生物化学、啤酒、烈性酒、果汁酒、醋、微生物学、酶学、突变或遗传工程

本发明涉及一种用于检测南美白对虾肝肠胞虫的引物对、扩增试剂、扩增试剂盒、检测方法和应用。本发明通过设计检测虾肝肠胞虫的引物对，该引物对由引物EHP‑F和EHP‑R组成；以及设计了荧光探针EHP‑P。可以成功实现基于RPA技术对虾肝肠胞虫靶标基因的扩增，本发明检测方法为基于RPA技术，可用于特异性检测虾肝肠胞虫，该方法操作简便，灵敏度高，反应条件温和，反应时间短，能满足养殖场现场检测的基本需求。

本发明公开了一种模拟感染伤口用于抗菌敷料抗菌效果测试的模型及方法，模型包括：放置用于模拟人体组织的基质的伤口感染模拟室，卡接于伤口感染模拟室瓶口并位于基质上方的敷料放置室，设置于敷料放置室下并用于模仿感染伤口的通孔，设置于敷料放置室上的密封盖；本发明通过结构设计能够准确模拟出不同程度的感染伤口，再配合测试方法实现客观定量的评价用于不同感染伤口的抗菌敷料的抗菌性能。

本发明提供一种用于乳腺癌分型及预后预测的引物组及试剂盒，属于生物医学检测领域，该引物组包括基因ESR1、PGR、ERBB2及管家基因ACTB、RPLPO和TFRC的6对引物，引物组的序列如序列表SEQ ID NO:1‑12所示。本发明提供的一种用于乳腺癌分型及预后预测的引物组及试剂盒具有操作简便、快速高效，对乳腺癌分型及预后的判断的可重复性高、实用性高、易于标准化的优点。

本发明涉及一种醋，具体地说是一种具有激发人体自愈能力的灵芝谷沙棘酵醋。具有助消化、提高细胞组织生理机能，调节免疫机能的作用。具体实施方案主要是将沙棘原浆、沙棘叶、牛蒡根、玉竹、桑叶、荷叶、柠檬、绿茶、甘草洗净、压榨、发酵和灵芝谷酵醋调配均质，采用量子技术加工处理后包装。

本发明公开了一种基于数字PCR技术检测胃癌血浆cfDNA中基因Reprimo和/或基因RNF180甲基化的组合物、试剂盒及检测方法。本发明基于微滴式数字PCR技术绝对定量检测胃癌血浆cfDNA中Reprimo基因或RNF180基因甲基化的检测方法，该方法检测灵敏度高，结果精准，可绝对定量，有着广阔的应用前景和产业化前景。更重要的是，本发明将胃癌标志物Reprimo基因或RNF180基因的甲基化进行联合检测，通过实验证明，多参数联合诊断分析用于区分健康对照组和GC组以及良性组和GC组的诊断价值优于单项参数检测，可实现胃癌诊断的早发现、早预防，对于胃癌的治疗和预后有着重要意义。

本发明公开一种硅基质核酸纯化柱的再生方法，具体是将纯化柱浸泡A溶液中并于室温条件轻微搅拌10～15小时，再用自来水冲洗两次，随后将纯化柱浸泡在B溶液中平衡至中性，纯化柱再浸泡在纯净水中于121℃度灭菌15分钟后，于60℃烘箱烘干待用。本方法可以一次性处理大量的纯化柱，纯化柱再生5次，其核酸吸附率保持在95％左右。本方法操作简单，具有经济、高效和环保等优点，适用于市场上常用的硅基质核酸纯化柱的再生和重复利用。

本公开提供了人肠癌原代细胞及其培养方法和应用，该人肠癌原代细胞命名为人肠癌细胞HCOC‑883，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21096。

本发明公开了一种检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，其中，黄颡鱼小RNA病毒‑1荧光定量检测试剂盒包括特异性引物组A和Taqman荧光探针B；本发明采用荧光定量技术，通过检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的衣壳蛋白基因，来检测黄颡鱼小RNA病毒‑1，这是目前国内外首次研制检测黄颡鱼小RNA病毒‑1的引物组和试剂盒。该试剂盒的研制为黄颡鱼小RNA病毒‑1病的监测和预防奠定基础。

