生物化学、啤酒、烈性酒、果汁酒、醋、微生物学、酶学、突变或遗传工程

本发明公开一种大豆免疫防御基因及其蛋白质和应用，包括大豆免疫防御GmPR‑1基因从大豆品系Wiliams82中使用引物对PR‑1‑F/R克隆获得，GmPR‑1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，GmPR‑1蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明提出的大豆病程相关基因GmPR‑1是一个编码参与到大豆免疫防御反应核心蛋白的基因，并且通过过表达GmPR‑1能够影响大豆在根瘤菌侵染时触发的早期免疫防御反应，进而提高共生结瘤和固氮能力，也能够增加单颗根瘤的瘤重和大小，提高大豆根瘤总重量和植株地上部分生物量。

本发明公开了一种转基因大豆事件XP‑2及其检测方法，所述转基因大豆事件XP‑2以SEQ ID NO:27所示的核苷酸序列为外源基因的左侧翼区，以SEQ ID NO:28所示的核苷酸序列为外源基因的右侧翼区。本发明转基因大豆事件XP‑2将编码草甘膦和啶嘧磺隆耐受性性状的基因连锁在同一DNA区段上，并且存在于转基因大豆事件XP‑2基因组的单一基因座上，这一点提供了增强的育种效率并使得能够用分子标记来追踪繁殖群体及其子代中的转基因插入片段。本发明提供的用于检测大豆植物的特异性核酸序列能够特异性检测转基因大豆事件XP‑2。

本发明涉及一种原发性肺癌辅助诊断panel、试剂盒及其应用，所述panel包括如下序号1至569所示的罕见功能性突变区域的90％及以上，所述罕见功能性突变区域与原发性肺癌相关。本发明进一步提供可应用于临床或人群的肺癌辅助诊断试剂盒，为肺癌早期筛查和诊断提供支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明公开了一种低氧环境下提高骨髓间充质干细胞活率的方法，具体涉及生物医药技术领域。所述方法包括获取骨髓间充质干细胞，并培养至第三代（F3）；选取生长良好的第三代（F3）细胞，进行细胞融合培养，培养至细胞融合到70%‑80%时，更换培养基；更换培养基后，放到通入含5%氧气和95%氮气的三气培养箱中低氧继续培养，得骨髓间充质干细胞。本发明优化细胞培养的方法，通过调节培养环境，促进细胞代谢和能量产生，增强细胞抗氧化能力，提高细胞在低氧环境下的适应能力和生存率。

本发明提供了用于快速鉴别槟榔鲜果果形的SSR分子标记引物，属于生物技术领域，所述引物包括SSR‑2‑F和SSR‑2‑R，所述SSR‑2‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SSR‑2‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该SSR分子标记引物对槟榔鲜果果形的鉴别具有较高的特异性，利用该SSR分子标记引物对槟榔基因组进行PCR扩增，扩增产物进行凝胶电泳，根据所得凝胶电泳图谱即可鉴别槟榔鲜果果形，将该SSR分子标记引物用于鉴别槟榔鲜果果形，具有易于操作、鉴别效率高和结果可靠的特点,具有极大的潜在应用价值。本发明还提供了用于快速鉴别槟榔鲜果果形的试剂盒及应用。

本发明提供了一种农杆菌介导玉米自交系B104幼胚的高效遗传转化方法，包括如下步骤：(1)获取玉米幼胚；(2)农杆菌侵染和共培养；(3)将共培养后的幼胚置于静息培养基；(4)将静息培养的胚状体用深蓝激发光源照射，再用体视镜观察，将含有绿色荧光的幼胚，夹掉其胚芽、胚根，转移到含双丙氨膦的筛选分化培养基中进行培养；挑选生长状态好的胚性愈伤组织转移至新的筛选分化培养基；(5)将筛选出的抗性组织继续置于筛选分化培养基，分化幼苗；(6)生根培养及炼苗移栽。本发明成功建立了简单、高效、重复性好的适合玉米自交系B104的遗传转化方法，对加快玉米育种进程、基因功能解析、丰富玉米种质资源等方面具有重要意义。

本发明涉及一种与花生蔗糖含量紧密连锁的分子标记及应用，所述分子标记为A06.115805462的SNP位点和A16.148167815‑148167817的InDel位点，根据这两个分子标记位点前后100bp的序列，分别设计KASP引物组合，基于候选基因的野生型和突变型序列，开发两位点的KASP分子标记，该标记在花生不同亲本的遗传群体中的分型结果与蔗糖含量紧密连锁，证明了该标记的准确性。该KASP标记能够快速准确的获得花生蔗糖含量信息，且能应用于花生分子辅助标记育种。

