医药中的用途。

本发明提供了一种快速鉴定二倍体T代基因编辑作物双等位基因纯合突变的方法，涉及基因型鉴定技术领域；通过T7E1内切酶处理待测T代基因编辑植株的PCR产物来去除嵌合体、杂合体和双等位基因杂合突变植株，得到双等位基因纯合突变或野生型植株，然后将待测的双等位基因纯合突变或野生型植株的PCR产物和已知野生植株的PCR产物进行等量混合后用T7E1内切酶处理，从而快速鉴定出双等位基因纯合突变植株。对得到的双等位基因纯合突变植株的PCR产物进行sanger测序，证实本发明所述方法可行。

本发明公开了一种基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途，涉及药物化学技术领域。基于灸甘草制备甘草酸的具体为：微波法提取甘草酸，接着酶法分解甘草酸制备甘草次酸，产物得率高。然后利用上述甘草次酸与芪苷化合物复合制得甘草次酸衍生物，两者协同作用，使其具有更高的生物利用度和细胞吸收效率，对癌细胞具有明显的抑制作用；且具有更低的甘草次酸衍生物的药物用量以及不良反应率。整个反应过程，反应条件温和，在室温下均可反应，产物收率较高。

一种用于生产倍半萜醇的方法和组合物，该方法包括使倍半萜与具有单加氧酶活性的P450多肽接触。

本发明提供一种微生物取样储存一体式容器，主要涉及微生物容器技术领域。微生物取样‑储存一体式容器，包括容器主体、活塞、顶盖、底盖，所述容器主体内设置隔板，所述隔板中部开设有螺纹孔，所述隔板上一侧开设有出液口、排液口，所述容器主体外壁上设置排出管，所述活塞中部开设有T形通孔，所述活塞底部开设有储液槽若干，所述活塞外壁上设置转柄，所述顶盖底部设置T形螺栓，所述活塞滑动连接在容器主体内，所述底盖通过螺纹连接在容器主体底部。本发明的有益效果在于：通过本发明的结构设计，不仅方便微生物的储存，还能够保证在密封的基础上精准控制样本取样量，同时将本装置拆解后非常便于清理容器。

本发明提供一种兼氧‑好氧微生物共存发酵罐，主要涉及微生物培养容器领域。兼氧‑好氧微生物共存发酵罐，包括罐体，所述罐体内中部设置隔板，所述隔板上部滑动设置密封板，所述密封板顶部中间固定连接丝杠，所述罐体一侧设置进气管，所述罐体内进气管底部固定连接鱼骨型出气装置，所述罐体底部设置排出管，所述罐体顶部设置罐盖，所述罐盖上设置进料斗，所述罐盖上安装贯通式直线电机，所述罐盖上设置压力表、泄压阀。本发明的有益效果在于：通过本发明的罐体结构实现了在保证好氧微生物侧腔体氧气供给充足的基础上大幅调节兼氧微生物腔体内的空气流量，以满足兼氧微生物发酵所需的不同氧气浓度，实现兼氧、好氧微生物的同时培养。

本发明公开了一种提高基于PNA的PCR抑制效率的方法，其特征在于：核酸扩增引物采用单碱基错配引物，错配位点位于PNA探针和扩增引物重叠序列的中间。本发明使用单碱基错配引物，可大大提高基于PNA的PCR抑制的效率。通过选择性扩增短DNA片段，结合采用单碱基错配引物抑制大背景DNA的PCR扩增，使得PNA可有效检测特异性DNA片段，比如可应用于监测循环肿瘤DNA和循环胎儿DNA。

提供了使用如纳米孔和酶等检测器来表征分析物的方法。一方面的特征在于使用检测器来表征双链多核苷酸的方法，例如，不使用连接所述双链多核苷酸的模板和补体的发夹。另一方面的特征在于使用标签修饰的纳米孔以增加的灵敏度和/或更高的通量表征分析物的方法。还提供了可以在所述方法中使用的组合物和系统，所述组合物和系统包含例如用于连接到双链多核苷酸和标签修饰的纳米孔的衔接子。