本发明公开了梨PbPRR2和PbPRR3基因及其应用。本发明挖掘了梨CCT基因家族中的两个成员PbPRR2和PbPRR3基因，在烟草中分别超量表达PbPRR2、PbPRR3基因，均可以起到抑制植物净光合速率、气孔导度和胞间CO浓度的作用。本发明的PbPRR2和PbPRR3基因可以显著抑制植物的光合作用，可利用基因工程基因干涉或敲除该基因，在果树高光效分子育种中发挥重要作用。

本发明公开了梨PpFKF1基因及其应用。在烟草中超量表达PpFKF1基因，可以起到抑制植物净光合速率、气孔导度和胞间CO浓度的作用。本发明的PpFKF1基因可以显著抑制植物的光合作用，可利用基因工程基因干涉或敲除该基因，在果树高光效分子育种中发挥重要作用。

本发明公开了一种脂肪干细胞培养方法，属于生物技术领域，一种脂肪干细胞培养方法，本方案可以实现当需要对吸脂来源的脂肪组织进行清洗时，脂肪组织放置在放置平台上端，将D‑Hanks溶液加入进冲洗箱内，按压堵盖使穿透杆插设进脂肪组织，同时膨胀气囊内的D‑Hanks溶液通过压力抵压流入至脂肪组织内壁，对脂肪内壁进行清洗，同时加热阻丝持续对冲洗箱内部进行恒温加热，为后续的干细胞分离工作降低了难度，当脂肪组织清洗结束后，通过拉动限位柄带动活塞向右侧移动，对排液管道内造成负压现象，使吸附薄膜对D‑Hanks溶液上的聚集一起的血细胞和组织碎片进行吸附，同时膨胀气囊对脂肪组织进行挤压，将脂肪组织上的D‑Hanks溶液排干。

本发明涉及核酸检测技术领域，公开了一种用于自动化核酸检测的一体式样本处理耗材，包括管体，管体内布置有裂解腔、提取腔和扩增腔，管体于裂解腔与提取腔之间、提取腔与扩增腔之间均成型有连通通道，连通通道上布置有阀芯，管体上还布置有与提取腔连通的气体通道，气体通道用于供核酸检测一体机向提取腔内通气或者排气以驱动阀芯移动，从而控制连通通道的开闭。在核酸检测时，样本的裂解、提取稀释以及扩增反应均在相应的腔体内密闭条件下进行，核酸检测一体机利用阀芯控制连通通道的开闭，利用压力变化驱动核酸样本在不同的腔体内流动，完成PCR裂解、提取、扩增、检测等操作，不需要在不同仪器间转移样本，避免样本、人员和环境受到污染。

本发明提供了一种鉴定小麦叶片绒毛基因的分子标记、引物组和应用。该基因为一个新基因，被定位在小麦地方品种白毛麦的7BS染色体上，命名为QLP.saas‑7BS；其被定位于SNP芯片探针AX‑86175290和AX‑86172908之间，根据探针序列分别开发了KASP标记，分别命名为KASP‑AX‑86175290和KASP‑AX‑86172908。本发明用新开发的KASP分子标记能有效检测和筛选小麦绒毛性状，将分子标记技术应用在选育小麦具有叶片绒毛表型性状品种中，节约了生产成本、提高了选择效率，缩短小麦品种的育种周期；且其检测方便快速，不受环境影响。

本发明提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)p(2'OMeU)。本发明提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

本发明提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为m7G(5')ppp(5')(2'OMeU)p(2'OMeU)。本发明提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

本发明涉及一种几丁二糖脱乙酰酶突变体，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac与底物GlcNAc结合的关键位点进行定点饱和突变体库的构建和筛选，从而鉴定一个或多个氨基酸残基在几丁二糖脱乙酰酶Dac的功能和稳定性等方面发挥的重要作用，并对酶活最高的突变体进行组合突变，获得了几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，提高了酶的反应活性。

本发明提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为3′‑O‑Me‑m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)p(2'OMeA)。本发明提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

本发明提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)p(2'OMeC)。本发明提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