本发明公开了一株广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株，所述广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株命名为A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)，保藏编号为CGMCC No.45216；以及所述的广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株在制备疫苗中的应用。本发明阐明了广西鸡源H9N2禽流感病毒与其他分离毒株的抗原变异情况；该毒株制成灭活疫苗后，免疫4W SPF鸡，通过对同源和异源H9流感野毒株的攻毒免疫保护效果分析，证明该病毒株可以用作H9亚型禽流感疫苗候选株；免疫源性强。

本发明属于植物分子生物学技术领域，特别涉及一种鉴定棉花花药颜色性状的分子标记组合及方法和应用，具体涉及棉花花药颜色性状基因位点的SNP分子标记及应用，该SNP分子标记位于棉花第A05号染色体上第105079550、105080001、105080116位碱基及其上下游碱基组成的核苷酸序列。该SNP分子标记直接以DNA的形式表现，在棉花的各个发育阶段以及不同的组织器官中均可检测，且不受环境和季节的限制，不存在表达与否等问题影响。因此，该标记操作简洁、扩增结果精准、所需试剂成本较低，该标记的开发可用于棉花黄色花药和其它颜色花药品种的筛选与鉴定，加快目标性状的分子标记辅助选择育种效率。

本公开的实施方案包括用于生成或扩增对病毒有特异性的免疫细胞群体的方法，所述方法包括通过在下述的存在下：(i)对应于病毒的一种或多种抗原的全部或部分的一种或多种肽；或(ii)呈递对应于病毒的一种或多种抗原的全部或部分的一种或多种肽的抗原呈递细胞(APC)，在包含人血小板裂解物的细胞培养基中培养外周血单核细胞(PBMC)来刺激对病毒有特异性的免疫细胞。在特定的实施方案中，例如，细胞培养基包含特定百分比的人血小板裂解物和/或所述PBMC被清除了CD45RA阳性细胞。

本发明公开了一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质，所述标准物质是以NDV病毒为载体，插入外源新冠病毒基因序列形成NDV重组病毒载体，NDV重组病毒载体经病毒拯救形成重组NDV病毒，随后利用灭活型病毒保存液将重组NDV病毒稀释5倍以上，测定拷贝数后形成标准物质。本发明标准物质不存在质粒DNA残留，能完整的质控从核酸提取到荧光定量PCR扩增的整个过程。

本发明公开了一个调控大豆下胚轴伸长和叶面积大小的基因GmERECTAb及其编码蛋白与应用，通过对GmERECTAb的基因组序列gGmERECTAb进行扩增，并采用无缝连接方法进行载体重组，高效得将gGmERECTAb的基因组全长序列克隆到pBF载体上；通过Bar标记基因赋予转化受体的除草剂抗性筛选，以及Western Blot检测gGmERECTAb‑FLAG融合蛋白表达，确保阳性苗能准确快速检出，阳性苗筛选到T3代纯合，无分离情况出现，避免假阳性干扰。本发明GmERECTAb对荫蔽下大豆株型调控效果显著，结果准确可靠，调控方法操作简单，方便，可公式化，易于推广应用。

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及LRH基因在调控植物根毛伸长中的应用。本发明提供了LRH基因在调控植物根毛伸长中的应用，所述LRH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现LRH基因功能缺失株系的根毛明显长于野生型株系，而基因过表达株系的根毛长度显著短于野生型株系，进而验证了LRH基因在调控植物根毛伸长中的作用，明确LRH基因的新用途。

本发明提供了一种快速高效稳定验证辣椒基因功能的方法及应用，属于基因功能方法研究技术领域。本发明基于烟草脆裂病毒(TRV)开发的VIGS技术，构建了一套可快速、高效、稳定验证辣椒基因功能的方法，并在辣椒朝天椒和薄皮椒类型中通过严格条件优化得出，辣椒在农杆菌侵染后生长温度、农杆菌侵染浓度、农杆菌接种方式等方面有较为显著的影响，且最终发现，辣椒VIGS基因沉默体系的最优条件为：侵染后生长温度24℃，农杆菌接种浓度OD600值0.01，最佳接种方法为注射法。本发明中的方法对于辣椒中各种基因功能的验证意义重大。