本发明提供了一种具有新型蛋白酶的自动盘碟洗涤清洁组合物。

本发明提供一种结膜上皮细胞、结膜杯状细胞以及结膜上皮干/祖细胞的诱导方法，其特征在于，使用含有EGF(表皮生长因子)信号转导活化因子的培养基培养多能干细胞的集落，并诱导分化。通过本发明，能够由包括iPS细胞的多能干细胞诱导为结膜上皮细胞、结膜杯状细胞、结膜上皮干/祖细胞，因此对结膜上皮细胞、结膜杯状细胞的基础研究、难治性眼表疾病的再生医疗或所述疾病相关的研究等方面极为有用。

本文描述了一种用于将一批植物材料分类为受污染或未受污染的方法，包括：(i)由所述一批植物材料提供多核苷酸样品；(ii)使所述多核苷酸样品与一种或多种扩增引物接触，以扩增与不育性相关联的靶多核苷酸序列；(iii)对所述样品执行体外多核苷酸扩增反应，以生成一种或多种扩增产物；(iv)确定所述一种或多种扩增产物的大小或序列；以及(v)基于在步骤(iv)中确定的所述一种或多种扩增产物的大小或序列，将所述一种或多种扩增产物的大小或序列与来自已知不育性遗传来源的已知的一种或多种扩增产物的大小或序列进行比较；其中如果步骤(v)中确定的所述不育性遗传来源与所述一批植物材料的预期的不育性遗传来源相对应，则认为所述一批植物材料是未受污染的；或者其中如果步骤(v)中确定的所述不育性遗传来源与所述一批植物材料的所述预期的不育性遗传来源不对应，则认为所述一批植物材料是受污染的。

本文在一些实施方案中提供了分子认证方法、系统和组合物。

本申请涉及一种分离的嵌合分子，其包含有包含E3泛素连接酶(E3)基序的降解结构域和能够特异性地将所述降解结构域引导至底物的靶向结构域，其中所述靶向结构域与所述降解结构域异源。接头将所述降解结构域与所述靶向结构域偶联。还公开了组合物，以及治疗疾病、沉默底物、筛选对疾病具有治疗功效的试剂的方法，和筛选疾病生物标志物的方法。

本申请公开了一种用于从细胞生产组织的装置。该装置包括细长体，该细长体具有至少一个周缘凹部并且可操作成通过紧密配合关系居中延伸穿过至少一个槽。该槽以闭合路径延伸，使得周缘凹部中的至少一个周缘凹部通向槽的内边缘。本申请还公开了一种经由过渡中间体从细胞生产组织的方法，该过渡中间体从细胞过渡为组织。

提供了用于减少细胞或动物中ATXN3 RNA的量或活性，并且在某些实施方案中减少细胞或动物中ATXN3蛋白的量的化合物、方法和药物组合物。此类化合物、方法和药物组合物可用于改善神经退行性疾病的至少一种症状或标志。此类症状和标志包括运动功能障碍、聚集形成和神经元死亡。此类神经退行性疾病包括脊髓小脑共济失调3型(SCA3)。

本发明公开了一种与猪肌内脂肪性状相关的UCP3基因、分子标记及其应用，该SNP分子标记为位于如SEQ ID NO：6所示序列的2159bp处的G/T突变，其基因组位置位于猪11.1版本第9号染色体从5’端起的8387309位点。本发明首先在279头试验猪群中利用FastTarget目标区域测序技术在该基因中鉴定了一个影响猪肌内脂肪含量的变异位点，并建立了针对该位点的PCR‑RsaI‑RFLP基因快速分型方法；在此基础上，本发明在500头试验猪群中对该位点提高肌内脂肪的应用效果进行了验证，结果表明通过该位点有利基因型的选择可显著提高猪群肌内脂肪含量，所鉴定的变异位点可用于种猪肌内脂肪的早期、活体、快速的标记辅助选育。

本发明公开了一种生物酶加工用粉碎筛选装置及其筛选方法，涉及生物酶加工装置结构技术领域，为解决现有的一种生物酶加工用粉碎筛选装置对生物酶的加工提取比较麻烦，不能快速的对生物酶进行提取的问题。所述提取装置的外壁四周设置有加热夹套，所述加热夹套的外壁一侧安装有安装架，所述提取装置的上方安装有搅拌电机，所述搅拌电机的前端设置有加液口，所述搅拌电机的一侧安装有提取口，所述搅拌电机的另一侧设置有进料口，所述安装架的上方安装有固定支撑架，所述固定支撑架的上方安装有粉碎装置，所述提取装置上端的一侧设置有抽真空口，所述固定支撑架的一侧安装有操控箱，所述操控箱的一端安装有电线，所述电线的一端安装有水加热装置。