本发明涉及资源利用和环境保护技术领域，且公开了一种安全高效沼气池，包括沼气池主体，所述沼气池主体的中间活动连接有平衡活塞板，所述平衡活塞板的底部为发酵间，所述平衡活塞板的顶部为储气间，所述储气间的一侧固定连接有通气管，所述通气管的一端固定安装有通气阀，所述储气间的顶端固定连接有取用管，所述沼气池主体的一侧固定连接有出料间。本发明通过利用平衡活塞板调节储气间内气压平衡时的上下移动，来带动外轴沿自身轴线进行自转，进而使搅杆转动对沼料进行搅拌，使得沼料与微生物的接触机会增加，促进微生物的新陈代谢，增加反应活性，提到产气率，确保了在低温环境下，沼气产量充足燃烧火力稳定。

本发明公开一种合成芥菜中导入的白菜基因组片段或遗传多样性分析的组合物及应用。本发明提供用于检测SNP分子标记的特异性引物组合，其包括第一正向引物、第二正向引物和反向引物。本发明基于KASP技术，开发了一套用于合成芥菜中导入的白菜基因组片段以及遗传多样性分析的通用SNP分子标记，从而实现高通量以及高精确的检测。同时本发明的基因导入方法，建立了合成的芥菜系，相比于传统芥菜，显著拓宽了芥菜的遗传多样性。此外，本发明的方法不仅能够有效评估新种质真实的遗传多样性，而且大大降低遗传多样性评估成本。

本发明提供用于特异性检测牛疱疹病毒I型(BoHV1)的LAMP引物组，包含该引物组以用于通过LAMP扩增技术检测BoHV1病毒的试剂盒，以及使用该引物组或试剂盒通过LAMP扩增技术进行BoHV1检测的方法。通过本发明，可以实现在采样后40‑60分钟即完成快速检测，极大地提高了BoHV1检测的效率，并且通过肉眼观察即可判定检测结果。

本发明提供一种欧洲型PRRSV‑N蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体的制备方法及其在制备用于检测欧洲型PRRSV感染的免疫检测工具中的应用。本发明以欧洲型PRRSV‑N蛋白为免疫原免疫小鼠，制备阳性单克隆杂交瘤细胞株，并通过诱生腹水与纯化，得到欧洲型PRRSV‑N蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体具有特异性好、敏感度高、纯度高的优点，具备较高检测灵敏性与特异性，为进一步应用于欧洲型PRRSV病原的检测奠定基础。

本发明公开了一种乳酸发酵含酸废水的回收利用方法，包括以下步骤：（1）玉米淀粉和反渗透废水混合均匀，调浆；（2）将调好浆的玉米淀粉溶解经过两次酶解，板框过滤，得到液化糖清液；（3）将液化糖清液和硫酸铵、酵母粉等营养物分别补充反渗透废水调整浓度，连消灭菌后得到微生物培养基，进行菌种发酵；（4）发酵后，经过固液分离出去菌体，经酸解得到乳酸，通过蒸发器浓缩提高乳酸浓度，蒸发过程中产生大量的含乳酸废水；（5）含乳酸的废水通过氢氧化钙中和生产乳酸钙，乳酸钙溶液透过反渗透膜，得到乳酸钙浓缩液和反渗透废水；产生的废水回到步骤（1）和步骤（3），如此循环。本发明相对节省了污水处理成本，提高乳酸了回收率，具有重要的环境效益、经济效益。

本发明公开了一种沼气生产分离装置，一种沼气生产分离装置，所述装置包括有进料箱、若干个发酵箱、送料箱、分离箱，所述进料箱的出料口通过第一开关组件可选择的依次与若干个发酵箱的进料口连通，若干个所述发酵箱的出料口通过第二开关组件依次与送料箱的进料口连通，所述送料箱的第一出料口通过第三开关组件与分离箱的进料口连通所述分离箱内活动设置有第一推板，所述第一推板可将分离箱内的沼渣推出分离箱进入送料箱内并通过第四开关组件与送料箱的第二出料口连通。