本发明提供一种核酸检测POCT卡盒，包括：试剂腔主体，试剂腔主体内构造有上下贯通其两端的柱塞腔以及多个容置腔，柱塞腔内设有柱塞；扁平式反应腔体，其内部空间能够与柱塞腔可控连通，扁平式反应腔体具有能够与柱塞腔连通的第二反应腔进出液口以及与试剂腔主体内的通气通道连通的第一出口，扁平式反应腔体内构造有主流道，主流道的一端为第二反应腔进出液口，主流道的另一端与第一出口连通，主流道具有分支流道，分支流道的末端连接扩增室，扩增室具有扩增室通气口，扩增室通气口处设有透气不透水的密封膜。本发明有效防止了对反应试剂量的降低，保证了后续的扩增以及光学检测结果的准确性。

本发明涉及多肽水凝胶技术领域，且公开了一种多肽水凝胶负载充质干细胞及其制备工艺，将蚕茧制成丝胶溶液与聚乙烯醇溶液混合，制成凝胶，将聚乙烯醇、丙烯酰氯、巯基乙酸混合反应，多肽IKVAV和丙烯酰氯‑聚乙烯醇‑巯基溶解到磷酸缓冲盐溶液中制成溶液，得到丙烯酰氯‑聚乙烯醇‑IKVAV溶液，并滴加到水凝胶薄膜上，紫外灯照射得多肽水凝胶，将充质干细胞置于水凝胶培养，观察充质干细胞的后续生长状态。水凝胶与多肽的融合，填补了水凝胶在负载充质干细胞方面功能单一化的缺点，为充质干细胞提供一个更完善的生存环境。

本发明提供了一种高效连接mRNA片段的方法及其应用，所述方法包括：将第一mRNA片段、第二mRNA片段与DNA夹板混合，并用RNA连接酶进行连接反应；所述DNA夹板由互补序列1和互补序列2组成；所述互补序列1与第一mRNA片段的3’末端互补配对；所述互补序列2与第二mRNA片段的5’末端互补配对；所述互补序列1与第一mRNA片段的3’末端互补配对后第一mRNA片段的3’末端含有3‑10个碱基冗余。本发明将体外转录和化学合成相结合，优势互补，用特殊设计的DNA夹板将体外转录产物和化学合成片段高效连接，可制备不同长度的mRNA，并可以突破polyA尾的长度限制，长度可精确控制且可引入特定的修饰。

本发明属于提取制备技术领域，具体涉及一种具有护肝功能的动物肝肽及其制备方法。包括如下步骤：将新鲜肝脏洗净，剥离结缔组织，搅拌成肝肉糜，加入纯净水，搅拌均匀制成肝脏组织匀浆；将肝脏组织匀浆调节pH至6.0‑7.0，加入脂肪酶和糖原磷酸化酶后，在室温下酶解20‑50min得到酶解液；将酶解液在80‑90℃条件下灭菌30‑60min，得到灭菌液；将灭菌液冷却至室温，加入发酵菌粉液，在温度30‑40℃下发酵30‑53h得到发酵液，将发酵液离心去除残渣得到上层清液；用分子量为3kDa、2kDa、1kDa的串联超滤膜对离心后的上层清液进行超滤分级分离，得到不同分子质量段的多肽液。该方法得到分子量＜1kDa的含量较高的分子肽段，并且该肽段具有很好的抗氧化能力和保护化学性肝损伤的作用。

本发明公开了一种检测HTLV‑1前病毒DNA的多酶恒温扩增试剂盒及检测方法。多酶恒温扩增试剂盒包括引物探针混合液、A buffer、冻干酶粉、B buffer、侧向流层析试纸条、阳性对照物和阴性对照物。引物探针混合液包括检测HTLV‑1前病毒DNA的特异性引物对和探针；引物对和探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本发明将MIRA检测方法与胶体金侧流层析技术结合，可通过肉眼观察条带对检测结果实现可视化，能有效检测HTLV‑1前病毒DNA，可用于HTLV‑1感染的快速体外诊断。本发明试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简单便携、用时短的优点，在实验室资源匮乏的基层医疗机构或血液中心(血站)具有很高的应用价值。