本发明提供了一种单细胞计数检测抗生素对细菌抑制的方法，包括：在待检测的细菌中加入预定浓度的抗生素后设为细菌抗生素混合物，同时，不加入上述抗生素的待检测的细菌设为阳性对照；在与上述抗生素的加入时刻相隔到达第一预定时长时，获取上述细菌抗生素混合物的上述细菌的当前数量以及上述阳性对照的上述细菌的当前数量；确定上述抗生素对上述细菌的最小抑制浓度，确定上述抗生素针对上述细菌的抑制程度。通过单细胞计数进行药敏的实现的基础上解决了如何准确的确定单细胞计数值与药敏实验结果之间的联系的技术问题，结果可靠，转化为临床实用性强，成本低，易于自动化的有益效果。

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌LT‑2(Bacillus velezensis LT‑2)，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019904，保藏日期为2019年11月7日。本发明还首次公开了贝莱斯芽孢杆菌在联产微生物多糖和γ‑聚谷氨酸中的应用。该菌株以菊芋粉和甘蔗汁中的一种或两种的混合物为碳源，胰蛋白胨为有机氮源，硫酸铵为无机氮源发酵合成微生物多糖和γ‑聚谷氨酸。在联产过程中培养基中积累的微生物多糖浓度最高可达29.16g/L，γ‑聚谷氨酸浓度最高可达6.96g/L。本发明所述操作方法简单，成本较低，极具工业化推广应用前景，同时为微生物多糖和γ‑聚谷氨酸的生物合成提供一种新工艺。

本发明公开了一株小菜蛾蒙氏肠球菌Enterococcus mundtii PxG1菌株及其应用，所述菌株于2020年06月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：61067。本发明研究表明，饲喂Enterococcus mundtii PxG1菌株的小菜蛾，羽化率显著降低；同时表明Enterococcus mundtii PxG1菌株具有提高Bt毒素杀虫活性、增效Cry1Ac原毒素快速致死小菜蛾的作用，Enterococcus mundtii PxG1菌株可以作为新型生物防治的细菌，用于十字花科蔬菜害虫的防控，具有很好的生物防治潜力和应用前景。

本发明提供了一种蛋白水解靶向病毒，所述病毒在其一个或多个不同蛋白的位点包含一个或多个能被泛素‑蛋白酶体系统识别的蛋白水解靶向分子；并且所述病毒蛋白和蛋白水解靶向分子之间通过一个或多个连接链连接；其中，所述连接链能够被选择性切割。本发明还提供了所述蛋白水解靶向病毒的制备方法。具体地，本发明提供了一种蛋白水解靶向流感病毒及其制备方法。本发明提供的蛋白水解靶向病毒及其制备方法可以被广泛应用于活疫苗、减毒疫苗、灭活疫苗、强毒的安全模型等。与现有技术相比，本发明提供的蛋白水解靶向病毒及其制备方法用于设计成具有不同失活程度的疫苗，具有安全的可控性，并且这类疫苗具有很好的免疫原性。

本发明公开了一种靶向Trypsin‑9基因的miR‑283‑3p及其应用，所述miR‑283‑3p序列如SEQ ID NO:1所示，Trypsin‑9基因序列如SEQ ID NO:2所示。并验证了miR‑283‑3p负调控Trypsin‑9的表达，进一步利用SDS‑PAGE电泳检测了高表达和抑制miR‑283‑3p的表达后，中肠液对原毒素Cry1Ac的活化作用，明确了miR‑283‑3p靶向Trypsin‑9可介导原毒素Cry1Ac的活化作用，可应用miR‑283‑3p作为分子靶标来防控小菜蛾等十字花科蔬菜害虫。