本发明公开了一种用桦褐孔菌提取黑玉米花青素的方法，包括如下步骤：(1)黑玉米穗轴预处理：清洗、干燥后，粉碎，过筛；(2)菌源液制备：将桦褐孔菌菌株于PDA培养基上培养得到菌丝体；再将菌丝体转移至液体培养基，培养得到菌源液；(3)花青素提取：在蒸馏水中加入黑玉米穗轴粉碎物和酵母提取物形成培养液；接种菌源液，振荡培养7‑10天，收集培养液；将培养液通入反渗透装置，得到浓缩液；将浓缩液通入树脂柱，以酸性乙醇进行洗脱，得到洗脱液；将洗脱液通入真空减压蒸馏器，回收溶剂，再对蒸馏物进行干燥即得到花青素粉末。本发明首次采用桦褐孔菌提取黑玉米花青素，提取效率高，生物安全，为黑玉米花青素的利用打开了广阔空间。

本发明公开了一种基于外周血内基因甲基化的肺癌诊断试剂盒，属于肿瘤诊断试剂领域。本发明的试剂盒包括检测TBCEL、GPI、UBE2S、TOX、PPL、H2AFX、FOXA1、TTC7B、ZNF799、WNT10B、KCNQ3、GFI1、CCDC170、RAET1G和EFNB2的甲基化的试剂，可实现肺癌快速诊断，准确性高，应用前景良好。

本发明提供了控制同一靶基因在宿主中以不同剂量进行表达的方法及产品，在插入序列中，外源强启动子两端设置了两个终止元件，每个终止元件两端具有不同的重组酶识别位点序列，当插入到宿主基因组编码外显子之前的内含子之中时，两个终止元件将阻止启动子的功能从而抑制靶基因表达，而通过不同的重组酶控制相应的终止元件及启动子的剔除实现内源启动子或外源强启动子调控的基因低剂量或高剂量表达。

本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了一种环状RNAcirc0001610及其表达产物在诊断和治疗膀胱癌药物中的应用，所述环状RNAcirc0001610的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。实验显示环状RNAcirc0001610及其表达产物在膀胱癌组织中表达显著上调。在人膀胱癌细胞5637和膀胱癌细胞J82中，敲低环状RNAcirc0001610的表达水平显著抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭水平，即下调表达环状RNAcirc0001610可以抑制膀胱癌细胞株的生长。

本发明提供了一种高产喜树碱内生菌株，所述高产喜树碱内生菌株为：细极链格孢菌ZCMUKL‑S1(Alternaria temuissima ZCMUKL‑S1)，其保藏编号为CCTCC NO：M2021189，或香茅链格孢菌ZCMUKL‑S2(Alternaria citricancri ZCMUKL‑S2)，保藏编号为CCTCC NO：M2021190，或杂色曲霉ZCMUKL‑S3(Aspergillus versicolor ZCMUKL‑S3)，保藏编号为CCTCC NO：M2021191。该内生真菌具有较高的喜树碱产量，其中，杂色曲霉ZCMUKL‑S3的单位干燥菌丝体粉末的喜树碱产量高达116μg/g，是目前已报道的内生菌产喜树碱的最高产量，对其工业化生产具有潜在的应用价值。另外，本发明提供的可高产喜树碱的内生真菌具有较好的遗传稳定性。

本发明涉及一种棒状杆菌工程菌构建方法及应用。本发明的棒状杆菌工程菌，是在棒状杆菌宿主菌中，替换PC基因5′端序列中起始密码子GTG前‑73位～‑61位核苷酸序列，降低PC基因5′端序列二级结构的稳定性，使其更易于被转录或表达，其中K指代T或G。该棒状杆菌工程菌与原始菌株相比，在L‑赖氨酸合成效率上有一定提高，进而提高L‑赖氨酸产量，降低生产成本，而且与现有的高产L‑赖氨酸的改造方法没有冲突，但是与现有的改造方法是否有相互促进的作用，仍需要进一步验证。

本发明涉及一种改造HTS基因5′端序列的重组棒状杆菌及其应用。本发明的重组棒状杆菌，是在棒状杆菌宿主菌中，替换HTS基因5′端序列中起始密码子ATG前‑19位～‑12位核苷酸序列，降低HTS基因5′端序列二级结构的稳定性，使其更易于被转录或表达。该重组棒状杆菌与原始菌株相比，在L‑赖氨酸合成效率上有一定提高，进而提高L‑赖氨酸产量，降低生产成本，而且与现有的高产L‑赖氨酸的改造方法没有冲突，但是与现有的改造方法是否有相互促进的作用，仍需要进一步验证。