本发明公开了鉴定水稻中胚轴长度的方法及其所用SNP标记Kasp‑7‑13.7与应用。本发明所解决的技术问题是鉴定或辅助鉴定水稻中胚轴长度。本发明在纯系中验证了序列1的第37位为AA基因型的水稻的中胚轴长度长于或候选长于序列1的第37位为GG基因型的水稻，GG纯合型的水稻品种比AA纯合型的水稻品种的中胚轴的平均值降低了36.1％,表明其单倍型或基因型分子标记可用于水稻分子标记辅助选择育种，显著提高水稻中胚轴长度的选择效率。

本发明涉及一种检测猫呼吸道病原体的引物、试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。本发明提供的可视化快速检测猫呼吸道病原体的引物及包含该引物的试剂盒，可以在恒温条件下高效、快速、简便的对猫杯状病毒、猫疱疹病毒、猫波氏杆菌、猫衣原体和猫支原体等常见病原体进行检测。解决了现有技术中对样本中病原体提取耗时长、成本高的问题，并具有快速、高效、可靠的优点，具有较高的实用价值和市场竞争力，可广泛应用于猫呼吸道病原体的检测和研究，具有较大的市场前景和经济价值。

本发明提供了一种双歧杆菌溶胞物及其制备方法和应用，涉及微生物发酵领域。该双歧杆菌溶胞物的制备方法包括：步骤一、将长双歧杆菌BNCC186627接种至发酵培养基中，进行厌氧发酵，获得发酵液；步骤二、将发酵液离心沉降，获得上清液，破碎处理，获得双歧杆菌胞溶物。本申请中首次采用长双歧杆菌BNCC186627发酵制备双歧杆菌胞溶物，并采用燕麦酶解液作为发酵培养基成分培养长双歧杆菌，优化了长双歧杆菌的发酵培养基，提升了菌体生物量得率，并使其特定功效成分含量升高，制备出了具有抗炎、修复、调节皮肤表面微生物作用的双歧杆菌胞溶物，为化妆品行业提供了一种新的功效性原材料，具有广阔的应用前景。

本发明属于臭鳜鱼发酵技术领域，公开了一种耐盐芽孢杆菌SJ1‑6和肉葡萄球菌F2混合接种发酵臭鳜鱼的方法。包括以下步骤：S1、新鲜鳜鱼去内脏、鱼鳞、鱼鳃；S2、分别对耐盐芽孢杆菌SJ1‑6和肉葡萄球菌F2进行活化；S3、称取与步骤S1所得鳜鱼等重量的饮用水，加入调味料、步骤S2所得耐盐芽孢杆菌SJ1‑6和肉葡萄球菌F2，得发酵液；S4、发酵：将步骤S1所得鳜鱼浸于发酵液中，在10～15℃下发酵5～9天。本发明发酵剂能够明显提高臭鳜鱼产品中特殊风味物质‑吲哚含量，从而达到增强臭鳜鱼特殊风味的目的，可以同时起到降低臭鳜鱼中假单胞菌、肠杆菌的数量与占比，提高食用安全性的作用。

本发明公开了一种猪血浆基质胶及其制备方法和应用，所述方法包括以下步骤：吸取无菌猪血浆和猪血小板裂解液到离心管中，再吸取钙盐溶液加入离心管，充分混匀后转移至培养皿或模具，放入培养箱中，使纤维蛋白形成析出生成的基质充分凝固；其中，血小板和血浆可冷冻长期保存，解冻后各组分可优化配比，并可添加其他培养基；利用该方法可将细胞、组织和类器官与基质以表面、混合和夹层等方法共同培养。本发明通过采集新鲜抗凝猪血分离血浆，制备猪血浆基质胶，猪血浆基质胶用于细胞培养时能够提高细胞增殖速率且不改变细胞的生长状态和分化潜能。

本发明提供一种自动精子操作系统的操作方法，其包括：S1、使得三维移动台位于图像成像装置的成像范围内；S2、使精子所在平面与焦平面重合，以使得图像成像装置清晰显示精子图像；S3、使微量移液器的末端与焦平面重合，确保末端在精子图像中清晰可视；S4、调整待操作精子位置，使其与微量移液器在精子图像中保持相对静止；S5、使微量移液器的末端按压待操作精子尾部至所在培养皿底；S6、吸取精子，并调整其在微量移液器腔内的位置。本发明通过仅控制三维移动台以实现自动精子操作，无需使用额外附加的定位器与操作手。得益于三维移动台与显微镜焦距的联合控制方法，本发明能够基于单一三维移动台快速准确地实现自动精子操作。