本发明公开了一种拭子核酸样本释放剂及其应用。所述样本释放剂包括1‑20mol/L的金属离子螯合剂、pH 6‑9、5‑80mmol/L的缓冲液、5％‑40％(v/v)的极性有机溶剂、0.2％‑10％(v/v)的表面活性剂、0.1‑1mol/L的核酸酶抑制剂。该样本释放剂可以集取样保存‑灭活‑核酸提取三步为一步，取样后样本可直接放入装有样本释放剂的采样管中进行保存与运输；并且在使用时将采样管上下颠倒混匀，样本与样本释放剂充分混匀后，常温静置15分钟，即可在灭活样本的同时，将样本的核酸释放出来。从取样到PCR检测之间整个操作过程不用加热及中途开盖，有效的避免了对于实验操作人员及实验室的污染，操作极简；在突发性传染病事件中，本发明有着快速、安全、稳定、高效、成本低等明显的优势。

本发明是涉及微生物领域，尤其是有关于植物乳杆菌菌株及其用于降低发炎与治疗高尿酸血症的用途。本发明提供一种具缓解痛风的植物乳杆菌菌株。本发明还提供一种植物乳杆菌菌株用于制备一调控介白素‑1β基因、肿瘤坏死因子‑α基因、基质金属肽酶1a基因及TIMP基质金属肽酶抑制因子1基因的表现量的组成物的用途以及用于制备一治疗痛风的组成物的用途。

一种生产海藻糖的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程及发酵工程领域。为了解决目前生产海藻糖需要人为提供有机碳源作为原料，提高了生产成本的问题，本发明提供了一种生产海藻糖的基因工程菌及其构建方法与应用。所述基因工程菌是蓝细菌过表达麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase与麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase以及海藻糖转运蛋白TRET1获得的。本发明在光合自养微生物蓝细菌中实现由太阳能直接固定二氧化碳合成海藻糖。海藻糖合成能量的来源是太阳能，碳源的来源是二氧化碳。因此利用本发明方式合成的海藻糖与传统的生产方式相比不会受到原料和能量不足的限制，同时也不会增加碳排放，是真正意义上的零排放海藻糖产品。

本发明属于纳米生物技术领域，具体涉及一种生物‑无机组装系统及制备方法、降解有机污染物的方法。本发明所提供的生物‑无机组装系统，包括：硫化银纳米颗粒，以及表面展示有无机结合肽的微生物；无机结合肽特异性吸附结合硫化银纳米颗粒；编码无机结合肽的基因片段包括SEQ ID No.1所示核苷酸序列。既然提高了硫化银无机半导体材料与微生物的生物相容性，又有效改善了硫化银纳米材料的光催化活性，可应用于有机污染物的光催化降解。

本发明提出了PCR反应系统，该系统包括：样本容纳单元，所述样本容纳单元设置有第一液体出/入口；稀释液容纳单元，所述稀释液容纳单元设置有稀释液出口；PCR反应单元，所述PCR反应单元设置有裂解后的样本混合液入口和PCR反应液出口，所述PCR反应液出口与所述稀释液出口通过第四管路相连；以及活塞单元，所述活塞单元包括注射室和活塞，所述注射室设置有第二液体出/入口，所述第二液体出/入口与所述第一液体出/入口通过第一管路相连，所述第二液体出/入口与所述稀释液出口通过第二管路相连，所述第二液体出/入口与所述裂解后的样本混合液入口通过第三管路相连。该系统实现了全自动化操作。

本发明公开了一种分子检测系统。该分子检测系统包括：基体，所述基体上设有固定装置、驱动装置、检测装置和温控装置；其中，所述固定装置适于固定含有待检测样本的容器；所述驱动装置适于驱动所述容器对所述待检测样本进行预处理；所述检测装置适于对经过所述预处理的所述待检测样本进行检测；所述温控装置适于调控所述待检测样本的温度。该分子检测系统可对待检测样本进行全自动化的快速检测。

本发明提出了缓冲液组合物，该组合物包括：丙三醇，氯化盐，Tris‑HCl，表面活性剂以及水。该缓冲液组合物能够同时在样本裂解和PCR扩增反应中发挥缓冲作用，从而为样本的核酸提取和荧光PCR反应的一体化提供了技术支持。