本发明公开了一种贵州黑山羊多羔主效基因应用及引物对和试剂盒，贵州黑山羊产羔性的主效基因包含：上调基因AMH、CYP19A1、FOXL2、FSHR、GATA4、INHBA、LHB、LHX9、ZP3，下调基因CNOT1、DMRTA1、GHRHR、Hox‑All、Oviductin、PCYT1B、SLC34A2、WDR19、Wnt‑7A；所述的上调基因和下调基因分别在多羔性的贵州黑山羊中表达量上调和下调。掌握贵州黑山羊产羔性的主效基因，在世代选育中，逐步淘汰具有单羔性能的基因个体，选留多羔性能基因个体，对组建贵州黑山羊繁殖群多羔专门化新品系具有重要科学依据。本发明对研究贵州黑山羊多胎性状具有重要价值，对提升贵州地方品种羊的生产性能、供种能力、经济效益及社会效益具有重要意义。

本发明属于食品制备技术领域，涉及一种魔芋葡甘露低聚糖的制备方法，该方法涉及如下步骤：(1)取经纯化后的魔芋精粉，向其中加入缓冲液，得到魔芋精粉的悬浊液；(2)向悬浊液中加入β‑甘露聚糖酶，水浴，得到混合料液；(3)将混合料液分别进行超声和微波处理，得到酶解液；(4)将酶解液灭酶，得到灭酶后的料液；(5)将料液取出，进行离心处理；(6)将离心后的上清液，用无水乙醇处理；(7)将处理后的溶液进行旋蒸，得到魔芋葡甘露低聚糖溶液；(8)将所得溶液冻干，得到魔芋低聚糖成品。本发明利用超微辅助酶解，减少了酶的用量，使魔芋精粉的水解率达到50％以上，得到了品质较好的魔芋葡甘露低聚糖产品。

本发明涉及一种烟草7‑脱氢胆固醇还原酶基因及其应用，7‑脱氢胆固醇还原酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于甾醇对烟叶安全性有重要影响，对烟草甾醇代谢调控基因进行深入研究，以利用基因工程构建新的烟草品种，为改善烟草品种奠定良好应用基础。本申请中，通过对特定烟草甾醇7‑脱氢胆固醇还原酶的初步研究，发现其与烟草叶片中甾醇含量高度相关，在本氏烟草中将该基因沉默，烟草叶片中豆甾醇、菜油甾醇含量均降低，总甾醇含量降低了24.8％。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的基础和参考借鉴。

本发明涉及一种烟草3β羟基类固醇脱氢酶/C4脱羧酶基因及其应用，3β羟基类固醇脱氢酶/C4脱羧酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本申请中，通过对特定烟草3β羟基类固醇脱氢酶/C4脱羧酶基因的初步研究，发现其与烟草叶片中甾醇含量高度相关，在本氏烟草中将该基因沉默，烟草叶片中豆甾醇、菜油甾醇含量发生了明显降低，总甾醇含量降低17.9％。基于这一特性，可利用基因工程手段，为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

本发明涉及生物发酵技术领域，具体是一种翻转式微生物发酵装置，包括底板，底板上端左右两侧分别安装有左侧板和右侧板，右侧板上部左侧固定有第二轴承，第二轴承中部安装有被动轴，被动轴另一侧固定有中空发酵圆盘，中空发酵圆盘上端安装有注料装置，且中空发酵圆盘左侧通过密封轴承安装有转动轴，转动轴右端安装有搅拌装置，且转动轴中部固定有第一齿盘，通过被动轴、中空发酵圆盘、注料装置、转动轴、搅拌装置、第一齿盘、第二齿圈和传动连接装置的设置使本装置在进行发酵时，以一个电机为动力，原料向一侧翻转，搅拌装置向另一侧翻转，避免了上下层发酵物混合不均匀导致的发酵速率不一致的情况，保证产品的质量。

本发明公开了一种口腔鳞癌类器官的培养方法，包括以下步骤：S1、解离酶配置；S2、配置培养基，培养基由基础培养基DMEM/F12、R‑spondin1条件培养基、Wnt3A条件培养基、无菌水和功能组分组成；S3、临床操作获取样品，通过取材或手术切除获得肿瘤标本，切取组织，用无菌生理盐水冲洗3次，将组织放入DMEM培养基中浸泡1小时，继续解离；S4、组织预处理：将步骤S3中获得的样品置于无菌6孔板中，用一次性无菌手术刀片将样品组织块切碎；S5、组织解离消化：加入步骤S1中配好的解离酶，重复离心‑去除上清这一过程3次以充分去除解离酶，最后一次离心前将细胞与样品组织块混合；S6、类器官培养。