本发明涉及菌种共培养技术领域，特别是涉及一种棘孢木霉HG1与枯草芽孢杆菌Tpb55的固态发酵方法及其应用。本发明通过适宜的接种比例和培养顺序，将棘孢木霉HG1与枯草芽孢杆菌Tpb55在大米培养基中进行共培养，采用固态发酵方法对棘孢木霉HG1和枯草芽孢杆菌tpb55进行共培养，使木霉能够在固体培养基表面和内部产孢，提高孢子产量，从而能够更好刺激微生物持续发酵，有效的提高共培养后两株生防菌的菌量；并进行了盆栽实验，获得了显著的防治效果。

本发明公开了一种用于检测髓系肿瘤CSF3R T618I突变的试剂盒及其专用引物与探针。本发明所提供的试剂盒包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物和SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的TaqMan‑MGB探针。该试剂盒可用于临床及科研中对CSF3R T618I突变进行定性及定量检测，不仅为髓系肿瘤的诊断提供了一条快速、可靠、准确的新途径，而且可进一步提供CSF3R T618I突变基因与野生CSF3R基因的确切比值，从而可为疗效观察、微小残留病的动态监测提供依据。本发明将在医学检测领域发挥重要作用。

本发明涉及一种非诊断目的基于数字PCR检测基因突变的方法，包括如下步骤：利用试剂盒配制用于检测样品的PCR反应体系；其中，试剂盒中包括多个信标探针，至少部分信标探针具有茎环结构，环部分包括相连接的靶配对序列及抗干扰序列，其中一个信标探针的抗干扰序列与另一个信标探针的抗干扰序列至少部分配对，以使无法恢复为茎环结构；加样至数字PCR芯片中；将数字PCR芯片放入数字PCR仪中进行PCR扩增，得到扩增结果；将得到扩增结果的数字PCR芯片放到芯片扫描仪中进行荧光信号扫描，根据荧光信号判读突变结果。可以针对抗干扰序列进行荧光猝灭，便于检测特定的荧光强度或者荧光标记的荧光，从而能够提高检测灵敏度。

本发明属于生物技术领域，公开了一株巴氏假单胞菌及其在抑制植物病原菌中的应用，所述的巴氏假单胞菌（Pseudomonas baetica）的保藏编号为CCTCC NO:M20231586。实验证明，本发明的巴氏假单胞菌可以在pH5‑8的环境中存活；在10%高盐条件可存活，对王氏葡萄孢菌、六出花莲格孢菌、隐秘刺盘孢菌、长镰刀菌、布氏镰刀菌、莱安附球菌、毛莨葡萄孢菌、分支横梗霉、附球菌属、长镰刀菌、莱安附球菌以及分支横梗霉的抑菌率均有抑制作用。本发明所提供的巴氏假单胞菌可以应用于一般病害真菌的防治，在果蔬花卉真菌病害防治和生态种植方面具有很好的应用价值。

CRISPR‑Cas13蛋白的筛选及其应用。涉及生物技术及医学领域。更具体地，涉及新的Cas13家族蛋白、筛选新的Cas13家族蛋白的方法、以及相应的RNA检测、RNA编辑等系统及其应用。尤其涉及Cas13蛋白及相关的RNA检测、RNA编辑等系统。所述新的Cas13蛋白包含较多的拓展的HEPN结构域。本公开内容通过快速寻找Cas13蛋白的方法，获得了多种新的Cas13蛋白，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

本发明公开了一种使用流式细胞仪分选植物组织细胞核的方法，包括如下步骤：植物组织裂解、PI染色、在流式细胞仪：FSC通道电压120，SSC通道电压290，PerCP‑CY5.5通道电压500，PE‑Taxes Red通道电压500；鞘液气压20的参数条件下分选，以及细胞核镜检。该方法解决了植物组织单细胞核制备困难；单细胞核制备过程中产生的大量杂质、碎片难以去除；细胞核膜不完整等问题，本方法可以有效、快速的获得高质量的背景杂质较少的植物单细胞核，同时保证核膜的完整性。