本发明提出了利用PCR反应系统进行PCR反应的方法，该方法包括：将所述活塞进行第一移动处理；将所述活塞进行第二移动处理，以便使进入注射室的所述稀释液与裂解冻干粉和样本进行第一混合处理；将第一混合处理产物进行裂解处理；将所述活塞进行第三移动处理；将所述活塞进行第四移动处理，以便使进入注射室的所述裂解处理产物与剩余部分稀释液进行第二混合处理；将所述活塞进行第五移动处理，以便使第二混合处理产物进入所述注射室；将所述活塞进行第六移动处理，以便使进入注射室的所述第二混合处理产物与反转录酶和PCR原料冻干粉进行第三混合处理；以及将第三混合处理产物进行PCR温度循环扩增处理。

本发明公开了一种高效土壤微生物总RNA提取方法，属于土壤微生物领域。本发明在the MoBio Power Soil®Total RNA Isolation Kit的土壤微生物RNA提取方法上进行改进，可以从重金属污染土壤（HC和MC）中提取到高质量和足够的量的RNA，并且可用于下游qRT‑PCR和宏转录组分析。此外，我们优化的提取方案还提高了从GL和FP土壤中获得RNA的效率，表明我们所提出的土壤微生物RNA提取方案在不同理化性质土壤中应用的稳定性。目前，已经有许多关于通过研究土壤微生物DNA，来探索潜在的污染物修复的微生物和其中的功能基因。通过我们改进的方法，未来的研究可以通过RNA来探索更多土壤生态地的活性微生物和相关功能基因，尤其是受污染的土壤生态环境。

本发明涉及TCF12在肝细胞癌的诊断和治疗中的应用。具体地，本发明提供了一种TCF12基因、mRNA、cDNA、或蛋白或其检测试剂在肝细胞癌诊断中的用途，本发明的TCF12基因或其蛋白抑制剂可有效治疗肝细胞癌，并且本发明的TCF12基因或其蛋白的抑制剂可任选的与其他预防和/或治疗肝细胞癌的药物联用，并且对肝细胞癌的治疗有显著的协同效果。

本发明涉及柠檬酸发酵领域，具体涉及一种玉米浸泡液的发酵处理方法及利用该方法获得的液相产物及其应用。玉米浸泡液的发酵处理方法包括：将酵母菌接种在玉米浸泡液中对所述玉米浸泡液进行发酵。通过上述技术方案，使用酵母菌先对玉米浸泡液进行发酵处理，获得的发酵液相产物中二氧化硫和亚硫酸盐的浓度大大降低，其可以不经高温蒸发浓度而直接用于柠檬酸发酵的种子培养基和发酵培养基中，节省了大量的能源。并且使用所述发酵液相产物制备的种子培养基进行黑曲霉种子培养时，能够大大缩短种子培养的时间，使用所述发酵液相产物制备的发酵培养基进行柠檬酸发酵时，能够有效提高发酵效率，提高发酵终点的酸度和糖酸转化率、缩短发酵周期。

本发明涉及乳酸菌发酵领域，一方面公开了一种乳酸菌培养基及其使用方法，所述培养基含有大米粉、酵母粉、糖蜜、乙酸钠、硫酸镁、柠檬酸铵、磷酸氢二钾、硫酸锰和吐温80。本发明一方面公开了如上所述的乳酸菌培养基在乳酸菌发酵中的应用。本发明一方面公开了一种乳酸菌的培养方法，该方法包括：将乳酸菌的种子液接种到如上所述的乳酸菌培养基中进行培养。本发明所述的乳酸菌培养基能够显著提高菌体的生长速度和菌体活力，能够使菌体更为强壮；利用所述培养基对乳酸菌进行发酵，在发酵结束时的菌体密度更高，发酵时间明显缩短。通过上述技术方案，能够降低生产成本，从而提高经济效益。

本发明涉及微生物菌剂领域，公开了一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体菌剂及其制备方法和应用。其中，所述用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基，其制备原料包括淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉。本发明中还提供了所述枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌菌种接种到上述固体培养基上进行发酵。使用本发明所述的用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基通过固态发酵的方法生产枯草芽孢杆菌固体菌剂，制备得到的枯草芽孢杆菌固体菌剂菌体粗壮、染菌率低，混合均匀度变异系数小于5％；还使菌剂制备流程简化，减少了设备和能耗，大大减少了废水的产生，从而减少了环境负担。