本发明涉及一种3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因及应用，3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本申请中，通过对特定烟草3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶的初步研究，发现其与烟草叶片中甾醇含量高度相关，在本氏烟草中将该基因沉默，烟草叶片中胆甾醇和豆甾醇含量发生了明显降低，总甾醇含量降低35.4％。基于这一特性，可利用基因工程手段为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

本发明公开了一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒，引物及探针包括针对COVID‑19 ORF 1ab、COVID‑19 N、H1N1、FluA、FluB、RNase P基因的特异性引物及探针；试剂盒包括核酸扩增反应液、One step预混液、阳性对照品、空白对照品，核酸扩增反应液含有针对COVID‑19 ORF 1ab、COVID‑19 N、H1N1、FluA、FluB和RNase P基因的特异性引物及探针溶液。本发明的人呼吸道病毒核酸多重检测的引物、探针及试剂盒，可同时快速检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、甲型H1N1病毒、新型冠状病毒，操作简单，重复性好，成本低廉，适于推广使用。

本发明涉及微生物技术领域，且公开了一种高产脲酶的枯草芽孢杆菌及其应用方法，所述菌株为枯草芽孢杆菌，该菌能够生产脲酶，其主要应用于治理被重金属污染的土壤，所述菌株是从如下方法得到：从采集的重金属污染的土壤样品中分离出六株枯草芽孢杆菌在37℃培养36h‑48h后，对六株枯草芽孢杆菌进行生物量和脲酶活性的测定，得到一株脲酶减量较高、生长最佳的菌株。该高产脲酶的枯草芽孢杆菌及其应用方法，与化学修复重金属污染的土壤的方法具有成本低，本身对环境影响小，对技术及设备要求低等优势，与其他植物类生物修复法相比也具有周期短、见效快和耗力小的优势，同时降低环境污染。

本发明公开了一种绵羊PDGFD基因插入/缺失多态性的检测方法，包括以下步骤：以待测绵羊基因组DNA为模板，利用PCR扩增包含绵羊PDGFD基因内含子区插入/缺失多态性位点，将扩增产物进行电泳分型，根据电泳结果鉴定对应插入/缺失多态性位点的基因型；所述插入/缺失多态性位点选自绵羊PDGFD基因NC_040266.1:g.3876993‑3877010位18‑bp indel多态性位点。本发明方法能够简便、精确、低成本、精确地检测所述插入/缺失多态性位点的基因型，以快速建立优良性状的绵羊遗传资源群体。

本发明公开了一种改良桑树白藜芦醇生物合成的转录因子基因MaMYB14及其应用，所述转录因子基因MaMYB14的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该基因全长831bp，编码276个氨基酸。亚细胞定位研究表明，该基因蛋白主要定位于细胞核中；酵母激活实验显示该蛋白具有转录激活作用；启动子活性实验表明MaMYB14显著激活ProMaSTS3::LUC的表达，表明MaMYB14能促进桑树白藜芦醇合酶基因MaSTS3的转录，蛋白互作表明MaMYB14能与E3类泛素化酶SIZ1互作，本发明能够应用于改良植物中白藜芦醇的生物合成。

本发明涉及一种新型短侧链脂肪酸CoA连接酶及其在制备广藿香酮中的应用，属于生物医药领域。所述CoA连接酶为PcAAE1和PcAAE2，氨基酸序列如SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12所示，两种酶均具有CoA连接酶的作用，PcAAE2能够催化底物生成广藿香酮合成的前体物质4‑甲基戊酰‑辅酶A，是广藿香酮合成通路中的关键合酶。本发明通过提高PcAAE1或PcAAE2的转录水平或改变其在不同组织中的表达模式，能进一步提高广藿香酮的产量，并在广藿香酮通路解析及酵母生产广藿香酮具有较强的理论基础和广泛的应用价值。