本发明涉及啤酒转化威士忌技术领域，且公开了一种啤酒直接转化为威士忌的设备及转化方法，一种啤酒直接转化为威士忌的设备，包括圆槽座，所述圆槽座的内壁转动连接有电动推杆，所述圆槽座的顶部设有蒸馏釜，所述圆槽座的一侧设有冷凝桶，所述蒸馏釜的内壁嵌有加热板，所述冷凝桶内设有冷凝组件，所述蒸馏釜内部设有搅拌机构，本发明可使发酵液均匀受热，提高冷凝效率和效果，并且方便将附着在蒸馏釜内壁的残渣清除，而且可加快气体馏分的传输速度，使气体馏分及时进行蒸馏，此外，可在气体馏分产生较多或流动缓慢时，加快气体馏分的排出，有效防止气体馏分在蒸馏釜的顶部聚集，且可方便将附着在冷凝部件上的冷凝液进行收集。

本发明公开了一种新的β‑橄榄烯(β‑maaliene)的合成酶、基因及其应用，属于生物技术领域。本发明首次发现了一个橡胶树Hevea brasiliensis来源的HbMaS基因的核苷酸序列和编码氨基酸序列或含有核苷酸序列和编码氨基酸序列的质粒能够用于合成β‑橄榄烯，可用于合成及调配香精香料等。本发明通过将合成β‑橄榄烯的橡胶树合成酶基因重组得到重组载体和工程菌，并且成功构建了β‑橄榄烯高产菌株，β‑橄榄烯摇瓶产量高达10mg/L，为目前报道的最高产量，为β‑橄榄烯的工业化应用奠定了重要的基础。本发明为开发利用橡胶树基因资源奠定良好的基础并提供了新的应用策略。

本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是涉及一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法。本发明通过对菌苔生理盐水洗脱量、带菌培养基菌液添加量，标准品溶液与供试品溶液的加样量进行改进，能够得到清晰地抑菌圈，可使标准品溶液高浓度所致的抑菌圈直径稳定在18～22mm之间。本发明的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法改进试验中的不确定因素，提高实验的准确度，减少实验误差，重复性好，检测结果准确率高，稳定性好，可快速准确的鉴定酒石酸泰万菌素的含量，为相关兽药制剂的质量把控及高效利用提供理论依据。

本发明公开一种基于线性几何聚焦超声波高通量自动打断系统，包括控制箱、与控制箱连接的水冷机、超声打断装置和废液装置，水冷机与超声打断装置之间通过管道连接；水冷机内设有冷却泵，超声打断装置内设有水槽，控制箱内设有水循环泵、三通阀一、三通阀二和除气泵，废液装置内设有废液瓶和试剂瓶，水槽与冷却泵、三通阀一、三通阀二和除气泵连接，三通阀一与试剂瓶连接，三通阀二与废液瓶连接，水循环泵与三通阀一和三通阀二连接。本发明的自动打断装置，通过设置控制箱、水冷机、超声打断装置和废液装置，在控制箱内设置除气泵，避免了介质液体对于超声效果的影响；超声打断装置可以一次性处理多个样本，实现多个样本的处理，提高打断效率。

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种基因插入促进大豆根瘤菌与大豆共生结瘤的方法。所述方法包括：将弗氏中华根瘤菌FG‑486的nod基因插入到大豆慢生根瘤菌DG‑688中，即得。本发明通过将来源于弗氏中华根瘤菌FG‑486的nod基因插入大豆慢生根瘤菌DG‑688基因组，获得改造工程菌株，提高大豆慢生根瘤菌与大豆共生后的的结瘤能力、固氮能力。相对已野生株DG‑688拌种后的大豆，DG‑688nod:FGnod拌种后，大豆的植株平均结瘤数上升27.15％，根瘤干重基本不变，大豆产量提升6.55％。

本发明提供靶向目的基因FISH荧光探针及其自组装放大探针系统，该荧光探针称为靶向目的基因FISH荧光探针X，所述FISH荧光探针X中间是长度15‑65bp的靶向目的基因的线性探针序列，所述线性探针序列左右两端分别连接一个长度5‑35bp的颈环序列，在每个所述颈环序列末端引入作为RNA酶切割位点的RNA碱基，和在两端的RNA碱基末端分别连接有封闭序列。本发明通过开发一种新型探针设计修饰标记方式，实现探针结合特异性提高，消除背景能力增强，且可以实现长，短等目标序列有效结合的，显示定位，且本发明的放大信号基团为自主装结构设计，对合成成本有极大的降低。