本发明涉及微生物发酵饲料领域，具体涉及植物乳酸菌固体菌剂及其制备方法和应用。该方法包括：(1)将植物乳酸菌的菌种接种到第一固体发酵培养基中进行第一发酵培养，得到第一发酵物料；(2)将所述第一发酵物料接种到第二固体发酵培养基中进行第二发酵培养，得到第二发酵物料；其中，所述第一固体发酵培养基含有淀粉质原料粉碎产物和淀粉渣；所述第二固体发酵培养基含有DDGS、DDS、淀粉质原料皮和钙源。通过上述技术方案，在特定的发酵培养基中对植物乳酸菌进行二次发酵，显著提高了菌种的代谢能力，从而使得最终获得的发酵产物中乳酸含量菌体数量得到了大大地提高，也即，改善了发酵效果。

本发明涉及微生物发酵领域，一方面公开了一种黑曲霉种子液的制备方法，该方法包括将黑曲霉种子接种到种子培养基中进行培养，得到黑曲霉种子液；其中，在所述培养的过程中流加营养物，所述营养物包含氮源和磷源。本发明另一方面公开了一种发酵制备柠檬酸的方法，该方法包括在能够生成柠檬酸的条件下，将通过如上所述的黑曲霉种子液的制备方法得到的黑曲霉种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液。通过本发明上述的方法，可以在黑曲霉种子液培养的不同时期提供不同的控制条件，加快种子生长，缩短种子液培养时间，进一步提高黑曲霉发酵的效率和产率。

本发明涉及生物菌剂领域，公开了一种用于植物乳杆菌发酵的固体培养基以及植物乳杆菌固体菌剂及其制备方法和应用。其中，所述用于植物乳杆菌发酵的固体培养基，其制备原料包括淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、碳酸盐、酵母浸粉和糖类。本发明还提供了所述植物乳杆菌固体菌剂的制备方法，该方法包括：将植物乳杆菌菌种接种到上述固体培养基中进行发酵。使用本发明所述的固体培养基通过固态发酵的方法生产植物乳杆菌固体菌剂，制备得到的植物乳杆菌固体菌剂菌体饱满粗壮，有效活菌数大于500亿cfu/g，混合均匀度变异系数小于5％；本发明操作步骤少，杂菌率低，提升产品质量，节约设备和能耗，大大减少了废水的产生，从而减轻了环境负担。

本发明涉及发酵领域，公开了一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌接种至发酵培养基中进行发酵，在枯草芽孢杆菌发酵的对数生长期，开始向所述发酵培养基中添加营养补充剂，所述营养补充剂含有酵母浸粉、葡萄糖和硫酸锰。采用本发明的方法进行枯草芽孢杆菌的培养，能够有效缩短出芽周期和发酵周期，提高发酵终点的菌体密度。本发明的方法还可以在不改变设备和反应条件等能耗的前提下，能够得到较高的菌体干重，从而提高了经济效益。

本发明公开了缺失型alpha‑地中海贫血三重实时荧光定量PCR检测引物、探针，包括分别针对HBA、CRE、HBZ基因的三组引物和探针，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.9的碱基序列。据此，发明人还研制了相应试剂和并建立相应基于Taqman探针的三重荧光PCR检测非常见缺失型alpha‑地中海贫血的方法。本发明具有灵敏度高、特异性强、结果可靠的特点，是一种理想的大规模探索广西常见和非常见的缺失型alpha‑地中海贫血基因的方法，从而弄清广西非常见的缺失型alpha‑地贫基因突变的基因谱和基因突变频率，为广西调整地贫防治策略、降低地贫患儿的出生提供科学依据。

本发明公开了一种通过定点突变提高聚合酶大片段活性的方法：通过酶切连接将野生型Bst DNA聚合酶大片段基因克隆到原核表达载体上，并对氨基酸D308或D520进行点突变构建突变体，并转入原核表达载体进行表达，纯化；所述野生型Bst DNA聚合酶大片段的基因序列如SEQ ID NO.1所示；得到了两个突变体：D308E，D520E。结果显示：与野生型Bst DNA聚合酶大片段相比，突变型D308E和D520E Bst DNA聚合酶大片段反应速率均有提高，因此，这两种突变体有着较大的应用价值和商业价值。