本公开提供了一种白酒、青稞酒酿造温度测量方法和系统，涉及计算机技术领域，尤其涉及青稞酒酿造技术领域。具体实现方案为：通过将青稞进行精选、粉碎、润粮、蒸煮、加水撒冷、加大曲粉和拌壳之后，入发酵池中进行一次发酵；预先在发窖池中的至少一个预设位置设置无线温度传感器；在发酵过程中，开启所述无线温度传感器，通过无线收发装置接收无线温度传感器按照预设频次测量的一次发酵温度数据，从而能够精确测量青稞酒酿造过程中的温度数据，以获取温度对微生物的作用以及对风味化合物形成的影响，为后续调节青稞酒中风味化合物的形成提供参考。

本发明提供在非补充细胞中不表达毒性HSV基因并且包含含有一种或多种转基因的基因组的单纯疱疹病毒(HSV)载体，其中所述载体能够在非补充细胞中表达转基因达至少28天。本公开的载体包括在基因ICP0、ICP4、ICP22、ICP27和ICP47中具有缺失，或备选的失活突变的载体，或在动力学改变的情况下表达这些基因中的一种或多种的载体。本发明还涉及本发明载体的病毒贮存物，其适于治疗使用或适于体外应用的组合物，及与其相关的方法。在另一方而，本发明提供补充细胞，尤其是U20S细胞，其被改造成在所述细胞被HSV感染时表达ICP4和ICP27的，以用于产生本发明的载体。所述细胞被公开为天然补充ICP0。

本发明提供了一种棉花隐性核不育恢复同源基因对及其敲除试剂在创造不育系中的应用，属于棉花育种技术领域。GhCYP703A2_A基因和GhCYP703A2_D基因属于恢复基因同源基因对，分别位于棉花At和Dt亚基因组上，恢复基因同源基因对GhCYP703A2_A/D的双突变使陆地棉花药绒毡层发育异常、花粉外壁发育缺陷，最终表现出雄性不育表型。因此，本发明通过敲除所述同源基因对创制棉花雄性不育种质，具体采用一组sgRNA或CRISPR/Cas9系统同时敲除棉花中同源基因对GhCYP703A2_A/D，创制出陆地棉新的不育系材料，对杂种优势利用和群体改良具有非常重要的意义。

本发明公开了Ptchd3基因或蛋白在制备治疗慢性肾小球肾炎的药物中的应用，所述药物靶向Ptchd3基因或蛋白；以及提供一种治疗慢性肾小球肾炎的siRNA分子，所述的siRNA序列如SEQID NO.1和SEQID NO.2所示。本发明发现了一种与慢性肾小球肾炎相关的分子标记物Ptchd3，以及该标志物的抑制剂在制备治疗慢性肾小球肾炎药物中应用；本发明为临床治疗慢性肾小球肾炎提供了新的思路，为研究慢性肾小球肾炎的基因治疗提供了新的方向。

本发明涉及一种烟草NUDIX水解酶基因及其应用，碱基序列具体如SEQ IDNO.1所示。本申请中，通过对烟草NUDIX水解酶NtNUDX14的初步研究，发现其与烟草叶片中淀粉的合成代谢相关。在本氏烟草中将该基因沉默，叶片中直链淀粉、支链淀粉和总淀粉含量明显降低，总淀粉含量下降了59.8％。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的参考借鉴。

本发明涉及一种烟草支链淀粉酶基因及其应用，碱基序列具体如SEQ ID NO.1所示。本申请中，通过对烟草支链淀粉酶的初步研究，发现其与烟草叶片中淀粉的合成代谢相关。在本氏烟草中将该基因沉默，烟草叶片中支链淀粉和总淀粉含量明显降低，支链淀粉降低44.4％，总淀粉含量降低24.4％。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

本发明提供了一种促进环状RNA成环的序列组合及其应用，所述促进环状RNA成环的序列组合包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列组合或SEQ IDNo.3～4所示的核苷酸序列组合。本发明还提供了一种促进环状RNA成环的载体及其制备方法以及一种促进环状RNA成环并过表达的方法。本发明所述促进环状RNA成环的序列组合可以提高环状RNA的成环效率，连接入骨架载体中，制成促进环状RNA成环的载体，配合促进环状RNA成环并过表达的方法，实现了环状RNA在体外的高成环率、高表达量表达，操作简单，技术成熟，应用价值极高。