本发明属于固体废物处理处置及资源循环利用领域，更具体地涉及一种有机质为主的固体废物高温好氧发酵工艺制生物碳的方法。针对含水率为60～85％的市政污泥、工业有机污泥（一般固废）、河湖底泥、餐厨垃圾等有机固体废物的处理处置，先与接种有成矿发酵菌液的秸秆、竹屑、木屑、玉米芯等农林副产物多孔生物质载体，和/或废醋酸、草酸等酸性废液以合适比例配比，进行通气好氧发酵制得40%以下含水率的生物碳。含多孔结构的生物质载体有助于好氧发酵过程中氧气的传输与储存，为成矿微生物提供附着点位，与酸性废液共同作用，加快有机固废中有机质的腐殖化和重金属的矿质化，促进发酵进程和提高发酵温度，杀灭粪大肠菌群等有害菌种，防止产生恶臭，同时有效降低了有机固废中间体的有害重金属含量和生物有效性，从而极大增强了所得生物碳的安全性。

本发明属于检测试剂盒技术领域，特别涉及一种基于纳米孔测序法的非小细胞肺癌检测试剂盒，包括装配组件、纳米孔基因测序仪、第一盒体组件和第二壳体组件；所述装配组件的顶部与纳米孔基因测序仪的底部活动卡接，所述第一盒体组件的顶部与装配组件的底部固定连接，通过装配组件通过调节位置，使若干组试剂管与若干组试剂滴管的连接处相互连通，并将试剂管内的采集物传递给试剂滴管，并且在采集物进入到试剂滴管内后，能够将试剂滴管向外顶出，使测试人员将顶出后的试剂滴管滴入到纳米孔基因测序仪的测试孔中，用于试剂管与试剂滴管无菌传递的作用，并且能够提高多组试剂滴管与纳米孔基因测序仪的测试效率。

本发明公开了FGF6在口腔黏膜癌变诊断、治疗中的应用，本发明涉及口腔黏膜癌前病变和口腔黏膜癌，提供了用于健康人与口腔黏膜癌前病变患者进行区分的产品与应用，本发明还提供了用于口腔黏膜癌前病变患者与口腔黏膜癌患者进行区分的产品及应用，本发明还提供了用于健康人与口腔黏膜癌患者进行区分的产品及应用，本发明还提供了用于治疗或与方法口腔黏膜癌前病变和口腔黏膜癌的产品与应用，在帮助受试者辅助诊断口腔黏膜癌前病变和口腔黏膜癌方面提供了有益的帮助。

本发明涉及消旋泛解酸内酯加工技术领域，且公开了一种消旋泛解酸内酯的微流体连续反应釜，包括反应釜壳体和设置在反应釜壳体上端的连接管道，将消旋泛解酸放置在反应釜壳体内，在电机、第一齿轮、第二齿轮、消旋泛解酸内酯通道、螺旋叶片和混合组件的配合下，消旋泛解酸内酯通道带动螺旋叶片进行转动，消旋泛解酸内酯通道内的微生物通过螺旋叶片上的连接孔向外甩出，当消旋泛解酸内酯通道逆时针进行转动时，反应釜壳体内的与微生物同时逆流而上，进行融合，同时混合组件的设置，混合组件可更进一步的将消旋泛解酸内酯与微生物进行混合，达到了可更加充分的对消旋泛解酸内酯与微生物进行融合的效果。

一种生产聚(4‑羟基丁酸酯)和/或1,4‑丁二醇的工程菌及其构建方法和应用。所述工程菌中缺失功能性乙醇脱氢酶、甲酸裂解酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶；过表达琥珀酰辅酶A合成酶、辅酶A依赖性琥珀酸半醛脱氢酶、4‑羟基丁酸脱氢酶和4‑羟基丁酸辅酶A转移酶；所述工程菌中还过表达PHA聚合酶和/或醇醛脱氢酶。

本发明涉及生物技术领域，公开了一种G458DNA聚合酶突变体及其应用。所述G458DNA聚合酶突变体包括G458‑1DNA聚合酶、G458‑2DNA聚合酶、G458‑3DNA聚合酶、G458‑4DNA聚合酶、G458‑5DNA聚合酶、G458‑6DNA聚合酶、G458‑7DNA聚合酶中至少一种；本发明制备的G458DNA聚合酶突变体，与野生型相比，其持续性和底物结合能力为野生型的2‑20倍以上。