本发明公开了一种单分子收集方法和收集系统，其中单分子收集方法包括：将待分离的单分子样品与反应试剂混合在一起，通过液滴制备技术，将单分子与反应试剂包裹到一个液滴中；通过信号放大系统将液滴中的单分子信号进行放大；对液滴中的信号进行检测；通过液滴收集系统，将包含特定信号的目标液滴收集出来，实现单分子的收集。本发明的收集方法具有快速，高通量，低成本的特点，可以实现单分子的高通量检测，捕获，收集，可以广泛应用于分子进化、合成生物学、分子筛选、抗体工程、酶工程、靶向测序等领域。

本发明涉及微生物领域，具体涉及植物乳酸菌在枯草芽孢杆菌固体菌剂保存中的应用及延长枯草芽孢杆菌的保存期的方法。方法包括：将植物乳酸菌菌体与枯草芽孢杆菌菌体进行混合，得到混合菌体；将所述混合菌体与冷冻载体混合，并将得到的混合物进行冷冻干燥；所述冷冻载体选自可溶性淀粉、无水亚硫酸钠、珍珠盐和葡萄糖中的至少一种。本发明通过在枯草芽孢杆菌与植物乳酸菌混合制备成固体菌剂，能够有效抑制保存过程中枯草芽孢杆菌的活菌数下降，延长保存周期。

本发明涉及微生物领域，具体涉及植物乳酸菌在枯草芽孢杆菌发酵液储存中的应用。所述应用包括：去除枯草芽孢杆菌发酵液储存过程中产生的异味，减缓其活菌数的下降。还提供了一种去除枯草芽孢杆菌发酵液储存过程中产生的异味的方法，该方法包括：将植物乳酸菌的发酵液和枯草芽孢杆菌的发酵液混合，得到混合发酵液，并将所述混合发酵液进行储存。将植物乳酸菌应用在枯草芽孢杆菌种子液储存的过程中，能够有效的去除其产生的较浓刺鼻性异味，并使得其活菌数较为稳定。

本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种柠檬酸的生产方法。包括：(1)原料预处理；(2)调浆；(3)液化；(4)发酵；(5)柠檬酸的分离纯化；其中，在步骤(1)‑(4)的任意一个或几个步骤中加入二氧化钛。本发明提供的方法是在以生物质为原料发酵生产柠檬酸的过程中，添加一定比例的二氧化钛，在搅拌过程中使黑曲霉菌球变小、增大比表面积，同时吸附培养基中所含毒素，改善培养基传质性能，增强细胞活力，加快物质进出细胞速度，从而实现加速黑曲霉代谢循环的目的，进而缩短发酵周期，节约能耗，提升产能，降低生产成本。

本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种枯草芽孢杆菌快速产芽孢的高密度发酵方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中进行发酵产芽孢，该方法还包括在发酵培养过程中添加消泡剂，以及通过如下至少一种方式调节发酵培养条件：(1)当发酵液的OD值达到1‑5时降低搅拌转速；(2)当发酵液的OD值达到1‑14时降低通风量；(3)当发酵液的OD值达到1‑14时升高培养温度。使用本发明的方法能够将枯草芽孢杆菌高密度发酵产芽孢的周期大幅度的缩短至15h以内，实现了快速发酵产芽孢的目的。通过控制发酵产芽孢过程中的参数，还实现了减少消泡剂使用量和糖分残余量的技术效果。

本发明涉及微生物技术领域，公开了一种菌剂载体及其制备方法和应用以及乳酸菌固体菌剂的制备方法。所述菌剂载体含有碳酸钙、粗纤维原料粉末、淀粉和蒙脱石。所述乳酸菌固体菌剂中除了所述菌剂载体和乳酸菌外，还含有菌体保护剂。与现有技术相比，本发明所述的菌剂载体具有营养缓释性，制备得到的乳酸菌固体菌剂由于菌剂载体中的碱性物质对高浓度乳酸的代谢反馈作用以及菌体保护剂的保护性能而能够使乳酸菌菌体能够在存储前期缓慢增殖，在保存6个月后菌体数量不低于初始值。同时在菌剂制备过程中发酵液全部被利用，实现了乳酸菌菌剂的绿色、高效生产。