本发明公开了一种用于生产重组细小病毒的组合物及应用。所述组合物包括：用于翻译产生细小病毒Rep蛋白的第一表达盒；用于翻译产生细小病毒Cap蛋白的第二表达盒；以及，转基因序列和转基因序列两端的AAV反向末端重复序列；所述第一表达盒包括用于翻译产生细小病毒Rep蛋白的重叠开放阅读框，以及在感染早期至晚期持续驱动所述Rep蛋白的表达的第一启动子。本发明通过在第一表达盒中设置不同转录起始时间的启动子来控制Rep蛋白的表达时间和强度，从而提高昆虫细胞中rAAV载体生产的效率以及生产的rAAV的质量。

本发明公开了一种重组乳酸乳球菌免疫增强剂，其特征在于，包含表达鲤Rhbdd3蛋白的重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌为Lactococcus lactis pNZ8148‑Rhbdd3，已由CCTCC保藏。本发明还公开了上述免疫增强剂的制备方法和饲喂方法，本发明中构建了相应的鲤Rhbdd3基因载体以及重组乳酸乳球菌，并饲喂给鱼体，本发明中的免疫增强剂能够提高水产动物自身的免疫机能，有效预防鱼类病毒性疾病的发生，实现水产绿色健康养殖。

本发明涉及一种食品中微生物的富集方法，包括以下步骤：步骤一：食品混合物包括至少两种磁性纳米材料，步骤二：制备无机培养基，同时取窖泥进行培养，得到窖泥种子富集液；步骤三：将五粮混合粉碎后，加水熬煮、糖化、沉淀、过滤得到天然培养基；步骤四：将窖泥种子富集液接种到天然培养基中发酵，发酵温度为25‑37℃，培养15‑30天，即得富集梭菌属微生物的发酵液。本发明通过上述步骤最终成功富集的反硝化厌氧甲烷氧化微生物在上述脱氮应用中具有高效的生物还原硝酸盐的效率。

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株高蛋白酶活、高产生物活性肽的嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)及其应用。所述嗜盐四联球菌筛选自东北传统自然发酵的豆酱，保藏编号为CGMCC No.27586。该菌株γ‑谷氨酰转移酶活力为7.361±0.003U/mL，清除DPPH自由基能力达到57.32％，清除羟基自由基的能力达到56.03％，蛋白酶活力高达342.71±0.48U/mL，均高于标准菌株ATCC 33315。该菌株具有高蛋白酶活力，具有高产生物活性肽能力，在具有良好抗氧化能力的前提下还具有增鲜潜力，可应用到发酵功能食品的生产中。

本发明涉及微生物基因工程技术领域，尤其涉及一株共表达多元纤维素酶基因的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用。本发明涉及的枯草芽孢杆菌C6‑AEA3分类为Bacillus subtilis，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉武汉大学，保藏日期为2023年8月31日，保藏编号为CCTCC NO:M 20231579。本发明得到的枯草芽孢杆菌C6‑AEA3具有高纤维素酶活性，能高效降解秸秆饲料中的纤维素，为农作物秸秆生物降解提供有效的菌种资源。

本发明公开了一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1及其应用，所述解淀粉芽孢杆菌ys1已于2023年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M 2023585，保藏地址为中国武汉·武汉大学。本发明的解淀粉芽孢杆菌ys1不仅对多种土传病害病原菌具有较好的拮抗效果，而且还能在植株根际和叶面有效定殖；另外，该菌株通过根际浇灌方式对水稻具有明显的促生效果，通过喷施叶面方式对水稻纹枯病具有一定的防控效果，其防控效果达61.1％。利用本发明所提供的解淀粉芽孢杆菌菌株ys1可以代替部分农药及化肥的施用，有效地保护农作物的生产以及减少农田农药和化肥的污染。

本发明提供了一种新型透明质酸酶及其基因工程菌、构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明首先筛选了一种来源于耐盐放线菌(Streptomyces thermolilacinus)SPC6的新型透明质酸酶SthylO，并成功在E.coli BL21中表达，实现了酶的分离纯化，并对其酶学性质进行了研究。然后以解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CF为宿主，在表达透明质酸合成酶质粒pMA5‑sthasA‑cghasB的基础上，克隆了透明质酸酶基因SthylO、信号肽基因SpyncM和IPTG诱导型启动子基因PgraC，成功实现了一菌制备高、中、低不同分子量的透明质酸及透明质酸寡糖，有利于简化工业化程序的复杂性，降低生产成本，且制备透明质酸寡糖在抗氧化分析中具有显著的清除效率极具工业化应用前景。